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UNIVERSIDAD LA SALLE A.C. ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS

LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA. MANUAL DE PRCTICAS.

QFB 791 Autor: Dra. Clarisa Villegas Gmez. Responsable: Dr. Juan Rodrigo Salazar

GENERALIDADES: a) Nmero Total de Prcticas: 7 b) Duracin de cada prctica: No. de Prctica 1.- Preparacin y separacin de extractos 2.- Identificacin de metabolitos secundarios 3.- Caracterizacin de poliacetilenos a partir de zanahorias. 4.- Aislamiento de hesperidina a partir de cscaras de naranja (Citrus sinensis). 5.- Aislamiento de linalool a partir de cilantro (Coriandum sativum) 6.- Caracterizacin de capsantina a partir de chile (Capsicum sp.) 7.- Aislamiento de piperina a partir de pimienta negra (Piper nigrum). No. de Sesiones 3 h (1 sesin) 3 h (1 sesin) 6 h (2 sesiones) 6 h (2 sesiones) 3 h (1 sesin) 6 h (2 sesiones) 3 h (1 sesin)

8.- Proyecto final

4 sesiones

c) Al trmino de cada prctica se entregar un reporte, el cual deber realizarse de la siguiente manera:

- Portada. - Nombre del laboratorio. - Nombre y nmero de la prctica. - Fecha en que se realiz la prctica. - Nombre de los alumnos que integran el equipo. - Introduccin. - Objetivos (redactados de manera personal). - Desarrollo de la parte experimental. - Resultados detallados. - Detallar pesos y rendimientos de las materias primas. - Datos cromatogrficos. - Equipo a utilizar. - Conclusiones. - Cuestionario. d) El reporte ser entregado a la siguiente sesin de que se realiz la prctica. e) Evaluacin: Promedio de los reportes: Proyecto final TOTAL 50% 50% 100%

La calificacin obtenida en el laboratorio se convertir al 20% a evaluar con la teora. f) Normas de seguridad. Es indispensable en todas las prcticas el uso de bata y googles. (Al alumno que no cumpla estos dos requisitos, se le impedir el ingreso al laboratorio).

BIBLIOGRAFIA: 1.- Trease y Evans. Tratado de Farmacognosia, Mxico; Nueva Editorial Interamericana, 1991 2.- Tyler, V.E., L. R. Brady y J. E. Robbers. Farmacognosia. Buenos Aires: Ed. El Ateneo, 1985 3.- Harborne, J.B., Phytochemical Methods, a guide to modern techniques of plant analysis. Third Edition, Chapman and Hall, 1998 . 4.- Domnguez, X.A., Mtodos de investigacin fitoqumica. Primera edicin, Editorial Limusa, 1973. UNIVERSIDAD LA SALLE, A.C. Facultad de Ciencias Qumicas Materia: Farmacognosia Clave: FA010508 PRCTICA NO. 1 Carrera: QFB PREPARACIN Y SEPARACIN DE EXTRACTOS. En vigor: 2012 Revisada y Escrita por: Substituye a: Versin Aprobada por: Dra. Clarisa Villegas Gmez. 2009 QFB. Ana Beln Prxima revisin: 2013 Ogando Justo. OBJETIVO: Que el alumno conozca y aplique metodologas generales en la extraccin de los diferentes metabolitos de origen vegetal para su futura caracterizacin. MATERIAL Y REACTIVOS: 40g de planta seca 10 Matraces Erlenmeyer de 25 ml 4 Matraces Erlenmeyer de 100 ml 1 Vaso de precipitado 4 Tubos de ensaye 1 Embudo tallo corto Placas para cromatografa Lmpara U.V 100 mL Nido Parrilla de calentamiento

Acetato de etilo Hexano Diclorometano Agua destilada Etanol Piedras de ebullicin Cristales de yodo. Equipo para reflujo 1 Probeta de 10 ml 1 Tijeras

de

INTRODUCCIN:

