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Manual de Artemia

Cortesia del CENTRO NACIONAL DE ACUICULTURA E INVESTIGACIONES MARINAS (CENAIM) Ecuador

Tel: (0243) 269-4729 Fax:( 0243) 269-3602 v e n t a s @ n u t r i s h r i m p. c o m

INTRODUCCION
Aunque muchos esfuerzos estan siendo invertidos actualmente en el desarrollo de dietas formuladas particuladas para las larvas de camarn, el xito de la larvicultura de hoy todava depende principalmente de la disponibilidad de organismos alimentarios vivos. El alimento vivo ms importante hasta hoy es la Artemia, en particular los nauplios recin eclosionados fuera de los quistes. Los quistes de Artemia comercialmente disponibles se cosechan de grandes ecosistemas naturales y los factores que pueden interferir en l a produccin estn fuera del control humano. Consecuente, la disponibilidad de quistes de Artemia no es predecible y los precios pueden fluctuar dentro de amplios mrgenes. Es por lo tanto de primordial importancia que tal valioso recurso natural sea utilizado en la manera ms eficiente. Primeramente, al momento de adquirir, el acuacultor deber seleccionar el mejor producto entre las alternativas ofrecidas. Luego, cuando los nauplios son producidos, las condiciones ptimas de eclosin deben ser observadas con respecto a mximizar el rendimiento. Finalmente, la Artemia producida debe ser manipulada de tal manera que sus propiedades nutritivas se conserven tan completas como sea posible hasta el momento que stas sean alimentadas a las larvas. El conocimiento de que el abastecimiento de quistes de Artemia puede ser limitado h a intensificado el estudio de nuevas fuentes de alimento para larvas de camarn. Alternativas vlidas pueden ser encontradas entre los rotferos planctnicos (e. g. Brachionus plicatilis, usualmente usado en la larvicultura de peces marinos), los coppodos y tambin dentro de la misma Artemia en su estadio adulto (llamado biomasa de Artemia). Sin embargo, en la bsqueda de un nuevo alimento vivo larvario no slo se dirige a disminuir la dependencia de la industria en un artculo alimenticio, sino igualmente con el deseo de diversificar el paquete nutricional que se ofrece actualmente a las larvas. La eficiencia nutricional del alimento vivo es regida por condiciones naturales ( e.g. Artemia) o zoo-tcnicas (e.g rotferos cultivados) y es una caracterstica determinante para cada lote. En aos recientes varias tcnicas han sido desarrolladas y publicadas tanto como para obtener un ptimo beneficio de las propiedades nutritivas de organismos alimentarios vivos as como para modificarlas. El propsito de este manual es de proveer informacin til e instrucciones prcticas para la produccin y manipulacin de organismos zooplanctnicos como potencial alimento larvario; as como tambin para documentar sobre su uso para propsitos especficos. El contenido de ste es un breve resumen del conocimiento disponible que se ha generado a travs de los aos por laboratorios de investigacin y por la misma industria de la larvicultura. Parte de la informacin aqu presentada se obtuvo durante un proyecto de cooperacin tcnica. entre los gobiernos de Blgica y Ecuador. Se espera que este documento sea de utilidad y que la presente informacin pueda contribuir a la optimizacin del uso de una gama creciente de organismos alimenticios vivos en el cultivo de larvas de camarn. Cualquier observacin, comentario o informacin suplementaria que contribuya con este objetivo ser muy apreciada.

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BIOLOGIA Y ECOLOGIA DE LA ARTEMIA

CLASIFICACION SISTEMATICA La clasificacin sistemtica de la Artemia hasta el nivel de gnero es dado por Flssner (1972): Clase : Crustacea Subclase : Branchiopoda Super Orden : Anostraca Familia : Artemiidae Gnero : Artemia Originalmente la Artemia salina ha sido descrita como la nica especie dentro de el gnero Artemia. Observaciones de un nmero creciente de nuevas poblaciones descubiertas, dieron pronto origen a un sin nmero de nombres especficos. Desde el principio del siglo 20 investigaciones citolgicas y genticas complementaron los mtodos tradicionales de clasificacin basados en aspectos morfolgicos. Como resultado de una serie de experimentaciones de cruce de razas (XXXX) el aislamiento reproductivo entre ciertas poblaciones podra ser demostrado y suplementado con datos analticos sobre iso-enzimas (Bowen y Stirling, 1978) y hemoglobinas (Bowen et al, 1978) de las cepas bisexuales del gnero Artemia han sido divididas en 6 especies hermanas: -Artemia salina -Artemia tunisiana -Artemia franciscana -Artemia persimilis -Artemia urmiana -Artemia monica Lymington, Inglaterra (actualmente extincta) Europa Amrica (Norte, Central y Sur) Argentina Irn Lago Mono, California-EUA

Varias poblaciones partenogenticas se conocen en Europa y Asia. A causa de importantes diferencias entre estas poblaciones (e.g. el nmero de cromosomas) es difcil justificar su articulacin dentro de la clasificacin taxonmica como una sptima especie hermana " Artemia parthenogenica". Por lo tanto se ha sugerido que, a menos que las especies hermanas exactas puedan ser definidas en cepa bisexual y hasta que la especificidad den el camarn de salmuera sea ms claramente entendida (especialmente en las cepas partengeneticas), el camarn de salmuera debera ser denominado por su nombre de gnero, Artemia (XXX). DISTRIBUCION Hasta hoy se conoce que la Artemia se encuentra en casi 400 sitios esparcidos sobre los cinco continentes. Una caracterstica comn de los biotopos de Artemia es el alto contenido de sal. La mayora de los biotopos han sido colonizados por medio de la dispersin natural de vectores tal como e.g. emigracin de los pjaros. Los ejemplos clsicos son las poblaciones de las reas Caribea y Ceylon. Pero tambin el hombre ha contribuido a la dispersin de la Artemia introduciendo el animal en regiones fuera de su rea de distribucin natural: -primeramente, el camarn de salmuera fue trasplantado a nuevas salinas construidas (e.g. Australia) debido a que se pens que contribuira a la capacidad productora de sal de la planta. -segundo, como la aquacultura se desarroll en una verdadera bio-industria y l a disponibilidad de quistes de Artemia lleg a ser ms y ms limitada, nuevos sitios naturales con el potencial comercial fueron explorados y algunos de ellos eventualmente fueron inoculados ( e.g. las llanuras de sal del Noreste de Brasil). -en tercer lugar, en un intento de mejorar el control de la produccin de Artemia fueron creados e inoculados biotopos hechos por el hombre en reas adecuadas (e.g. estanques de produccin de Artemia en el Sureste de Asia).

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En poblaciones permanentes la Artemia est presente durante todo el ao o sobrevive a condiciones ambientales o climatolgicas adversas en un estado de proteccin bajo la forma de quistes o huevos latentes (se explica mas adelante). Poblaciones no permanentes de Artemia no pueden vencer condiciones ambientales o climatolgicas adversas y el hombre tiene la necesidad de re-introducir nuevas poblaciones sobre una base anual. La Artemia es un filtrador no-selectivo y se alimenta filtrando materia particulada de origen biolgico (e.g. detritus orgnico de aguas de manglares) as como tambin de organismos vivos de tamao apropiado (bacterias y algas microscpicas). De hecho debido a la ausencia de predadores y competidores por alimento, la Artemia frecuentemente se desarrolla en grandes monocultivos, y las densidades son principalmente controladas por la limitacin de alimento. La reproduccin ovovivpara (nauplios como descendencia) ocurre mayormente en niveles de baja salinidad, considerando que los quistes (reproduccin ovpara) son producidos en salinidades ms all de 150 ppt. CICLO DE VIDA Y DESARROLLO El camarn de salmuera posee la propiedad de reproducirse de dos maneras diferentes. Dependiendo de las condiciones ambientales ya sea larvas de libre natacin (ovoviviparidad) o quistes o huevos latentes (oviparidad) son liberados. En el ltimo caso el desarrollo embrionario es reversiblemente interrumpido en el tero: en la etapa de gstrula el embrin es rodeado por una cscara protectora quitinosa y una reserva de carbohidrato es depositada. Por medio de este estado ametablico (diapausa), la Artemia es capaz de sobrevivir condiciones ambientales extremas. Con la interrupcin de la condicin de diapausa y con la trasnferencia de los quistes a condiciones ptimas de incubacin, la gstrula reanuda su desarrollo hasta que sta emerja. La primera etapa larval de l a Artemia (liberada como tal por ovoviviparidad reproduciendo hembras o incubando fuera de los quistes), tambin llamada Instar I, tiene un color castao-anaranjado (reserva acumulada de vitelo) y cuyas medidas promedian 0,5 mm de longitud. Los aspectos tpicos de esta etapa son los 3 pares de extremidades en la regin frontal, cada una de ellas con funciones especficas: las primeras antenas (o antenulas teniendo una funcin sensorial), las segundas antenas (con funcin locomotora y filtradora) y las mandbulas (con funcin de captura de alimento). El lado ventral de la larva est cubierta por un gran labro que tambin est involucrado en el proceso de captacin alimentaria. Un ocelo impar rojo se encuentra ubicado en la regin frontal entre las primeras antenas. La larva Instar I es incapaz de tomar el alimento, ya que su sistema digestivo no es an funcional (la boca y el ano estn todava cerrados). Despus de alrededor de 12 horas el animal muda en la segunda etapa larval (Instar II). A partir de esta etapa el sistema digestivo es funcional y pequeas partculas de tamao que oscilan entre 1-40 m pueden ser ingeridas (e.g. clulas de algas, bacterias, detrito). La larva de Artemia crece a la etapa adulta mediante una serie de 15 mudas. Durante este desarrollo larval las extremidades en la regin frontal continuamente se diferencian resultando en, la reduccin gradual de las mandbulas larvales, finalmente reemplazadas por las mandbulas del adulto y por un dimorfismo sexual de las segundas antenas. En los machos stas se desarrollan en agarraderas musculares en forma de gancho que desempearn en el futuro un rol pre-copulatorio. Las antenas de las hembras se degeneran en pequeos apndices sensoriales. En la Artemia adulta el aparato filtrador alimentario de la larva es reemplazado por las maxilas, las maxilulas y 11 pares de toracpodos que se desarrollan en la regin del tronco. Las ltimas estructuras son multi-funcionales y juegan un rol no solamente en la captacin alimentaria pero tambin en la locomocin y respiracin.

