Cromatografa de intercambio inico en aminoacidos La cromatografa de intercambio inico se lleva a cabo con resinas sintticas que contengan grupos

reactivos bsicos o cidos o usando celulosa modificada con grupos funcionales adecuados. (Warton 1973) La separacin de una mezcla de aminocidos en una columna de intercambio de iones resulta de las interacciones ionicas e hidrofbicas entre las molculas del aminocido y la resina. El grado de resolucin obtenido depende de estas interacciones y en el flujo de amortiguadores eluyentes a travs de la columna. Una gran cantidad de variables influencian estas interacciones. El cambio de algunos parmetros puede cambiar el orden de elusin, pero generalmente los aminocidos sern eludos en el orden del grupo cido, neutro y bsico. Este orden surge de los valores del pKa de los aminocidos y de las interacciones hidrofbicas entre las cadenas laterales no polares y la resina, las ramificaciones o el tamao pequeo de las cadenas laterales no polares disminuyen el tiempo de elusin. (Blackburn 2000) Para alcanzar una buena separacin de una mezcla de aminocidos, los dos principales requerimientos son resolucin adecuada y buena sensibilidad. La resolucin de dos picos adyacentes depende de la separacin de las bandas de sus centros y del ancho de sus bandas. Una buena sensibilidad para un sistema requiere una alta concentracin del aminocido en el centro de la banda. (Blackburn 2000) El alto de un pico es directamente proporcional al rea de la columna y a la raz cuadrada de su longitud. Para aumentar la resolucin y la sensibilidad se usan dimetros ms pequeos y longitudes ms cortas. (Blackburn 2000) El tamao de la muestra no debe exceder el 6% del volumen de la columna de preferencia se usa una muestra ms pequea. El pH del buffer puede ser de eleccin personal. Se ha reportado que el pH de la muestra puede favorecer la resolucin del anlisis en las primeras partes del cromatograma, pero alteracin de amortiguadores de elusin puede alcanzar los mismos efectos an con muestras aplicadas en el buffer de pH2.2 de Moor y Stein. (Blackburn 2000) Las dimensiones de los picos son afectadas por la tasa de flujo a travs de la columna. El grueso de los picos en el cromatograma vara directamente como funcin de la raz cuadrada de la tasa de flujo y la altura vara inversamente a esta misma funcin. En la prctica es difcil conseguir una buena resolucin con un flujo muy lento porque esto aumenta la presin en la parte de atrs de la columna. (Blackburn 2000)