Algunos aspectos importantes cuando se va a trabajar con plantas se mencionan a continuacin. Colecta: Las plantas deben recolectarse con cuidado, el ejemplar, al que se le asigna un nmero progresivo debe ser lo mas completo que se pueda, con hojas, tallos, flores y si es posible con semillas. Durante la colecta, las plantas se pueden poner en una bolsa de polietileno y as retardar su marchitamiento. Las plantas se deben prensar tan pronto como sea posible. Secado: Puede hacerse de dos maneras. Secado al sol: Debe cambiarse el papel peridico a las 24 h; Es muy importante, ya que en ese perodo las plantas pierden la mayor parte del agua. Despus, cambiar papeles cuatro o cinco veces ms, en las plantas con mucho agua y dos o tres veces ms en planas con poco agua. Secado artificial: (que puede ser elctrico o de otra fuente). En este caso se necesita adicionalmente cartn corrugado para facilitar el secado. Estudios preliminares para estos casos se pueden utilizar muestras de 1 a 1000 g y orientarse a localizar cualitativa o cuantitativamente varios principios activos (por ejemplo, flavonoides, sapogeninas, alcaloides, etc.) Los mtodos pueden ser:

a) Histolgicos, que consiste en la observacin del comportamiento de cortes de tejidos vegetales frente a ciertos reactivos. b) Qumicos que consiste en el tratamiento de extractos con agentes cromgenos. c) Fisicoqumicos, que consiste en el uso de cromatografa o espectroscopia (IR y UV de manera frecuente) d) Biolgicos, consiste en observar el efecto de extractos sobre cultivos de microorganismos, en animales pequeos (ratas, ratones), embriones, rganos aislados, tejidos y cultivos celulares. Determinacin cualitativa de principios activos. Las tcnicas utilizadas son muy variadas y diferentes, se procura que satisfagan criterios sobre sensibilidad, costos, reproducibilidad, etc. Para asegurar la reproducibilidad de la prueba es importante indicar si el material est fresco o seco; que cantidad de ste se extrajo; el peso del extracto obtenido y el volumen de la solucin del que se tomaron las alcuotas para las pruebas y la composicin exacta de los reactivos empleados. PARTE EXPERIMENTAL: Anlisis fitoqumico preliminar (Mtodo de Wally y colaboradores).

La cantidad de material con la que se trabajar est entre los 30 y 40g. 1.- Se colocan 5 g en un matraz Erlenmeyer y se adicionan 15 ml de disolvente y 3 piedras de ebullicin (hacer esta prueba con cuatro matraces, empleando como disolvente hexano, acetato de etilo, diclorometano, agua), y se calienta hasta ebullicin, durante 10 minutos, si el disolvente se evapora adicionar un poco ms de tal forma que el volumen no sea menor a 10 ml. 2.- Se deja enfriar, filtrar con un embudo de tallo corto y papel filtro; al residuo se le toman placas cromatogrficas, empleando placas de gel de slice y haciendo eluciones en hexano-acetato de etilo 80:20 (matraz con hexano), hexano, acetato de etilo 60:20 (matraz con acetato de etilo y con diclorometano), hexano-acetato de etilo 20:80 (matraz con agua). 3.- Para todos los casos se usa luz UV y vapores de yodo como agentes reveladores. No olvide dibujar las cromatoplacas en su bitcora de manera detallada. En que extracto observa la mayor cantidad de componentes? 4.-Posteriormente someta los extractos a evaporacin casi completa de disolventes (aproximadamente 2 3 ml) y coloque los matraces en un bao de hielo acuoso y observe si se forman precipitados slidos. 5.- Por otro lado 20 g de material seco y finamente molido se colocan en un matraz bola de 250 ml, se adicionan 100ml de etanol y se calienta hasta alcanzar el reflujo y se mantiene bajo esas condiciones durante 1 hora. Se deja enfriar y se filtra el extracto en un embudo de tallo corto, el disolvente se elimina hasta un 50% del volumen inicial. 6.- A este extracto tambin se le toma una placa cromatogrfica, la cual se eluye en hexano-acetato de etilo 20:80, empleando tambin luz UV y vapor de yodo como reveladores. Esta solucin se guarda para los experimentos a realizar en la Prctica 2. CUESTIONARIO: 1.- Qu entiende por metabolito primario y metabolito secundario? 2.- Qu importancia tiene la polaridad del disolvente en una extraccin de plantas? 3.- Mencione los principales grupos de metabolitos secundarios y para cada caso dibuje la frmula qumica de algn compuesto, mencionando que propiedad fisiolgica importante presenta. 4.- Qu clase de compuestos espera observar al revelar una cromatoplaca empleando luz UV de yodo?

