PRCTICA # 1 MANEJO DEL MICROSCOPIO I.

OBJETIVO Que el alumno conozca las partes del microscopio, su funcin, manejo y cuidados para conservarlo en las mejores condiciones de trabajo y as lograr el mayor provecho de sus prcticas de laboratorio. II. INTRODUCCIN Para llevar a cabo las prcticas del laboratorio de microbiologa, se requiere de la observacin de microorganismos y dado que estos no se observan a simple vista, es necesario el uso del equipo adecuado, en este caso, el microscopio como apoyo para la identificacin y comprensin de los objetivos planteados para cada una de las mismas. III. CONOCIMIENTOS PREVIOS 1. Definicin de microscopio 2. Definicin de microorganismo 3. Formas de agrupacin de las bacterias IV. MARCO TERICO El microscopio, es el instrumento ms utilizado y fundamental en el Laboratorio de Microbiologa, proporciona la amplificacin gracias a la cual el hombre es capaz de ver organismos y estructuras que a simple vista son invisibles. Se dispone de microscopios que permiten amplias escalas de aumento; se cuenta tambin con varios tipos de microscopios y se han ideado muchas tcnicas por las cuales las muestras de microorganismos se preparan para el examen con mximo detalle. (ver esquema 1) Cada tipo de microscopio y cada mtodo de preparar las muestras ofrecen alguna ventaja para demostrar algunos aspectos morfolgicos. Existen microscopios simples, que emplean una sola lente y microscopios compuestos, que utilizan dos o ms lentes. El alumno utilizar un microscopio compuesto, por lo que se dar una descripcin de ste. Consta de varios sistemas: A) B) C) D) Sistema de soporte Sistema ptico Sistema de Ajuste Sistema de iluminacin

A) SISTEMA DE SOPORTE Este sistema consta de: Brazo Tubo del Microscopio Revlver Platina Pie Brazo Es la parte del microscopio utilizada para transportarlo. Se sostiene con la mano izquierda y por el pie con la mano derecha. Tubo de Microscopio Comunica y sostiene el ocular con el revolver. Se desplaza en forma vertical por medio de dos tornillos: el macromtrico y el micromtrico. Revlver Se comunica con el tubo del microscopio y sostiene los objetivos: Es una pieza giratoria para seleccionar el objetivo y colocarlo en una posicin vertical respecto al ocular. Generalmente contiene 3 a 4 objetivos. Platina Es la parte donde se coloca la preparacin a observar; puede tener pinzas para sostener el porta objeto o bien un carro que se maneja con un tornillo que permite el desplazamiento hacia arriba y abajo y otro tornillo que desliza a la derecha e izquierda. Pie Sostiene al microscopio B) SISTEMA OPTICO Dado que la funcin del microscopio es hacer visibles las cosas demasiado pequeas para poder verse a simple vista, esto se logra por medio de un sistema de lentes de aumento y poder de resolucin suficiente para que los pequeos elementos muy prximos en la muestra examinada se vean separados, de tal modo que se obtenga una imagen claramente definida.

El microscopio compuesto, Consta de dos sistemas de lentes: 1. Ocular 2. Objetivos Ocular Est formado por un sistema de lentes, que aumenta la imagen producida por el objetivo. Esta situado cerca del ojo del observador y lleva grabado el aumento que proporciona. Algunos microscopios son monoculares y otros binoculares. Objetivos La resolucin del microscopio, depender solo del objetivo. Son cuatro las clases de objetivos generalmente usados: a. Objetivo 5X (lupa). Es el objetivo explorador, se utiliza una visin de conjunto y para localizar estructuras grandes. b. Objetivo 10X (seco dbil). Tambin se llama seco dbil. El rea observada disminuye pero la amplificacin es mayor. Se utiliza de preferencia para observar clulas o tejidos o bien para localizar estructuras ms fcilmente y llevarlas al centro del campo para enfocarlas con el siguiente objetivo. c. Objetivo 40X (seco fuerte). Tambin se conoce como seco fuerte. Se obtiene un mayor aumento y el campo se reduce, observndose los detalles de la estructura enfocada. d. objetivo100x (de inmersin). Conocido como objetivo de inmersin, ya que para su uso es necesario colocar a la preparacin aceite de inmersin. Con este objetivo se obtiene una imagen ms definida y ms grande. Estas dos lentes, el ocular y el objetivo, estn separadas por un tubo a una distancia tal que el ocular amplifica la imagen producida por el objetivo. La amplificacin total de u microscopio, es el producto del aumento que da el objetivo (con el que se esta observando), y el del ocular. As la amplificacin total de los objetivos 5X, 10X, 40X y 100X y con el ocular 10X, ser de 50, 100, 400 y 1000 veces respectivamente. Por ejemplo una clula o estructura que mide 6 micras al observarla con los diferentes objetivos tendremos que:

Lupa (5X) x ocular (3X 5X) x 6 micras = 150 micras. Seco dbil (10X) x ocular (5X) x 6 micras = 300 micras. Seco fuerte (40X) x ocular (5X) x 6 micras = 1200 micras. De inmersin (100X) x ocular (5X) x 6 micras = 3000 micras = 3 mm. Como se demuestra el incremento de la imagen ya permite al ojo humano observar detalles en la estructura microscpica. C) SISTEMA DE AJUSTE Est constituido por dos tornillos: 1. Tornillo macromtrico 2. Tornillo micromtrico Tornillo macromtrico. Permite el desplazamiento rpido y vertical del tubo del microscopio. Se localiza debajo de la platina. Se utiliza para hacer el ajuste grueso de la imagen que se desea observar. Tornillo micromtrico. Puede estar localizado debajo del tornillo macromtrico o ser la parte central de ste. Permite el desplazamiento lento y vertical del tubo del microscopio hasta que la imagen se aclara y queda bien definida. Se utiliza para obtener un ajuste preciso y enfocar los diferentes planos de la estructura observada. D) SISTEMA DE ILUMINACIN Consta de tres partes: 1, Fuente luminosa (lmpara o espejo) 2, Condensador 3. Diafragma 1. Lmpara Consta de un foco cuya intensidad luminosa puede regularse por medio de un transformador o bien ser constante. Espejo Es por lo general doble, plano por un lado y cncavo por el otro. El espejo cncavo es el ms utilizado ya que capta mejor los rayos solares o la luz de una lmpara externa y los transmite a la preparacin que se encuentra en la platina. 2. Condensador

En su estructura presenta un sistema de lentes que sirven para concentrar los rayos luminosos en el campo de observacin. 3. Diafragma Situado en la parte inferior del condensador. Est compuesto de laminillas metlicas que se abren o se cierran para regular la cantidad de luz necesaria a la observacin y as lograr una imagen ms definida.

1.- Ocular 2.- Revlver y objetivos 3.- Platina 4.- Carro 5.- Tornillo macromtrico 6.- Tornillo micromtrico 7.- Diafragma 8.- Condensador 9.- Botn del condensador 10.- lminas de ajuste del condensador 11.- Interruptor de luz 12.- Transformador o regulador de intensidad de la luz

ESQUEMA 1 Para poder hacer una observacin en el microscopio, se deben seguir los siguientes pasos: 1.- Colocar la preparacin en la platina 2.- Ver lateralmente para bajar el tubo del microscopio con el tornillo macromtrico cerca de la preparacin y utilizar el objetivo de menor aumento. 3.- Observando por el ocular, subir el tubo del microscopio hasta localizar el objeto de observacin con el macromtrico 4,. Mover lentamente el micromtrico, para precisar la imagen 5.- Girar el revlver para colocar el objetivo seco fuerte, observar por el ocular y detallar la imagen con el tornillo micromtrico. 6.- Para observar con el objetivo 100X o de inmersin, seguir los pasos siguientes: a) Despus de observar con seco fuerte (40X), gire el revlver para colocar el objetivo de inmersin y antes de concluir esta operacin, colocar una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin. b) Bajar el tubo del microscopio usando el tornillo macromtrico observando del lado hasta que el objetivo entre en contacto con el

aceite de inmersin y posteriormente se ajuste el enfoque por medio del tornillo micromtrico. Cuidados: Para una mejor observacin, se requiere mantener al microscopio en perfectas condiciones mecnicas, limpio y manejarlo correctamente. Para lograr esto, hay que tener en cuenta las siguientes indicaciones: 1) Si no est en uso, debe mantenerse en su estuche o funda protectora 2) Debe alejarse de la accin de cidos y lquidos corrosivos. 3) Debe transportarse con cuidado en forma vertical y por medio del brazo y de preferencia colocando la otra mano debajo del pie 4) Limpiarlo antes y despus de usarlo, para el caso de las lentes se aconseja utilizar papel seda. 5) Al terminar la observacin, colocar el objetivo de menor aumento y guardar el microscopio en su estuche o cubrirlo con su funda. V. MATERIAL POR EQUIPO 1 Microscopio ptico 1 Preparacin de frotis sanguneo 1 Preparacin de frotis de microorganismos 1 Preparacin de letras de papel peridico 1 Preparacin de parsito Aceite de inmersin Papel seda VI. METODOLOGA 1.- Bajo la supervisin del profesor, adiestrarse en el conocimiento del microscopio haciendo un repaso y reconocimiento de las partes del microscopio, identificando su manejo. 2.- Enfocar a seco dbil, seco fuerte e inmersin, las preparaciones proporcionadas 3.- Despus de utilizar el microscopio entregarlo al laboratorio considerando los cuidados necesarios. VII. RESULTADOS Reportar los resultados obtenidos y hacer dos esquemas de cada una de las observaciones realizadas con el microscopio: una que demuestre lo observado con el objetivo 40X o seco fuerte y la otra con el objetivo de 100X u objetivo de inmersin. VIII. CUESTIONARIO 1) Defina ndice de refraccin

2) 3) 4) 5) 6)

Cul es la funcin del aceite cuando se usa el objetivo de inmersin? Con cul de los objetivos hizo una mejor observacin? Qu aplicaciones se obtienen con el microscopio de luz? Explique que es el poder de resolucin de un microscopio Cmo se determina el grado de amplificacin?; determnelo con cada uno de los objetivos que utiliz. 7) Cul es la diferencia entre resolucin y aumento?

IX. BIBLIOGRAFA 1.-Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiologa Mdica de Jawetz. 16 ed. Mxico, D.F.: Editorial Manual Moderno, 1999: 11-12. 2.- BOB. A Freeman, Ph.D. Microbiologa de Burrows. 22ed. Mxico: Editorial Mc Graw Hill, 1989: 17-55. 3.-Philip L Carpenter. Microbiologa. 4 ed. Mxico, D.F: Editorial Interamericana, 1996: 28-46. 4.-Jos A. Garca-Rodrguez. J.J. Picazo. Compendio de Microbiologa Mdica. Madrid, Espaa: Editorial Harcourt Brace, 2000: 20-22. 5.-Elemer W. Koneman, M.D. Diagnstico Microbiolgico. 5 ed. Buenos Aires, Argentina: Editorial Mdica Panamericana, 2001: 81-96.