BIOLOGIA MARINHA

A poluio por petrleo e seus derivados, em ambientes marinhos, tem sido um dos principais problemas ambientais das ltimas dcadas. Diversas tcnicas fsicas e qumicas foram desenvolvidas para a retirada do petrleo derramado no mar ou para a reduo dos seus efeitos sobre o ecossistema. A descoberta de que certas bactrias que vivem nos sedimentos marinhos, inclusive na areia das praias, podem degradar os componentes do petrleo abriu a possibilidade de usar mtodos biolgicos para o tratamento dos derrames. Esses mtodos, objeto de pesquisas recentes no Brasil, so chamados, em seu conjunto, de biorremediao.

BIORRE
TRATAMENTO PARA DERRAMES DE PETRLEO

Mirian A. C. Crapez, Alexandre L. N. Borges, Maria das Graas S. Bispo e Daniella C. Pereira Programa de Ps-Graduao em Biologia Marinha, Universidade Federal Fluminense
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Explorado comercialmente desde meados do sculo 19, o petrleo foi usado, por muitas dcadas, para a iluminao e, em menor escala, como lubrificante. A inveno do motor de combusto interna e sua adoo rpida em todas as formas de transporte ampliaram o emprego desse recurso natural, aumentando a demanda e com isso a produo, o transporte, a estocagem e a distribuio tanto do leo cru quanto de seus derivados. Todas essas atividades envolvem riscos de derrames acidentais, que podem ser minimizados, mas no totalmente eliminados. Felizmente, os grandes derrames que contaminam oceanos e reas costeiras de forma significativa no ocorrem com freqncia. So exemplos desses desastres ambientais as 200 mil toneladas de leo despejadas na costa da Frana pelo acidente com o navio petroleiro Amoco Cadiz (1978); as 40 mil 4

FOTO MARIO MOSCATELLI

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Tais desastres mostraram como o petrleo danoso ao ambiente marinho, mas eles tambm serviram para o desenvolvimento de tcnicas para lidar com os derrames acidentais chamados de mars negras no mar e nas praias. Essas tcnicas incluem em geral mtodos fsicos e qumicos, como barreiras de conteno, aparelhos de suco, uso de jatos dgua para dispersar o leo, absorventes, formadores de gel, precipitantes e dispersantes qumicos. As barreiras de conteno e os aparelhos de suco so eficientes em guas calmas, onde as ondas no comprometem essas tcnicas. Uma variedade ampla de materiais absorventes como espuFATORES QUE AFETAM A DEGRADAO DO PETRLEO mas de polietileno ou poliuretano e palha so empregados para FATORES CARACTERSTICAS remoo do leo derramado, principalmente na regio de quebraComposio Cerca de 60% a 90% so hidrocarbonetos alifticos, passveis mar. A aplicao de agentes ququmica de biodegradao. Nessa classe, o fitano e o pristano so mais resistentes degradao e podem ser usados como marcadores micos sobre o leo, para provocar qumicos em monitoramento. Entre os aromticos, deve-se monitorar a formao de gel ou a coagulabenzeno, tolueno e xileno (BTX), mais txicos aos seres vivos; hopano o, diferentemente dos procespode ser usado como marcador qumico, em monitoramento. Nos seres sos anteriores, feita na coluna vivos, o petrleo pode ser incorporado s gorduras, causar distrbios dgua, distante da praia, o que metablicos ou interromper a quimiorrecepo. aumenta o custo, devido aos gasEstado fsico Condiciona agregao, espalhamento, disperso ou adsoro tos com embarcaes. no ambiente. Da mesma forma, a queima do leo no mar no considerada Mudanas A composio qumica e o estado fsico do leo, associados um tratamento satisfatrio. Tanqumicas temperatura, radiao solar e ao batimento das ondas, induzem mudanas qumicas, evaporao e fotooxidao. to esse mtodo quanto o uso de agentes qumicos so danosos gua essencial vida bacteriana, mas excluda dos agregados, fauna e flora marinhas. De toporque o petrleo hidrofbico. das as tcnicas, apenas as de precipitao e disperso tm sucesTemperatura Determina a evaporao, constituindo um fator importante no processo de degradao. so aparente em mar aberto. A precipitao realizada com o Oxignio fator decisivo para iniciar e sustentar a biodegradao. lanamento, sobre a camada de petrleo na superfcie, de ps ou Nutrientes So essenciais nitrognio (N) e fsforo (P). Teoricamente, para cada grama de leo degradado so necessrios 150 mg de N e 30 mg de P. Salinidade Microrganismos desconhecida a biodegradao em ambientes hipersalinos. As bactrias hidrocarbonoclsticas podem estar ausentes ou em nmero insuficiente para desencadear a biodegradao. Figura 1. A degradao do petrleo derramado influenciada por inmeros fatores qumicos, fsicos e biolgicos