Tratamiento de residuos. Los slidos debern ser secados de cualquier residuo de disolventes antes de desecharse en la basura. Los disolventes debern ser depositados en los contenedores respectivos. Los cidos y bases se debern neutralizar para poder ser depositados en los contenedores correspondientes. Si existen residuos de metales pesados, estos debern confinarse en los recipientes correspondientes.

UNIVERSIDAD LA SALLE, A.C. Facultad de Ciencias Qumicas Materia: Farmacognosia Clave: FA010508 PRCTICA NO. 2 Carrera: QFB IDENTIFICACIN DE METABOLITOS SECUINDARIOS. En vigor: 2012

Escrita por:
Dra. Clarisa Villegas Gmez.

Revisada y Aprobada por: QFB. Ana Beln Ogando Justo.

Substituye a: Versin 2009 Prxima revisin: 2013

OBJETIVO: utilizar pruebas simples y generales en la identificacin de metabolitos a partir de un extracto alcohlico simple. MATERIAL Y REACTIVOS: HCl Mg metlico HgCl2 Kl FeCl3 I2 Revelador de Sulfato crico NaOH NaCl Acetato de etilo Cloroformo Hexano Alcohol isoamlico 4 zanahorias grandes PARTE EXPERIMENTAL: Para la siguiente prctica. Cuatro zanahorias cortan en pedazos muy pequeos, los cuales se Erlenmeyer de 500 mL se adicionan 50 mL de reposar hasta la siguiente sesin, cuidando temperatura y bien tapado. de tamao grande se colocan en un matraz ter etlico y se deja condiciones a baja Metanol Etanol cido actico cido sulfrico Anhdrido actico Vainillina ter etlico Tubos de ensayo Parrilla de calentamiento y agitacin Placas de cromatografa 5 vasos de precipitados 25 y 50 mL. 5 Matraces Erlenmeyer 5, 10, 25 y 100 mL 1 Probeta de 10 mL

Se utiliza el extracto etanlico preparado en la Prctica 1. Los 100 ml se dividen en dos porciones (50 ml). Se trabajaran solo los primeros 50 ml. a) Presencia de flavonoles: 1.- Se toman 2 ml del extracto etanlico y se mezclan con 2 ml de una solucin de HCl al 1%, posteriormente se adiciona una viruta de Mg metlico, agitando suavemente la formacin de coloracin roja indica la presencia de flavonoles, posteriormente adicione 1 ml de alcohol isoamlico (observe si se forma un compuesto colorido). 2.- Realizar una cromatografa en placa fina del extracto etanlico empleando un sistema hexano/acetato de etilo 80:20 como eluyente y

cristales de yodo como revelador. Qu colores observa en la placa? Qu significa si presenta un color amarillo al revelar? b) Presencia de glicosidos. 1.- De manera convencional se emplean sales de Pb, por tal razn y debido a la alta toxicidad que presenta solo se realizar por medio de la coloracin en cromatografa en placa fina. Se aplica una muestra del extracto etanlico en una placa cromatogrfica y se eluye en un sistema diclorometano-metanol-agua (87:12:1), una vez que se eluy la placa se revela con una solucin preparada de sulfato crico en cido sulfrico, (anote sus observaciones). 2.- A 12 ml del extracto etanlico se le agrega agua caliente (10 ml) y se agita durante 15min. Si se genera espuma y esta perdura por ms de 15 minutos, se considera como prueba positiva de saponinas. c) Presencia de alcaloides: 1.- A 15 ml del extracto etanlico se le evapora el disolvente hasta sequedad y se disuelve en una solucin de HCl 2N, adicionndole una cantidad similar de solucin saturada de NaCl, se deja reposar durante 10 minutos, finalizado ste tiempo se filtra y al filtrado se realizan pruebas con los reactivos de Dragendorff Mayer. Para preparar el reactivo de Mayer se disuelve 1.36 g de HgCl2 en 60ml de agua y 5 g de Kl en 10 ml de agua, se juntan las soluciones y se aforan a 100 ml. En caso de no contar con los reactivos arriba descritos, se puede utilizar el reactivo de Wagner, este se prepara disolviendo 1.27 g de yodo y 2 g de yoduro de potasio en 20 ml de agua; la solucin se afora a 100 ml con agua destilada, la mayora de las soluciones aciduladas de alcaloides forman precipitados floculentos color marrn. La parte restante de la solucin se utiliza para cromatografa en capa fina ocupando como revelador una solucin del reactivo de Wagner, y como sistema de elucin cloroformo-metanol 9:1 Ultimo paso: Una porcin de 60 ml, se evapora hasta tener un volumen aproximado de 6 ml., El restante se divide en tres partes para las siguientes pruebas. d) Presencia de taninos: El residuo se disuelve en 5 ml de agua destilada y se adicionan 5 ml de solucin de FeCl3 acuoso, deje reposar por 5 min y anote sus observaciones.

