UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN LUIS

FACULTAD DE QUMICA, BIOQUMICA Y FARMACIA

GENTICA E INTRODUCCIN A LA BIOLOGA MOLECULAR CARRERA: LICENCIATURA EN BIOQUIMICA. GUA DE TRABAJOS PRCTICOS DE AULA
Profesores Responsables: Susana Siewert-Silvana Marsa Auxiliares Docentes: Marita Rodrguez- Irma Gonzlez
INDICE

-2010PGINA 3

OBJETIVOS

Esta gua contiene una serie de problemas y actividades que intentan acercarlos al mundo de la Gentica y la Biologa Molecular para que conozcan las herramientas y hechos cientficos que se han ido labrando a travs del tiempo y que hoy nos dan la posibilidad de conocer cada vez mas acerca de nosotros mismos y de los diferentes organismos existentes con los cuales convivimos. Es la intencin introducirlos en la temtica y estar dispuestos a profundizar aquellos temas que despierten su curiosidad.

INDICE OBJETIVOS. TRABAJO PRCTICO N 1: MENDELISMO Y PROBABILIDADES .. TRABAJO PACTICO N 2: HERENCIA LIGADA AL SEXO, CARACTERES INFLUIDOS Y LIMITADOS POR EL SEXO TRABAJO PRACTICO N3: EXTENSIONES Y MODIFICACIONES DE LOS PRINCIPIOS BASICOS TRABAJO PRACTICO N 4: ESTRUCTURA Y ORGANIZACION DEL GENOMA HUMANO.. TRABAJO PRCTICO N 5 REPLICACION y REPARACION.. TRABAJO PRACTICO N 6: TRANSCRIPCION. TRABAJO PRACTICO N 7: TRADUCCION.. TRABAJO PRACTICO N 8: REGULACION DE LATRANSCRIPCION. TRABAJO PRCTICO N 9: BIOLOGIA MOLECULAR DE LOS GENES .. TRABAJO PRCTICO N 10. TECNOLOGIA DEL DNA RECOMBINANTE. BIBLIOGRAFIA. 3 4 9 13 14 20 25 29 36 40 44 50

OBJETIVOS GENERALES

Manejar el vocabulario especfico de la asignatura. Lograr que el alumno adquiera destrezas en: Comprensin de los mecanismos cuantitativos bsicos y los mtodos para predecir la herencia. Aplicar dichos mecanismos (tablero de Punnet) en la resolucin de ejercicios bsicos. Comprender los mecanismos cuantitativos bsicos y los mtodos para predecir la herencia de dos o ms factores hereditarios simultneos. Aplicar dichos mecanismos en la solucin de ejercicios con orientacin clnica. Reconocer y analizar los distintos patrones de herencia de las enfermedades, con ejemplos concretos de distintas enfermedades hereditarias autosmicas, ligadas al sexo, ligadas al cromosoma Y y mitocondriales. Describir los componentes estructurales de los cidos Nucleicos. Entender y describir el cdigo gentico, la replicacin del DNA y del RNA y la sntesis de protenas. Diferenciar y aplicar los conceptos ms importantes de la clonacin como la tcnica ms contempornea de la gentica; y la identificacin de oncgenos como causa importante de cncer. Distinguir la diferencia entre biotecnologa e ingeniera gentica. Comprender la forma bsica en que acta la ingeniera gentica para la obtencin de recursos especficos. Analizar de qu forma incide la biotecnologa en las enfermedades para su posterior tratamiento y prevencin. Profundizar los conocimientos sobre el genoma humano, tanto de su organizacin como de los diferentes tipos de secuencia que en l se encuentran, haciendo nfasis en el PGH que ha permitido conocer la secuencia completa de genoma del hombre. Desarrollar una actitud crtica frente a la informacin disponible.

TRABAJO PRCTICO N 1: MENDELISMO Y PROBABILIDADES

Hermano Mendel, ya estamos cansados de comer arvejas!!

1. Completar el siguiente esquema con los conceptos: Gen, alelo, homocigoto recesivo, heterocigoto.

2. Usted acaba de iniciar su curso de gentica y sorprendido con el modelo de estudio de Mendel decide repetir algunos de sus experimentos, para lo cual, elije una determinada flor de la que conoce que existen 2 colores, rosa y blanco. De manera que procede a cruzar una planta rosa (pura) con una blanca (pura) lo que le da por resultado una F1 toda rosa, en base a estos datos identifique: *Caracterstica o gen estudiado. *Variantes allicas *Alelo dominante. *Alelo recesivo. 3. En los siguientes pedigres humanos los smbolos negros representan una condicin fenotpica anormal, heredada de manera mendeliana simple. En cada pedigr: a) Indique si la condicin anormal es dominante o recesiva. b) Describa los genotipos de todos los individuos que pueda.

1)

2)

3)

4)

4. El color azul de los ojos en el hombre se debe a un gen recesivo. Los padres de un varn de ojos azules tienen los ojos pardos. a) Cules son sus genotipos? Qu probabilidad hay de que un segundo hijo tenga los ojos pardos? b) El hijo de ojos azules anterior se casa con una mujer de ojos pardos cuyos padres tienen ojos azules y ojos pardos, y que tiene un hermano de ojos azules. El matrimonio formado tiene un hijo de ojos pardos, cules son los genotipos de los padres de la esposa, de los esposos y de su hijo? 5. La incapacidad para detectar el sabor amargo de la feniltiocarbamida (PTC) en la especie humana se debe a un gen recesivo frente al alelo que permite detectar el sabor amargo de la PTC. En un matrimonio en el que ambos padres son heterocigticos para este locus, tuvieron 6 descendientes. Determine las probabilidades de las siguientes descendencias o familias: a) Cuatro descendientes detectan el sabor amargo de la PTC y dos no lo detectan. b) Todos distinguen el sabor amargo c) Al menos uno de los descendientes detecta el sabor amargo de la PTC. 6

d) Los cuatro descendientes mayores distinguen el sabor amargo y los dos ms jvenes no lo detectan e) Slo uno de los descendientes detecta el sabor amargo de la PTC. f) Si los cinco mayores detectan el sabor amargo, que el sexto no lo distinga. 6. La galactosemia es un carcter recesivo autosmico. Un matrimonio normal tiene un hijo afectado. a) encontrar la probabilidad de que los dos hijos siguientes sean galactosmicos. b) que de los cuatro hijos al menos uno sea tambin galactosmico. c) que el hijo siguiente sea heterocigoto para el alelo recesivo. d) que si el hijo galactosmico hubiese tenido un hermano gemelo este tambin hubiese sido galactosmico. e) que el padre del hijo galactosmico sea heterocigoto. 7. La enfermedad humana anemia falciforme est producida por un gen en homocigosis. Los eritrocitos tienen forma de hoz y son incapaces de transportar el oxgeno adecuadamente. Las personas afectadas mueren antes de llegar a la edad adulta. Los heterocigotos no padecen la enfermedad, aunque sus eritrocitos adquieren forma de hoz en condiciones de baja concentracin de oxgeno. Una mujer, cuyo hermano padece la enfermedad, desea asesoramiento gentico antes de tener hijos. Las pruebas de sangre muestran que sus eritrocitos, situados en bajas concentraciones de oxgeno, adquieren forma de hoz. Su pareja es tambin heterocigota. Redacte un informe sobre los futuros hijos de la pareja. Cmo son los padres de la mujer respecto al carcter que se estudia? 8. La braquidactilia es un carcter humano raro dominante que causa el acortamiento de los dedos. Varios estudios han puesto de manifiesto que aproximadamente la mitad de la progenie de matrimonios braquidactlicos x normal son braquidactlicos. Qu proporcin de descendientes braquidactlicos cabra esperar entre dos individuos heterocigtico? 9. La enfermedad de Tay-Sachs es una enfermedad hereditaria recesiva que causa la muerte en los primeros aos de la vida. La presencia del alelo dominante resulta en fenotipo normal. Por otro lado la braquidactilia es provocada por un gen dominante B, letal en homocigosis, y su alelo recesivo b hace que los dedos sean normales. Cules sern los fenotipos esperados en nios adolescentes de un cruzamiento entre padres heterocigotos para ambos loci?.