toneladas lanadas pelo Exxon Valdez no litoral do Alasca (1989); e o incndio do Haven, na costa da Itlia, com 140 mil toneladas de leo a bordo (1991). Tambm em 1991, a Guerra do Golfo contaminou o Kuwait com 820 mil toneladas de leo e, dois anos depois, o petroleiro Braer derramou 80 mil toneladas de leo nas guas costeiras das ilhas Shetland (Esccia). No Brasil, em maro de 1975, um acidente rompeu o casco do navio-tanque iraquiano Tarik Ibn Ziyad no canal central de navegao da baa de Guanabara. Vrias praias foram atingidas nas cidades do Rio de Janeiro e de Niteri, tanto no interior da baa quanto na costa ocenica. O leo provocou incndios em reas de manguezal, em torno da baa, e a contaminao afetou seriamente as comunidades animais da zona entremars. Em agosto de 1997, um vazamento nas instalaes dos Dutos e Terminais do Sudeste (DTSE) atingiu o mangue adjacente Refinaria Duque de Caxias (Reduc), na baa de Guanabara. Alm do mangue, o leo espalhou-se pelas praias de Freguesia, Baro, Pitangueiras, Bandeira e Zumbi, localiza-

das na ilha do Governador. Em janeiro de 2000, outro vazamento de leo ocorreu no mesmo local, atingindo inmeras reas de manguezal, alm da ilha de Paquet e do norte e leste da ilha do Governador. Esse vazamento foi considerado um dos maiores acidentes com petrleo j ocorridos na baa de Guanabara (ver 500 anos de degradao, em CH n 158).

Tratamento inicial das mars negras

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IMAGENS CEDIDAS PELOS AUTORES

Figura 2. Colnias de trs consrcios de bactrias hidrocarbonoclsticas (A, B, C) isoladas de sedimentos marinhos impactados por hidrocarbonetos de petrleo materiais de granulometria fina, mas com alta densidade. O leo absorve essas partculas e sofre precipitao, depositando-se no sedimento. J os dispersantes qumicos fazem com que o leo se espalhe de modo muito rpido, tornando-o menos visvel. Nos dois casos, porm, o material continua no ambiente, sendo assimilado pelos organismos marinhos e acumulado nos tecidos, em diferentes nveis da cadeia alimentar (desde os microrganismos at os grandes peixes, alm das aves e mamferos que se alimentam no mar e dependem dele). Tanto os mtodos fsicos quanto os qumicos devem levar em conta que o leo derramado no mar espalha-se na superfcie da gua, formando uma camada fina e homognea, semelhante a mousse de chocolate, e que esta camada pode ser degradada por fatores fsicos, qumicos e biolgicos.