e) Presencia de fenoles: El residuo se disuelve en 8 ml de una solucin de HCl al 1% se agita durante 5 minutos y se extrae con ter etlico (2 X 8 ml), una vez separada la fase etrea se toma una placa cromatogrfica utilizando cido actico-diclorometano (1:9). Se revela con una solucin de vainillina-cido sulfrico, el cual se prepara disolviendo 3 g de vainillina en 100 ml de etanol absoluto, se adicionan 0.5 ml de cido sulfrico y se agita por 10 minutos. f) Presencia de terpenos: Para este caso primero se prepara un reactivo mezclando anhdrido actico-cido sulfrico-cloroformo (10:1:25), se adiciona 10 ml de esta solucin al residuo y se agita durante 3 a 5 minutos, la aparicin de colores rojizos o azules se consideran prueba positiva.

CUESTIONARIO: 1.- Mediante que reacciones qumicas podran diferenciar los grupos funcionales presentes en los metabolitos secundarios de la prctica 2? 2.- Si se quisiera confirmar la estructura de algn compuesto en especial, que tcnica analtica utilizara y porqu? 3.- Qu sugiere para descartar o confirmar la presencia de algn metabolito buscando mediante la generalizacin realizada en la prctica? 4.- Cundo usted se prepara un t, que grupos de compuestos considera que se extraen en mayor proporcin y porqu?

Tratamiento de residuos. Los slidos debern ser secados de cualquier residuo de disolventes antes de desecharse en la basura. Los disolventes debern ser depositados en los contenedores respectivos. Los cidos y bases se debern neutralizar para poder ser depositados en los contenedores correspondientes.

Si existen residuos de metales pesados, estos debern confinarse en los recipientes correspondientes.

DE ZANAHORIAS. Revisada y Escrita por: Aprobada por: Dra. Clarisa Villegas Gmez. QFB. Ana Beln Ogando Justo.

UNIVERSIDAD LA SALLE, A.C. Facultad de Ciencias Qumicas Materia: Farmacognosia Clave: FA010508 PRCTICA NO. 3 Carrera: QFB CARACTERIZACIN DE POLIACETILENOS A PARTIR En vigor: 2012 Substituye a: Versin 2009 Prxima revisin: 2013

OBJETIVO: Realizar la caracterizacin de falcarinol, un compuesto poliacetilnico a partir de zanahorias como fuente natural. MATERIAL Y REACTIVOS: 1 Matraz Erlenmeyer de 500 ml Equipo de destilacin 1 Embudo de tallo corto 1 Matraz bola de 100 ml 1 Probeta de 10 ml Placas cromatogrficas Lmpara UV Cscaras de naraja I2 INTRODUCCIN: Las zanahorias poseen cuatro tipos de acetilenos, el mayor de ellos es el falcarinol, este compuesto es dbilmente txico pues posee una propiedad neurotxica, sin embargo, en las zanahorias su concentracin es extremadamente pequea que no presenta algn peligro en la dieta Papel filtro Piedras de ebullicin MgSO4 Hexano Benceno Cloroformo Revelador de Sulfato Crico. Eter etlico

