Las bacterias como fbricas de protenas

Obtencin de la protena nucleadora del hielo

Introduccin
Las protenas nucleadoras son producidas por algunas bacterias Gram-negativas que promueven la nucleacin del hielo. Actan alineando las molculas del agua a lo largo de repeticiones de dominios de 48 aminocidos, que consisten en 16 residuos repetidos conteniendo el octmero conservado AGYGSTxT. Presentan un elevado inters comercial en la industria del fro, utilizndose actualmente en la produccin de nieve artificial.

Caractersticas de la protena

Fig. 1. Representacin 3D de la seccin repetitiva de 8 octmeros. Se representan 3 secciones correspondientes a los residuos (490 al 535).

Fig. 2. Representacin de la estructura en lmina de las secciones. La protena entera forma un plegamiento en hlice .

Caractersticas de la protena
Int e rac

ci

Fig. 3. Interaccin de las molculas del agua con una de las secciones de la protena. Nota: no se representan los tomos de hidrgeno.

Obtencin de la protena: antecedentes

El agua pura que no contengan partculas en suspensin ni se encuentre alojada en un recipiente con bordes irregulares posee un punto de congelacin situado a -40C. En la naturaleza el punto de congelacin se encuentra situado a 0C debido a la presencia de partculas y sales que actan como ncleos de formacin de cristales de hielo. Entre los factores que se conocen como iniciadores de ncleos de formacin de hielo, las protenas de determinadas bacterias se encuentran entre los ms efectivos, subiendo la temperatura de congelacin a -5C. La presencia de estas protenas en aguas naturales, facilita e inicia la congelacin de a una temperatura ms alta.

Obtencin de la protena: antecedentes

Una de las bacterias con mayor capacidad nucleadora del hielo (Ina+) es Pseudomonas syringae, la cual es un fitopatgeno. La bacteria presenta en su membrana externa un elevado nmero de estas protenas. En das fros, las protenas aceleran la formacin de cristales de hielo que actan rompiendo la pared de las clulas vegetales, favoreciendo tanto la penetracin de las bacterias como la obtencin de nutrientes.

Fig. 4. Fotomicrografa electrnica.

Fig. 5. Daos de P. syringae.

Obtencin de la protena: antecedentes

Pseudomonas syringae es una bacteria que presenta tincin de Gram negativa. Las protenas nucleadoras del hielo (InaZ) son glicolipoprotenas que se pueden disponer en la membrana externa mediante un anclaje de glicofosfatidil inositol, y son capaces de mimetizar la estructura de un ncleo de hielo, actuando como un molde para la formacin del hielo. Las InaZ se clasifican en tres grupos segn su actividad y el incremento de la temperatura de congelacin que producen.

Obtencin de la protena: biotecnologa

En los procesos biotecnolgicos se busca el mayor rendimiento productivo con el mnimo costo econmico. Para incrementar este rendimiento debe establecerse una estrategia dirigida hacia los siguientes puntos:
Establecer los parmetros de temperatura, pH, aireacin, y estado fisiolgico de mxima produccin. Emplear caldos y/o sustratos de bajo precio y ampla disponibilidad (=subproductos industriales). Economizar tiempo y energa: lneas de produccin.

Dado que existen 3 tipos de protenas, se busca la generacin del tipo I que presenta una mayor eficiencia de nucleacin. Mediante el seguimiento de la sntesis de protena InaZ tipo I, se establece que su sntesis se inicia a finales de la fase de crecimiento exponencial y a principios de la estacionaria (en ella es comn la sntesis de metabolitos secundarios). La presencia de glicerol como fuente de C, y una menor concentracin de P, N, S o Fe, favorece la sntesis de InaZ. La eficiencia de sntesis de InaZ se ve afectada por la tasa de crecimiento. A mayor tasa menor eficiencia de sntesis.

Obtencin de la protena: biotecnologa

FASES DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

Obtencin de la protena: biotecnologa

Flori4 Selection :19/11/2003 10:10:45 - 20/11/2003 8:10:42

History Plot

pH.Value;Db 0.20 pH PO2.Value;Db 2.0 %Sat TEMP.Value;Db 0.50 Degr C

Fase latencia/Fase exponencial

TEMP PO2 pH pH Degr C %Sat 100.0 9.00 40.0

39.0 38.0 75.0 37.0 36.0 35.0 34.0 33.0 25.0 32.0 31.0 30.0 0 6.00 6.75 50.0 7.50 8.25

Cambio en el pH = cambio metablico

f pH

d era u

el r

o ptim o a ng

Fase estacionaria avanzada

4.0

8.0

12.0 Time / hours

16.0

20.0

Obtencin de la protena: produccin

1. 2.
Inicia el crecimiento de la bacteria Pseudomonas syringae. Se ajustan las condiciones del medio para la mxima produccin de InaZ tipo I. Se concentra el cultivo bacteriano. Se liofiliza el cultivo (desecar una sustancia mediante congelacin y posterior sublimacin a presin reducida del hielo formado. Se utiliza en la deshidratacin de alimentos, materiales biolgicos y productos sensibles al calor). Se esteriliza el cultivo mediante radiacin beta (preserve la actividad de la protena.

Lnea de produccin.

3. 4.

Concentracin. Liofilizacin. Esterilizacin.

5.