ALGO INTERESANTE!!
Lotera blgara repite la misma combinacin dos veces seguidas Autor: Ifun Lunes, 21 Septiembre 2009 Casualidad o fraude? Esa es la pregunta que se hace Bulgaria despus de que en los sorteos de la lotera de los pasados das 6 y 10 de septiembre las mismas seis cifras, entre un total de 42, fueran las elegidas por la fortuna para componer la combinacin ganadora, que fue ratificada por las autoridades. Segn los expertos mencionados por los medios locales, la probabilidad de que salgan dos veces seguidas los mismos seis nmeros es una entre 4,2 millones. Una probabilidad tan reducida que las acusaciones de manipulacin obligaron a las autoridades a iniciar una investigacin al respecto. Hoy, el Ministerio de Deportes anunci que no se han detectado irregularidades en los dos sorteos de este tipo de lotera, que se celebran siempre los jueves y domingos. Una conclusin que parece dejar como nica explicacin que la casualidad quiso que los mismos seis nmeros cayeran del bombo dos veces seguidas: 4, 15, 23, 24, 35 y 42. En el primer sorteo no hubo acertantes de la combinacin ganadora. En el segundo, 18 personas haban elegido la serie correcta y se llevaron 5.196 euros cada uno.

TRABAJO PACTICO N 2: HERENCIA LIGADA AL SEXO, CARACTERES INFLUIDOS Y LIMITADOS POR EL SEXO.

1. Las mujeres tienen los cromosomas sexuales XX, y los hombres los cromosomas sexuales XY. Cul de los abuelos de un hombre no podra ser la fuente de los genes en su cromosoma Y? a) b) c) d) e) La madre del padre. El padre de la madre. El padre del padre. La madre de la madre, padre de la madre, madre del padre. La madre de la madre.

2. La hemofilia en humanos se debe a una mutacin en el cromosoma X. Cul ser el resultado del apareamiento entre una mujer normal (no portadora) y un hombre hemoflico? 3. El Talmud, un antiguo libro de leyes civiles y religiosas judas, establece que si una mujer da a luz dos hijos que mueren por hemorragia despus de la circuncisin (extirpacin del prepucio), los prximos hijos que tenga no debern ser circuncidados. (Lo ms probable es que la hemorragia se deba a la hemofilia, 9

enfermedad ligada al X). Adems, el Talmud establece que los hijos de sus hermanas no debern ser circuncidados mientras que los hijos de sus hermanos deben serlo. Esta ley religiosa es compatible con principios genticos legtimos? Explique su respuesta. 4. Nystagmus es una enfermedad que causa visin doble por oscilacin involuntaria de los ojos. Esta enfermedad est controlada por un alelo recesivo ligado al sexo. Un hombre y una mujer, ambos con visin normal, tienen cuatro descendientes, todos ellos se casan con individuos normales. El primer hijo varn tiene Nystagmus, pero tiene una hija normal; el segundo es normal y tiene una hija normal y un hijo tambin normal; la primera hija es normal y tiene 8 hijos todos normales; la segunda hija tiene dos hijas normales y dos hijos, uno normal y otro afectado. a) Indicar el genotipo de todos los miembros de la familia. b) Si los padres originales hubiesen tenido otro descendiente, cul es la probabilidad que tendra de ser un varn normal, un varn afectado y una hija afectada? c) Si la madre original estuviese afectada y el padre fuese normal, podra algn descendiente presentar el carcter recesivo ligado al sexo? 5. Una mujer lleva en uno de sus cromosomas X un gen letal recesivo l y en el otro cromosoma, el dominante normal L. Cul es la proporcin de sexos en la descendencia de esta mujer con un hombre normal?.

6. Un gen para el patrn de la calvicie es dominante en el hombre y recesivo en las mujeres. Un hombre no calvo se casa con una mujer no calva. Uno de sus hijos es calvo. Indique los genotipos de los parentales. Anote adems en qu tipo de herencia ubicara este problema. 7. Un gen recesivo ligado al sexo en los seres humanos produce hombres daltnicos cuando son hemicigotos y mujeres daltnicas cuando son homocigotos. Un gen infludo por el sexo para el patrn de la calvicie es dominante en el hombre y recesivo en las mujeres. Un hombre calvo, heterocigoto, daltnico, se casa con una mujer no calva, con visin normal, cuyo padre fue daltnico y no calvo y cuya madre fue calva con visin normal. Enumere las proporciones fenotpicas esperadas en sus hijos? Anote adems en qu tipo de herencia ubicara este problema. 8. Se conoce un gen holndrico que codifica para el crecimiento de vello largo en la oreja. Cuando un hombre con pabelln velludo se casa con una mujer normal:

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a) Qu % de los hijos varones se espera que presenten el rasgo? b) Qu proporcin de las hijas tendr el rasgo? c) Qu proporcin habr de hijos velludos en las orejas y normal?
La calvicie puede ser beneficiosa Los hombres que se quedan calvos a los 30 son menos propensos a padecer cncer de prstata. La mayora de los hombres piensa que la calvicie es una maldicin, pero eso podra cambiar a partir de ahora, ya que un estudio mdico indica que los que son calvos a los 30 aos tienen menos probabilidades de sufrir cncer de prstata. Cientficos de la Universidad de Washington que estudiaron una muestra de 2.000 hombres de entre 40 y 47 aos llegaron a la conclusin de que los altos niveles de testosterona que muestran aquellos que han perdido su caballo pronto estn vinculados a un menor riesgo de padecer tumores de prstata. La mitad de los estudiados haba padecido cncer de prstata. Los investigadores compararon los ndices de tumoracin entre los que haban perdido el pelo a los 30 aos y aquellos que no y llegaron a la conclusin de que los calvos tenan entre un 29 y un 45 por ciento menos de riesgo de sufrir cncer de prstata. L a calvicie se produce cuando los folculos pilosos de la cabeza se encuentran sometidos a una excesiva cantidad de dihidrotestosterona, que es un producto qumico producido por la hormona testosterona. Los altos niveles de esta hormona son los que, en opinin de los cientficos, provocan la calvicie, pero tambin parecen proteger de la enfermedad. Jonathan Wright, profesor de la Universidad de Washington, reconoci que, en un principio, los resultados del estudio resultaron sorprendentes. La testosterona es la hormona responsable de caractersticas fuertemente masculinas, como la voz profunda, el mayor ndice de masa muscular y la fortaleza de los huesos que caracterizan al gnero masculino. Los resultados de este estudio, que fueron inicialmente expuestos en otoo de 2004 pero se publican esta semana en el Journal Cancer Epidemiology, sugieren por tanto que los altos niveles de testosterona a edades tempranas pueden representar mayor proteccin contra los tumores de prstata.

