Oiv-Oeno 419a-2011

RESOLUCIN OIV-OENO 419A-2011
MTODOS ESPECFICOS PARA EL ANLISIS DE LOS AZCARES DE UVA (MOSTO CONCENTRADO RECTIFICADO)
LA ASAMBLEA GENERAL CONSIDERANDO el articulo 2 prrafo 2 iv del Acuerdo del 3 de abril de 2001 que establece la Organizacin Internacional de la Via y el Vino, TOMANDO EN CUENTA los trabajos de la Subcomisin de Mtodos de Anlisis en la puesta al da del compendio con los mtodos especficos para el anlisis de los azcares de uva TOMANDO EN CUENTA la Resolucin existente OENO 47/2000 sobre las especificaciones del Azcar de Uva y de los mtodos relacionados y la necesidad de poner al da estos mtodos especficos DADO que los mtodos siguientes han sido reconocidos por organismos internacionales de la autoridad, DECIDE crear un Anexo F titulado los Mtodos Especficos para el Anlisis de los Azcares de Uva DECIDE insertar, en el Anexo F del Compendio de Mtodos de Anlisis Internacionales de Vinos y Mostos, los mtodos descritos en el apndice siguiente DECIDE en consecuencia adaptar la Resolucin Oeno 47/2000 incluida en el Cdigo Enolgico Internacional.
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ANEXO B: CONDUCTIVIDAD Tipo IV 1. Fundamento del mtodo Medida de la conductividad elctrica de una columna de lquido, delimitada por dos electrodos de platino (mantenidos paralelos), que constituye una de las ramas de un puente de Wheatstone. La conductividad vara con la temperatura y se expresa a 20 C. 2. 2.1. 2.2. Reactivos Agua purificada para laboratorios, de conductividad especfica inferior a 2 microsiemens por cm a 20 C, por ejemplo agua EN ISO 3696 tipo II. Solucin de cloruro de potasio de referencia Disolver en agua desmineralizada (punto 2.1) 0,581 g de cloruro de potasio, KCl, previamente secado hasta obtener una masa constante a la temperatura de 105 C. Completar hasta 1 litro con agua desmineralizada (punto 2.1). Esta solucin tiene una conductividad de 1 000 microsiemens por cm a 20 C. Su plazo de conservacin se limita a 3 meses. Se puede usar una preparacin comercial.
Usar slo reactivos de grado qumico
3. 3.1. 3.2.
Material Conductmetro que permita efectuar medidas de conductividad en una banda comprendida entre 1 y 1 000 microsiemens por cm (S cm-1). Bao Mara que permita poner las muestras problema a una temperatura de aproximadamente 20 C (20 2 C).
4. 4.1.
Procedimiento Preparacin de la muestra problema Utilizar una solucin cuyo contenido en azcares totales sea del 25 0,5 % (m/m) (25 Brix): pesar una masa igual a 2500 / P y completar hasta 100 g con agua (2.1), P = porcentaje (m/m) de azcares totales del mosto concentrado rectificado.
4.2.
Determinacin de la conductividad Llevar la muestra problema a una temperatura de 20 C mediante inmersin en un bao Mara. Comprobar la temperatura con una aproximacin de 0,1 C.
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Lavar dos veces la clula de medida del conductmetro con la solucin que vaya a analizarse. Medir la conductividad expresada en microsiemens por centmetro.
5.
Expresin de los resultados La conductividad se expresa en microsiemens por centmetro (Scm1) a 20 C, sin decimales, para la solucin al 25 % (m/m) (25 C Brix) de mosto concentrado rectificado.
5.1.
Clculo En caso de que el aparato no cuente con un compensador de temperatura, corregir la conductividad que se haya medido mediante la tabla I. Si la temperatura es inferior a 20 C, aadir la correccin; si la temperatura es superior a 20 C, restar la correccin.
6.
Caractersticas del mtodo
Repetibilidad (r) r = 3 S/cm Reproducibilidad (R) R = 16 S/cm
TABLA I Correcciones de conductividad para temperaturas distintas de 20 C en microsiemens cm1 Temperaturas Conductividad 20,2 20,4 20,6 20,8 21,0 21,2 21,4 19,8 19,6 19,4 19,2 19,0 18,8 18,6 0 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 2 3 0 0 1 1 2 2 3 3 3 3 4 5 5 0 1 1 2 3 3 4 5 5 6 7 7 8 0 1 2 3 3 4 5 6 7 8 9 10 11 0 1 2 3 4 6 7 8 9 10 11 12 13 0 1 3 4 5 7 8 9 11 12 13 14 16 0 1 3 5 6 8 9 11 12 14 15 17 18 21,6 18,4 0 2 3 5 7 9 11 12 14 16 18 19 21 21,8 22,0(1) 18,2 18,0(2) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 0 2 4 7 9 11 13 15 18 20 22 24 26
