ndice Introduccin 1. Microscopia. 1.1 Antecedentes. 1.2 Microscopia ptica (MO). 1.2.1 Componentes del microscopio ptico. 1.2.

2 Principio de funcionamiento. 1.2.3 Tipos de microscopios pticos. 1.2.4 Variantes de observacin en MO. 1.3 Microscopia Electrnica 1.3.1 Componentes bsicos del microscopio electrnico y principio de funcionamiento. 1.3.2 Principio de funcionamiento. 1.3.3 Tipos de microscopios electrnicos. 1.4 Aplicaciones de la microscopia. 2. Centrifugacin. 2.1 Antecedentes del equipo. 2.2 Partes de la centrifuga. 2.3 Principio de funcionamiento. 2.4 Tipos de centrifugadoras. 2.5 Aplicaciones de la centrifugacin. Conclusiones. Bibliografa.

Introduccin Este proyecto se centra dos principales mtodos; la microscopia y la centrifugacin. La microscopia es uno de los mtodos esenciales para el avance del estudio de la clula. La centrifugacin es un mtodo donde se utiliza la fuerza centrifuga para separar una mezcla de diferentes densidades. Estos dos mtodos son muy necesarios en el estudio de todo lo que no percibe nuestro glbulo ocular. Por lo cual son de gran importancia ya que existe, prcticamente, todo un mundo microscpico que no vemos. Abordaremos algo de historia de cada uno de los mtodos, donde se aplican, as como, los tipos de instrumentos que utilizan y sus partes.

1. Microscopia. La microscopia es el conjunto de tcnicas y mtodos destinados a producir imgenes visibles de estructuras o detalles demasiado pequeos, en un objeto de estudio, para ser percibidos a simple vista por el ojo humano. Generalmente implica la difraccin, reflexin o refraccin de algn tipo de radiacin incidente en el sujeto de estudio. El microscopio es el elemento central de la microscopia, aunque el uso del mismo requiere todo un conjunto de mtodos y tcnicas afines pero extrnsecas al aparato, para producir imgenes adecuadas. 1.1 Antecedentes. Ya los antiguos saban que los espejos curvos y las esferas de cristal llenas de agua aumentaban el tamao de las imgenes. En las primeras dcadas del siglo XVII se iniciaron experiencias con lentes (as llamadas por tener forma de lentejas) a fin de lograr el mayor aumento posible. Anteriormente los seres vivientes ms pequeos conocidos eran insectos diminutos. Naturalmente, se daba por sentado que no exista organismo alguno ms pequeo. Pero despus los instrumentos para aumentar la visin de los objetos, o microscopios (la palabra griega significa para ver lo pequeo) comenzaron a usarse progresivamente. A continuacin se muestran hechos importantes que ayudaron al desarrollo de la microscopia y lo que se fue realizando, gracias a los mismos, a lo largo del tiempo: En 1608, Z. Jasen construye un microscopio de dos lentes convergentes. En 1611, Kepler sugiere la manera de fabricar un microscopio compuesto. En 1665, Robert Hooke, utiliza un microscopio compuesto para estudiar cortes de un corcho y describe los pequeos poros en forma de caja que se observaban a los que l llam "clulas". Publica su libro Micrographia. En 1674, Anthony van Leeuwenhoek, informa su descubrimiento de protozoarios. Observar bacterias por primera vez 9 aos despus. Es considerado el Padre de la Microscopa.

En 1683, Anthony van Leeuwenhoek, observa bacterias por primera vez. En 1828, W. Nicol, desarrolla la microscopa con luz polarizada. En 1833, Brown, publica sus observaciones microscpicas de orqudeas y describe claramente el ncleo de la clula. En 1849, J. Quekett, publica un tratado prctico sobre el uso del microscopio. En 1838, Schleiden y Schwann, proponen la teora de la clula y declaran que la clula nucleada es la unidad estructural y funcional en plantas y animales.

En 1857, Kolliker, describe las mitocondrias en clulas del msculo. En 1876, Abb, analiza los efectos de la difraccin en la formacin de la imagen en el microscopio y muestra cmo perfeccionar el diseo del microscopio.