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Dependiendo de la cepa y de las condiciones ambientales, la etapa de actividad reproductiva se alcanza en un perodo de crecimiento de 2-3 semanas. La Artemia adulta posee entonces una longitud 10-20 mm (los animales ms grandes son encontrados dentro de las poblaciones partenogenticas). Los machos tienen un par de penes en la parte posterior de la regin del tronco mientras que las hembras pueden ser fcilmente reconocidas por el distintivo saco embrionario o tero que se ubica inmediatamente detrs el undcimo par de toracpodos. El par de ovarios se sitan detrs los toracpodos sobre ambos lados del tracto digestivo lineal. La pre-copulacin en la Artemia bisexual madura es iniciada por el macho con el apego a las hembras con sus agarraderas musculares. En esta "posicin de equitacin" los animales pueden nadar conjuntamente por largos perodos de tiempo mientras ellos mueven sus toracpodos en un golpe sincrnico. La real copulacin con la consecutiva fertilizacin consiste de un rpido reflejo del macho en doblarse hacia adelante e introduciendo un pene en la apertura del tero. En la Artemia partenogentica (poblaciones hembras) la fertilizacin no tiene lugar y el desarrollo embrionario comienza tan pronto como los huevos alcanzan el tero.

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BIOLOGIA Y ECOLOGIA DE ROTIFEROS

CLASIFICACION SISTEMATICA El rotfero ms importante (hasta ahora) para propsitos de acuacultura es el Brachionus plicatilis. Las siguientes secciones se referirn mayormente a esta especies en particular. PHYLUM: CLASE: ORDEN: FAMILIA: GNERO: MORFOLOGIA Rotatoria (= Rotifera) pertenecen a los ms pequeos metazoarios. Ellos raramente alcanzan 2 mm en la longitud del cuerpo. Los machos tinen un tamao reducido y son menos desarrollados que las hembras; algunos miden tan solo 60 m. El cuerpo de todas las especies consiste de un nmero constante de clulas, las diferente especies de Brachionus contienen aproximadamente 1000 clulas las que no deben considerarse como identidades nicas sino como un rea de plasma. El crecimiento del animal es asegurado por el aumento de plasma y no por la divisin de la clula. La epidermis contiene una capa densamente empaquetada de protenas similar a l a queratina denominada la loriga. El cuerpo del rotfero se diferencia en tres partes distintas que consisten de la cabeza, el tronco y pie. La cabeza lleva el rgano rotatorio o corona que es reconocido fcilmente por sus cilios anulares. La corona retrctil asegura la locomocin y un movimiento del agua en forma de remolino que facilita la captacin de pequeas partculas alimentarias (principalmente algas y detrito). El tronco contiene el tracto digestivo, consistiendo de un mastax que muele las partculas ingeridas, el esfago, el estmago con glndulas gstricas y el intestino. El sistema excretorio consiste de un par de protonefridios con clulas terminales (cyrtocitos), el conducto y la vescula. Los protonefridios expulsa lquido excretorio y juegan un papel importante en la regulacin osmtica. El rgano genital es impar (Monogononta) o pareado en los ordenes Seisonidea y Bdelloidea. La apertura del conjunto externo de la vescula y el oviducto se llama cloaca. El pie es una estructura anillada retrctil sin segmentacin que termina en uno o cuatro dedos poseyendo glndulas pedales que segregan una sustancia adhesiva en rotferos reptantes y ssiles. Tipos de cepas ( L y S) Existen dos diferentes morfotipos de rotferos: el tipo pequeo (S) y el tipo grande (L). Ellos difieren en la longitud de la loriga: 130-340 m (promedio 239 m) para el tipo L y 100-210 m (promedio 160 m) para el tipo S. Existen tambin diferencias en el peso, forma de las espinas occipitales y de las temperaturas ptimas de crecimiento (el tipo L tiene un rango de temperatura ms amplio, mientras el tipo S posee mayor resistencia a temperaturas ms alta). CICLO DE VIDA Y DESARROLLO El ciclo de vida de Brachionus plicatilis presenta dos modos de reproduccin. Durante la partenognesis las hembras amcticas producen huevos amcticos (diploide, cromosomas 2n) los que se desarrollan nuevamente en hembras amcticas. Esta es la manera ms rpida de reproduccin y por lo tanto la ms importante para la produccin intensiva de rotferos. Sin embargo, el ciclo de vida puede volverse en reproduccin sexual ms complicada por condiciones ambientales desfavorables. Durante la reproduccin sexual las hembras mcticas y amcticas son producidas. Aunque ambas no son morfolgicamente diferentes, las hembras Nemathelminthes o Aschelminthes Rotatoria Monogononta Brachionidae Brachionus

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mcticas producen huevos haploides (n cromosomas). Las larvas que son incubadas fuera de estos huevos mcticos infrtiles se desarrollan en diminutos machos haploides. Estos machos son aproximadamente un cuarto del tamao de la hembra; ellos no poseen tracto digestivo ni vescula, pero tienen un sobredimensionado testculo que se llena esperma maduro. Los huevos mcticos que eclosionarn en machos son significativamente menores en tamao, mientras que los huevos mcticos fertilizados son ms grandes y consisten de una capa externa gruesa y dbilmente granulada. Estos son los huevos latentes y nicamente eclosionarn hembras amcticas bajo cambios repentinos en las condiciones ambientales. Estos pueden ser originados por cambios en las condiciones climatolgicas eventualmente provocando variaciones en la temperatura, salinidad o en las condiciones alimenticias. Se debe enfatizar que la densidad de la poblacin del rotfero juega tambin un papel importante en la estrategia del modo de reproduccin. Aunque el mecanismo no es entendido completamente se acepta generalmente que el sentido biolgico de producir huevos latentes, por causa de condiciones ambientales desfavorables como sequa o fro, permite asegurar la supervivencia de la poblacin. El lapso de vida de los rotferos depende de la temperatura del cultivo, pero en un ambiente controlado (25 C) el perodo de vida se ha estimado en 3.4 a 4.4 das. Generalmente, las larvas llegan a ser adultas despus de 0.5 a 1.5 das por lo cual las hembras comienzan a poner huevos aproximadamente cada cuatro horas. Se cree que las hembras pueden producir diez generaciones de progenie antes que ellas eventualmente mueran. La actividad de reproduccin de Brachionus depende de la temperatura del ambiente. ALIMENTO Los rotferos del gnero Brachionus como filtrador no selectivo, puede ingerir partculas de alimento de 20-30 m. En la naturaleza consumen microalgas, bacterias, levaduras y protozoarios. Los animales cultivados se alimentan mayormente con algas unicelulares y/ o levaduras. Nannochloropsis es una de las microalgas utilizadas usualmente como alimento del rotfero. Tiene un tamao de 2-3 m. Sin embargo tambin Tetraselmis e Isochrysis son de alta calidad nutricional. La levadura de pan ha sido tambin empleada para el cultivo de rotferos, pero el valor nutritivo resultante de los rotferos es muy pobre. Desde hace algunos aos, existen dietas artificiales y de enriquecimiento en el mercado, las cuales son nutricionalmente completas y pueden reemplazar totalmente el uso de algas y/ o levadura.

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NAUPLIOS DE ARTEMIA
SELECCION DEL LOTE DE ARTEMIA DE QUISTES El valor de la Artemia como fuente econmico y nutricional para larvas de peces y de camarones es determinado por un nmero de factores: almacenamiento de los quistes morfometra de los nauplios la calidad nutricional de los nauplios caractersticas de eclosin de los quistes

ALMACENAMIENTODE LOS QUISTES El lapso de tiempo entre el envasado de los quistes y su consumo en el laboratorio puede variar desde unas pocas semanas hasta varios aos. Su viabilidad durante este perodo depende principalmente de las condiciones de procesamiento, transporte y almacenamiento del cual slo parte del ltimo est bajo completo control del acuacultor. De ser posible, se debera limitar a comprar aquellos lotes de Artemia que han sido almacenados bajo condiciones de refrigeracin. Es tambin una buena prctica examinar el contenido de agua de los quistes ya que este parmetro correlaciona negativamente l a duracin de vida de los quistes: quistes con buena eclosin pero con un contenido de agua sobre el 8% deberan nicamente ser considerados para inmediato consumo. Condicin procesamiento envasado almacenamiento transporte almacenamiento almacenamiento Responsable productor productor productor productor /distribuidor distribuidor acuacultor Comentarios producto limpio, humedad< 8% al vaco o atmsfera inerte refrigerado (2-10 C) transporte refrigerado almacenamiento refrigerado (2-10 C) - almacenamiento refrigerado (2-10 C): almacenamiento prolongado - almacenamiento en fro (sala con aire acondicionado ): perodo corto de almacenamiento

DIMENSIONES DE LOS NAUPLIOS DE ARTEMIA Cuando el tamao de la presa no permite su captura e ingestin por parte del predador su valor nutricional se reduce a cero. Por otra parte es buena prctica ofrecer a las larvas organismos alimentarios vivos del mayor tamao como le sea posible manipular ya que entonces la energa relativa de captura es ptima. Dentro de las cepas de Artemia disponibles comercialmente la longitud del nauplio en Instar I vara entre 420-500 m. Aunque las diferencias pueden parecer pequea, permite a l acuacultor seleccionar la cepa ms apropiada para las larvas cultivadas. Especialmente en la produccin de larvas de peces marinos el tamao correcto de la presa es importante ya que estos organismos ingieren la presa capturada en su totalidad. En las larvas de camarones penaeidos, el tamao de la presa es menos crtico a causa de su hbito de desgarrar la presa en pedazos de tamao manipulable. Es sin embargo bien conocido que la Artemia de mayor tamao (e.g. originaria del Gran Lago Salado, UTAH-EUA) son ingeridas por la zoea III con gran dificultad mientras que los nauplios de menor tamao cosechados (e.g. salina cerca de San Francisco) son capturadas fcilmente por las mismas larvas.