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DETERMINACION DEL SEXO.

LABORATORIO DE BIOLOGIA

TODOS LOS CROMOSOMAS X ESTAN TRATANDO DE ENCONTRAR CON QUIEN JUGAR TA-TE-TI.

1. Cul es el fenotipo sexual de personas con Sndrome de Turner, Sndrome de Klinefelter, duplo Y, as como en las mujeres poli-X? 2. Cuntos corpsculos de Barr esperara ver en las clulas humanas que contuvieran los siguientes cromosomas? a) XXX b) XY c) XO d) XXY e) XXYY f) XYY g) XXXY h) XXX 3. Roberto tiene los cromosomas XXY (Sndrome de Klinefelter) y es ciego para los colores. Su madre y su padre tienen una visin normal para los colores pero su abuelo materno es ciego para los colores. Suponga que la anormalidad cromosmica de Roberto fue causada por no disyuncin durante la meiosis. En cul de los padres y en qu divisin meitica ocurri la no disyuncin? Explique su respuesta. 4. Una mujer ciega para los colores y un hombre con visin normal de los colores tienen tres hijos y seis hijas. Todos los hijos padecen ceguera para los colores. Cinco de las hijas tienen visin normal de los colores mientras que una padece ceguera para los colores. Esta ltima tiene 16 aos, es baja para su edad y nunca entr en la pubertad. Proponga un mecanismo que explique cmo hered esta joven su ceguera para los colores.

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TRABAJO PRCTICO N3: EXTENSIONES Y MODIFICACIONES DE LOS PRINCIPIOS BASICOS

1. La ptosis (cada del prpado) se puede heredar como un rasgo humano dominante. Entre 40 personas heterocigticas para el alelo de la ptosis, 13 presentan ptosis y 27 tienen prpados normales. a)Cul es la penetrancia de la ptosis? b) Si la ptosis exhibiera expresividad variable, qu significara? 2. Los grupos sanguneos M, N, y MN son debido a los alelos LM y LN. El grupo Rh+ es debido aun alelo dominante (R) de otro gen y los grupos AB0 se deben a la serie allica IA, IB e i. En un caso judicial de determinacin de paternidad, dos hombres afirman que los tres descendientes de una mujer son suyos. Conociendo los siguientes fenotipos sanguneos, puede denegarse la paternidad? Mujer Marido Amante Hijo 1 Hijo 2 Hijo 3 A 0 AB 0 A A N M MN MN N MN Rh+ Rh+ RhRh+ Rh+ Rh-

3. La audicin normal depende de la presencia de por lo menos un gen dominante de cada uno de dos pares de genes: D y E. Si se examina la progenie de un gran nmero de matrimonios de genotipos DdEe por DdEe, qu proporcin genotpica esperara Ud. encontrar? 4. Analice la siguiente genealoga y explique cmo es posible que los padres III-7 y III-9 tengan hijos con audicin normal. Seale los genotipos posibles.

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TRABAJO PRCTICO N 4: ESTRUCTURA Y ORGANIZACION DEL GENOMA HUMANO

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1.

La siguiente actividad se realizara en grupo. Se leer el texto atentamente y luego se proceder a contestar las preguntas que figuran debajo relacionadas con el mismo. Para responderlas debe ayudarse de la bibliografa propuesta por la ctedra.

Secuencian el genoma humano ms antiguo

Hasta el momento slo se han secuenciado ocho genomas humanos de tres regiones geogrficas diferentes: uno africano, cuatro europeos, uno chino y dos coreanos, pero ninguno de un hombre que vivi hace cientos de aos. Inuk muri hace ms de 4000 aos, vivi muy al norte del continente americano, en Groenlandia, y perteneci a la cultura Saqqaq, una de las primeras culturas del Nuevo Mundo. Sus restos fueron descubiertos en 1980 en Qeqertasussuk, un lugar arqueolgico al suroeste de Groenlandia. No se pudo recuperar mucho, pero, bast con un mechn de pelo.Que se conserv fenomenalmente por miles de aos, gracias al permafrost que cubre el territorio rtico. Esta no ha sido la primera vez que los cientficos intentan secuenciar el genoma de un hombre antiguo. Ya se ha secuenciado con xito el primer borrador del genoma del Neanderthal a partir del ADN obtenido de huesos y dientes. Pero este borrador slo comprende el 63% del genoma del Neanderthal. El principal problema en secuenciar un genoma antiguo es que el ADN empieza a degradarse una vez que el organismo muere, a pesar que est bien preservado. La deaminacin de las citosinas y uracilos es el principal problema porque resulta en incorporacin de bases de manera errnea. Adems, el ADN suele contaminarse con ADN de virus, bacterias y de los mismos hombres modernos, ya sean al momento de la excavacin o en los anlisis de laboratorio. Para evitar estos inconvenientes, los cientficos usaron las mismas tcnicas usadas cuando secuenciaron el genoma del mamut. Trataron de minimizar el contacto con el mechn de pelos, mantenindolo congelado todo el tiempo. Adems, en el laboratorio, la muestra slo fue manipulada por un investigador y le pusieron, al ADN antiguo, sondas especficas que detectaban algn tipo de contaminacin con ADN de hombres modernos. Finalmente, alrededor del 85% de ADN extrado fue de origen humano y un 15% de ADN desconocido con trazas de ADN de hongos, virus y bacterias. No se observ evidencias de contaminacin con ADN de algn miembro del equipo de investigacin. Usando secuenciamiento de alta resolucin se logr una cobertura de 20X (o sea, ese 80% de ADN secuenciado unas 20 veces). .Lo primero que salt a la vista es que Inuk fue varn al identificar al cromosoma Y en su secuencia. Se encontr el alelo A1 ms el factor Rhesus, lo cual indica que tena un tipo de sangre A positivo. Este tipo de sangre es muy frecuente en la costa este de Siberia y el sur de China, esto podra sugerir que su origen puede estar en estas zonas y migraron al Nuevo Continente por el estrecho de Bering. El locus HERC2-OCA2, que en los asiticos esta asociado con un color de ojos marrn, sugiere que tena este color de ojos. SNPs en los cromosomas 2, 5, 15 y X sugieren que su color de piel no era clara como de los europeos y que tena un cabello oscuro y muy delgado, lo que indica que tena un alto riesgo a sufrir de calvicie. An hay muchos SNPs que no han podido ser descifrados los cuales nos podran dar ms pistas sobre su condicin fsica y sus riesgos a determinadas enfermedades. Al comparar sus genes con los genes de personas modernas que viven en regiones aledaas, se observ que Inuk estaba cercanamente relacionado con tres grupos rusos: los Nganasans, los Koryaks y los Chukchis. Esto sugiere que los antecesores a Inuk colonizaron el Nuevo Mundo de manera independiente a los antecesores de los Inuits y los nativos americanos actuales, quienes ya lo haban hecho muchos aos antes que ellos desde Siberia por el estrecho de Bering. Es muy importante secuenciar estos genomas para entender mejor como ha sido nuestro desarrollo como sociedad, de donde provenimos, cual era la diversidad gentica humana hace miles de aos, como estaban adaptados a vivir en condiciones climticas ms complicadas que las actuales, como sobrevivan a las mortales enfermedades que ahora nos aquejan. Muchas respuestas pueden ser reveladas entendiendo como han evolucionado nuestros genes. Referencia: Rasmussen, M., Li, Y., Lindgreen, S., Pedersen, J., Albrechtsen, A., Moltke, I., Metspalu, M., Metspalu, E., Kivisild, T., Gupta, R., Bertalan, M., Nielsen, K., Gilbert, M., Wang, Y., Raghavan, M., Campos, P., Kamp, H., Wilson, A., Gledhill, A., Tridico, S., Bunce, M., Lorenzen, E., Binladen, J., Guo, X., Zhao, J., Zhang, X., Zhang, H., Li, Z., Chen, M., Orlando, L., Kristiansen, K., Bak, M., Tommerup, N., Bendixen, C., Pierre, T., Grnnow, B., Meldgaard, M., Andreasen, C., Fedorova, S., Osipova, L., Higham, T., Ramsey, C., Hansen, T., Nielsen, F., Crawford, M., Brunak, S., Sicheritz-Pontn, T., Villems, R., Nielsen, R., Krogh, A., Wang, J., & Willerslev, E. (2010). Ancient human genome sequence of an extinct Palaeo-Eskimo Nature, 463 (7282), 757-762 DOI: 10.1038/nature08835