diaria. Este compuesto se aisla fcilmente de las zanahorias y la presencia de falcarinol puede observarse por medio de espectroscopia UV. PARTE EXPERIMENTAL: Para la siguiente prctica. 100 g de cscara de naranja cortada en pedazos muy pequeos se colocan en un matraz Erlenmeyer de 1000 ml y se adicionan 350 ml de una solucin de hidrxido de calcio al 10%, agitando manualmente por un periodo de hora y media, dejndolo en reposo hasta la siguiente sesin. Cuatro zanahorias de tamao grande se cortan en pedazos muy pequeos, los cuales se colocan en un matraz Erlenmeyer de 500 mL se adicionan 50 mL de ter etlico y se deja reposar hasta la siguiente sesin, cuidando condiciones a baja temperatura y bien tapado. (ya se realiz) Al trmino de este tiempo, el ter se decanta, el residuo etreo se seca sobre MgSO4 y se destila suavemente el ter en un bao Mara (cuidar que la temperatura no exceda de los 35C). El residuo se disuelve en un pequeo volumen de hexano y se toman placas cromatogrficas que se eluyen en un sistema benceno-cloroformo (10:1), utilizando un revelador de sulfato crico en cido sulfrico, una vez rociadas las placas, se calientan por unos minutos. La presencia de falcarinol se toma como positiva cuando en la placa se observa una intensa mancha color caf. Realice tambin pruebas ocupando vapores de yodo y luz UV como reveladores. Utilice la siguiente sesin para realizar la caracterizacin en UV de la sustancia aislada.

CUESTIONARIO: 1.- Estudios recientes sobre productos naturales, han demostrado que los compuestos alqunicos poseen actividad farmacolgica muy interesante, uno de los ejemplos ms contundentes son los enedinos, de un ejemplo de este tipo de compuestos y para tal caso cite su inters farmacolgico. 2.- Cul es el origen biogentico de los compuestos acetilnicos? 3.- Qu prueba de caracterizacin de grupos funcionales sugiere para este caso?

4.- Usted cree posible la presencia de falcarinol en otro tipo de tubrculos?

Tratamiento de residuos. Los slidos debern ser secados de cualquier residuo de disolventes antes de desecharse en la basura. Los disolventes debern ser depositados en los contenedores respectivos. Los cidos y bases se debern neutralizar para poder ser depositados en los contenedores correspondientes. Si existen residuos de metales pesados, estos debern confinarse en los recipientes correspondientes.

CASCARAS DE NARANJA (Citrus sinensis) Revisada y Aprobada por: Dra. Clarisa Villegas Gmez. QFB. Ana Beln Ogando Justo.

UNIVERSIDAD LA SALLE, A.C. Facultad de Ciencias Qumicas Materia: Farmacognosia Clave: FA010508 PRCTICA NO. 4 Carrera: QFB AISLAMIENTO DE HESPERIDINA A PARTIR DE En vigor: 2012 Substituye a: Versin 2009 Prxima revisin: 2013

Escrita por:

OBJETIVO: Aislamiento e identificacin de flavonoides, en especial de hesperidina a partir de las cscaras de la naranja. MATERIAL Y REACTIVOS: cido actico 2 Matraz Erlenmeyer de 500 ml

Hidrxido de calcio Celita Cloruro frrico cido clorhdrico Formamida Magnesio 1 Matraz kitazato de 500 ml

1 Embudo Buchner 4 Tubos de ensaye Hexano Metanol Agua destilada Papel filtro Cscaras de naranja

PARTE EXPERIMENTAL: 100 g de cscara de naranja cortada en pedazos muy pequeos se colocan en un matraz Erlenmeyer de 1000 ml y se adicionan 350 ml de una solucin de hidrxido de calcio al 10%, agitando manualmente por un periodo de hora y media, dejndolo en reposo hasta la siguiente sesin. Finalizado el tiempo, la mezcla se filtra a travs de un embudo Bchner con una capa delgada de celita y papel filtro. El filtrado de color amarillo-naranja se acidula cuidadosamente a pH de 4 a 6 con cido clorhdrico concentrado; la hesperidina precipita como un slido amorfo. El precipitado se separa mediante filtracin en un Bchner y se lava con muy poca cantidad de agua destilada helada. Nota: Si la precipitacin de hesperidina al momento de adicionar el cido clorhdrico es muy lenta, es conveniente concentrar la solucin a presin reducida. Al residuo se le realizan las siguientes pruebas: a) Prueba con cloruro frrico: La adicin de una solucin de cloruro frrico a una muestra de hesperidina produce un color rojo. b) Prueba con cido clorhdrico-magnesio: La adicin de cido clorhdrico a una solucin etanlica de hesperidina que contiene magnesio produce un color violeta. Utilice la segunda sesin para realizar la caracterizacin de la sustancia aislada. CUESTIONARIO: 1.- Cul es la biognesis de los flavonoides?