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Ambas cepas pertenecen a la misma especies hermana Artemia franciscana, sin embargo a veces los productores de Artemia tratan de confundir a sus clientes relacionando el nombre de las especie hermana directamente e incondicionalmente al de la cepa de San Francisco con el consiguiente tamao naupliuar y mayor costo. En caso de duda la longitud de los nauplios recin eclosionados deber ser verificado por medicin microscpica directa. Una manera indirecta confiable para la estimacin de la longitud naupliar, es la medida del dimetro del quiste: un alto y positivo grado de correlacin ha sido ciertamente demostrado entre esas dos medidas biomtricas. Medicin del dimetro de los quistes de Artemia y de la longitud de los nauplios recin eclosionados - Materiales y equipos requeridos - microscopio binocular -dispositivo de calibracin (e. g. micrmetro ocular o hematocitmetro) - cristalera: erlenmeyer, pipetas, cajas petri - sistema en pequea escala para incubar quistes de Artemia (botellas de 1 l o conos de Imhoff) - reactivos:lugol - agua de mar - Procedimiento (vese tambin la ilustracin: SELECCION DE LA CEPA ADEQUADA DE ARTEMIA, Determinacin del tamao de los nauplios recin eclosionados) - calibracin del equipo de medicin - medida de la longitud de los nauplios recin eclosionados - incubar los quistes de Artemia bajo condiciones ptimas a una densidad de 1 gl-1 - cosechar los nauplios eclosionados al T90 - medir una muestra de por lo menos 100 nauplios teidos y calcular el valor promedio - continuar la medicin de muestras de 100 nauplios hasta que la desviacin estndard se encuentre debajo del 10% del promedio de las longitudes de los nauplios - medicin del dimetro de los quistes -hidratar alrededor de 0,1 g de quistes durante 2 h en agua de mar a 25 C -medir una muestra de por lo menos 100 quistes y calcular el valor promedio -continuar la medicin de muestras de 100 nauplios hasta que la desviacin estndard se encuentre debajo del 10% del promedio de las longitudes de los nauplios -estimacin de la longitud de los nauplius en base al dimetro de los quistes -aplicar la frmula: Y= 1.5 x X + 92.1 (R2= 0.80) donde: Y= longitud de los nauplios X= dimetro de los quistes a y b son valores constantes igualando a a y b respectivamente CARACTERSTICAS DE ECLOSION DE LOS QUISTES DE ARTEMIA El potencial de eclosin de los quistes de Artemia es cuantificado por el porcentaje de eclosin (E%) y la eficiencia de eclosin (EE). El E% es de valor biolgico ya que indica la viabilidad de los quistes como tal. La EE toma enconsideracin no solamente los quistes pero tambin las posibles impurezas. La EE es de importancia econmica para el acuacultor ya que representa el nmero de nauplios que eclosionan de 1g de producto tomando en consideracin el producto entero (i.e. quistes e impurezas posibles).

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Otra caracterstica de eclosin de importancia prctica directa para el acuacultor es la tasa de eclosin (TE) o la evolucin de la eclosin durante el perodo de incubacin. Es importante que los quistes eclosionen de manera rpida y sincrnica. Los puntos caractersticos en la curva de eclosin son: t10 t50 t90 ts tiempo cuando el 10% de los quistes viables han eclosionado tiempo cuando el 50% de los quistes viables han eclosionado tiempo cuando el 90% de los quistes viables han eclosionado sincronizacin de la eclosin: t90-t10

Los procedimientos con respecto a la determinacin de EE, E% y TE se plantean en las ilustraciones: SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA, y determinacin de las caractersticas de eclosin.

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PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA

ECLOSION DE NAUPLIOS Ilustracin: PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA, Condiciones de eclosin La produccin de nauplios de Artemia por eclosin de quistes es una rutina ampliamente conocida. El proceso consiste en tres fases: la desinfeccin de los quistes, la incubacin de los quistes y la recoleccin de los nauplios. Desinfeccin de los quistes Debido a las grandes cargas bacterianas reportadas en los quistes de Artemia, deben ser desinfectados en una solucin de cloro por 20 minutos (densidad de quistes: 50 g.l -1, concentracin de cloro: 200 ppm de producto activo). Despus de la desinfeccin, los quistes se enjuagan con agua dulce y son transferidos al medio de incubacin. Incubacin de los quistes Se pone los quistes previamente desinfectados en agua de mar en un tanque transparente de forma cilndro-cnico, con aireacin suficiente para mantenerlos en suspensin. La densidad de los quistes incubados no debe sobrepasar los 2 g.l-1. La temperatura se mantiene constante de preferencia en el rango de 28-30 C y el pH debe ser superior a 8. La iluminacin es continua, con una intensidad en la superficie del medio de incubacin de no menos de 2,000 lux. Recoleccin de los nauplios eclosionados Despus de 24 horas de incubacin la aireacin y la iluminacin son interrumpidas y se cubre el tanque con una tapa opaca. Despus de 5-10 minutos las cscaras de los quistes vacos flotan en la superficie y la mayora de los nauplios se concentran en el fondo del tanque de donde son cosechados. Una segunda cosecha se efecta despus de otros 5-10 minutos. Con esta rutina se recoge virtualmente todos los nauplios eclosionados y se evita la contaminacin por las cscaras de quistes vacos.

DESCAPSULACION DE QUISTES DE ARTEMIA Ilustracin: PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA, Descapsulacin La descapsulacin de los quistes de Artemia consiste en la eliminacin completa de la capa exterior (corin), mediante el uso de una solucin concentrada de hipoclorito de cloro. Adems de resolver el problema de la separacin de nauplios y cscaras de quistes durante la recoleccin de los nauplios recin eclosionados; la descapsulacin ofrece otras ventajas: desinfeccin de los quistes, mejoramiento de la eclosin, disponibilidad de partculas alimenticias de menor tamao y mas nutritivas que el nauplio.

MEJORAMIENTO DEL VALOR NUTRICIONAL DEL ALIMENTO VIVO Ilustracin: PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA, Enriquecimiento Investigaciones realizadas han demostrado que el valor nutricional de ciertos tipos de alimento vivo no siempre cubre con los requerimientos de las especies cultivadas. Aprovechando la manera especfica de alimentacin de la Artemia (por medio de filtracin no selectiva), se han desarrollado durante los ltimos aos tcnicas para enriquecerlos. Los

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procedimientos, hoy en da ya bien establecidos en el mundo acuicultor pueden ser aplicados para el enriquecimiento con cidos grasos, protenas, pro- y anti-biticos, etc.

PRESERVACION DEL VALOR NUTRITIVO DE NAUPLIOS DE ARTEMIA Ilustracin: PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA, Preservacin al fro de los nauplios En los procedimientos rutinarios de la larvicultura es muy comn de que por motivos econmicos el alimento vivo quede almacenado durante un cierto tiempo despus de su produccin (p.ej. despus de la eclosin los nauplios de Artemia son almacenados por 8 horas antes de ser distribuidos a las larvas). Si el almacenamiento ocurre bajo temperaturas ambientales (25 C) el valor nutritivo disminuir significativamente por los procesos metablicos del alimento vivo mismo. Para evitar este inconveniente se aplica el almacenamiento a bajas temperatura (4-10 C).

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ROTIFEROS
APLICACION DE ROTIFEROS EN LA LARVICULTURA DE CAMARON Sin duda el rea mas importante para el uso de rotferos en la acuacultura se situa el la larvicultura de peces marinos. Para la mayora de las especies, el rotfero es indispensable como primer alimento vivo debido al hecho que el nauplio de Artemia es inaccesible para las larvas. En la larvicultura del camarn el rotfero no es muy utilizado. justifica por varias razones: Sin embargo, su uso se

- tamao intermedio por su tamao de 180 - 250 m, siendo intermedio entre algas (< 20 m) y nauplios de Artemia ( 500 m), el rotfero es una presa adecuada para los estadios de zoea 1 - mysis 3: a partir de la muda zoea 1-zoea 2 la larva es capaz de capturar e ingerir rotferos. - movimiento lento larvas que se encuentran en fases crticas de su desarrollo que por varias razones estn dbiles, pueden tener dificultades para capturar nauplios de Artemia:; proporcionando rotferos durante esas etapas se ayuda a la larva a conseguir ms fcil su paquete nutritivo - biologa de la alimentacin debido a la alimentacin por filtracin no-selectiva de los rotferos al igual que la Artemia , son presas excelentes para ser enriquecidas - tasa metablica el metabolismo muy accelerado del rotfero da la ventaje al larvicultor de poder reaccionar muy rpido en condiciones crticas: para enriquecer rotferos con sustancias profilcticas se necesita solamente unas pocas horas (comparado con las 24 horas de eclosin + 12/24horas de enriquecimiento de los nauplios de Artemia) La figura 1 muestra la ubicacieon del rotfero en el esquema alimenticio de larvas de penaeidos.
PREY SIZE (m) I 1000 800 600 400 200 0 INSTAR I ARTEMIA TETRASELMIS CHAETOCEROS ENRICHED ARTEMIA ROTIFERS LARVAL STAGE OF DEVELOPMENT ZOEA II III I MYSIS II III I II III IV POSTLARVA V VI VII VIII IX X