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En base al texto anterior responda: a. Cmo fuente de qu se utilizo el pelo? Por qu? b. Que otros materiales biolgicos puede proponer para la realizacin de anlisis moleculares. c. En que otras situaciones y/o casos se puede utilizar material biolgico para la realizacin de anlisis moleculares. d. El trmino secuenciar ser explicado mas adelante, pero para ir introducindonos en el tema, que se imagina usted que es secuenciar? Qu utilidad tiene la secuenciacin para entender y/o leer el genoma antiguo? e. Uno de los principales problemas para secuenciar genomas antiguos es la degradacin. Como se le ocurre a usted que puede afectar al material gentico? Qu ocurre con el citoplasma, el ncleo e histonas? f. La deaminacin de citocinas y uracilos es un problema. Por qu? Qu se imagina usted? g. A qu tipo /s de cido /s nucleico/s afecta la deaminacin de citocinas? Y la de uracilos? h. Como resultado de la secuenciacin se sabe que el contenido del genoma antiguo en Adenina es de un 20%? Y del resto de las bases? i. El material gentico antiguo puede estar contaminado con virus y bacterias. Si yo quisiera diferenciar el genoma humano de cada uno de ellos cmo hara? Realice un cuadro comparativo entre los tres genomas. j. Esquematice como entiende usted la siguiente relacin: Sangre tipo A----------Alelo A1 Factor Rhesus-----------Rh+

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Responda las siguientes preguntas. 1. En el siguiente grfico indique los diferentes niveles de organizacin del material gentico

2. Cul de las siguientes afirmaciones es verdadera: a) La informacin gentica est codificada y se transmite a travs de las protenas de un organismo. b) La informacin gentica de todos los organismos est codificada en el lenguaje de los cidos nucleicos. c) La informacin gentica est distribuida en las diferentes estructuras celulares. d) El material gentico debe contener informacin completa. e) La replicacin del material gentico debe realizarse fielmente. f) El material gentico codifica fenotipos. 3. Si una molcula de DNA de cadena doble tiene 15% de timina Cules son los porcentajes de las otras bases? 4. Un virus contiene 10% de Adenina, 24% de timina, 30% de guanina y 36% de citosina Cmo es el material gentico de este virus? . Fundamente su respuesta. a) DNA de cadena doble. b) DNA de cadena simple. c) RNA de cadena doble. d) RNA de cadena simple. 5. Un estudiante mezcla algunas bacterias Streptococcus pneumoniae de tipo IIS muertas por calor con bacterias tipo IIR vivas e inyecta la mezcla en un ratn. El ratn se enferma de neumona y muere. El estudiante recupera algunas bacterias del tipo IIS del ratn muerto. Si es el nico experimento que realiza el estudiante ha podido demostrar que la transformacin se ha 17

producido? De que otra forma puede explicarse la presencia de bacterias tipo IIS en el ratn muerto? 6. Un estudiante de Doctorado manda a analizar 3 soluciones de extraccin de ADN, le envan el siguiente informe. Puede usted determinar qu tipo de estructura secundaria se encuentra presente en las soluciones? Caracterstica Solucin A Solucin B Solucin C % de Humedad 95% -----73% Direccin de la Dextrgira Levgira Dextrgira Hlice Promedio de 10 12 11 Base por giro. Forma general Larga y Angosta Alargada y Corta y Ancha Angosta Estructura propuesta 7. Qu tipos de estructura terciaria se presenta como primera solucin para resolver la problemtica del empaquetamiento del ADN? Describa cada una. 8. Usted enva a analizar el genoma de su cultivo de Bacterias E. Coli y en el informe que le envan figura un valor C A qu hace referencia dicho valor? 9. Marque con una cruz a que tipo de cromosoma corresponden las siguientes caractersticas: Caractersticas Cromosoma Procariota ADN Circular ADN Lineal Genoma distribuido en varios cromosomas. Cromosomas pequeos y con un solo origen de replicacin. Cromosomas grandes y varios orgenes de replicacin El genoma conforma una estructura denominada nucleoide. El genoma conforma una estructura denominada nucleosoma. El estado de condensacin vara de acuerdo al momento del ciclo celular. Cromosoma Eucariota

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10. El rea de qumica orgnica est desarrollando diferentes compuestos y analizando su accin sobre el ADN. Uno en particular neutraliza las cargas positivas en las colas de las histonas: a) Cul sera el efecto ms probable de dicho compuesto sobre la estructura de la Cromatina? b) Afectara la expresin de los genes? 11. Cul de las siguientes 2 molculas de DNA tiene mayor temperatura de desnaturalizacin? Por qu? a) -------GCTAGTATAGCTACTAATCA-------------CGATCATATCGATGATTAGT-------------GCTAGCGGATAGGTAGCGGA-----------CGATCGCCTATCCATCGCCT-------

b)

12. Una secuencia de insercin contiene una gran delecin en su gen transposasa. En qu circunstancias podra lograr la transposicin esta secuencia de insercin? 13. La zidovudina (AZT) es un frmaco que se emplea para el tratamiento de los pacientes con SIDA. Su accin la realiza bloqueando la enzima transcriptasa inversa usada por el virus de HIV, que es el agente causante del SIDA: a) Esperara que la AZT ejerciera algn efecto sobre los elementos transponibles? b) De ser as Qu tipo de elemento transponible se comprometeran y cul sera el efecto ms probable?

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TRABAJO PRCTICO N 5 REPLICACION y REPARACIN

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1. Respecto a la replicacin semiconservativa, cul de las siguientes afirmaciones son falsas? c) La naturaleza complementaria de las 2 cadenas de la molcula de ADN sugiere que cada cadena puede servir como molde para la sntesis de una cadena nueva. d) Toda la molcula de ADN de doble cadena sirve como molde para una nueva molcula de ADN y la molcula de ADN original se conserva en su totalidad durante la replicacin. e) La estructura de la molcula de ADN sugiere que la replicacin ocurre por el modelo dispersivo. f) La replicacin semiconservativa es un proceso intermedio entre el modelo de replicacin dispersiva y conservativa. 2. Adems de un molde compuesto por ADN de cadena simple; Qu otros componentes son necesarios para la replicacin? 3. Suponga que un cientfico descubre una forma diferente de cido Nucleico en un organismo nuevo. Cuando este cido Nucleico se expone a la ADN polimera de E. coli la replicacin ocurre en forma continua en ambas cadenas. A qu conclusin puede llegar en relacin con la estructura de este cido nucleico diferente? 4. El siguiente diagrama representa una molcula de ADN en proceso de replicacin. En el mismo dibuje las cadenas nuevas e identifique los siguientes elementos: g) Polaridad de las cadenas nuevas. h) Cadenas lderes y retrasadas. i) Fragmentos de Okazaki. j) Cebadores de ARN.