En 1879, Flemming, describe con gran claridad el comportamiento de los cromosomas durante la mitosis en clulas animales. En 1881, Retzius, describe gran nmero de tejidos animales con un detalle que no ha sido superado por ningn otro microscopista de luz. En las siguientes dos dcadas l, Cajal y otros histlogos desarrollan nuevos mtodos de tincin y ponen los fundamentos de la anatoma microscpica.

En 1882, Koch, usa tinte de anilina para teir microorganismos e identifica las bacterias que causan la tuberculosis y el clera. En las siguientes dos dcadas, otros bacterilogos, como Klebs y Pasteur identificarn a los agentes causativos de muchas otras enfermedades examinando

preparaciones teidas bajo el microscopio. En 1886, C. Zeiss, fabrica una serie de lentes, diseo de Abb que permiten al microscopista resolver estructuras en los lmites tericos de la luz visible. En 1898, Golgi, ve y describe por primera vez el aparato de Golgi tiendo clulas con nitrato de plata. En 1908, Khler y Siedentopf, desarrollan el microscopio de fluorescencia.

En 1924, Lacassagne y colaboradores, desarrollan el primer mtodo autoradiogrfico para localizar polonio radiactivo en especmenes biolgicos. En 1930, Lebedeff, disea y construye el primer microscopio de interferencia. En 1932, Zernike, inventa el microscopio de contraste de fases. En 1937, Ernst Ruska y Max Knoll, fsicos alemanes, construyen el primer microscopio electrnico. En 1941, Coombs, usa anticuerpos acoplados a tintes fluorescentes para estudiar antgenos celulares. En 1952, Nomarski, inventa y patenta el sistema de contraste de interferencia diferencial para el microscopio de luz. En 1981, Aparece el microscopio de efecto tnel (MET).

Bueno, despus de un poco de historia, ahora mostraremos lo ms relevante de los dos tipos de microscopias que existen en la actualidad; la ptica y la electrnica. 1.2 Microscopia ptica (MO). La microscopia ptica est basada en la observacin de elementos que a simple vista no son visibles, o difcil de ver en detalle, esta disciplina nos permite apreciar la estructura de organismos de dimensiones nfimas con la ayuda del microscopio. Como su nombre lo indica, en la microscopia ptica se utilizan microscopios pticos. Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticas que nos permiten observar objetos de pequeo tamao. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek, como ya lo mencionamos anteriormente.

Este microscopio se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. Los microscopios de este tipo generalmente producen un aumento de 1000 veces el tamao original, siendo su lmite de unas 2000 veces aproximadamente. El microscopio es una de las herramientas bsicas en el estudio de la biologa. Por esto es necesario conocer sus componentes y principios de funcionamiento. 1.2.1 Componentes del microscopio ptico. El microscopio ptico compuesto est integrado por tres tipos de componentes: a) Componentes Mecnicos: Son aquellos que sirven de sostn, movimiento y sujecin de los sistemas pticos y de iluminacin as como de los objetos que se van a observar. stos se muestran en la imagen del microscopio de la figura 1. Soporte: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. Platina: Lugar donde se deposita la preparacin. Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, entre otros. Revlver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. Tornillos de enfoque: Macromtrico que aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el enfoque correcto.

Figura 1. Principales componentes de un microscopio ptico compuesto.

b) Componentes pticos: Son los objetivos, los oculares, el condensador y los prismas. . stos se muestran en la imagen del microscopio de la figura 1. Ocular: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del objetivo. Objetivo: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta. Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

c) Componentes de iluminacin: Se consideran dentro de este grupo a los instrumentos que proporcionan energa luminosa al microscopio.
La fuente de luz, con la ayuda de una lente (o sistema), llamada colector, se representa en el plano del diafragma iris de abertura del condensador. Este diagrama se instala en el plano focal anterior del condensador y puede variar su abertura numrica. El diagrama iris dispuesto junto al colector es el diafragma de campo. La variacin del dimetro del diafragma de campo permite obtener su imagen igual al campo visual lineal del

microscopio. La abertura numrica del condensador supera, generalmente la de la abertura del objetivo microscpico: es la iluminacin que permite ver mejor lo que queremos observar como las clulas o las membranas celulares entre otros.

1.2.2 Principio de funcionamiento. La luz entra en el sistema, debe enfocarse sobre la preparacin y para esto se utiliza el condensador. Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una posicin que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se observa. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se transmite al ocular. En el ocular se realiza el aumento final. Ver figura 2.