Fig. 1.- Esquema alimenticio para larvas de camarn a base de alimentos vivos

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PRODUCCION DE ROTIFEROS
CULTIVO DE ROTIFEROS Ilustraciones: PRODUCCION DE ROTIFEROS, Esquema de la produccin y rutina de trabajo En el proceso de cultivo de rotferos se observa dos fases distintas: el mantenimiento de un stock (cultivo en volumenes pequeos) y el cultivo masivo (cultivo en gran volumen) Mantenimiento del stock de rotferos Para este propsito se inocula volumenes pequeos (p.ej. tubos de ensayo de 20 ml) con unos 20 rotferos (densidad de no ms de 1 rotfero por ml - R.ml-1). Alimentando con algas unicelulares (Tetraselmis maculata o Nannochloropsis oculata) estos cultivos llegan a densidades de 10 R.ml-1 dentro de un periodo de 2 a 3 semanas. Posteriormente se filtra la suspensin del cultivo utilizando una malla de 60 m, se enjuagan los rotferos y se los transfiere a fiolas de 1 litro diluyndolos hasta 1 R.ml -1 en agua de mar conteniendo las mismas algas. Cuando se estima una vez ms una densidad de 10 R.ml-1 en las fiola se cosechan y se utiliza la cantidad requerida de rotferos previamente limpios para re-inocular tubos de ensayos y el ciclo empieza nuevamente. Para el mantenimiento de los stock de rotferos se debe utilizar agua de mar normal (35 ppt), filtrada y esterilizada. Se alimenta los cultivos solamente una vez (al inicio). Los recipientes estn almacenados en un rea termostatizada donde se observa muy estrictamente las medidas para que el riesgo de contaminacin sea mnimo. Cultivo masivo de rotferos Utilizando los rotferos remanentes de las fiolas se inocula tanques de 50 litros, se alimenta con algas hasta conseguir despus de 4 das una densidad promedio de 150 R.ml-1. Luego sern transferidos a tanques de 200 litros, 500 litros hasta llegar a 5,000 litros, por un lapso de 4 das en cada fase. El alimento a utilizar vara de acuerdo a las necesidades, pudiendo ser ste algas, levaduras, combinacin de los mencionados o levadura manipulada. De acuerdo al alimento se obtienen diferentes densidades de rotferos (150-800 R.ml-1 proporcionando algas y levadura manipulada respectivamente; la levadura de pan, posiblemente complementado con algas da resultados intermediarios). La tcnica implantada de produccin de rotferos, se basa en el tipo de cultivo de recoleccin completa (cultivo batch). Consiste en inocular el cultivo y una vez que se ha alcanzado densidad mxima se realiza la cosecha completa. Para alimentar con algas, inicialmente se realiza un bloom fitoplanctnico en agua de mar (35 ppt), se pone dichas algas en los tanques de produccin de rotferos y se inocula los animales a una densidad de 10-30 R.ml-1, para despus de 4 das cosechar todo el volumen. De cada cosecha se utilizar el 80% para alimentar las larvas y el remanente 20% sirve como inculo de un nuevo tanque. Cuando se administra levadura de pan levadura manipulada se trabaja con salinidad de 20 ppt, salinidad en que se observa mayor reproduccin de los rotferos. La densidad inoculada es de alrededor de 200 R.ml-1 y la racin diaria usualmente utilizada de levadura de pan es de 1 g.10-6 de rotferos mientras que de la levadura manipulada se utiliza 300 - 550 mg.10 -6 de rotferos. Esta tcnica de cultivo tiene dos variantes: una consiste en el mantenimiento de un volumen constante de cultivo con un incremento en la densidad de rotferos o el mantenimiento de una densidad constante de rotferos con un incremento en el volumen de cultivo. ENRIQUECIMIENTO DE ROTIFEROS Ilustracin: PRODUCCION DE ROTIFEROS, Enriquecimiento Igual que en la Artemia, donde la tcnica es ampliamente conocida, se puede enriquecer el rotfero con una variedad de componentes activos.

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El componente activo debe ser presentado en forma accessible lo que significa en el caso del rotfero: partculas con tamao inferior a 20 m o gotas de aceite emulsificadas en el agua (dimetro alrededor de 1 m). Las condiciones de enriquecimiento son similares a las mencionadas para la Artemia. Se puede ejecutar el processo al final de un cultivo masivo (en el medio de cultivo mismo) o en un medio fresco despus de la cosecha del cultivo masivo. Por lo tanto el tanque de enriquecimiento, la calidad del agua, la aereacin y la temperatura son idnticos a los del cultivo masivo. - tanque de enriquecimiento tanques cilindro-cnicos (de preferencia) con fondo plano - calidad del agua agua desinfectada (clorinada y consecutivamente neutralizada con tiosulfato de sodio) el agua pude ser agua de mar normal ( 35 ppt) o diluida con agua dulce hasta 18-22 ppt) - densidad de rotferos 400-600 rotferos.ml-1 - aireacin moderada, sin embargo evitando que la concentracion de oxgeno baje hasta 5 ppm - temperatura 25-30 C - preparacin del alimento bien licuado con agua de manera que el producto de enriquecimiento se presente en forma de partculas individualizadas con un tamao mximo de 20 m o en forma de glbulos aceitosos emulsificados con dimetro de 1m - alimentacin se agrega el producto de enriquecimiento en 2 raciones iguales de 150 ppm (0.15 g.l-1) - primera racin: 6 horas antes de la cosecha - segunda racin: 3 horas antes de la cosecha

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CULTIVO INTENSIVO DE ARTEMIA

La biomasa de Artemia puede ser producida intensivamente segn dos principios: recoleccin completa (circuito cerrado) o flujo continuo (circuito abierto). Durante el proyecto se aplic ambos mtodos. El cultivo intensivo de Artemia es caracterizado por muy altas densidades de animales. Cuando se utiliza algas unicelulares, siendo el alimento principal de la Artemia en su ambiente natural, se necesita mantener continuamente grandes cantidades de cultivos de fitoplancton. Por razones tcnicas y econmicas esta estrategia no es factible: el desarrollo de procedimientos para el cultivo intensivo de Artemia entonces depende completamente de la disponibilidad de un alimento apropiado y de bajo costo. La produccin intensiva de Artemia es relativamente simple, sin embargo se necesita instalar cierto nivel de tecnologa. La Artemia se alimenta por medio de filtracin del agua reteniendo las partculas suspendidas de tamao entre unas micras hasta 60 m. Esta es una accin continua realizada ms eficientemente cuando la densidad de partculas es constante. Por consecuencia, la distribucin del alimento debe ser muy precisa por un lado y bastante frecuente por otro. Lo ms conveniente (e.g. alimentacin durante la noche) es la distribucin automtica de la cual la forma fsica variar segn el mtodo de cultivo (circuito cerrado o abierto). Otro factor importante es la circulacin del agua asegurando el uso ptimo del espacio de cultivo disponible (distribucin de los animales), la suspensin homognea del alimento y la aireacin suficiente para que no se formen zonas anaerbicas. La circulacin est determinada principalmente por la forma y los dimensiones relativas del tanque de cultivo y en la mayora de casos es realizada como efecto secundario de la aireacin. En tanques cilindro-cnicos se puede instalar puntos de aireacin abiertos, difusores de aire o colares de aireacin mientras que en los tanques rectangulares (tipo race-way) se aplica con preferencia los air-water lifts. Alimentos secos para Artemia La dieta ms frecuentemente usada para el cultivo intensivo de Artemia es sin duda el afrechillo de arroz micronizado. Este es considerado en algunos lugares como un producto de desecho de la industria agrcola, y es por lo tanto disponible en grandes cantidades a bajo costo. An ms, los excelentes resultados de produccin obtenidos en muchos experimentos tanto en reas tropicales y sub-tropicales en todo el mundo han provado su conveniencia desde el punto de vista nutricional. Antes de que el afrechillo de arroz (al igual que otros alimentos potenciales) puedan ser utilizados en los cultivos de Artemia, ste debe ser molido hasta obtener un tamao menor a 100 m. La mejor tcnica para obtener esto es la micronizacin. Sin embargo, dicha mquina es raramente disponible y se deber buscar alternativas. El mtodo ms simple consiste en pasar la materia prima a travs de un molino ordinario para harinas tantas veces sea necesario hasta obtener una fraccin razonablemente pequea que la requerida, 100 m. Esta porcin es separada de la fracin corriente tamizndola. Esta combinacin de procedimientos toma bastante tiempo y tiene adems la desventaja de que nutrientes especficos pueden estar selectivamente concentrados en las partculas mayores las cuales, por su tamao, son eliminadas por dichoproceso. Una posibilidad para reducir este problema es mezclar la fraccin corriente en una licuadora de cocina y subsecuentemente exprimir la suspensin a travs de un filtro con malla de 100 m. A pesar de los inconvenientes producidos por la ausencia de la maquinaria apropiada para moler, el afrechillo molido y tamizado ha sido aplicado con xito en cultivos intensivos de Artemia.

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Cultivo con recoleccin completa Con este sistema no se aplica recambio de agua (circuito cerrado) y como consecuencia la calidad del agua va progresivamente deteriorndose. La densidad de Artemia inoculada es relativamente baja y la supervivencia despus un cultivo de 2 semanas no sobrepasa el 35%. Cultivos realizados con este mtodo producen tpicamente unos 5-7 kg de Artemia adulta despus 2 semanas de cultivo. La deterioracin de la calidad del agua puede ser reducida por eliminacin de las sustancias sedimentadas, lo que puede ser ejecutado manualmente por medio de sifoneo del fondo del tanque o automticamente utilizando un separador de placas. Alimentacin automtica La mejor produccin de Artemia es alcanzada cuando la densidad en el medio de cultivo es tan constante como sea posible. Conociendo el eficiente sistema de filtracin de la Artemia, uno se da cuenta que alimentaciones frecuentes son la garanta para obtener resultados aceptables de produccin. Por lo tanto, la alimentacin automtica es un requerimiento necesario. La figura 2.1 presenta una versin simple de un sistema automatizado.

toma corriente

aire

suspensin de alimento

al tanque de cultivo resevorio para suspensin de alimento

temporizador

bomba de aire

A: Parte electrnica (temporizador y aireador) B: Reservorio para la suspensin de alimento C: Air-water-lift B C

Fig. 2.1.- Alimentacin automtica para cultivos intensivos de Artemia

El componente ms importante es el temporizador electrnico que activa un aireador de acuario durante cierto tiempo y con una frecuencia determinada (e.g. se puede ajustar el temporizador de manera que activara el aireador cada 20 minutos durante medio minuto). A travs de un circuito de mangueras, el aire comprimido por el aireador es dirigido hacia el reservorio que contiene la suspensin de alimento. Aqu, el incremento de la presin activa un tipo de air-water-lift resultando en pequeas cantidades de la suspensin bombendolas al tanque de cultivo.

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Purificacin primaria del agua El sistema de purificacin del agua por medio de un separador de placas consiste de un filtro con malla apropiada, una bomba de agua con flujo ajustable y un tanque de sedimentacin. Los diferentes componentes estn interconectados por medio de mangueras y tubos.

FILTRO Y BOMBA

tubo de PVC

Marco del filtro

Faja de material liso (e.g. plstico) malla de nylon Malla intercambiable

El filtro es colocado en interior del tanque de cultivo previniendo la salida de la Artemia durante el proceso de filtracin. Este consiste de un marco de tubos PVC, un collar de aireacin y una malla de nylon intercambiable (figura 2.2.). Segn el crecimiento de l a Artemia se selecciona el orificio de malla apropiado. El agua circula del tanque cultivo al separador de placas por medio de aire comprimido (tipo airwater-lift).