Origen

3 5

5 3

Desenrollamiento Origen

Desenrollamiento

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5.

Que efecto sobre la replicacin del ADN produciran mutaciones destructoras de cada una de las siguientes actividades de la ADN polimerasa I? a) actividad de exonucleasa 3 5 b) actividad de exonucleasa 5 3 c) actividad de polimerasa 5 3

6.

En un laboratorio de farmacologa se estn ensayando nuevos productos de origen vegetal y su implicancia en la replicacin, se descubre que uno de ellos afecta especficamente la enzima topoisomerasa hacindola totalmente inactiva Cmo afecta esto a la replicacin? 7. Usted estudia diferentes tratamientos contra el cncer, su jefe le propone que ponga especial importancia en la replicacin de los extremos de los cromosomas. Por qu cree usted que su jefe le indica esto? Proponga brevemente un ensayo de un posible tratamiento contra el cncer. 8. Observe el siguiente esquema, segn los resultados que se obtienen Qu ocurre con las histonas durante la replicacin del DNA eucarionte?
Se cultivan clulas durante varias generaciones en un medio con aminocidos marcados con un istopo pesado

Cambio de Medio

Replicacin Aislamiento de Octameros Medio conteniendo aminocidos marcados con un istopo liviano

Aislamiento de Octameros

Centrifugacin

Centrifugacin

Banda nica Banda Ancha

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9. La integridad del DNA est bajo agresin constante por la radiacin, los mutgenos qumicos y los cambios espontneos. A pesar de ello la tasa de mutacin es baja. A que se debe ello? 10. Complete el siguiente cuadro: Tipo de dao reparado Errores de la replicacin, bases mal -------------------------------------------- apareadas y deslizamiento de las cadenas. Dmeros de pirimidina; otros tipo ---------------------------------------- especfico de alteraciones Bases anormales, bases modificadas ----------------------------------------- y dmeros de pirimidinas Dao del DNA que distorsiona la doble hlice, entre ellos las bases ---------------------------------------anormales, las bases modificadas y los dmeros de pirimidina Sistema de reparacin

11. En un capitulo de la serie Los Simpson Homero y su familia se mudan a una granja huyendo de un Sureo que los persigue. Una vez instalados en la granja, tienen que imaginar de qu manera pueden subsistir. Homero comienza a sembrar tomates, pero stos demoran mucho en crecer, decide darle una ayudita y los roca con plutonio, que obtiene de la planta nuclear de Springfield .Al otro da Homero descubre felizmente que sus tomates son enormes y con un gustos particular por lo cual nombra a su nuevo producto tomaco. Encantado comienza a venderlos. Supongamos que Lisa preocupada por este hecho acude al Dr. Frink y este luego de analizar el producto le explica que en el ADN de los tomates gigantes existen bases alteradas que deben haber sido expuestas a algn agente extrao: a) Qu tipo de mecanismo no debe haber funcionado en los tomates gigantes? b) Explique brevemente los pasos de dicho mecanismo. 12. Un instructor de gentica disea un experimento de laboratorio para estudiar la radiacin UV sobre la mutacin en bacterias. En el experimento, los estudiantes exponen a bacterias sembradas en placas de petri a la luz UV durante periodos de distinta duracin, colocan las placas en una incubadora durante 48hs y luego cuentan el nmero de colonias que aparecen en cada placa. Las placas que han recibido ms radiacin UV deben tener ms dmeros de primidina que bloquean la replicacin; por tanto deben aparecer menos colonias sobre las placas expuestas a la luz UV durante perodos ms prolongados. Antes de que los estudiantes lleven a cado el experimento, el instructor les advierte que, aunque las bacterias estn en la 23

incubadora, ellos no deben abrir la puerta de la incubadora a menos que la habitacin est oscurecida. Por qu no se deben exponer las bacterias a la luz? 13. Cmo diferencian las protenas de reparacin entre la cadena nueva y vieja en las bacterias E. coli?

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TRABAJO PRCTICO N 6: TRANSCRIPCION

1. Complete el siguiente cuadro respecto a la estructura del DNA y el RNA : Caracterstica Contiene nucletidos Tipo de azcar presente Presencia del grupo 2-OH Bases Presenta nucletidos enlaces fosfodister unidos por DNA RNA

Cadena Doble o cadena simple Estructura secundaria Estabilidad

2.

De acuerdo a la ubicacin y funciones descriptas en el siguiente cuadro complete a que clase de RNA hacen referencia. de Tipo Celular Localizacin de la Funcin funcin en las clulas eucariontes y Citoplasma Componentes estructurales y funcionales del ribosoma. y Ncleo y Portador del cdigo Citoplasma gentico para las protenas. 25

Clase RNA

Bacterianas eucariontes Bacterianas eucariontes

Bacterianas eucariontes Eucariontes Eucariontes Eucariontes Eucariontes Eucariontes

y Citoplasma

Ncleo Ncleo Citoplasma Citoplasma Citoplasma

Ayuda a incorporar los aminocidos a la cadena polipeptdica. Procesamiento del premRNA. Procesamiento y ensamblaje del rRNA. Variable. Inhibe la traduccin del mRNA. Desencadena la degradacin de otras molculas de RNA.

3.

Las molculas de RNA tienen tres fosfatos en su extremo 5pero las de DNA nunca tienen estos fosfatos. Explique esta diferencia. El siguiente diagrama representa el DNA que forma parte de la secuencia que codifica el RNA de una unidad de transcripcin. La cadena inferior es la cadena molde. Mencione la secuencia encontrada en la molcula de RNA transcripta a partir de este DNA y marque los extremos 5y 3del RNA. 5-----ATAGGGCGATGCCA-----3 3------TATCCCGCTACGCT------5.

4.

5.

Realice un esquema de la unidad de transcripcin, indique las diferentes partes de la misma. Una cepa de bacteria posee una mutacin termosensible en el gen que codifica la subunidad rho de la RNA polimerasa. A altas temperatura rho no es funcional. Si estas bacterias se cultivaran a alta temperatura, Cul de los siguientes efectos esperara ver? a) No ocurre la transcripcin. b) Todas las molculas de RNA son ms cortas que lo normal. c) Todas las molculas de RNA son ms larga que lo normal. d) Algunas molculas de RNA son mas largas que lo normal. e) El RNA se copia a partir de ambas cadenas de DNA. Explique sus razones para aceptar o rechazar cada una de estas cinco opciones. Mediante ingeniera gentica, un genetista muta el gen que codifica la TBP en clulas humanas en cultivo. Esta mutacin anula la capacidad de la TBP para

6.

7.