Figura 2. Principio de funcionamiento.

1.2.3 Tipos de microscopios pticos. Dentro de la microscopia ptica podemos distinguir, segn el nmero y posicin de las lentes, el microscopio simple y el compuesto. Microscopio Simple.

Est provisto de una lente o sistema de lentes convergentes dispuestas de manera que proporcionan una imagen virtual, derecha y mayor que el objeto, que a su vez est situado entre la lente y el foco. La ampliacin del microscopio simple es bastante limitada y suele utilizarse para la diseccin de pequeos animales o para la disociacin de piezas histolgicas.

Este tipo de microscopio se denomina tambin lupa. Las lupas pueden ser monoculares o binoculares. Microscopio Compuesto.

En este tipo de microscopios se combinan dos lentes o sistemas de lentes convergentes de amplificacin de imagen, colocados en los extremos del tubo: el denominado objetivo, situado ms cerca del objeto a observar; y el ocular, ms cercano al ojo del observador. o Tipos de microscopios compuestos. Estereomicroscopios.

Son microscopios dobles, con dos objetivos y dos oculares que poseen un doble prisma, el cual permite enderezar las imgenes y conservar el relieve. La iluminacin del objeto se hace por transparencia o por incidencia, siendo esta ltima ms frecuente. Estn dotados de accesorios de investigacin tales como: equipo microfotografico, doble dispositivo de observacin para poder trabajar dos observadores

simultneamente, cmaras claras y microdisectores. 1.2.4 Variantes de observacin en MO. Microscopa ptica normal (de campo brillante coloreado): El material a observar se colorea con colorantes especficos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera. Ver figura 3 y 4.

Figura 3. Clula de Pisum, coloracin: safranina-fast-green

Figur 4. Traqueidas del leo de Pinus Coloracin: safranina

Microscopa de campo brillante: El material se observa sin coloracin. La luz pasa directamente y se aprecian detalles que estn naturalmente coloreados.

El microscopio en campo oscuro utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin manchas, invisibles con iluminacin normal.

Microscopa en contraste de fase: se usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y oscuras de las clulas sin colorear. Es ideal para especmenes delgados, o clulas aisladas. El microscopio de fase ilumina el espcimen con un cono hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el microscopio de fase el cono de luz es ms estrecho y entra en el campo de visin del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que reduce la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la longitud de onda. Este tipo de iluminacin provoca variaciones minsculas en el ndice de refraccin de

un espcimen transparente, hacindolo visible. Este tipo de microscopio es muy til a la hora de examinar tejidos vivos, por lo que se utiliza con frecuencia en biologa y medicina. Ver figura 5.

Figura 5. Phase contrast image of cultured epithelial cells using a 20X objective.

Nomarski, microscopa diferencial de contraste de interferencia (DIC). Utiliza dos rayos de luz polarizada y las imgenes combinadas aparecen como si la clula estuviera proyectando sombras hacia un lado. Fue diseado para observar relieves de especmenes muy difciles de manejar, es muy utilizado en los tratamientos de fertilizacin in-vitro actuales. DIC se usa cuando el espcimen es muy grueso para usar contraste de fases. Ver figura 6.

Figura 6. Clulas epiteliales 200X

Microscopa de fluorescencia: una sustancia natural en las clulas o un colorante fluorescente aplicado al corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energa absorbida como rayas luminosas: esto se conoce como fluorescencia. La luz fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera directamente del colorante. Ver figura 7.

Figura 7. Clulas epiteliales , triple coloracin: ncleo (azul), microtubulos (verdes), actina (rojo). 200X (izq.) y 1000X (der.).

1.3 Microscopia Electrnica El microscopio electrnico utiliza electrones para iluminar un objeto. Dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar estructuras mucho ms pequeas. La longitud de onda ms corta de la luz visible es de alrededor de 4.000 angstroms (1 angstrom es 0,0000000001 metros). La longitud de onda de los electrones que se utilizan en los microscopios electrnicos es de alrededor de 0,5 angstroms. 1.3.1 Componentes bsicos del microscopio electrnico y principio de funcionamiento. Todos los microscopios electrnicos cuentan con varios elementos bsicos. Can de electrones que emite los electrones que chocan contra el espcimen, creando una imagen aumentada.

Lentes magnticas que se utilizan para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios pticos no funcionan con los electrones.