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 (1) (2)
Restar la correccin Sumar la correccin
ANEXO C: HIDROXIMETILFURFURAL (HMF) por cromatografa liquida de alto rendimiento Tipo IV 1. Fundamento del mtodo Cromatografa liquida de alto rendimiento (CLAR) Separacin a travs de una columna por cromatografa fase-inversa y determinacin en 280 nanmetros. 2. 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. Reactivos Agua purificada para uso de laboratorio y de calidad corriente EN ISO 3696 Metanol, CH3OH destilado o de calidad HPLC Nmero CAS 67-59-1 cido actico, CH3COOH (20 = 1,05 g/ml) Nmero CAS 64-19-7 Fase mvil: agua (2.1) metanol (2.2) - cido actico (2.3) previamente filtrados por membrana (0,45 m), (40 : 9 : 1, v/v). Esta fase mvil debe prepararse diariamente y desgasificarse antes de su uso. 2.5. Solucin de referencia de hidroximetilfurfural de 25 mg/l (m/v). Introducir, en un matraz aforado de 100 ml, 25 mg exactamente pesados de hidroximetilfurfural C6H3O6, y completar el volumen con metanol (2.2). Diluir esta solucin al 1/10 con metanol (punto 2.2) y filtrarla por una membrana (0,45 m). Esta solucin se conserva de 2 a 3 meses si se introduce en un frasco de vidrio topacio hermticamente cerrado y se mantiene refrigerada. (la concentracin de la solucin de referencia se da a ttulo orientativo) 3. 3.1. 3.1.1 Material Equipo Cromatgrafo de lquidos de alta resolucin equipado con: un inyector con loop de 5 o 10 l (a ttulo indicativo), un detector espectrofotomtrico que permita efectuar mediciones a 280 nm, una columna de slice dopada con octadecilo (por ejemplo: Bondapak C18 Corasil, Waters Ass.), un registrador y, en su caso, un integrador.
Flujo de la fase mvil: 1,5 ml/min. (a ttulo indicativo) 3.1.2 4. 4.1. Equipo de filtracin por membrana (0,45 m) Procedimiento Preparacin de la muestra Utilizar la solucin obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 % (m/v) (introducir 200 g de mosto concentrado rectificado, pesado exactamente, en un matraz aforado de 500 ml, enrasar con agua y homogeneizar) y filtrarla por membrana (0,45 m). 4.2. Determinacin cromatogrfica Inyectar en el cromatgrafo 5 (o 10) l de la muestra preparada del modo indicado en el punto 4.1 y 5 (o 10) l de solucin de referencia de hidroximetilfurfural (punto 3.2.5). Registrar el cromatograma. El perodo de retencin del hidroximetilfurfural es de aproximadamente 6 7 minutos. El volumen inyectado y la secuencia se dan a ttulo orientativo. La determinacin cromatogrfica puede realizarse tambin con una curva de calibracin 5. Expresin de los resultados El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectificado se expresa en miligramos por kilogramo de azcares totales. 5.1. Modo de clculo Sea C mg/l el contenido en hidroximetilfurfural de la solucin de mosto concentrado rectificado al 40 % (m/v). El contenido en hidroximetilfurfural en miligramos por kilogramo de azcares totales viene expresado por: 250 * C/P P 6. = contenido % (m/m) en azcares totales del mosto concentrado rectificado.
Caractersticas del mtodo Repetibilidad (r) r = 0,5 mg/kg azcares totales Reproducibilidad (R) R = 3,0 mg/kg azcares totales
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ANEXO E: DETERMINACIN DEL GRADO ALCOHLICO VOLUMTRICO ADQUIRIDO (GAV) DE LOS MOSTOS CONCENTRADOS (O DE LOS MOSTOS CONCENTRADOS RECTIFICADOS, MCR) Tipo: IV 1. Introduccin
Los mostos concentrados y los azcares de uva (MCR) son productos espesos con un bajo contenido de alcohol; la determinacin de su GAV adquirido requiere el uso de un mtodo cuyos resultados (linealidad, repetibilidad, reproducibilidad, especificidad, lmites de deteccin y de cuantificacin) permitan medir contenidos de alcohol inferiores al 1%vol. 2. Campo de aplicacin
Este mtodo se aplica a los mostos concentrados y a las azcares de uva.
3.
Principio
A. Una masa conocida de mosto concentrado (MC) o de azcar de uva se alcaliniza mediante suspensin de hidrxido de calcio y luego se destila. El grado alcohlico volumtrico del destilado se determina mediante densimetra electrnica o por densimetra usando una balanza hidrosttica. 4. Reactivos