26

unirse a la caja TATA. Prediga el efecto de esta mutacin sobre las clulas que las poseen. 8. La hormona calcitonina se traduce a partir de un pre-mRNA en clulas de tiroides, en tanto que en las clulas del cerebro se transcribe un pre-mRNA idntico a ste, cuyo producto final es un pptido relacionado con el gen de la calcitonina. A qu se debe esto? Fundamente. Dibuje un gen eucarionte tpico y el pre-mRNA y el mRNA que derivan de l. Suponga que el gen contiene tres exones. Identifique los siguientes puntos y describa de forma breve la funcin de cada uno de ellos: a) Regin 5no traducida. b) Promotor. c) Secuencia consenso AAUAAA. d) Sitio de iniciacin de la transcripcin. e) Regin 3no traducida. f) Intrones. g) Exones. h) Cola poli (A). i) Casquete 5.

9.

10. La transcripcin primaria del ARNm para la ovoalbmina de pollo contiene 7 intrones (en negro, de A a G) y 8 exones (en blanco); si el ADN para la ovoalbmina se asla y desnaturaliza a cadenas sencillas, y posteriormente se hibrida con ARNm citoplasmtico para la ovoalbmina, en una micrografa electrnica, cul ser el aspecto esperado de la estructura del hibrido? 5 3
A B C D

11. Dada la siguiente secuencia de nucletidos de un segmento de ADN que se traduce a un polipptido de cinco aminocidos, y empleando el cdigo gentico: 3TACAATGGCCCTTTTATC5 5ATGTTACCGGGAAAATAG3 a) Deduzca la secuencia de ribonucletidos en el ARN mensajero. b) Indique la hlice codificadora del ADN. 12. Cul sera el efecto ms probable sobre la secuencia de aminocidos, de una protena, de una mutacin que ocurriera en un intrn de un gen que codificara la protena? Fundamente su respuesta. 27

13. De que manera la delecin de las siguientes secuencias o rasgos afectaran mas probablemente a un pre-mRNA eucarionte? a) Secuencias consenso AAUAAA. b) Casquete 5`. c) Cola poli (A). 14. Un genetista hace mutar un gen para protenas que se unne a la cola poli (A) en una lnea de clulas cultivadas en el laboratorio. Cual sera el efecto inmediato de esta mutacin en las clulas de cultivo? 15. Ha sido desarrollado un sistema de corte y empalme in vitro (dentro de un tubo de ensayo). Este sistema contiene todos los componentes, snRNA, protenas, factores de corte y empalme, necesarios para el corte y empalme de los genes nucleraes de pre-mRNA. Cuando un trozo de RNA que contiene un intrn y dos exones se aade al sistema, el intrn se elimina como un lazo y los exones se aade al sitema, el intron se elimina como un lazo y los exones se empalman uno al lado del otro. Qu productos intermedios de la reaccin de corte y empalme se acumularan si se omitiera los siguientes componentes del sistema de corte y empalme? Explique su razonamiento. a) U1. b) U2. c) U6. d) U5. e) U4.

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TRABAJO PRCTICO N 7: TRADUCCIN

Paul, este libro de biologa es

inentendible!!

El proceso por el cual el ribosoma traduce el mRNA a protenas usa un tercer RNA llamado RNA transferencial

Entends esto? Si claro!! Es biologa molecular bsica

COSAS DE PAUL.

COSAS DE PAUL.

Impresionante!!

Ahh!! Entonces creo que lo que realmente me confunde es..

Como podes acordarte de esto y nunca donde pones tu billetera.

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El siguiente trabajo prctico de aula se desarrollara en grupo, cada uno trabajar con uno de los 5 textos que figuran debajo. ACTIVIDADES 1. Lea atentamente el texto referido a las propiedades de Cloranfenicol. Con ayuda de la teora, responda: a) Cules son los componentes requeridos para la sntesis proteica? b) Describa brevemente los tres pasos centrales de la iniciacin de la traduccin c) Qu requiere el proceso de elongacin? Describa dicho proceso. d) Esquematice el mecanismo de accin del antibitico.

Cloranfenicol
Es un antibitico bacteriosttico de amplio espectro. Sin embargo, puede ser bactericida en concentraciones elevadas o cuando se usa contra organismos altamente sensibles. Es liposoluble; difunde a travs de la membrana celular bacteriana y se une en forma reversible a la subunidad 50S de los ribosomas bacterianos, donde evita la transferencia de aminocidos a las cadenas peptdicas en formacin. No se ha establecido el mecanismo por el cual se produce anemia aplsica irreversible. Se piensa que el mecanismo responsable de la mielodepresin reversible (dependiente de la dosis), durante su administracin y despus de ella, se relaciona con la inhibicin de la sntesis proteica mitocondrial en las clulas de la mdula sea. Se absorbe con facilidad y por completo en el tracto gastrointestinal. Se distribuye por todo el organismo en forma amplia aunque no uniforme. En el hgado y en el rin alcanza las concentraciones ms altas. Atraviesa la placenta y las concentraciones sricas fetales pueden ser de 30% a 80% de los niveles sricos maternos. Alcanza concentraciones teraputicas en los humores acuoso y vtreo del ojo. En el lquido cefalorraqudeo las concentraciones pueden ser de 21% a 50% de las sricas, a travs de meninges no inflamadas, y de 45% a 89%, a travs de meninges inflamadas. Su unin a protenas es de baja a moderada. El metabolismo es heptico, 90% conjugado a glucurnido inactivo. El succinato sdico de cloranfenicol (va parenteral) se hidroliza a frmaco libre en plasma, hgado, pulmn y rin. En el feto y neonatos el hgado inmaduro no puede conjugarlo, por lo que se acumulan concentraciones txicas de frmaco activo que pueden producir el sndrome gris. De 5% a 10% se excreta en forma inalterada por rin en 24 horas. Se excreta en la leche materna. La dilisis no elimina de la sangre cantidades significativas.

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Dihidrocloruro de Puromicina
1. Lea atentamente el texto referido a las propiedades de Dicloruro de Puromicina y con ayuda de la teora, responda: a) Qu son EF-Ts, EF-Tu y EF-G? Qu forman? Para qu se utiliza GTP? b) Cmo finaliza la sntesis proteica? c) Existen mecanismos de control de calidad de la traduccin? Cules? d) Esquematice el mecanismo de accin del antibitico.

Dihidrocloruro de Puromicina Accin teraputica. Nuclesidos antibitico Inhibidor de la sntesis de protenas Propiedades. Antibitico que se utiliza para la seleccin de lneas de clulas de mamferos, que han sido transformadas por los vectores que expresan puromycin-N-acetil-transferasa Puromycin es un inhibidor de la sntesis de protenas. Que provoca la cadena de terminacin prematura . Se unen al factor EFTu.; la puromicina bloquea la adicin de aa-ARNt al EFTu para formar el complejo ternario.

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Eritromicina
1. Lea atentamente el texto referido a las propiedades de la Eritromicina. Con ayuda de la teora, responda: a) Cmo se establece el marco de lectura correcto? Qu son AUG, GUG y UUG? Cul es el ms comn? YUAA, UAG y UGA que indican? b) Brevemente cmo ocurre la traduccin? En cuntas etapas se divide la sntesis proteica? c) Cul es la funcin del tRNA? Cmo une a los aminocidos? Quin da la clave para la especificidad entre el aminocido y su tRNA? Qu sitios puede ocupar el tRNA en el ribosoma? d) Esquematice el mecanismo de accin del antibitico.