2.- Cules son las propiedades fsico qumicas ms importantes de las flavonas e isoflavonas? 3.- Cite al menos una estrategia de sntesis de flavonas. 4.- Qu fuente natural es rica en flavonas y cuales son sus atribuciones farmacolgicas?

Tratamiento de residuos. Los slidos debern ser secados de cualquier residuo de disolventes antes de desecharse en la basura. Los disolventes debern ser depositados en los contenedores respectivos. Los cidos y bases se debern neutralizar para poder ser depositados en los contenedores correspondientes. Si existen residuos de metales pesados, estos debern confinarse en los recipientes correspondientes.

UNIVERSIDAD LA SALLE, A.C. Facultad de Ciencias Qumicas Materia: Farmacognosia Clave: FA010508 PRCTICA NO. 5 Carrera: QFB

AISLAMIENTO DE LINALOOL A PARTIR DE CILANTRO (Coriandum sativum) Revisada y Escrita por: Aprobada por: Dra. Clarisa Villegas Gmez. QFB. Ana Beln Ogando Justo.

En vigor: 2012 Substituye a: Versin 2009 Prxima revisin: 2013

OBJETIVO: Aislamiento de aceites escenciales, de manera particular monoterpenos acclicos (linalol) a partir de cilantro (Coriandum sativum). MATERIAL Y REACTIVOS: 3 Matraz Erlenmeyer de 500 ml Material de vidrio para destilacin por arrastre de vapor. Lmpara de luz UV Agua destilada Cristales de yodo Vainillina Benceno Cloroformo Hexano Placas cromatogrficas Cilantro fresco INTRODUCCIN: Los compuestos denominados aceites esenciales generalmente se utilizan como saborizantes y aromatizantes, algunos presentan actividad fisiolgica, por ejemplo los derivados de Anethum graveolens (eneldo), todos ellos tienen la caracterstica de ser principalmente monoterpenos, especialmente aldehdos o cetonas (cuminaldehdo y carvona) en la gran mayora de los casos. Las diferencias entre los aromas que de ellos se obtienen estn ligadas a las diferencias estructurales. La cromatografa en capa fina es un buen mtodo para determinar la cantidad de monoterpenos aislados a partir de una fuente en especial, esta metodologa puede servir para muestras desconocidas y compararlas con patrones preestablecidos y as conocer si algn compuesto en especial se repite en ms de una especie, esto es muy til en farmacognosia.

PARTE EXPERIMENTAL: En un matraz Erlenmeyer de 250 ml se colocan 50 g de cilantro fresco y se someten a una extraccin por arrastre de vapor, hasta obtener alrededor de 200ml. La caracterizacin del linalol se realiza mediante cromatografa en placa fina, utilizando como eluyente benceno (100%), benceno-cloroformo (1:1) y hexano-cloroformo (3:2). Observe las cromatoplacas en la luz UV (el linalol, genera una fuerte absorcin obscura). NOTA: realizar dos placas de cada eluyente (dos lotes de tres placas) Las primeras tres cromatoplacas se revelan con vainillina y se calientan. Las otras tres placas se revelan con Yodo. En ambos casos realice sus notas pertinentes. Finalmente, es agradable el aroma del linalol?, Le recuerda algn aroma en especial?

CUESTIONARIO: 1.-Qu importancia tienen los aceites esenciales para el ser humano? 2.- Cite algn ejemplo de aceite esencial que posea actividad farmacolgica y cul es sta. 3.- Cul es el origen biosinttico de los terpernos? 4.- Cuntas vas biosintticas existen para los terpenos? 5.- Cul de stas dos vas pertenece al linalol? 6.- Se sabe que la gran mayora de los terpernos son de muy baja polaridad, Entonces por qu se utiliza arrastre de vapor de agua como tcnica de aislamiento?.