(A)

(B)

Preocupao com o ambiente marinho

Em 1946, o microbilogo marinho norte-americano Claude E. ZoBell (1905-1989) identificou, pela primeira vez, microrganismos capazes de consumir petrleo, isto , de us-lo como fonte de carbono para a gerao de biomassa. Na poca, porm, os derrames de petrleo ainda no eram vistos como um problema ambiental srio. Apenas 21 anos depois, em 1967, o acidente com o superpetroleiro Torrey Canyon, na Inglaterra, e o desenvolvimento da explorao de petrleo no rtico serviram de alerta para o risco de outros acidentes. A partir da, os cientistas passaram a se preocupar em conhecer o destino do petrleo como poluente e uma ateno especial foi dada ao ambiente marinho, o maior e ltimo receptor das mars negras. As pesquisas desenvolvidas desde ento procuravam respostas para diversas perguntas sobre: 1. os componentes biodegradveis do petrleo; 2. os fatores ambientais que influenciariam a biodegradao dessa substncia; e 3. a distribuio das populaes de microrganismos capazes de degradar o petrleo. O petrleo, formado por processos biogeoqumicos, uma mistura complexa de hidrocarbonetos. Sua composio varia em funo de sua localizao geogrfica e das condies fsico-qumicas e biolgicas que o originaram. Assim, grande parte de seus componentes (de 60% a 90%) passvel de biodegradao (figura 1). Entretanto, o restante bruto ou

(C) refinado recalcitrante, isto , demora a desaparecer por meios naturais, aps algum acidente em um ambiente. Mesmo tratando-se de uma frao menor (de 10% a 40%), preciso lembrar que isso significa toneladas de material poluente impactando o ambiente e podendo ser bioacumuladas nos seres vivos (ver Filtros biolgicos, em CH n 58). Assim, o destino dessa substncia no ambiente, aps um derrame, depender da interao de vrios fatores. A biodegradao um desses fatores. Pesquisas desenvolvidas em regies frias (como o rtico) ou temperadas mostraram que diversos grupos de bactrias e fungos tm habilidade para degradar os componentes de petrleo. As bactrias, denominadas hidrocarbonoclsticas, fazem parte da microflora presente no solo, na gua e no sedimento. Quando esses ambientes so expostos a mars negras, ocorre um fenmeno de adaptao ou aclimatao de certas populaes de bactrias, que passam a reconhecer os componentes do leo como fonte de carbono, iniciando o processo de degradao. 4
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Figura 3. Degradao (da esquerda para a direita) dos hidrocarbonetos de petrleo por consrcio bioamplificado de bactrias hidrocarbonoclsticas e bioestimulados com fertilizante NPK

IMAGEM CEDIDA PELOS AUTORES

A complexidade dos processos metablicos necessrios a essa degradao leva formao de consrcios, com bactrias de diferentes gneros e espcies, cada uma especializada em degradar uma ou vrias fraes do leo derramado (figura 2). Os principais gneros so Acidovorans, Acinetobacter, Agrobacterium, Alcaligenes, Aeromonas, Arthrobacter, Beijemickia, Burkholderia, Bacillus, Comomonas, Cycloclasticus, Flavobacterium, Goordona, Moraxella, Mycobacterium, Micrococcus, Neptunomonas, Nocardia, Pasteurella, Pseudomonas, Rhodococcus, Streptomyces, Sphingomonas, Stenotrophomonas e Vibrio. Derrames sucessivos no mesmo ambiente aceleram cada vez mais o aumento da biomassa bacteriana hidrocarbonoclstica. A maior concentrao dessas bactrias, portanto, serve como um indicador de ambiente impactado cronicamente por petrleo.

cimento e atividade bacterianas. A bioestimulao (adio de fertilizantes) e a bioamplificao (semeadura de nmero expressivo de bactrias hidrocarbonoclsticas) podem ser consideradas abordagens gerais nessa tecnologia. Os trabalhos de biorremediao devem ser feitos tanto no ambiente quanto em condies controladas de laboratrio, para obter informaes que permitam estimar custo, viabilidade e durao do tratamento, e para identificar os fatores limitantes do processo e as vias possveis de superao dos mesmos. A eficcia da tecnologia testada, em laboratrio, pela determinao da biomassa da populao bacteriana (total e hidrocarbonoclstica), o isolamento e a manuteno de consrcios das bactrias que fazem a biodegradao, a medio da taxa de respirao (consumo de oxignio e/ou produo de gs carbnico), a quantificao da atividade de enzimas ligadas degradao do leo e a determinao das taxas de degradao do poluente. bom ressaltar que todos esses parmetros tambm podem ser usados para avaliar ambientes impactados por leo, exceto o consumo de O2 e/ou produo de CO2. No ambiente, mudanas quantitativas nesses fenmenos podem indicar tanto a mineralizao da matria orgnica quanto o consumo de leo pelas bactrias, levando a uma interpretao errnea dos resultados.