Eritromicina
Accin teraputica: Antibitico. Propiedades. Es un antibitico macrlido bacteriosttico, producido por una cepa de Streptomyces erythreus; sin embargo, puede ser bactericida a concentraciones elevadas o cuando se utiliza contra organismos altamente sensibles. Se piensa que penetra en la membrana de la clula bacteriana y se une en forma reversible a la subunidad 50S de los ribosomas bacterianos o cerca de "P" o lugar donador, de forma que se bloquea la unin del tRNA (RNA de transferencia) al lugar donador. Se evita la translocacin de pptidos de "A" o lugar aceptor a "P" o lugar donador, por consiguiente se inhibe la sntesis de protenas. La eritromicina slo es eficaz frente a organismos que se dividen en forma activa. Administrada por va oral se absorbe con facilidad y rpidamente se metaboliza en el hgado en forma parcial a metabolitos inactivos y puede acumularse en pacientes con enfermedad heptica grave. Etilsuccinato de eritromicina: se hidroliza a frmaco libre en el tracto gastrointestinal y en la sangre. Estolato de eritromicina: se disocia en el ster propanoato en el tracto gastrointestinal, se absorbe y ms tarde se hidroliza parcialmente a frmaco libre en la sangre. Estearato de eritromicina: se disocia al frmaco libre en el tracto gastrointestinal. Su unin a las protenas es alta, obtenindose la mxima concentracin plasmtica en 1 a 4 horas. Se elimina por va heptica (por la concentracin en el hgado y la excrecin en la bilis). Va renal (por filtracin glomerular) de 2% a 5%. Se excreta inalterado despus de la administracin oral; de 10% a 15% se excreta inalterado despus de la administracin intravenosa.

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Estreptomicina
1. Lea atentamente el texto referido a las propiedades de la Estreptomicina y con ayuda de la teora, responda: a) Describa la composicin de las protenas, estructura de los aminocidos y enlace peptdico. Nombre y describa brevemente los diferentes niveles de organizacin de las protenas. b) Cada cuntos nucletidos se codifica un aminocido? Cmo se denomina a esta unidad? Qu significa la degeneracin del cdigo gentico? c) Describa cmo est constituido un ribosoma bacteriano, unidades que lo conforman y sitios de accin. Qu es un polirribosoma? d) Esquematice el mecanismo de accin del antibitico.

Estreptomicina
Accin teraputica: Antibitico aminoglucsido. Propiedades. Antibitico bactericida de espectro pequeo. Es transportado en forma activa a travs de la membrana bacteriana; se une de manera irreversible a una o ms protenas receptoras especficas de la subunidad 30S de los ribosomas bacterianos e interfiere en el complejo de iniciacin entre el RNA mensajero y la subunidad 30 S. El DNA puede leerse en forma errnea, lo que da lugar a la produccin de protenas no funcionales. Los polirribosomas se separan y no son capaces de sintetizar protenas. Se absorbe total y rpidamente por va intramuscular. Al igual que todos los aminoglucsidos su absorcin por va gastrointestinal es muy escasa. Se distribuye principalmente en el lquido extracelular y en todos los tejidos del organismo excepto en el cerebro; su distribucin es escasa en LCR y en secreciones bronquiales; se ha encontrado en la bilis, en los lquidos asctico y pleural, y en abscesos tuberculosos y tejido caseoso; sus concentraciones son muy elevadas en orina. Atraviesa la placenta. Su unin a las protenas es baja a moderada y no se metaboliza. De 80% a 98% se excreta por va renal como droga inalterada en 24 horas y 1% por bilis.

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Gentamicina

1. Lea atentamente el texto referido a las propiedades de la Gentamicina. Con ayuda de la teora: Responda: a) Cmo ocurre la traduccin? En cuntas etapas puede ocurrir?. Describa brevemente cada una de ellas. b) Qu es un polirribosoma? c) Esquematice el mecanismo de accin del antibitico.

Gentamicina Propiedades. Pertenece al grupo de los aminoglucsidos. Estos son transportados en forma activa a travs de la pared bacteriana, se unen irreversiblemente a una o ms protenas receptoras especficas de la subunidad 30S de los ribosomas bacterianos e interfieren con el complejo de iniciacin entre el RNA mensajero y la subunidad 30S. El RNA puede leerse en forma errnea, lo que da lugar a la sntesis de protenas no funcionales, los polirribosomas se separan y no son capaces de sintetizar protenas. Los aminoglucsidos son antibiticos bactericidas. La gentamicina se absorbe totalmente despus de su administracin por va intramuscular, en cambio, por va oral su absorcin es escasa. Por va local tpica se pueden absorber cantidades significativas en la superficie corporal. Se distribuye principalmente en el lquido extracelular con acumulacin en las clulas de la corteza renal. Atraviesa la placenta. metaboliza.

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Responda las siguientes preguntas: 1. Empleando el siguiente cdigo gentico que se proporciona, indique los aminocidos especificados por las siguientes secuencias de mRNA bacteriano e indique los extremos amino y carboxilo de polipptido producido. a) 5`-AUGUUUAAAUUUAAAUUUUGA-3`. b) 5`-AUGUAUAUAUAUAUAUAUGA-3`. c) 5`-AUGGAUGAAAGAUUUCUCGCUUUGA-3`. d) 5`-AUGGGUUAGGGGACAUCAUUUUGA-3. 2. La siguiente secuencia de aminocidos se encuentra en un tripeptido: Met-TrpHis. Provea todas las secuencias de nucletidos posibles de mRNA, en la cadena molde de DNA, y en la cadena no molde de DNA, que codificaran este tripptido.

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TRABAJO PRCTICO N 8: REGULACIN DE LA TRANSCRIPCIN

1. Como se vi en teora un gen puede ser regulado en diferentes puntos a lo largo de la va de flujo de la informacin del genotipo al fenotipo. a) Indique en el siguiente grfico y explique brevemente en que puntos puede producirse algn tipo de regulacin.
DNA COMPACTO

DNA RELAJADO

Pre-mRNA

mRNA PROCESADO

PROTEINA INACTIVA

PROTEINA MODIFICADA (activa)

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b. En el siguiente esquema identifique: Gen regulador, gen promotor, gen operador y genes estructurales.

c. Defina a un opern y describa cmo es su funcin sintticamente. 2. De acuerdo al siguiente cuadro responda:

a. Cuntos tipos de controles hay de la transcripcin?

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a. En el cuadro anterior identifique cada uno de los tipos de control que existen sobre la transcripcin e indique el estado del activador, represor y transcripcin. b. Brevemente describa cada una de estos controles. 3. En el sitio operador ocurre una mutacin que evita que la protena reguladora se una. Qu efecto tendr esta mutacin en los siguientes tipos de operones? a. La protena reguladora es un represor en un opern reprimible. b. La protena reguladora es un represor en un opern inducible. 4. El opern blob produce enzimas que convierten al compuesto A en el compuesto B. El opern es controlado por un gen regulador S. Normalmente las enzimas se sintetizan solo en ausencia del compuesto B. Si el gen S est mutado, las enzimas se sintetizan en presencia y en ausencia del compuesto B. El gen S produce un represor o un activador? El opern es inducible o reprimible? 5. Una mutacin evita que la Protena activadora de catablico (CAP) se una al promotor del opern lac. Cul ser el efecto de esta mutacin en la transcripcin del opern? 6. En cules de las siguientes condiciones un opern lac producir la mayor cantidad de -galactosidasa? y la menor cantidad? Explique su razonamiento.
CONDICIN CONDICIN 1 CONDICIN 2 CONDICIN 3 LACTOSA PRESENTE SI NO SI GLUCOSA PRESENTE NO SI SI EXPLICACIN