- Suspensin de hidrxido de calcio 2M de calidad analtica obtenido vertiendo con precaucin un litro de agua caliente (60 a 70 C) en aproximadamente 120 g de cal viva (CaO). - Solucin antiespumante obtenida por dilucin de 2 ml de antiespumante de silicona concentrada en 100 ml de agua. - Agua purificada para laboratorio de calidad EN ISO 3696. 5. Material
- Material corriente de laboratorio, matraces de 200 ml. - Balanza analtica para pesar hasta 0,1 g aproximadamente. - Cualquier tipo de equipo de destilacin o destilacin al vapor puede usarse, si cumple la siguiente prueba: Destilar una mezcla de etanol y agua con un grado alcohlico de 10% vol. cinco veces consecutivas. El destilado debe tener un grado alcohlico de al menos 9,9% vol. despus de la quinta destilacin: esto es, la prdida de alcohol durante cada destilacin no debera ser superior a 0,02% vol. - Densmetro electrnico con un resonador de flexin o densmetro con balanza hidrosttica.
6.
Procedimiento
- Homogeneizar la muestra dando vueltas al matraz. - En un matraz aforado de 500 ml, pesar aproximadamente 200 g de mosto concentrado o rectificado (con una precisin de hasta 0,1 g aproximadamente). Anotar el peso (PE) de esta muestra. Completar hasta la raya de graduacin con agua desionizada. Esta solucin es de 40% p/v en mosto. Obtencin del destilado - Traspasar 250 ml de la solucin al 40% al matraz de destilar. Aadir en el matraz aproximadamente 10 ml de suspensin de hidrxido de calcio, aproximadamente 5 ml de solucin antiespumante y, llegado el caso, un regulador de ebullicin (fragmentos de porcelana, por ejemplo) - Llevar al punto de ebullicin con suavidad. - Recoger el destilado en un matraz aforado de 200 100 ml (aproximadamente 190 90 ml). - Dejar que el destilado llegue a la temperatura ambiente y completar hasta la raya de la graduacin con agua desionizada. Medicin del GAV Se lleva a cabo mediante densimetra electrnica o balanza hidrosttica. 7. Clculo
Grado alcohlico volumtrico alcanzado = GAV medido X 200 X MV PE GAV medido = contenido de alcohol dado por el densmetro como % vol. PE = muestra de mosto concentrado o azcar de uva, en gramos MV= densidad del mosto concentrado o del mosto concentrado rectificado, en g/ml Los resultados se expresan con dos decimales y se redondean hasta aproximadamente el 0,05%vol.
8. 8.1
Caractersticas del mtodo Linealidad de la respuesta
La linealidad del densmetro para los valores de bajo GAV es uno de los parmetros crticos de este mtodo. Se prepar una gama patrn de 10 soluciones hidroalcohlicas de GAV comprendido entre 0 y 5 %vol. Cada solucin se analiz tres veces. La respuesta del densmetro es perfectamente lineal en este campo, tal como lo muestra la recta de calibracin de la figura 1.
respuesta
respuesta Lineal (respuesta)
Figura 1: Linealidad de la determinacin del GAV por densimetra electrnica entre 0 y 5%vol. 8.2 Especificidad del mtodo
El segundo punto crtico de este mtodo es la destilacin de los mostos viscosos con pequeas cantidades de alcohol. Para comprobar la especificidad se aadieron cantidades conocidas de etanol (de 0,25 %vol. a 5%vol) a MC y a azcares de uva. Las muestras con esta adicin se destilaron en condiciones previamente definidas. Los destilados se analizaron a continuacin mediante densimetra electrnica y balanza electrnica Los resultados aparecen en la tabla 1, siendo satisfactoria la tasa de recuperacin, comprendida entre 88 y 99 %. Tal como se ve en la recta de la figura 2, el mtodo es especfico (pendiente cercana al 1, ordenada en el origen cercana al 0).
Muestra
Contenido inicial (%vol.) MC 1 0,00 MC 1 0,00 Azcar de uva 0,00 (MCR) 1 Azcar de uva 0,00 (MCR) 1 MC 2 0,00 Azcar de uva 0,00 (MCR) 2
Contenido aadido (%vol.) 0,25 1,00 1,00 2,00 0,50 5,00
Contenido encontrado (%vol.) 0,22 0,98 0,94 1,97 0,44 4,94
Tasa recuperacin (%) 88 98 94 99 88 99
de
Tabla 1: Tasa de recuperacin de la determinacin del GAV de los MC y de las azcares de uva
especificidad para Densimetra electrnica