Fig. 2.2.- Filtro para cultivo intensivo de Artemia: partes, componentes y forma de ensamblar.

SEPARADOR DE PLACAS El separador de placas consiste de un tanque rectangular dividido en un compartimento pequeo de entrada y un compartimento de sedimentacin. Existe una placa vertical localizada a 2 cm del fondo del tanque que separa a los dos compartimentos,. En el compartimento de sedimentacin estn ubicadas varias placas, de esta manera se incrementa la superficie de sedimentacin. La inclinacin de las placas es de 30-45 grados (en l a direccin del flujo). El agua es continuamente bombeada hacia el separador donde pasa entre las placas. Para resultados ptimos, el volumen del separador debe ser no menos del 10% del volumen del tanque de cultivo. Se ajusta el flujo de la bomba de tal manera que el tiempo de retencin en el separador sea entre 15-30 minutos. La instalacin del sistema igual como su funcionamiento estn representados en la figura 2.3.

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inyeccin de aire para crear el efecto air-water-lift

tubo PVC

separador de placas a tanque de cultivo c b filtro para retencin de Artemia a: tubo PVC b: compartimento de entrada c: placas (inclinacin: 30-45 direccin del flujo de agua

Fig. 2.3.- Instalacin de un sistema para la purificacin primaria de agua por medio de un separador de placas

Preparacin de la infraestructura Despus de la desinfeccin del tanque de cultivo con hipoclorito de sodio se lo enjuaga con agua de mar hasta que no se detecta mas el olor del cloro. De igual manera se trata el separador de placas, la tubera y las mallas. Inmediatamente antes de la inoculacin se llena el tanque con agua de mar filtrada. Origen de la cepa de Artemia Para todo cultivo intensivo realizado durante el proyecto se utiliz Artemia del Gran Lago Salado (Utah, EE.UU.). Inoculacin del cultivo Se inocul los tanques con nauplios recin eclosionados aplicando una densidad alrededor de 5,000 nauplios.l-1. Operacin del cultivo Durante los 3 primeros das del cultivo no oper el sistema de filtracin del agua mediante el separarador de placas y la alimentacin se ejecut manualmente, de manera que l a turbidez del medio de cultivo se mantenga alrededor de los 25 cm. A partir del cuarto da se instal el sistema de filtracin utilizando en el filtro malla de 100 m. Al mismo tiempo tambin se oper la alimentacin automtica. Durante el cultivo se calibr la frecuencia de la alimentacin para llegar a obtener una turbidez de 25 cm. Dos veces por da se prepar una nueva suspensin de alimento y diariamente se limpi las mallas. Desde el momento que el tamao de la Artemia lo permiti se reemplaz la malla por otra con orificios ms grande. Debido a que no se aplic sistema de calentamiento el crecimiento de la Artemia vari significativamente segn la estacin y los cultivos duraban entre 15-19 das.

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Cosecha del cultivo En el momento que la Artemia lleg a la madurez (observado por la presencia de parejas) se cosech el cultivo completamente. La manera mas conveniente fue de parar la aireacin totalmente. Por falta de ox geno la Artemia se dirigi hacia la superficie en pocos minutos y se la pudo colectar con una malla de 800 m. Cultivo con flujo continuo En el cultivo intensivo de Artemia con flujo continuo no se aplica purificacin de agua por que el medio de cultivo esta reemplazada continuamente con agua de mar nueva. Una instalacin de cultivo conveniente y confiable consiste del tanque de cultivo, un filtro con malla apropiada, un tanque pulmn sirviendo como reservorio para el agua de recambio y l a tubera conectando las diferentes partes mencionadas. Los procedimientos para la preparacin de la infraestructura y la cosecha del cultivo son igual a los mencionados para el cultivo con recoleccin completa. Se inocul los cultivos con una densidad de 20,000 nauplios.l-1, tambin eclosionados de quistes originarios del Gran Lago Salado. Con excepcin de la alimentacin los modos de operacin tampoco difieren mucho entre ambos tipos de cultivo. Durante los 3 primeros das se ejecuta exactamente los mismos procedimientos come si fuera cultivo con recoleccin total. A partir del cuarto da, el medio de cultivo fue reemplazado continuamente con agua de mar nueva. El tiempo de retencin era de 24 horas. Aplicando el flujo continuo se mezcla el alimento con el agua de recambio en el tanque pulmn. La concentracin del alimento en el agua de recambio esta determinada por la turbidez requerida del agua de cultivo y el tiempo de retencin. Potencial del cultivo intensivo Despus de 15 das de cultivo alimentando con afrechillo de arroz se puede esperar cosechas promedias (peso hmedo) por m3 de 5.8 kg en los cultivos cerrados y 6 kg en los sistemas abiertos con eficiencias de conversin alimenticia de 0.8 y 1.2 respectivamente. Despus de ser molido y tamizado se recupera unos 60% de la cantidad inicial del afrechillo.

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CULTIVO EXTENSIVO DE ARTEMIA EN ESTANQUES

CULTIVO EXTENSIVO DE ARTEMIA EN AGUA DE ALTA SALINIDAD El objetivo de esta mtodo de cultivo es de establecer y mantener poblaciones permanentes de Artemia. Preparacin de la planta piloto para la inoculacin de Artemia Los cultivos extensivos de Artemia son precedidos por un periodo ms o menos extenso dentro del cual se debe conseguir una salinidad alta ( 100 ups) gracias a la evaporacin del agua. El tiempo requerido para alcanzar esta condicin depende de la profundidad del agua. Por lo tanto, inmediatamente despus de terminar la construccin de la planta de produccin, se debe llenar todos los estanques con un promedio de 20 cm de agua de mar (en los primeros das se tiene que adicionar regularmente mas agua para compensar la prdida resultante de la absorcin por el suelo, un proceso temporal conocido como saturacin del fondo del estanque). Mediante el manejo del agua (ingreso) durante los siguientes meses se producir una cantidad de salmuera suficiente para la primera inoculacin con nauplios de Artemia recin eclosionados. Para llenar el resto de la planta piloto se sigue el mismo procedimiento. Origen de la cepa de la Artemia inoculada Reportes de la introduccin de Artemia con propsitos de cultivo en estanques, fuera de la distribucin natural, son numerosos. Los mejores resultados de produccin son obtenidos con Artemia de la cepa franciscana (originaria de USA) y se pens que durante estos aos la Artemia de los estanques podra ser transferida a sitios vecinos e.g.. las plantas para la produccin de sal. En zonas que tienen poblaciones autctonas de Artemia es preferible de no utilizar cepas exticas por la posible presencia local de vectores naturales para l a dispersin de la Artemia (e.g. flamingos) se puede fcilmente y de manera irreversible contaminar la cepa local. Inoculacin de los estanques Los estanques de Artemia tienen que ser inoculados con nauplios recin eclosionados. Si los sitios de incubacin y de eclosin se encuentran distantes, condiciones apropiadas de transporte debern ser consideradas. - densidad de 500 nauplios.l-1 - temperatura ambiente es aceptable por cortos periodos de transporte, de otra forma el agua necesitar ser temperada (e.g. 4 - 10 C); en este caso, es mejor aclimatar los nauplios cerca del arribo a los estanques (e.g. 5 - 10 C.h-1) - cuando el transporte es largo es inevitable suministrar aireacin mediante una bomba porttil; otra solucin es la de tranportar los nauplios en fundas plsticas con oxgeno. Para evitar temperaturas excesivamente altas, el mejor tiempo del da para la inoculacin es el principio de la noche, o hasta la siguiente maana. Control de la salinidad Debido a que aguas de diferentes densidades no se mezclan, despus de cada lluvia una capa de agua dulce se acumular encima de la salmuera. Una situacin parecida prolongada puede ser perjudicial para las poblaciones de Artemia no tanto por el riesgo de que la salinidad bajara excesivamente pero mas que todo por efectos indirectamente relacionados a la formacin de la capa de agua dulce: ingreso de grandes cantidades de material inorgnico y la estratificacin de las capas de agua.

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 Ingreso de material inorgnico Especialmente en estanques pequeos con una relacin baja entre el volumen del agua y la circunferencia, gran cantidad de arcilla es llevada de las orillas hacia el estanque donde se queda este material suspendido e interfiere muy seriamente con la biologa de l a alimentacin de la Artemia (por filtracin no selectiva). Este fenmeno fue la causa de que la primera poblacin de Artemia fue erradicada totalmente unos meses despus de la inoculacin. Por el establecimiento, poco a poco, de vegetacin en las orillas se piensa que problemas parecidos no se repetirn ms. Estratificacin de capas En sistemas con dos capas de agua de diferente densidad se establece un efecto invernadero en el cual la temperatura en la capa inferior aumenta espectacularmente (registrada hasta 80 C durante el proyecto). Bajo condiciones parecidas el oxgeno se terminar muy rpidamente y procesos anaerobicos empezarn a desarrollarse con consecuente formacin de sustancias txicas (e.g.. H2S). Cuando posteriormente las capas se mezclaron las condiciones del volumen total del agua pueden ser prohibitivo para la Artemia.

capa de agua dulce evacuacin de agua dulce capa de salmuera

Fig. 2.4.- Evacuacin de la capa de agua dulce formada encima de la salmuera de una piscina para la produccin de Artemia.

Consecuentemente, en caso de que fuertes lluvias azoten la zona se debe tomar acciones inmediatas para la evacuacin del agua dulce. Con este fin se coloca un tubo vertical en la estructura de drenaje, abrindose unos centmetros debajo de la superficie del agua, de manera que el agua dulce sea selectivamente drenada (figura 2.4). Fertilizacin Manteniendo un florecimiento de algas para proveer el principal alimento a las poblaciones en desarrollo de Artemia, es uno de los objetivos ms difciles de conseguir en el cultivo extensivoArtemia. Frecuentemente no se consigue una buena respuesta del fitoplancton con la fertilizacin. Varios productos (orgnicos y inorgnicos) combinaciones de productos pueden ser utilizados para inducir y mantener florecimientos de algas unicelulares. A continuacin se recomiendan cantidades de fertilizantes a utilizar: Produccin de biomasa La cosecha de la biomasa puede ser efectuada con una versin pequea del piernn, siendo la malla la tpicamente utilizada por los larveros que pescan las postlarvas en el mar. Las cosechas son determinadas por el principio de la produccin substituible (PS) lo que significa que la fraccin de la biomasa cosechada puede ser regenerada durante el tiempo entre dos cosechas consecutivas (figura2.5).