El sistema de vaco es una parte relevante del microscopio electrnico. Los electrones pueden ser desviados por las molculas del aire, de forma que tiene que hacerse un vaco casi total en el interior de un microscopio de estas caractersticas.

Sistema que registra o muestra la imagen que producen los electrones.

1.3.2 Principio de funcionamiento. Este microscopio se basa en los siguientes principios: Una fuente, un filamento de tungsteno calentado que emite electrones (ctodo).

Un nodo, hacia el cual son atrados los electrones. Una diferencia de potencial entre el ctodo y el nodo imparte un voltaje de aceleracin entre 20.000 y 200.000 voltios a los electrones, que crea el haz.

El

haz

pasa

por

una

serie

de

electroimanes

que

tienen

las

mismas funciones que las lentes de vidrio de un microscopio ptico.

1.3.3 Tipos de microscopios electrnicos. Hay dos tipos bsicos de microscopios electrnicos: el microscopio electrnico de transmisin(Transmission Electron Microscope, TEM) y el microscopio electrnico de barrido (Scanning Electron Microscope, SEM). Microscopio electrnico de transmisin (MET): permite la observacin de muestra en cortes ultra finos. Un TEM dirige el haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son

absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espcimen. Para utilizar un TEM debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de angstroms. Se coloca una placa fotogrfica o una pantalla fluorescente detrs del objeto para registrar la imagen aumentada. Los microscopios electrnicos de transmisin pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces. Ver figura 8 y 9.

Figura 8. Bacilos en divisin

Figura 9 60.000X MET, Mitocondria

MEB Un microscopio electrnico de barrido crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto. No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo con un SEM, sino que puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparativos. El SEM explora la superficie de la imagen punto por punto, al contrario que el TEM, que examina una gran parte de la muestra cada vez. Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un

haz de electrones por la pantalla de una televisin. Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o provocar la aparicin de electrones secundarios. Los electrones perdidos y los secundarios son recogidos y contados por un dispositivo electrnico situado a los lados del espcimen. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pxel en un monitor de televisin. Cuanto mayor sea el nmero de electrones contados por el dispositivo, mayor ser el brillo del pxel en la pantalla. A medida que el haz de electrones barre la muestra, se presenta toda la imagen de la misma en el monitor. Los microscopios electrnicos de barrido pueden ampliar los objetos 200.000 veces o ms. Este tipo de microscopio es muy til porque, al contrario que los TEM o los microscopios pticos, produce imgenes tridimensionales realistas de la superficie del objeto. Ver figura

Figura 10. Glbulo rojo

Figura 11. Celulas vegetals com cristales 1700X. Tecnica de falso color.

1.4 Aplicaciones de la microscopia. Existen muchas aplicaciones de la microscopia algunos ejemplos son

primeramente en la biologa donde se utiliz para la observacin de clulas, bacterias, virus, entre otras, las cuales sera imposible verlas a simple vista. En la medicina tambin juega un papel importante, al realizarse estudios de clulas infectadas por alguna enfermedad, ayuda a la identificacin de la misma y as poder destruirla con el tratamiento adecuado. En la qumica es importante tambin ya que nos ayuda a reconocer y facilitar el estudio de ciertas partculas.

2. Centrifugacin. La centrifugacin es uno de los mtodos de separacin de mezclas que puede usarse cuando la sedimentacin es muy lenta; para acelerar esta operacin la mezcla se coloca en un recipiente que se hace girar a gran velocidad; por accin de la fuerza centrifuga (fuerza-g) los componentes ms pesados se sedimentan ms rpidamente y los livianos quedan como sobrenadante. Luego la operacin que se sigue es la decantacin. La centrifuga es el elemento central de la centrifugacin. 2.1 Antecedentes del equipo. La invencin de la mquina centrfuga que purga masa cocidas azucareras ha sido atribuida a Schotter en 1848 y a Dubrunfaut, pero las autoridades en esta materia estn de acuerdo en que fue David Weston quien obtuvo la patente de la centrfuga suspendida en 1852 y la introdujo al trabajo prctico azucarero en Hawai, en 1867. Hasta bien entrado el siglo XX, al tipo de mquina centrfuga que est en uso general en la actualidad se le llamaba centrfuga Weston. Fue para trabajo azucarero que se desarrollaron equipos de filtracin de varios tipos, entre ellos el filtro Taylor de bolsas, de hace ms de 100 aos; el filtro prensa, fue sugerido por Howard alrededor de 1820, pero fue introducido con xito por Needham en 1853; y los filtros modernos de lminas, tales como los Kelley, Sweetland y Vallez, fueron introducidos de 1910 a 1920. 2.2 Partes de la centrifuga. Sus componentes son:

Rotor: Dispositivo que gira y en el que se colocan los tubos. Existen varios tipos: o Rotor basculante: Los tubos se colocan en un dispositivo (cestilla) que, al girar el rotor, se coloca en disposicin perpendicular al eje

de

giro.

As

pues

los

tubos

siempre

giran

situados

perpendicularmente al eje de giro. o Rotor de ngulo fijo: Los tubos se insertan en orificios en el interior de rotores macizos. El caso extremo es el de los rotores verticales en los que el tubo se sita paralelo al eje de giro. Este tipo de rotores es tpico de ultracentrfugas y se emplea en separaciones de molculas en gradientes de densidad

autogenerados (por ej. de cloruro de cesio). Motor: Es elctrico y capaz de girar a docenas de miles de veces por minuto. Permite que la tcnica sea ejecutada. Cmara de Vaco: Es una pieza cncava que sirve para contener dentro de ella el rotor y su respectivo soporte que lo une o conecta con el motor. Control de Velocidad, Tiempo y Temperatura: Regula la velocidad del dispositivo al igual que el dispositivo regulador de la temperatura necesaria para la centrifugacin de las muestras.

2.3 Principio de funcionamiento. El centrifugado es una sedimentacin acelerada, ya que la aceleracin de la gravedad se sustituye por la aceleracin centrfuga, angular de giro de la centrifugadora y , donde es la velocidad

es la distancia al eje de la centrifugadora.

Puesto que la velocidad angular de giro puede ser de miles de revoluciones por minuto, se alcanzan aceleraciones mucho mayores que la gravedad. El centrifugado, como la sedimentacin, est gobernado por la ley de Stokes, segn la cual las partculas sedimentan ms fcilmente cuanto mayor es su dimetro, su peso especfico comparado con el del fluido, y cuanto menor es la viscosidad del mismo. Es importante entender que el papel del fluido es esencial, pues sin su viscosidad todas las partculas caeran a la misma velocidad.

2.4 Tipos de centrifugadoras. a) Segn el rango de velocidades de giro. Centrfugas de baja velocidad, de sobremesa o clnicas. De pequeo tamao y sin refrigeracin. Alcanzan una velocidad mxima de 5000 rpm. Son tiles para la separacin de partculas grandes como clulas o precipitados de sales insolubles. Las centrfugas micrfugas son una variante de las anteriores que permiten llegar a velocidades de ms de 10.000 rpm, Los volmenes de trabajo son muy pequeos. Son tiles en el campo de la biologa molecular. Centrfugas de alta velocidad. Alcanzan velocidades de entre 18.000 y 25.000 rpm. Son refrigeradas y algunas tienen sistema de vaco para evitar el calentamiento del rotor a causa del rozamiento con el aire. Son tiles en la separacin de fracciones celulares, pero insuficientes para la separacin de ribosomas, virus o macromolculas en general. Ultracentrfugas. Superan las 50.000 rpm, por lo que tienen sistemas auxiliares de refrigeracin i de alto vaco. Hay ultracentrfugas analticas que permiten la obtencin de datos precisos de propiedades de sedimentacin (coeficientes de sedimentacin, pesos moleculares), y preparativas, tiles para aislar partculas de bajo coeficiente de

sedimentacin (microsomas, virus, macromolculas).

b) Segn el propsito. Centrifugacin analtica. Tiene como objetivo medir las propiedades fsicas que sedimentan, tales como su coeficiente de sedimentacin o su masa molecular. Especialmente en la variante ultra centrifugacin analtica. Las molculas se observan mediante un sistema ptico durante la

centrifugacin. Los tubos de centrifuga deben ser de cuarzo para dejar pasar la luz visible y ultravioleta. Rotor basculante, observacin en vertical. Centrifugacin preparativa. Es de uso ms comn. Su objetivo es aislar partculas, celular o molculas para su anlisis o utilizacin posterior. En general, se emplea mayor cantidad de muestra que en la analtica.