6,00
contenido recuperado
5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 0,00 0,00
y = 0,9968x - 0,039
contenido agregado contenido recuperado (medido - inicial) Lineal (contenido recuperado (medido - inicial))
1,00
2,00
3,00 contenido agregado (%vol.)
4,00
5,00
6,00
Figura 2: Especificidad de la determinacin del GAV de los MC y de las azcares de uva
8.3
Repetibilidad
La repetibilidad del mtodo se determin a partir de 20 muestras de MC o de azcar de uva con y sin adicin de alcohol. Se analiz tres veces cada muestra para estar en condiciones idnticas. Los lmites de repetibilidad obtenidos fueron los siguientes:
Repetibilidad para densimetria electronica valor calculado Desviacin tpica 0,009 Coeficiente de variacin o desviacin tpica 0,9 % relativa en % lmite r 0,024 %vol. lmite r en % 3% Repetibilidad para Balanza hidrosttica Valor calculado Desviacin tpica Coeficiente de variacin o desviacin tpica relativa en % Lmite r Lmite r en % 0,013 1,7% 0,038 %vol. 5,3%
Tabla 2: Repetibilidad de la determinacin del GAV de los MC y de las azcares de uva
8.4
Reproducibilidad
La reproducibilidad de los resultados se determin analizando el mismo mosto en doble, en diferentes fechas, durante un periodo dado. Los resultados aparecen en la tabla 3. Reproducibilidad para densimetria electronica valor calculado Desviacin tpica 0,043 Coeficiente de variacin o desviacin tpica 3% relativa en % lmite R 0,12%vol. lmite R en % 9% Reproducibilidad para Balanza hidrosttica Valor calculado Desviacin estndar 0,026 Coeficiente de variacin o desviacin tpica relativa en 3,4% % Lmite R 0,076%vol. Lmite R en % 10,6% Tabla 3- Reproducibilidad de la determinacin del GAV de los MC y de las azcares de uva
8.5
Lmites de deteccin y de cuantificacin
Los lmites de deteccin (LD) y de cuantificacin (LQ) estimados a partir del estudio de linealidad son los siguientes: LD = 0,01 %vol. LQ = 0,05%vol.
El lmite de cuantificacin se verific analizando los mostos cuyo GAV tena un nivel de concentracin de 0,05%vol.
8.6
Incertidumbre
La incertidumbre se evalu a partir de la desviacin tpica de la reproducibilidad, y fue de 0,10%vol.
ANEXO G: SACAROSA (CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO) 1. Fundamento de los mtodos Mtodo de deteccin y determinacin por cromatografa lquida de alta resolucin. La sacarosa se separa mediante una columna de slice con alquilamina y se detecta por refractometra. Para calcular la cantidad, se establece una comparacin con un patrn externo analizado en las mismas condiciones. Notas: La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse mediante el mtodo de RMN del deuterio, descrito para la deteccin del enriquecimiento de mostos, de mostos concentrados rectificados y de vinos. Las condiciones de cromatografa son presentadas a ttulo orientativo. Tipo IV
2. Reactivos 2.1 Agua purificada para uso de laboratorio de calidad corriente EN ISO 3696. 2.2 Acetonitrilo (CH3CN) de calidad HPLC Nmero CAS 75-05-8 2.3 Sacarosa Nmero CAS 57-50-1 2.4 Fase mvil: acetonitrilo-agua, previamente filtrados por membrana (0,45 m) (80:20 v/v). (La composicin de la fase mvil se da a ttulo indicativo). Antes de su utilizacin se deber desgasificar. 2.5 Solucin de referencia: solucin acuosa de sacarosa de 1,2 g/l. Filtrada por membrana (0,45 m). (La concentracin de la solucin de referencia se da a ttulo indicativo).
3. Material 3.1 Cromatgrafo de fase lquida de alta resolucin dotado de: 1) Inyector con loop de 10 l (a ttulo indicativo); 2) Un detector: un refractmetro diferencial o refractmetro interfermetro 3) Columna Alkylammina (25 cm de longitud por 4 mm de dimetro interno) (a ttulo indicativo) 4) Precolumna de la misma fase (a ttulo indicativo) 5) Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura (30 C) el conjunto formado por la precolumna y la columna.