Tratamiento de residuos. Los slidos debern ser secados de cualquier residuo de disolventes antes de desecharse en la basura.

Los disolventes debern ser depositados en los contenedores respectivos. Los cidos y bases se debern neutralizar para poder ser depositados en los contenedores correspondientes. Si existen residuos de metales pesados, estos debern confinarse en los recipientes correspondientes.

UNIVERSIDAD LA SALLE, A.C. Facultad de Ciencias Qumicas Materia: Farmacognosia Clave: FA010508 PRCTICA NO. 6 Carrera: QFB CARACTERIZACIN DE CAPSANTINA A PARTIR DE En vigor: 2012
CHILE (Capsicum sp.)

Escrita por:
Dra. Clarisa Villegas Gmez.

Revisada y Aprobada por: QFB. Ana Beln Ogando Justo.

Substituye a: Versin 2009 Prxima revisin: 2013

OBJETIVO: Caracterizacin de capsantina, compuesto carotenoide a partir de de chile. MATERIAL Y REACTIVOS: Equipo para reflujo de 250 o de 500 mL. KOH 1 Embudo de separacin de 500 ml Hexano 1 Embudo Bchner de tallo corto Cloroformo Nido Acido sulfrico 1 Matraz Erlenmeyer de 250 ml Agua destilada 1 Matraz Kitazato de 100 ml Na2SO4 1 Embudo de tallo corto Papel filtro Parrilla de calentamiento Cristales de yodo Lmpara de luz UV Chiles INTRODUCCIN: Los carotenoides son pigmentos inestables, se oxidan fcilmente, de manera particular cuando se exponen al aire en la cromatografa de capa fina, tambin sufren isomera cis-trans al realizar el aislamiento. Mucha de la identificacin de carotenoides se basa en la cromatografa por placa fina, comparndola con muestras estndar para aquellos casos en donde sea posible. Otra forma es a travs de la informacin que proporciona la espectroscopia de UV, ya que para este caso aparecen absorciones caractersticas de 400 a 500 nm.

PARTE EXPERIMENTAL: 1.- 50 g de chiles finamente cortados se colocan a reflujo durante 1.5 h en 100 ml de hexano, finalizado este tiempo se deja enfrar y se filtra, 2.- Al filtrado se le adicionan 20 ml de cloroformo y 15 ml de una solucin de KOH al 30%, se agita durante 1 h, 3.- Finalizado ste tiempo se separan las fases orgnica e inorgnica, a la fase orgnica se le realizan dos lavados con agua destilada (30 ml c/u), y al final se seca sobre Na2SO4, este residuo se concentra hasta obtener un volumen aproximado de 10 ml del extracto. 4.- Se adicionan 20 ml de hexano y se deja en reposo en un lugar obscuro hasta la siguiente sesin, tiempo durante el cual los cristales de capsantina aparecern; stos se separan por filtracin. 5.- Se adicionan de 3 a 5 ml de una solucin de cloroformo-cido sulfrico, y se observar la formacin de un color azul. (Mientras ms color azul se observ, ms concentracin de capsantina) Realice cromatografa en placa fina utilizando como eluyente hexano:acetato de etilo (90:10) y como revelador vapores de yodo y luz UV Utilice la segunda sesin para la caracterizacin del producto aislado. CUESTIONARIO: 1.- Cul es el origen biogentico de los carotenoides? 2.- Qu importancia tienen en el ser humano? 3.- La capseicina, es un metabolito presente en los chiles; Cul es la frmula de dicho compuesto y que propiedades farmacolgicas presenta? 4.- Qu otras fuentes naturales son ricas en carotenoides?

Tratamiento de residuos. Los slidos debern ser secados de cualquier residuo de disolventes antes de desecharse en la basura.

Los disolventes debern ser depositados en los contenedores respectivos. Los cidos y bases se debern neutralizar para poder ser depositados en los contenedores correspondientes. Si existen residuos de metales pesados, estos debern confinarse en los recipientes correspondientes.

UNIVERSIDAD LA SALLE, A.C. Facultad de Ciencias Qumicas Materia: Farmacognosia Clave: FA010508 PRCTICA NO. 7 Carrera: QFB AISLAMIENTO DE PIPERINA A PARTIR DE PIMIENTA En vigor: 2012
NEGRA (Piper nigrum)

Escrita por:
Dra. Clarisa Villegas Gmez.