c) Segn el medio en el que se centrifuga y la forma en que se aplica la muestra. Las partculas se pueden separar en funcin de la velocidad de sedimentacin (centrifugacin diferencial), la masa (centrifugacin zonal) o la densidad (centrifugacin isopcnica). La centrifugacin zonal y la centrifugacin isopcnica constituyen ejemplos de centrifugacin mediante un gradiente de densidades. Centrifugacin diferencial. Es el mtodo ms comn de separacin. En este mtodo el tubo de centrifuga se llena con una mezcla uniforme. Tras la centrifugacin se obtienen dos fracciones: un tubo que contiene el material sedimentado y un sobrenadante con el material no sedimentado. El mtodo es bastante inespecfico y no se puede saber si la partcula buscada quedara en el sobrenadante, en el tubo o repartido entre ambos; sin embargo es una tcnica muy til para aislamiento de organeras subcelulares. Centrifugacin en Gradiente de Concentracin: este mtodo es algo ms complicado que la centrifugacin diferencial. La tcnica no solo permite la separacin de varios sino de todos los componentes de la muestra, tambin permite realizar medidas analticas. Este mtodo implica la utilizacin de un soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona superior a la inferior. Existen 2 variaciones dentro de la centrifugacin en gradiente de densidad:

o Centrifugacin de equilibrio en gradiente o isopicnica: esta tcnica se emplea para separar partculas similares en tamaos pero distintas en densidad. Puestos que las protenas poseen casi la misma densidad, este mtodo no suele utilizar para su separacin, sin embargo, en situaciones donde intervienen diferentes densidades, la centrifugacin isopicnica es el mtodo adecuado. o Centrifugacin zonal: la muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente de densidad preformado. Bajo fuerza centrifuga las partculas comenzaran a sedimentar a travs del gradiente, movindose cada partcula a diferentes velocidades dependiendo de su masa.

2.5 Aplicaciones de la centrifugacin. La centrifugacin es una de las tcnicas de investigacin ms importantes y de mayor aplicacin en bioqumica, biologa celular y molecular y en medicina. Son muchas las aplicaciones de la centrifugacin y pueden incluir la sedimentacin de clulas y virus, la separacin de orgnulos subcelulares y el aislamiento de macromolculas, tales como ADN, ARN, protenas o lpidos. Las investigaciones y aplicaciones clnicas de hoy en da dependen del aislamiento de clulas, orgnulos subcelulares y macromolculas, por lo general de alto rendimiento y por esta razn la centrifugacin es de muy buena ayuda para avances de estos tipos. Por ejemplo: Una aplicacin tpica consiste en acelerar el proceso de sedimentacin, dividiendo el plasma sanguneo y el suero sanguneo en un proceso de anlisis de sangre.

Es muy usada en laboratorios de control de calidad, de fbricas que elaboran zumos a base de ctricos, para controlar el nivel de pulpa fina de estos, separando la pulpa fina del zumo exprimido.

Otra aplicacin de las centrfugas es la elaboracin de aceite de oliva. En ella las aceitunas una vez molidas y batidas se introducen en una centrfuga horizontal en la que se separa el aceite que es la fraccin menos pesada del resto de componentes de la aceituna; agua, hueso, pulpa etc.

Una aplicacin importante es la separacin del uranio 235 del uranio 238.

Conclusiones. Como ya vimos la microscopia y la centrifugacin son de gran importancia en el estudio de los microorganismos. La microscopia nos ayuda a ver lo que no podemos a simple vista y la centrifugacin nos ayuda a separar los componentes de una sustancia a fin de poderlas estudiarlas o bien para verificar lo que existe dentro de ella. En la microscopia existen diferentes tipos de microscopios y para obtener una buena imagen se necesita escoger el adecuado. De igual manera en la centrifugacin dependiendo del tipo de nuestra muestra debemos escoger una centrifuga adecuada. Si esto lo realizamos bien podemos estar ms seguros de que tendremos resultados de calidad. Entrando en nuestra carrera, un ingeniero bioqumico necesita dominar estos dos mtodos de manera adecuada ya que esto le servir a lo largo de toda su carrera, ahora acadmicamente al realizar por ejemplo alguna tesis y de manera profesional, para realizar correctamente su trabajo.

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