6) Un registrador o, en su caso, un integrador. 7) Flujo de la fase mvil: 1 ml/min (a ttulo indicativo) 3.2 Dispositivo de filtracin por membrana (0,45 m) 4. Procedimiento 4.1 Preparacin de la muestra: Utilizar la solucin obtenida diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 % (m/v), tal como se indica en el Anexo H del mtodo Acidez total, seccin 5.1. y filtrarla por membrana (0,45 m). 4.2 Determinacin cromatogrfica Inyectar sucesivamente en el cromatgrafo 10 l de la solucin de referencia y 10 l de la muestra preparada como se indica en el punto 4.1. Repetir las inyecciones en el mismo orden. Registrar el cromatograma. El tiempo de retencin de la sacarosa es de unos 10 minutos. El volumen de la muestra y la secuencia se dan a ttulo orientativo. La determinacin cromatogrfica puede realizarse tambin con una curva de calibracin. 5. Clculo Utilizar para el clculo el promedio de 2 resultados de la solucin de referencia y de la muestra. Sea C g/l el contenido en sacarosa de la solucin de mosto concentrado rectificado al 40 % (m/v). Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concentrado rectificado: 2,5 C 6. Expresin de resultados La concentracin de sacarosa se expresa en gramos por kilogramo, con una cifra decimal. 7. Caractersticas del mtodo Repetibilidad (r) r = 1,1 g/kg mosto
ANEXO H: ACIDEZ TOTAL 1. Definicin
Tipo IV
La acidez total de un mosto concentrado rectificado es la suma de los cidos valorables cuando se lleva el pH a 7 aadiendo una solucin alcalina valorada. El dixido de carbono no se incluye en la acidez total. 2. Fundamento del mtodo Valoracin potenciomtrica o valoracin en presencia de azul de bromotimol como indicador del final de reaccin, mediante comparacin con un patrn de coloracin. 3. Reactivos 3.1 Soluciones tampones: 3.1.1 pH 7,0: Fosfato monopotsico (KH2PO4) Solucin 1 M de hidrxido sdico (NaOH): Agua csp: 1 000 ml 3.1.2 pH 4,0 Solucin 0,05 M de ftalato cido de potasio. Solucin con 10,211 g/l de ftalato cido de potasio (C8H5KO4) a 20 C (duracin mxima de la solucin: 2 meses). Nota: Tambin pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que exista correspondencia con unidades del SI. Por ejemplo: pH 1,679 0,01 a 25C pH 4,005 0,01 a 25C pH 7,000 0,01 a 25C 3.2 Solucin 0,1 M de hidrxido sdico (NaOH). 3.3 Solucin de azul de bromotimol de 4 g/l: Azul de bromotimol (C27H28Br2O5S)..................... 4 g Alcohol neutro 96 % vol. .................................. 200 ml Una vez solubilizado, aadir: Agua sin CO2 ............................................ 200 ml Solucin 1 M de hidrxido sdico csp coloracin verdeazulada (pH 7) ........7,5 ml
107,3 g 500 ml
Agua csp ................................................. 1000 ml 4. Equipo 4.1 Potencimetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos. A ttulo indicativo, el electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada. El electrodo de calomelanos de cloruro potsico saturado debe conservarse en una solucin saturada de cloruro potsico. Generalmente se emplea un electrodo combinado, que se conserva en agua destilada. 4.2 Vasos de precipitados de 100 ml de capacidad. 5. Procedimiento 5.1 Preparacin de la muestra: Poner 200 g de mosto concentrado rectificado, exactamente pesado en un matraz aforado de 500 ml. Enrasar con agua. Homogeneizar. 5.2 Valoracin potenciomtrica 5.2.1 Puesta a cero del aparato Se efectuar antes de cada medida, siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado. 5.2.2 Calibrado del pH metro El pH metro se debe calibrar a 20C usando soluciones tampn de referencia acopladas con el SI. Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse en los mostos. Si el pH metro usado no es compatible con la calibracin a valores suficientemente bajos, se debera realizar una verificacin usando una solucin tampn de referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en los mostos. 5.2.3 Tcnica de medicin En un vaso de precipitados (4.4) introducir 50 ml de la muestra, preparada como se indica en 5.1. Aadir 10 ml de agua destilada, aproximadamente, y verter con una bureta la solucin 0,1 M de hidrxido sdico (3.2) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 C. La adicin de la solucin alcalina debe realizarse lentamente, agitando constantemente la solucin. Se denominara n el nmero de mililitros de NaOH 0,1 M. utilizados 5.3 Valoracin con indicador (azul de bromotimol) 5.3.1 Ensayo previo: obtencin del patrn de coloracin En un vaso de precipitados (4.4), echar 25 ml de agua destilada y hervida, 1 ml de solucin de azul de bromotimol (3.3) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (5.1). Aadir la solucin 0,1 M de hidrxido de sodio (3.2) hasta obtener una coloracin verdeazulada. Aadir 5 ml de la solucin tampn pH 7 (3.1.1). 5.3.2 Determinacin En un vaso de precipitados (4.4), echar 30 ml de agua destilada y hervida, 1 ml de solucin de azul de bromotimol (3.3) y 50 ml de muestra preparada como se indica en (5.1). Aadir la