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Biomasa en la piscina A B . . . . . . . . . COSECHAS DIARIAS .

Tiempo (das)
Fig. 2.5.- Representacin esquemtica de la produccin sustituible: PS = A-B.

Se debe tomar en consideracin que: existe una concentracin de la biomasa en la orilla opuesta al viento se recomienda filtrar la biomasa por tramos paralelos a la direccin del viento la densidad y el peso individual de la Artemia varia considerablemente; estas caractersticas son directa y positivamente correlacionadas con la disponibilidad de alimento (algas unicelulares) la cantidad de Artemia cosechada varia de acuerdo a la disponibilidad del alimento la tasa de reproduccin de la Artemia tambin varia segn la disponibilidad del alimento el porcentaje de la biomasa substituible (PS) varia y se debe adaptar a l a superficie cosechada La ejecucin prctica de la cosecha y el clculo de la PS estn ilustrados en la figura 2.6.
Estanque de produccin

1 . . . . . . x
1 . . y b
a, b: d v 1 .... x 1 ... y ancho y longitud del estanque : ancho de la base del piernn : direccin princ ipal del viento : tramos de cosecha : tramos de cosecha

v d a

Piernn orificios de la malla: 800 m

c d
l-k : superficie del agua d : ancho de la base del piernn c : ancho del piernn en la superficie del agua : apertura del piernn

Por cada tramo se filtra( d + c

2.z

). 100 %

d - h.tg() . ( o 2.z ) 100 %

del volumen

(dependiendo de la direccin, z = a b) Ejemplo: haciendo tramos paralelos a la direccin principal del viento estanque : - z =a= 75 m piernn : - d= 1.5 m - b = 100 m - =60 - h = nivel del agua sobre el fondo produccin substituible (PS) estimada = 15% nmero de tramos : h = h 1= 0.4 m x = 10.84 ~ 11 tramos h = h 2= 0.8 m x = 8.86 ~ 9 tramos Fig. 2.6.- Clculo de la cosecha de cantidades sustituibles de Artemia

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CULTIVO EXTENSIVO DE ARTEMIA EN AGUA DE MAR NORMAL

La produccin de Artemia en estanques de alta salinidad es un proceso continuo y requiere constante monitoreo y seguimiento de los cultivos. La operacin del proceso de produccin de un organismo en un medio inslito (alto contenido de sal) demanda adems experiencia especfica. La produccin actual es precedida por una fase de inicio durante la cual cantidades suficientes de salmuera son producidas. Dicha fase es relativamente extensiva. Para que la ejecucin del cultivo extensivo de Artemia sea de mas atraccin y accesibilidad para un nmero mayor de los productores potencialmente interesados, una nueva tcnica ha sido evaluada durante el curso del proyecto: la produccin extensiva de Artemia en agua de mar normal.

Introduccin
Observaciones realizadas in situ demostraron que los depredadores principales de Artemia son los coppodos y un miembro del grupo de la familia Corixidae (localmente conocida como mosquilla). No se determin estos organismos hasta el nivel de especie. Experimentos realizados en laboratorio revelaron que ambos depredadores prefieren diferentes tamaos de Artemia. Los coppodos son solamente perjudiciales cuando la Artemia es pequea (nauplio recin eclosionado hasta metanauplio de 4 das). Por el contrario, la mosquilla solo toma como presa a los juveniles y adultos de Artemia, esta ltima siendo frecuentemente capaz de escapar del ataque del depredador. Para evitar la entrada de coppodos a los estanques, se utilizan mallas de 60 m que se ubican en las estructuras de la entrada de agua. Las mosquillas son insectos que invaden los estanques por el aire. Durante el tiempo que stas pasan en la columna del agua, regularmente necesitan subir a la superficie para respirar. Una medida probada para erradicar depredadores de iguales hbitos en estanques de camarones y de peces es l a aplicacin de pequeas cantidades de diesel. La delgada capa de diesel previene que los insectos alcancen la superficie, sofocndolos eventualmente. Se pens que este tipo de cultivo de Artemia, a pesar de las medidas rigurosas, eventualmente debera estar invadido de depredadores a parte de los mencionados coppodos y mosquillas (e.g.cangrejos que pasan por los diques e inmediatamente comienzan a reproducirse o peces que entran en los estanques como huevos transportados en las plumas de los pjaros). Por lo tanto, la duracin anticipada para cada cultivo de Artemia debera preferentemente estar restringida a una generacin. Preparacin del estanque Al inicio de las pruebas de cultivo, el estanque es tratado de manera similar a los estanques de camarn entre dos producciones consecutivas siendo drenado, secado y calado. Secciones del estanque que debido a la topografa no pueden ser drenados completamente, debern ser especialmente tratados. Dichas reas indudablemente pueden ser infestadas con coppodos que despus servirn de inculo en el siguiente cultivo de Artemia. Toma de agua Mediante anlisis de muestras de agua filtrada se demostr que la ausencia absoluta de coppodos en el estanque de produccin es garantizada slo utilizando un filtro con orificios no mayores a 100 m. Sin embargo, aunque el flujo de entrada se reduca, la malla de 100 m se taponaba y eventualmente era expulsada. Por lo tanto, este mtodo es solamente recomendado cuando pequeos volmenes de agua deben ser filtrados y/o cuando grandes superficies de filtracin pueden ser instaladas. Para eliminar completamente los coppodos del agua del estanque se sugiere construir una estructura de toma de agua consistente de una bomba porttil y un filtro de acero inoxidable del tipo cross flow. Debido a la propiedad de auto limpieza, grandes flujos de agua pueden pasar a travs de este tipo de filtro sin que su superficie de filtracin sea taponada. En ausencia del filtro de acero inoxidable (como fue el caso de los experimentos) se consider necesario aplicar un sistema de filtracin doble. Se instal una serie de dos filtros

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consecutivos con orificios de 800 y 200 m respectivamente (figura 2.7). Con la malla de 200 m la eliminacin total de los huevos de depredadores mayores (peces y crustceos) fue asegurada mientras que la cantidad de coppodos que entraron al estanque fue significativamente reducida. Como consecuencia, cualquier florecimiento de estos organismos sera retardado y se increment las posibilidades que el nauplio de Artemia pase por los periodos crticos en los cuales es presa fcil de los coppodos.

dique

filtro 800 m

dique

filtro 200 m

canal

piscina

Figura 2.7.- Toma de agua para cultivos extensivos de Artemia: infraestructura con filtracin doble

Origen de la cepa de Artemia inoculada Para los diferentes ensayos, la cepa de EE.UU. proveniente del Gran Lago Salado fue utilizada. Despus de cada ciclo de cultivo, el estanque fue completamente cosechado y la inoculacin de esta cepa extica fue mucho menos daina para la integridad de la cepa local, que hubiera sido si hubiese sido utilizada para los cultivos permanentes o semi-permanentes en altas salinidades. Inoculacin del estanque Para asegurar producciones satisfactorias, la introduccin de Artemia en el sistema de cultivo puede ser considerada solamente cuando los coppodos no son una amenaza. Dichas condiciones se alcanzan cuando: los coppodos estn completamente ausentes o presentes en bajas densidades: inoculacin con nauplios recin eclosionadas puede ser realizada coppodos estn presentes: inoculacin con metanauplios mayores, suficientemente grandes de manera que son inaccesibles para los coppodos INOCULACION CON NAUPLIOS RECIEN ECLOSIONADOS La eclosin de los quistes y el transporte de los nauplios es idntico al descrito para el cultivo de Artemia en alta salinidad. De nuestros experimentos se concluy que la inoculacin de los nauplios recin eclosionados no es posible cuando la densidad de coppodos excede a 1.l -1. En caso de que la estructura de ingreso de agua solamente permite una filtracin con malla de 200 m, dicha condicin de seguridad es obtenida inmediatamente despus de la filtracin. Sin embargo, inoculaciones a este momento tienen la desventaja de que el fitoplancton no ha tenido el tiempo suficiente para florecer y limitaciones de alimento pueden ocurrir. Este mtodo es por lo tanto mejor practicado cuando las algas han florecido previamente en el reservorio o canal de abastecimiento (e.g. cuando parte del canal de abastecimiento puede ser aislado y separadamente fertilizado algunos das antes de llenar el estanque de produccin de Artemia). Se supone (no comprobado) que los coppodos seran totalmente eliminados cuando se utiliza el filtro de acero inoxidable; por eso, la inoculacin podra ser pospuesta hasta por lo menos una semana despus del ingreso de agua, periodo dentro del cual las algas se han desarrollado.

