Simpsio Gesto da Qualidade em BCTG, ANVISA, So Paulo, Nov-2012

Fertilizao in vitro: Aspectos Laboratoriais e Controle de Qualidade

Sidney Verza Jr Bilogo, Responsvel pelo Laboratrio de FIV
ANDROFERT- Centro de Referncia em Reproduo Masculina Campinas So Paulo www.androfert.com.br

Artigos da RDC 23 citados nesta aula:

Art. 15. A doao de clulas ... assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido; Art. 27. O BCTG deve ser constitudo ... de acordo com a RDC n. 50 ...; Art. 29. O BCTG deve possuir sistema de energia eltrica de emergncia ...; Art. 38. O laboratrio de fertilizao in vitro deve possuir: I-sistema de climatizao que mantenha presso positiva em relao aos ambientes adjacentes ...; Art 39. A manipulao das amostras deve ser efetuada em uma rea limpa classificada, no mnimo, como ISO Classe 5 ...; Art. 41. So requisitos mnimos adicionais dos ambientes e equipamentos do BCTG: ... manuteno preventiva e corretiva, ...equipamentos de medio calibrados ...;

Artigos da RDC 23 citados nesta aula:

Art. 42. Todos os procedimentos crticos realizados no BCTG, desde a coleta at a liberao das clulas, tecidos germinativos e embries devem ser validados. Art.43. Todos os materiais utilizados e que mantenham contato com as clulas ou tecidos germinativos, devem ser estreis ... nmero de lote. Art. 45. Deve ser atribuda, a cada amostra coletada, uma identificao numrica ou alfanumrica. Art. 51. Deve ser mantido registro dirio das condies dos equipamentos... Art. 53. O BCTG deve realizar controle microbiolgico... Art. 58. O BCTG deve manter disponvel ... arquivos de documentos e registros ...; Art. 59. Os arquivos de registros podem ser mantidos em meio eletrnico ...

Laboratrio de Fertilizao in vitro

Estrutura:
Construo, materiais e equipamentos em conformidade com as RDCs (RDC 50, RDC 23)

Controle de qualidade:
Equipamentos, limpeza, check-list dirio

Identificao do doador:
Escrita/digital/escrita e digital Identificao (alfa-numrica) de placas, tubos e todo material que ter contato com os gametas e embries

Incubadoras com portas individuais para cada doador

LABORATRIO DE FIV

Estrutura para sala limpa

Materiais e Acessrios
Parede (poliuretano/epoxi) Piso (poliuretano) Tinta (poliuretano) Cantos arredondados em paredes, piso e teto Bancada (ao inox) Luvas (nitrile) Tapete adesivo Roupa para sala limpa Papis Canetas, etc.

ANDROFERT

Salas Limpas

Estrutura

Classe >15, Grupo 0

Estrutura

Laboratrio FIV: Controle de Qualidade Temperaturas:

Placas aquecedoras

Equipamentos aferidos

Geladeira

Incubadoras

Laboratrio FIV: Controle de Qualidade

Manuteno preventiva

Laboratrio FIV: Controle de Qualidade

Termmetro digital (menos preciso).

Termmetro de mercrio HB. Graduao: De 0,1 em 0,1 C (mais preciso).

Laboratrio FIV: Controle de Qualidade

Controles: C, CO2, pH; limpezas, ajustes, calibragens, manutenes.

Laboratrio FIV: Controle de Qualidade

Meio de cultura com registro; Certificado de anlise do meio de cultura: Composio; Resultado do pH; Testes de embriotoxicidade (ratos); Valores de osmolaridade; Formao de blastocisto em ratos.

Laboratrio FIV: Controle de Qualidade

Uso de datalogger para monitoramento dos equipamentos

Uso de datalogger para monitoramento da entrega dos meios de cultura

Documentao
Consentimentos informados para todos os procedimentos; Fichas com cdigos numricos e identificao individual; Contratos.

Processo de identificao:
Dados provenientes do pronturio clnico, o qual possui as informaes necessrias; Ficha de micromanipulao dos gametas com dados do doador, das amostras e alquotas; Dados de controle de qualidade dos meios de cultura, preparo do smen; Campos para rubrica, identificao de responsveis; Identificao da tampa e base da placa de cultura;

Identificao do doador e amostra

Identificao do doador e amostra

Identificao digital: imagens

Identificao digital: pronturio eletrnico

Validao da informao, que fica salva e bloqueada para edio; Reduo/eliminao do volume de papel circulante dentro do Lab. FIV; Facilidade no acesso das informaes (clnca, casa, celular).

Identificao do doador e amostra

Procedimentos no Laboratrio de FIV:

Passo-a-passo desde o preparo dos meios de cultura at a transferncia embrionria/congelamento.

Preparo dos meios de cultura (Vspera)

Identificao do doador; Materiais atxicos e Estreis; Checagem do pH dos meios de cultivo.

Preparo de meios de cultura

Geladeira: 4 a 8C; Materiais estreis.

Captao oocitria
Laboratrio Centro cirrgico

Captao oocitria

Centro Cirrgico:Conforme RDC 50, 2002.

Captao oocitria

Verificao do lquido folicular e identificao oocitria

Morfologia do Ocito
Zona pelcida 15-20 M Ooplasma
100-110 M

Espao perivitelinio Corpsculo polar Complexo cumulus corona radiata DIMETRO DO OCITO + ZONA PELUCIDA 120 M

Fertilizao in vitro
FIV clssica
Ocitos so colocados em contato com espermatozoides na mesma gota de meio de cultura

Microinjeo do espermatozoide dentro do ocito (ICSI Intracytoplasmic Sperm Injection)

Um nico espermatozoide injetado em cada ocito

Preparo do smen
Orientao prvia para coleta (tempo de abstinncia sexual, etc); Identificao da amostra; Analise de concentrao, motilidade; Definio da tcnica de preparo a ser utilizada; Lavagem simples; Gradiente coloidal; Swim-up; Envio da amostra identificada ps processamento para laboratrio de FIV.