solucin 0,1 M de hidrxido sdico (3.2) hasta obtener una coloracin idntica a la obtenida en el ensayo previo (5.3.1). Se denominar n al nmero de mililitros de solucin de hidrxido sdico 0,1 M utilizados. 6. Expresin de los resultados 6.1 Mtodo de clculo Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado: A=5n Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azcares totales: A = (500 n)/P P = contenido en % (m/m) de azcares totales. Se dar con 1 decimal. 7. Caractersticas del mtodo Repetibilidad (r): r = 0,4 meq /kg azcares totales Reproducibilidad (R): R = 2,4 meq /kg azcares totales
ANEXO I: pH 1. Fundamento
Tipo IV
Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el lquido que se estudia. Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcin definida del pH del lquido, el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia. 2. Reactivos 2.1 Soluciones tampn: 2.1.1 Solucin saturada de tartrato cido de potasio, al menos de 5,7 g/l de tartrato cido de potasio (C4H5KO6) a 20oC. Esta solucin puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 0,1 g de timol por cada 200 ml) pH/temperatura 3,57 a 20oC 3,56 a 25oC 3,55 a 30oC 2.1.2 Solucin 0,05 M de ftalato cido de potasio. Solucin con 10,211 g/l de ftalato cido de potasio (C8H5KO4) a 20 C (duracin mxima de la solucin: 2 meses). pH/temperatura 3,999 a 15oC 4,003 a 20oC 4,008 a 25oC 4,015 a 30oC 2.1.3 Solucin que contenga: Fosfato monopotsico KH2PO4 .......................... 3,402 g Fosfato bipotsico K2HPO4 ........................... 4,354 g Agua csp ............................................................ 1 000 ml (Duracin mxima de la solucin: 2 meses) pH/temperatura 6,90 a 15oC 6,88 a 20oC 6,86 a 25oC 6,85 a 30oC Nota: Tambin pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comerciales para las que exista correspondencia con unidades del SI. Por ejemplo: pH 1,679 0,01 a 25C pH 4,005 0,01 a 25C pH 7,000 0,01 a 25C
3. Material 3.1 pH metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una aproximacin de 0,01 como mnimo. 3.2 Electrodos: 3.2.1 Electrodo de vidrio 3.2.2 Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potsico saturado 3.2.3 O electrodo combinado. 4. Procedimiento 4.1 Preparacin de la muestra para anlisis Diluirlo con agua a fin de obtener una concentracin de 25 0,5 % (m/m) en azcares totales (25oBrix). Si P es el contenido en % (m/m) en azcares totales del mosto concentrado rectificado, pesar una masa igual a 2 500 / P y completar con agua hasta 100 g. La conductividad del agua utilizada deber ser inferior a 2 microsiemens por centmetro. 4.2 Puesta a cero del aparato Se efectuar antes de cada medida, siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado. 4.3 Calibrado del pH metro El pH metro se debe calibrar a 20C usando soluciones tampn de referencia acopladas con el SI. Los valores de pH seleccionados deben abarcar la gama de valores que pueden encontrarse en los mostos. Si el pH metro usado no es compatible con la calibracin a valores suficientemente bajos, se debera realizar una verificacin usando una solucin tampn de referenencia acoplada con el SI y que tenga un valor de pH cercano a los valores hallados en los mostos. 4.4 Medida Introducir el electrodo en la muestra a analizar , cuya temperatura deber estar comprendida entre 20 y 25oC y tan prxima como sea posible a 20 oC. Leer directamente el valor del pH. Efectense al menos 2 determinaciones de cada muestra. Tomar como resultado la media aritmtica de ambas determinaciones. 5. Expresin de los resultados El pH de la solucin al 25 % (m/m) (25oBrix) del mosto concentrado rectificado se expresarn con 2 decimales. 6. Caractersticas del mtodo Repetibilidad (r) r = 0,07 Reproducibilidad (R) R = 0,07
ANEXO J: DIXIDO DE AZUFRE 1. Definiciones
Tipo IV
Se denomina dixido de azufre al dixido de azufre presente en el mosto en las formas siguientes: H2SO3, H SO3-; cuyo equilibrio es funcin del pH y de la temperatura:
H2SO3
H + HSO3