Uma nova tecnologia atrai interesse

Aps o acidente com o petroleiro Exxon Valdez, em que o leo derramado no mar atingiu 15% da costa do golfo do Alasca, e a Guerra no Golfo, que formou 330 lagos de leo no Kuwait, os processos de degradao biolgica chamados, em conjunto, de biorremediao receberam maior ateno. Tais processos surgiram a partir de estudos de decomposio e detoxificao de pesticidas em solos e, mais tarde, foram propostos como promissores para a recuperao de reas costeiras atingidas por derrames de petrleo. A tecnologia de biorremediao usa, para a remoo de poluentes, o potencial fisiolgico de bactrias. Estas transformam o petrleo em biomassa, gua, dixido de carbono e outros compostos (figura 3). O objetivo principal da biorremediao minimizar o impacto das substncias recalcitrantes no ambiente, criando condies favorveis ao cres36 CINCIA HOJE vol. 30 n 179

Pesquisas sobre biorremediao no Brasil

Os estudos de biorremediao, no Brasil, ainda so incipientes. O Laboratrio de Microbiologia Marinha, da Universidade Federal Fluminense, pioneiro nessa rea e vem desenvolvendo pesquisas para estabelecer as bases dessa tecnologia em funo das condies ambientais brasileiras. As baas so ambientes de maior risco para acidentes com petrleo porque, alm da intensa movimentao de embarcaes em seu interior, em geral apresentam em seu entorno grande densidade demogrfica e maior concentrao de portos e indstrias. As baas da ilha Grande e de Guanabara, no estado do Rio de Janeiro, so exemplos do tipo de ambiente com alto risco para acidentes de derrames de leo, e em ambas foram realizadas pesquisas sobre biorremediao.

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Os estudos feitos na baa da ilha Grande constataram a presena de populaes hidrocarbonoclsticas capazes de consumir benzeno, tolueno e naftaleno (alguns dos componentes do petrleo) na complexa comunidade bacteriana dos sedimentos de praias. Ensaios em laboratrio com bactrias desse tipo, isoladas e introduzidas em amostras de sedimento, aumentaram em mais de 200% a produo de CO2, tornando mais rpida e eficaz a degradao do petrleo. Bactrias hidrocarbonoclsticas tambm foram isoladas na baa de Guanabara, em amostras de sedimento superficial da ilha de gua, e seu rendimento na degradao do petrleo foi avaliado em laboratrio. Para isso, as bactrias foram bioamplificadas em meio de cultura contendo petrleo e depois submetidas a diferentes formulaes do bioestimulante NPK (baseado em nitrognio, fsforo e potssio). Outros projetos estudaram a influncia da matria orgnica na degradao de benzeno, tolueno e xileno, hidrocarbonetos extremamente txicos. Esses projetos serviram ainda para avaliar e monitorar reas de risco. Avaliaes desse tipo tambm so importantes para verificar o potencial da microbiota hidrocarbonoclstica em reas onde sero implantados novos projetos ligados ao petrleo. Os estudos do Laboratrio de Microbiologia Marinha tm apontado que a resposta da comunidade bacteriana a derrames depende das caractersticas do ambiente impactado, do tipo do leo e de sua concentrao, mas a quantidade e a qualidade da matria orgnica disponvel nos sedimentos do local tambm muito importante para a aclimatao e a bioamplificao da microbiota hidrocarbonoclstica presente no ambiente. Na lagoa de Saquarema e na praia de Jurujuba, reas do estado do Rio de Janeiro onde grande quantidade de esgoto e de rejeitos de fbricas alimentcias chegam ao sedimento, no foi consta-