Preparo do micromanipulador

Injeo intracitoplasmtica do espermatzoide

FIV: Cultura celular

16h

48h

72h

96h

5d

Transferncia dos pr-embries

Ps-transferncia Embrionria

Criopreservao
Congelamento lento: Vitrificao:

Ps-transferncia Embrionria
Dados da ficha de micromanipulao so transferidos para:
Pronturio do paciente (documento escrito e/ou digital) Planilha de dados (documento digital). Esta planilha gera relatrios semestrais/anuais de dados para:
Relatrios internos e externos da Clnica (balanos bimestrais, folders, site) Relatrio anual de dados para REDLARA Relatrio anual para SisEmbr (Anvisa)

Ps-transferncia Embrionria
Ficha de micromanipulao anexada pasta de procedimentos para checagens posteriores e cruzamento de dados.
Fichas em papel Fichas digitais

Validao de dados
Rastreabilidade dos dados:
Identificao por cdigos (nicos):
Nmero do pronturio; Cdigo da ficha de preparo do smen; Cdigo da ficha de micromanipulao; Cdigo do congelamento de embries;

Validao/rastreamento N do congelamento dos dados

N do pronturio do paciente

N do ciclo de fertilizao Local de armazenamento do material biolgico

Controle de qualidade geral

Exigncia dos certificados de anlise dos meios de cultura; Exigncia da curva de temperatura dos meios de cultura durante o transporte; Certificao dos equipamentos interna* e externa; Uso de datalogger nos equipamentos do laboratrio; Definio de valores de referncias para monitoramento dos resultados laboratoriais (Tx. Fertilizao, tx. Qualidade embrionria, tx. Gravidez; tx. Sobrevivncia embrionria ps descongelamento).

Certificao interna dos equipamentos

Temperaturas observadas nos lquidos dentro dos tubos (simulao do fluido biolgico), acondicionados dentro dos blocos aquecidos sobre as placas aquecedoras.

Checagem do pH dos meios de cultura.

Certificao externa dos equipamentos

Controle microbiolgico

Referncia externa de resultados

Ano: 2009. Fonte: www.redlara.com

Referncia interna de resultados

Indicadores de Qualidade Taxa de Fertilizao Taxa de Degenerao Taxa de Clivagem dos Zigotos 2PN Taxa de pr-embries de tima qualidade no D3 Taxa de pr-embries com clivagem lenta no D2 Taxa de Blastulao Taxa de Gestao Qumica Taxa de Gestao Clnica Taxa de Gestao Clnica Grupo selecionado (<35 anos) Taxa de Gestao Clnica Grupo selecionado (35-39 anos) Taxa de abortamento espontneo Taxa de Sobrevida Embrionria ps-Vitrificao Taxa de Sobrevida Embrionria ps Descongelamento Lento Taxa de Gestao Clnica ps-Vitrificao Taxa de Gestao Clnica ps-descongelamento lento 4 Bimestre 62,5% 6,6% 98,3% 38,5% 19,0% -----49,5% 44,4% 56,6% 57,0% 11,3% 86,5% 46,5% 35,2% 25,0% Valores de Referncia* 65% 10% 90% 40% 20% 45% 45% 40% 55% 50% 20% 70% 70% 22,0% 22,0%

*Os valores de referncia so baseados em estudos externos, e sempre que atingidos, so aumentados, (conceito de melhoria contnua ISO 9001:2008)

Proficincia interna de resultados

O embriologista 1 injetou 44 casos, sendo que destes: 33 (75,0%) com espermatozides ejaculados 1 (2,3%) com espermatozides provenientes de PESA 6 (13,6%) com espermatozides de TESA 4 (9,1%) com espermatozides de ejaculado + TESA O embriologista 2 injetou 22 casos, sendo que destes: 18 (81,8%) com espermatozides ejaculados 1 (4,5%) com espermatozides de MICRO+crio heterloga 3 (13,7%) com espermatozides de ejaculado + TESA

ANLISE DESCRITIVA 2. ANLISE COMPARATIVA 1. Taxa de Fertilizao O embriologista 1 injetou 44 casos, com um total de 343 ocitos. Destes, 209 fertilizaram, resultando em uma taxa de 60,9%. O embriologista 2 injetou 22 casos, com um total de 193 ocitos. Destes, 119 fertilizaram, resultando em uma taxa de 61,6%. 2. Taxa de Degenerao Dos 343 ocitos injetados pelo embriologista 1, 32 degeneraram, resultando em uma taxa de 9,3%. Dos 193 ocitos injetados pelo embriologista 2, 13 degeneraram, resultando em uma taxa de 6,7%. 3. Taxa de Gestao Qumica Dos 44 ciclos realizados pelo embriologista 1, 33 tiveram transferncia embrionria, sendo que 16 resultaram em gestao qumica - taxa de 48,4%. Dos 22 ciclos realizados pelo embriologista 2, 16 tiveram transferncia embrionria, sendo que 8 resultaram em gestao qumica - taxa de 50,0%.

Simpsio Gesto da Qualidade em BCTG, ANVISA, So Paulo, Nov-2012

Fertilizao in vitro: Aspectos Laboratoriais e Controle de Qualidade

Contato: labfiv@androfert.com.br Para rever esta aula: www.androfert.com.br/aulas