H2SO3 representa el dixido de azufre molecular. Se denomina dixido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dixido de azufre presentes en el mosto en estado libre o combinado con sus componentes. 2. Materiales Se extrae el dixido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100 C) del mosto concentrado rectificado previamente diluido. 2.1 Reactivos 2.1.1 cido fosfrico al 85 % H3PO4 (20 = 1,71 g/ml). 2.1.2 Solucin de perxido de hidrgeno de 9,1 g/l H2O2 (3 volmenes). 2.1.3 Reactivo indicador: rojo de metilo ............................................ 100 mg azul de metileno ......................................... 50 mg Alcohol de 50 % vol ...................................100 ml 2.1.4 Solucin de hidrxido de sodio (NaOH), 0,01 M.
o
2.2 Material 2.2.1 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacin, principalmente en lo que se refiere al refrigerante.
Figura 1.
Las dimensiones estn indicadas en milmetros. Los dimetros internos de los 4 tubos concntricos que constituyen el refrigerante son: 45, 34, 27 y 10 mm. El tubo de conduccin de los gases al borboteador B termina en una pequea esfera de 1 cm de dimetro que lleva, en su mayor crculo horizontal, 20 agujeros de 0,2 mm de dimetro. Tambin puede terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formacin de gran nmero de pequeas burbujas, realizando as un buen contacto entre las fases gaseosa y lquida. El flujo de gas que debe recorrer el aparato debe ser de 40 l/h aproximadamente. El frasco situado a la derecha del aparato de destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresin producida por la trompa de agua. Para poder regular dicha depresin de forma que el caudal sea el correcto, conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador y el frasco. 2.2.2 Una microbureta 3. Procedimiento 3.1 En el caso del mosto concentrado rectificado, utilizar la solucin obtenida diluyendo la muestra para analizar al 40 %(m/v) tal y como se indica en el captulo Acidez total, en el apartado 5.1. En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta solucin y 5 ml de cido fosfrico (2 1.1). Acoplar el matraz al aparato 3.2 Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucin de perxido de hidrgeno (2.1.2), neutralizarla con la solucin 0,01 M de hidrxido sdico (2.1.4), llevar a ebullicin el mosto contenido en el matraz A con una pequea llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar ligeramente el fondo del matraz. No colocar bajo el matraz ninguna tela metlica, sino depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de dimetro. Se evita as la pirogenacin de las materias extractivas de la muestra sobre las paredes del matraz.
Mantener la ebullicin durante el paso de la corriente de aire (o de nitrgeno). En 15 minutos el dixido de azufre total habr sido arrastrado y oxidado. Valorar el cido sulfrico formado con la solucin 0,01 M de hidrxido sdico (2.1.4). Sea n el nmero de mililitros utilizados. 4. Clculo Dixido de azufre en miligramos por kilo de azcares totales (muestra: 50 ml de muestra preparada (3.1)) (1600 n)/P P = contenido en % (m/m) de azcares totales. 5. Expresin de los resultados El dixido de azufre total se expresa en miligramos por kilogramo (mg/kg) de azcares totales. 6. Caractersticas del mtodo Repetibilidad (r) muestra de 50 ml < 50 mg/l, r = 1x 250/P mg/kg de azcares totales Reproducibilidad (R) muestra de 50 ml < 50 mg/l, R = 9x 250/P mg/kg de azcares totales.
ANEXO K: CARACTERSTICAS CROMTICAS 1. Fundamento
Tipo IV
Medida de la absorbancia, a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor, del mosto concentrado rectificado cuya concentracin en azcares se haya reducido al 25 % (m/m) (25o Brix). 2. Material 2.1 Espectrofotmetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm. 2.2 Cubetas de vidrio con un trayecto ptico de 1 cm. 2.3 Filtro con membrana y de una porosidad de 0,45 m. 3. Procedimiento 3.1 Preparacin de la muestra Utilizar una solucin cuyo valor en azcares sea del 25 % (m/m) (25 o Brix) y que se habr preparado del modo indicado en el captulo pH (4.1.). Filtrarla en un filtro con membrana de una porosidad de 0,45 m. 3.2 Determinacin de la absorbancia Ajustar a cero para la longitud de onda 425 nm en una cubeta de 1 cm de trayecto ptico que contenga agua destilada. Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solucin al 25 % de azcares (25oBrix) obtenida en el apartado 3.1 y colocada en una cubeta de 1 cm de trayecto ptico. 4. Expresin de los resultados La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solucin al 25 % (m/m) de azcares (25o Brix) se expresar con 2 decimales. Repetibilidad (r) r = 0,01 U Abs 25Brix