tada a atividade de bactrias hidrocarbonoclsticas. Nesses locais, uma mar negra poder acarretar srios prejuzos para a fauna e a flora locais. O tempo decorrido desde o derrame e o nmero de exposies do local ao leo so fatores cruciais nos processos de biorremediao e de recuperao ambiental. Para verificar as respostas potenciais da microbiota aos efeitos agudo e crnico de hidrocarbonetos de petrleo, foram realizados ensaios laboratoriais em amostras de sedimento das praias da Boa Viagem e do Forte do Rio Branco e da rea da Estao Hidroviria de Niteri (RJ). Na Estao Hidroviria de Niteri, que recebe considervel volume de esgoto e de leo, as bactrias j utilizam essas substncias como fonte de carbono, produzindo biomassa considervel. Os ensaios feitos com sedimento das praias de Boa Viagem e do Forte do Rio Branco, por sua vez, mostraram que, aumentando a freqncia de entrada de benzeno, tolueno e xileno no sistema, as bactrias tornam-se capazes de degradar quantidades crescentes desses poluentes. Tal efeito depende das interaes ambientais entre os componentes do petrleo e as populaes bacterianas, que atuam em cometabolismo (alguns componentes do petrleo no so reconhecidos pelo sistema enzimtico das bactrias, mas a repetio da disponibilidade dessas substncias faz com que as bactrias sintetizem novas enzimas, capazes de degradar mesmo as mais recalcitrantes) e/ou de forma sinrgica (degradao seqencial de diferentes componentes do petrleo, realizada por gneros ou espcies diferentes do consrcio de bactrias, em que o subproduto de cada etapa fonte de carbono para a outra). Quando as bactrias esto aclimatadas, ou seja, j sintetizaram as enzimas para degradar o leo, sua concentrao pode atingir 10 bilhes de clulas por mililitro, tanto no meio de cultura quanto no ambiente natural. Ao consumirem o leo, as bactrias hidrocarbonoclsticas produzem biomassa, podendo aumentar em mais de 1.000% seu contedo de lipdios e em 240% o de protenas. Os resultados desses estudos e de inmeros outros, ao redor do mundo deixam claro que as tcnicas convencionais de limpeza das mars negras podem e devem ser complementadas com a biorremediao. Em grandes acidentes, mesmo com a aplicao adequada das tcnicas mecnicas hoje existentes, ainda resta uma frao de leo oxidado pela luz solar. Essa frao fica disponvel para a biota e precisa ser degradada para que o ecossistema no fique impactado. A biorremediao, portanto, multiplica a capacidade de depurao do ambiente, alm de permitir o restabelecimento da vida animal e vegetal e o mapeamento de reas de risco. s

Sugestes para leitura

BALBA, M.T.; AL-AWADHI, N. and AL-DAHER, R. Bioremediation of oil-contaminated soil: microbiological methods for feasibility assessment and field evaluation, in Journal Microbiological Methods, v. 32, p. 155, 1998. CRAPEZ, M.A.C.; TOSTA, Z.T.; BISPO, M.G.S. & PEREIRA, D.C. Acute and chronic impacts by aromatic hydrocarbons on bacterial communities at Boa Viagem and Forte do Rio Branco beaches, Guanabara Bay, Brazil, in Environmental Pollution, v. 108/2, p. 291, 2000. CRAPEZ, M.A.C.; BORGES, A.L.N.; BISPO, M.G.S.; PEREIRA, D.C.; ALVES, P.H. & THIENGO, D.A. Bioremediation utilizing three consortiums of Bacillus spp. hydrocarbon degraders, isolated from tropical beach sediment, in 5th Congress on Marine Sciences (Marcuba, La Habana, Cuba), CD-Rom, 2000. CRAPEZ, M.A.C.; TOSTA, Z.T.; BISPO, M.G.S.; MESQUITA, A.C.; LOGULLO, C.J. & CORREA-JNIOR, J.D. Biorremediao em sedimentos de praias arenosas utilizando Bacillus spp. isolados de solo de floresta, in Oecologia Brasiliensis, v. 19, p. 28, 1997.

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