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INOCULACION CON METANAUPLIOS DE ARTEMIA Los metanauplios de 5 das de edad han crecido hasta un mayor tamao al cual el coppodo no puede tomar como presa (verificado experimentalmente). Las condiciones del cultivo se describen a continuacin: tanque de cultivo (m3) 4 densidad (nauplios.l-1) 2,000 alimento da 0-1: Tetraselmis sp. da 2-4: afrechillo de arroz Los metanauplios son transportados al estanque en recipientes plsticos a una densidad de 500.l-1.y inoculados a 100 animales por litro. Control de depredadores Se observ ausencia completa de peces y camarones durante el periodo de cultivo. Cangrejos adultos fueron observados dentro y alrededor del estanque. Aunque no se lo determin exactamente, se pens que su nmero y consecuente depredacin en la poblacin de Artemia fue mnimo. En muestras de agua, larvas de cangrejo fueron ocasionalmente encontradas a los diez das de ingresada el agua. En caso de que la inoculacin de Artemia fuera exitosa, las larvas de cangrejo aparecieron en las muestras de agua slo cuando stas no eran dainas para los juveniles de Artemia. Ninguna medida fue tomada para el control de estas larvas que adems fueron muy pocas. El principal depredador de la Artemia juvenil y adulta es indudablemente la mosquilla. Estos organismos invaden los estanques inmediatamente despus del ingreso de agua y adems reproducindose rpidamente. Diez das despus de la inoculacin, las mosquillas fueron abundantes en las muestras de agua y se decidi aplicar diesel al estanque en una proporcin de 10 l.ha-1. El efecto fue obvio e instantneo: en pocos minutos el diesel se dispers en la superficie del agua y no slo previno que las mosquillas pudieran tomar aire, sino que tambin se adhiri a sus cuerpos los cuales se tornaron hidrofbicos. Por lo tanto, los organismos son incapaces de sumergirse e inevitablemente son atrados a la superficie, la cual pocos minutos despus de la aplicacin del diesel es cubierta por los desesperados insectos. Masas de mosquillas muertas y moribundas se concentran en la orilla del estanque y pueden ser removidas fcilmente. Este procedimiento fue aplicado justo antes de la cada del sol (parte del da con poco viento) y al da siguiente no se observ evidencia de la presencia del diesel, slo en pequeas secciones cerca de las orillas. Por la noche todas las trazas de diesel se haban evaporado y no fueron observados efectos negativos para la poblacin de Artemia ni en ese momento ni despus. Aunque la poblacin de mosquilla fue seriamente daada con el tratamiento del diesel, nunca desapareci totalmente. Se verific que desde el momento en que la capa de diesel desapareci, una nueva invasin se produjo. Tambin se asumi que los huevos de l a mosquilla sumergidos no fueron destruidos por el procedimiento y luego eclosionaron, dando el nacimiento a una nueva generacin de mosquilla. Por lo tanto, aplicaciones de diesel deben ser repetidas regularmente (cada 4 das en nuestro experimento). Produccin de biomasa De los ensayosse observ que la inoculacin con metanauplios ofrece una mejor oportunidad y luego de 3 semanas de cultivo se produjo el equivalente a un poco menos de 300 kg de biomasa por hectrea. Conclusiones El cultivo de Artemia en piscinas con agua de mar solamente es factible cuando se toma las medidas para la eliminacin de predadores. En el caso especfico del Ecuador el depredador ms importante es la mosquilla. Cuando se puede alcanzar esta condicin, esta manera de produccin de biomasa requiere menos esfuerzo o experiencia que la produccin en salmuera y las cosechas son mayores.

Manual para la produccin y Uso de organismos Zooplanctnicos

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PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA

Enriquecimiento
PREPARACIN DEL TANQUE DE ENRIQUECIMIENTO Se ejecuta la misma rutina como para la preparacin del tanque de eclosin

PREPARACION DE LOS NAUPLIOS

ECLOSIN

COSECHA

ENJUAGUE

CONCENTRACIN

RE-SUSPENSION DE LOS NAUPLIOS

PREPARACION DEL PRODUCTO DE ENRIQUECIMIENTO

OOCC

78 / 9 45 * 6 12 3 0+ = .
clculo de la cantidad del producto de enriquecimiento peso de la cantidad requerida agitacin fuerte con licuadora de cocina (3 - 5 minutos)

EJECUCION DEL ENRIQUECIMIENTO

Condiciones para el enriquecimiento de nauplios de Artemia t=0h - tanque: con fondo cnico (preferencial) plano - medio de enriquecimiento - enriquecimiento en agua de mar normal filtrada, previamente desinfectada y neutralizada con 5 ppm de hipoclorito de sodio y tiosulfato de sodio respectivamente aireacin - fuerte, garantizando una concentracin de oxgeno superior a 5 ppm - adicionar suficientes difusores de aire temperatura: 25-30 C densidad: hasta 300 nauplios.ml-1 COSECHA t = 24 h primera adicion: 0.3 g.l-1

t = 12 h segunda adicion: 0.3 g.l-1

PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA

Preservacin en fro

ECLOSIN

COSECHA

ENJUAGUE

CONCENTRACIN

Alimentacin directa a las larvas

Preservacin a temperatura ambiente durante 24 h

Preservacin al fro (4 -10 C) durante 24 h

25 - 30 C

aireacin suave

2000-4000 Artemia.ml -1 500 Artemia.ml

-1

CARACTERISTICAS DE LOS NAUPLIOS DESPUES DE LA PRESERVACION BAJO DIFERENTES TEMPERATURAS Alimentacin directa a las larvas Preservacin a temperatura ambiene durante 24 h Preservacin al fro (4 -10 C) durante 24 h

ESTADIO EDAD LONGITUD PESO SECO ENERGIA

Instar I 0h 480 m 100 % 100 %

Instar II-III 24 h 700-900 m 61 - 78 % 66 - 84 %

Instar I 24 h 480 m 97 - 98 %

PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA

Condiciones de eclosin
PREPARACION DEL TANQUE DE ECLOSION PROCEDIMIENTO - limpiar el tanque y la tubera de aireacin con abundante agua - disinfectar el tanque y la tubera con una solucin fuerte de hipoclorito de sodio (e.g. 200 ppm de cloro activo) - despus de 1-2 h enjuajar las paredes con agua hasta que no se detecta ms olor a cloro - llenar el tanque con agua de mar filtrada (de preferencia utilizar agua pre-condicionada > 25 C) - colocar el sistema de aireacin (utilizar suficiente lneas para que la concentracin de oxgeno sea superior a 2 ppm durante el proceso de eclosin)

HIPOC DE SODIO

HIP OC

PROCEDIMIENTO 25-30 C Na2 - disinfectar el agua con hipoclorito de sodio: e.g. agregar 0.5 g de cloro activo por cada 100 litros de agua y aplicar aireacin suave durante 1 h - neutralizar el agua desinfectada: agregar 0.5 de tio-sulfato de sodio por cada litro de agua - ajustar la temperatura: 25 - 30 C - agregar los quistes en cantidades equivalentes a 1 - 2 g.l-1

DESINFECCIN DE LOS QUISTES PROCEDIMIENTO Para reducir el nivel de contaminacin bacteriana se recomienda desinfectar los quistes antes de incubarlos - suspender los quistes (50 g.l-1) en una solucin de hipoclorito (200 ppm de cloro activo) durante 20 minutos - aplicar aireacin moderada durante la desinfeccin - colectar los quistes en una malla( 120 m) y enjuagarlos con agua de mar antes de incubarlos en el tanque de eclosin

CONDICIONES PARA UNA ECLOSION OPTIMA Agua - agua de mar filtrada (100 m); - salinidad: 25 -35 ppm - pH: > 8 Iluminacin - continua con intensidad en la superficie del agua de 2000 lux

COSECHA PROCEDIMIENTO - interrumpir la aireacin por 10 - 15 minutos - dentro de este tiempo los nauplios se separan de las cscaras vacas - las cscaras flotan - los nauplios se acumulan en el fondo del cono - colectar los nauplios en una malla sumergida con orificios de 120 m filtro tanque para la coleccin de los nauplios drenaje del filtro

Temperatura - 25 - 30 C Aireacin - agitacin fuerte del agua: el nivel de oxgeno debe ser > 2 ppm durante el proceso de la eclosin Tanque de eclosin - con fondo cnico Densidad de quistes - 1 - 2 g.l-1
AA rh

para el tratamiento de los nauplios postcosecha refirase a la ilustracin #

PRODUCCION DE NAUPLIOS DE ARTEMIA

Descapsulacin
PREPARACIN DEL TANQUE DE DESCAPSULACIN Se ejecuta la misma rutina que para la preparacin del tanque de eclosin

PREPARACION DE LOS QUISTES PARA LA DESCAPSULACION: HIDRATACION 50 g.l-1 aireacin fuerte PROCEDIMIENTO - poner los quistes en agua de mar durante 30 minutos - 1 h (densidad equivalente a 50 g.l-1 ) - recolectar los quistes hidratados en una malla de 120 m y eliminar el exceso de agua - estos quistes debern ser descapsulados dentro de media hora recoleccin y eliminacn del agua

RH rh

art 30 - 60 minutos hidratacin

PREPARACION DE LOS REACTIVOS PARA LA DESCAPSULACION REACTIVOS REQUERIDOS POR GRAMO DE QUISTE SECO Descapsulacin - Cloro activo 0.5 gramos (use hipoclorito de sodio: NaOCl) - NaOH 0.33 ml de una solucin al 40 % - Agua de mar 14 ml - NaOCL - NaOH Neutralizacin - Tiosulfato de sodio: Na2S2O3 : solucin al 0.1 %

79 8/ 46 5* 13 2. = 0las-cantidades de + clculo de
cada producto

OOCC

EJECUCION DE LA DESCAPSULACION PROCEDIMIENTO - llenar el tanque para la descapsulacin con agua de mar e instalar las lneas de aireacin - adicionar los productos en el orden siguiente: - quistes de Artemia - Hidrxido de Sodio (NaOH) - Hipoclorito de Sodio (NaOCl) - verificar la temperatura, la descapsulacin es una reaccin exotrmica: para garantizar la viabilidad del embrin la temperatura del medio de descapsulacin debe ser siempre menos de 40 C; con temperaturas crticas se debe adicionar hielo - verificar microscpicamente cada 30 segundos el progreso de la descapsulacin (la disolucin de la cscara) - cambio del color de los quistes: caf gris naranja (color del embrin) - al final del proceso cosechar los embriones rpidamente, se los enjuaga con agua de mar abundantemente - para neutralizar cualquier remanente de cloro, suspender los embriones ligeramente en la solucin de tiosulfato de sodio y los enjuaga otra vez con agua de mar

USO Y PRESERVACIN DE LOS QUISTES DESCAPSULADOS - uso directo: eclosionar los quistes inmediatamente bajo condiciones ptimas - uso futuro: - preservacin durante un mximo de 1 semana: en refrigeracin (0-4 C) despus que el exceso de agua haya sido eliminada (filtracin de la pasta de embriones con malla de 120 m) - preservacin por largo tiempo: deshidratacin de los embriones con salmuera saturada (conteniendo 300 g.l-1 de sal disuelta)

SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA

Determinacin de las caractersticas de eclosin: eficiencia (EE) y porcentaje (E%) de eclosin
PREPARACION DE LOS ANLISIS: ECLOSIN DE QUISTES BAJO CONDICIONES ESTNDARES

PROCEDIMIENTO

28C

- eclosin bajo condiciones estndares (iluminacin permanente, temperatura constante: 28 C) - tiempo t=0: incubacin de 2 g de quistes en 800 ml de agua de mar - tiempo t=2: aadir 200 ml de agua de mar (para re-suspender los quistes pegados a la pared del recipiente) - tiempo t=24: toma de muestras (100 l utilizando una micro-pipeta automtica)

duracin de la eclosin (h)

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DETERMINACION DE LA EFICIENCIA DE ECLOSION (EE)