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RESOLUCIN OIV-OENO 419A-2011

Usar slo reactivos de grado qumico

Caractersticas del mtodo

Repetibilidad (r) r = 3 S/cm Reproducibilidad (R) R = 16 S/cm

Restar la correccin Sumar la correccin

Este mtodo se aplica a los mostos concentrados y a las azcares de uva.

Caractersticas del mtodo Linealidad de la respuesta

respuesta Lineal (respuesta)

Contenido aadido (%vol.) 0,25 1,00 1,00 2,00 0,50 5,00

Contenido encontrado (%vol.) 0,22 0,98 0,94 1,97 0,44 4,94

Tasa recuperacin (%) 88 98 94 99 88 99

especificidad para Densimetra electrnica

5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 0,00 0,00

3,00 contenido agregado (%vol.)

Figura 2: Especificidad de la determinacin del GAV de los MC y de las azcares de uva

Tabla 2: Repetibilidad de la determinacin del GAV de los MC y de las azcares de uva

Lmites de deteccin y de cuantificacin

La incertidumbre se evalu a partir de la desviacin tpica de la reproducibilidad, y fue de 0,10%vol.

ANEXO H: ACIDEZ TOTAL 1. Definicin

ANEXO J: DIXIDO DE AZUFRE 1. Definiciones

ANEXO K: CARACTERSTICAS CROMTICAS 1. Fundamento

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