Revisada y Aprobada por: QFB. Ana Beln Ogando Justo.

Substituye a: Versin 2009 Prxima revisin: 2013

OBJETIVO: Aislamiento e identificacin de piperina, alcaloide comn en especies del gnero Piper. MATERIAL Y REACTIVOS: Soxhlet Parrilla de calentamiento 1 Embudo Hirsch de tallo corto 1 Matraz kitazato de 50 ml 1 Matraz Erlenmeyer de 50 ml Lmpara U.V Hidrxido de potasio I2 Etanol Acido Sulfrico Placas cromatogrficas Papel filtro

Piedras de ebullicin Pimienta negra en bola (prohibido traer pimienta molida) Nido al tamao del equipo Soxhlet PARTE EXPERIMENTAL: 10 g de pimienta negra finamente molida se someten a extraccin con 50 ml de etanol al 95% en un aparato soxhlet por 1.5 horas. La solucin se filtra y concentra. Se adiciona al filtrado una solucin alcohlica de hidrxido de potasio (10 ml al 10%), se decanta la solucin debido a la formacin de un residuo insoluble. Se induce la cristalizacin de la solucin alcohlica hasta la formacin de agujas amarillentas (si esto no es posible, concentre en el rotavapor la disolucin hasta unos 5 mL, e induzca la cristalizacin), estas se filtran en un embudo Hirsch, se dejan secar y se obtiene el rendimiento del alcaloide. Pruebas de identificacin: a) El extracto se aplica en una placa cromatogrfica y se eluye en un sistema benceno-acetato de etilo 2:1. Si la placa se somete a la luz UV se observar una fluorescencia color azul debida a la piperina. b) Si se roca un cido sulfrico y se calienta a por unos min, piperina adquirir una coloracin amarilla-caf. la

c) Realizar otra placa en el mismo eluyente y someterla en cristales de Yodo, anotar las posibles diferencias entre estos dos reveladores. SOY MUY ENOJONA Y AGRESIVA, RECONOZCO QUE NECESITO AYUDA. ARELI TAL VEZ SEA LA RESPONSABLE, SIENTO COSAS MUY EROTICAS POR ELLA. OJALA LA TUVIERA DESNUDA EN MI CAMA LA DESEO CON LOCURA Y PASION DESENFRENADA SERA MI PEQUEO SECRETO. pf de 125 a 126C. CUESTIONARIO: 1.- Cules son las propiedades fsico qumicas ms importantes de los alcaloides? 2.- Se podra englobar una sola va biogentica para los alcaloides? 3.- Bajo que condiciones se recomienda el aislamiento de alcaloides? 4.- Cul es el agente revelador por excelencia para determinar la presencia de alcaloides en una muestra?

Tratamiento de residuos.

Los slidos debern ser secados de cualquier residuo de disolventes antes de desecharse en la basura. Los disolventes debern ser depositados en los contenedores respectivos. Los cidos y bases se debern neutralizar para poder ser depositados en los contenedores correspondientes. Si existen residuos de metales pesados, estos debern confinarse en los recipientes correspondientes.

UNIVERSIDAD LA SALLE, A.C. Facultad de Ciencias Qumicas Materia: Farmacognosia Clave: FA010508 PRCTICA NO. 8 Carrera: QFB PROYECTO DE INVESTIGACION En vigor: 2012 Revisada y Escrita por: Substituye a: Versin Aprobada por: Juan Rodrigo Salazar 2009

QFB. Ana Beln Ogando Justo.

Prxima revisin: 2013

OBJETIVO: el estudiante plantear un proyecto de investigacin. MATERIAL Y REACTIVOS: El alumno deber entregar al docente una lista con el material solicitado para poder trabajar. PARTE EXPERIMENTAL: el alumno disear su propio procedimiento y lo entregar al docente para su evaluacin. Las metas del proyecto son: aislar un metabolito secundario y caracterizarlo mediante UV, IR, y otras tcnicas si fuera necesario. Los alumnos debern hacer incapie en utilizar metodologas limpias e indicar los procedimientos para el tratamiento y disposicin final de los residuos de cada prctica.