PROCEDIMIENTO - fijar la muestra con unas gotas de LUGOL - observacin microscpica y conteo del nmero de nauplios: N (= 42 en el ejemplo ilustrado) - clculo de la EFICIENCIA DE ECLOSIN (EE) - cantidad de quistes incubados: C = 2 g - volumen de la eclosin: V = 1000 ml - volumen de la muestra: M = 100 l = 0.1 ml - EFICIENCIA DE ECLOSIN EE = M C N x V 42 x 1000 = 0.1 2 = 210000 nauplios.g-1

LUGOL

DETERMINACION DEL PORCENTAJE DE ECLOSION (E%)

PROCEDIMIENTO - la muestra previamente fijada con LUGOL y analizada para la EE ser tratada con HIPOCLORITO DE SODIO las cscaras vacas y los quistes que no eclosionaron se disuelven (descapsulacin) de estos ltimos quedan los embriones - observacin microscpica y conteo de los embriones: E (=9 en el ejemplo ilustrado) -clculo del PORCENTAJE DE ECLOSIN (E%) - nmero de nauplios: N (= 42 en el ejemplo ilustrado) - nmero de embriones: E (= 9 en el ejemplo) - PORCENTAJE DE ECLOSIN E% = N N+E = 42 42 + 9 = 82.3 %

HIPOCLORITO

SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA

Determinacin de las caractersticas de la eclosin: Tasa de eclosin
PREPARACION DE LOS ANLISIS: ECLOSION DE QUISTES BAJO CONDICIONES ESTANDARES

28C

14

15

16

24 duracin de la eclosin (h)

PROCEDIMIENTO LUGOL - eclosin bajo condiciones estndar (iluminacin permanente, temperatura constante: 28 C) - tiempo t=0: incubacin de 2 g de quistes en 800 ml de agua de mar - tiempo t=2: aadir 200 ml de agua de mar (para resuspender quistes pegando a la pared del recipiente) - tiempo t=14: toma de la primera muestras (100 l utilizando una micro-pipeta automtica) y determinacin del E% - tiempo t = 15 , t = 16, ... t = 24: repite las acciones de t =14

EJEMPLO Al final de la experiencia se calcula la para cada muestra la EE relativa a la EE despus 24 h: EE t ERt = 100 EE 24 t: duracin de la eclosin (h) EE ( 106 nauplios.g-1 ) ER 14 5 2.4 15 10 4.8 16 25 11.9 17 50 23.8 18 100 47.6 19 140 66.7 20 165 78.6 21 185 88.1 22 195 92.9 23 205 97.6 24 210 100

VALORES TPICAS DE LA TASA DE ECLOSIN - t90 , t50 y t10 : los tiempos despus de los cuales 90%, 50% y 10% de los quistes viables han eclosionados - ts = t90 - t10 : una valor terica dando una estimacin de la sincrona de la eclosin; lotes aceptables deben tener ts < 6 horas - en el ejemplo ilustrado: - t90 = 22 horas - t10 = 15 horas - ts = 7 horas - t50 = 18.5 horas

SELECCION DE LA CEPA ADECUADA DE ARTEMIA

Determinacin del tamao de los nauplios recin eclosionados
CALIBRACION DEL OCULAR cuadrilla del hemocitmetro cuadro estandard del hemocitmetro: sss mm2 escala del ocular 0 100 campo del micrscopio Calibracin 65 unidades de la escala del ocular corresponden con 4 x sss mm 1 unidad corresponde con ttt mm

MEDICION DEL DIAMETRO DE LOS QUISTES DE ARTEMIA quiste de Artemia

hidratacin de los quistes 2 h en agua de mar con aireacin suave

observacin microscpica y determinacin del dimetro de los quistes para una estimacin confiable se debe calcular el promedio de por lo menos 100 quistes

MEDICION DEL TAMAO (LONGITUD) DE NAUPLIOS DE ARTEMIA incubacin de los quistes y eclosin de nauplios

nauplio de Artemia

LUGOL

preparacin de la muestra

observacin microscpica y determinacin del tamao de los nauplios para una estimacin confiable se debe calcular el promedio de por lo menos 100 nauplios

RELACION ENTRE EL DIAMETRO DE LOS QUISTES DE ARTEMIA Y EL TAMAO DE LOS NAUPLIOS RECIEN ECLOSIONADOS (segn datos de Vanhaecke, 1983 y Vanhaecke & Sorgeloos, 1980; en: Lger et al., 1986)

PRODUCCION DE ROTIFEROS
Enriquecimiento

PREPARACION DE LOS ROTIFEROS ENRIQUECIMIENTO EN EL MEDIO DE CULTIVO ENRIQUECIMIENTO EN AGUA NUEVA

Cosecha del cultivo masivo, limpieza de los rotferos y transferencia a un tanque con agua nueva

PREPARACION DEL PRODUCTO DE ENRIQUECIMIENTO

78 / 9 45 * 6 12 3 0+ =de la cantidad del . clculo

producto de enriquecimiento peso de la cantidad requerida

OOCC

agitacin fuerte con licuadora de cocina (3 minutos)

EJECUCION DEL ENRIQUECIMIENTO ENRIQUECIMIENTO EN EL MEDIO DE CULTIVO ENRIQUECIMIENTO EN AGUA NUEVA

Condiciones para el enriquecimiento de rotferos - tanque: con fondo cnico (preferencial) plano - medio de enriquecimiento - enriquecimiento en el medio de cultivo: medio del cultivo - enriquecimiento en agua nueva: agua de mar normal de 18-22 ppt previamente desinfectada y neutralizada con 5 ppm de hipoclorito de sodio y tiosulfato de sodio respectivamente - aireacin - moderada, garantizando una concentracin de oxgeno superior a 5 ppm - agregar difusores de aire - temperatura: 25-30 C - densidad: 400-600 rotferos.ml
-1

t=0h primera adicin: 0.15 g.l-1

t=3h segunda adicin: 0.15 g.l-1

t=6h COSECHA

PRODUCCION DE ROTIFEROS
Esquema de produccin
Mantenimiento del stock Cultivo masivo

Tubo de ensayo densidad (rotferos.ml ) inoculacin : 1 cosecha : 10 20 ml tiempo de cultivo (das) 20

-1

Tanque cnico densidad (rotiferos.ml-1 ) inoculacin : 30 cosecha : 150 50 l tiempo de cultivo (das) 4

densidad (rotferos.ml-1 ) inoculacin : 30-150 cosecha :150-800 200 l tiempo de cultivo (das) 4

Fiola densidad (rotferos.ml-1 ) inoculacin : 1 cosecha : 10 tiempo de cultivo (das) 20 500 l densidad (rotferos.ml-1 ) inoculacin : 30-150 cosecha :150-800 tiempo de cultivo (das) 4

1000 ml

Condiciones ptimas para el cultivo masivo de rotferos - calidad del agua: salinidad: agua de mar diluda con agua dulce hasta obtener una salinidad de 18 -22 ppt el medio de cultivo debe ser filtrado y clorinado (5 ppm de cloro activo durante 1h) y finalmente neutralizado (5-6 ppm de tiosulfato de sodio) - temperatura: 25-28 C - aireacin: bastante suave manteniendo la concentracin de oxgeno > 2 ppm los difusores de aire se suspenden 15 cm encima del fondo del tanque

Tanque rectangular con fondo plano densidad (rotferos.ml-1 ) inoculacin : 30-150 cosecha :150-800 5000 l tiempo del cultivo (das) 4

Preparacin del alimento - algas Nannochloropsis oculata: 5.106 celulas.ml-1 Tetraselmis maculata: 0.5.106 celulas.ml-1 las algas son producidas segn los procedimientos normales de cultivo se alimenta con algas una vez por da - levaduras levadura de pan: 1g.d-1 por cada milln de rotferos levadura manipulada: entre 310-550 g.d-1 por cada milln de rotferos, segn tabla de alimentacin se disuelve la cantidad requerida por cada alimentacin en agua de mar (hasta 50 g.l-1 ) y se lo agita durante 3 minutos en una licuadora de cocina la cantidad diaria se distribuye proporcionalmente para 4-6 raciones

Tabla de alimentacin (levadura manipulada) da del cultivo (#) 0 1 2 3 4 densidad de rotferos (rotferos.ml-1 ) 200 250 350 450 600 alimentacin (mg.10-6 .da-1 ) 550 440 340 310 ----

PRODUCCION DE ROTIFEROS
Rutina de trabajo
DA 0: INOCULACION DEL CULTIVO aireracin inculo Preparacin del tanque para un nuevo cultivo - instalar las lneas de aireacin - llenar el tanque con el medio de cultivo, clorinar y neutralizar; si se aplica el mtodo Cultivo con Volumen Constante (CVC) tambin proporcionar la cantidad requerida de algas Inoculacin - alrededor de 200 rotferos.ml-1 Alimentacin - a base de 1 g de levadura de pan.d-1 por cada milln de rotferos dividido en 4-6 raciones, para la levadura manipulada se consulta la tabla de alimentacin

tanque de cultivo

cultivo de algas (opcional )

suspensin de alimento

DAS 1-4(6): MANTENIMIENTO DEL CULTIVO Mantenimiento del cultivo - estimar la densidad de rotferos (como el promedio de varias muestras de 100 l) - calculo de la cantidad del alimento para el da (a base de 1 g de levadura (manipulada).d-1 para cada milln de rotferos - preparacin del alimento - alimentacin (4-6 raciones por da) - proporcionar la suspensin de algas (opcional)

adicin de algas (opcional) conteo clculo del alimento

alimentacin (4x/d) cultivo de algas (opcional) tanque de cultivo preparacin del alimento

DA 4(6): COSECHA DEL CULTIVO

Cosecha del cultivo 80 % produccin neta

20 % tanque de cultivo malla de 60 m

inculo

hipoc hlo de limpiar y desinfectar el tanque cosechado vaco sanitario (1 da)

Cosecha del cultivo - se divide la cosecha en dos partes: con la primer a parte (20 % de la cosecha total) se inocula un nuevo cultivo, la segunda parte (80 %, siendo la produccin neta) servir como alimento para las larvas - el tanque cosechado ser limpiado y desinfectado segn la manera usualmente aplicada en tanques de eclosin de Artemia - antes de re-utilizar el tanque para un nuevo cultivo se lo deja secar durante un da (vaco sanitario)