CONDICIN 4

NO

NO

7. Para las cepas de E. coli con los genotipos lac especificados, indique mediante (+) para la sntesis de -galactosidasa y la permeasa y un signo (-) para indicar que no hay sntesis de enzimas. Genotipo de la cepa lacI+lacP+lacO+lacZ+lacY+ lacI-lacP+lacO+lacZ+lacY+ lacI+lacP+lacOclacZ+lacY+ lacI-lacP+lacO+lacZ+lacYlacI-lacP-lacO+lacZ+lacY+ lacI+lacP+lacO+lacZlacY+/lacI.lacP+lacO+lacZ+l acY38 Lactosa ausente -galactosidasa Permeasa Lactosa presente -galactosidasa Permeasa

lacI-lacP+lacOclacZ+lacY+/ lacI+lacP+lacO+lacZ-lacYlacI-lacP+lacO+lacZ+lacY-/ lacI+lacP-lacO+lacZ-lacY+ lacI+lacP-lacOclacZ-lacY+/ lacI-lacP+lacO+lacZ+lacYlacI+lacP+lacO+lacZ+lacY+/ lacI+lacP+lacO+lacZ+lacY+ lacIslacP+lacO+lacZ+lacY-/ lacI+lacP+lacO+lacZ-lacY+ lacIslacP-lacO+lacZ-lacY+/ lacI+lacP+lacO+lacZ+lacY+

8. En la siguiente lista de ag hay algunas mutaciones que se encontraron en la regin 5UTR del opern trp de E. coli Cul ser el efecto ms probable de cada una en la transcripcin de los genes estructurales? a. Una mutacin que evita la unin del ribosoma al extremo 5del mRNA 5UTR. b. Una mutacin que cambia los codones triptfano en la regin 1 del mRNA 5UTR a codones de alanina. c. Una mutacin que crea un codn de terminacin precozmente en la regin 1 de la 5UTR del mRNA d. Deleciones en las regiones 2 de la 5UTR del mRNA. e. Deleciones en las regiones 3 de la 5UTR del mRNA. f. Deleciones en las regiones 4 de la 5UTR del mRNA. g. Delecin en la secuencia de nucletidos adenina que sigue a la regin 4en la 5UTR. 9. Esquematice el funcionamiento de un RNA anti sentido en la regulacin gnica. 10. Cul sera el efecto de una mutacin que destruye la capacidad de la protena que se une a poli (A) (PABP) de unirse a una cola poli (A)?

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TRABAJO PRCTICO N 9: BIOLOGA MOLECULAR DE LOS GENES.

LABORATORIO DE INVESTIGACION GENOMICA

Bien, la buena noticia es que logramos manipular el DNA para lograr un poltico que sea incapaz de mentir. La mala es, que no podemos lograr que sea electo

1. En base a la clase recibida de Biologa Molecular de los Genes, complete el siguiente cuadro, respecto a las diferentes tcnicas que pueden utilizarse para el estudio del genoma: Tipo de Estudio Tcnica o Descripcin Establecimiento de lneas celulares. Generacin de fragmentos de ADN. Visualizacin de fragmentos de ADN. Determinacin de la secuencia de nucletidos de genes o de genomas de organismos. Identificacin de fragmentos de ADN, ARN y Protenas. Identificacin y localizacin cromosmica de un gen o un mRNA Amplificacin de un fragmento de ADN en mltiples copias. Estudio en las variaciones de los patrones de corte de fragmentos de ADN con enzimas de restriccin. Utilizacin de secuencias de DNA para identificar personas individuales.

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2. Usted trabaja en un laboratorio de biologa celular, su jefe esta interesado en el estudio de ciertos factores de comunicacin celular de las clulas epiteliales, para lo cual le pide que establezca una lnea celular a partir de una muestra de tejido epitelial de ratn, Cul sera su esquema de trabajo?, Qu caracterstica principal muestran este tipo de clulas? 3. La siguiente es una de una corrida electrofortica de un fragmento que usted envi a secuenciar De que secuencia se trata?

4. El mapeo de restriccin de un fragmento lineal de DNA revela los siguientes sitios de restriccin EcoRI. Eco RI sitio 1 200pb 350pb Eco RI sitio 2 450pb

a) Qu tamao tiene el fragmento? b) Si se realizara una corrida electrofortica de dichos fragmentos y se tieran con bromuro de etidio. Dibuje un esquema de las bandas que aparecern en el gel. c) Si se produce una mutacin que altera el sitio de accin 2 de EcoRI En qu diferira este patrn de bandas del anterior? 5. Usted est realizando las prcticas profesionales en un hospital pblico, esa semana para realizarse un exudado y posterior cultivo alegando tener un dolor plvico muy fuerte. Cuando usted realiza la anamnesis, la paciente le manifiesta la prdida de 2 embarazos, en los ltimos 3 aos remarcando que el ltimo haba sido un embarazo fuera de lugar (ectpico). Usted toma 41

el exudado y con todos lo datos recopilados busca en su libro de cabecera con qu agente etiolgico se corresponden todos los sntomas manifestados por la paciente para elegir de ser necesario otra tcnica diagnstica. Junto al gineclogo de turno concluyen que es muy factible que se trate de una infeccin por Chlamydia Trachomatis y ste le comenta que se fije bien que tcnica diagnstica confirmatoria debe usar ya que la Chlamydia Trachomatis no le toca trabajar en el rea de consultorios externos de ginecologa. Una paciente acude puede detectarse por cultivo y los kits comerciales disponibles, no son confiables. a) Qu tcnica sugiere usted utilizar y por qu? b) Nombre las ventajas de la tcnica propuesta. 6. En una bacteria se aisl un fragmento de DNA de 15kb. El mismo se somete a digestin primero con EcoRI y luego con HindIII. Cada digestin es corrida en un gel de agarosa junto a un patrn de peso molecular y se observa el siguiente patrn de bandas:

2000pb

1000pb

500pb. 400pb. 300pb. 200pb. 100pb.

EcoRI

HindIII

PM

a) Cuntos sitios de corte, en dicho fragmento, presenta EcoRI? Cuntos HindIII? b) Dibuje un mapa de los sitios de restriccin de este fragmento. 42

7. Segn mltiples estudios epidemiolgicos la presencia de ciertos tipos de HPV es un factor de alto riesgo para el desarrollo de cncer cervical. El HPV (Virus del Papiloma Humano) es un virus de ADN de doble cadena con 8000pb que infectan la piel y las mucosas en sus hospedadores naturales. Debido a que necesita un tejido estratifificado para su replicacin no se lo puede diagnosticar mediante su aislamiento por cultivo de las clulas que infecta. a) Qu tcnica propondria usted para su deteccin? . Explique b) Sabiendo que existen aproximadamente 100 tipos diferentes de HPV Qu tcnica propondra para su tipificacin? Explique. 8. Qu son los VNTR? Para qu se utilizan? 9. Mycobacterium tuberculosis es una bacteria responsable de la mayor cantidad de casos de tuberculosis en el mundo. El medio de cultivo ms usado y ms adecuado para su deteccin es el de Lowenstein Jensen. La bacteria requiere por lo menos de 15 das para presentar un desarrollo visible macroscpicamente sobre el medio de cultivo y necesita hasta 8 semanas de incubacin debindose incubar un promedio de 30 das. Con los conocimientos adquiridos por usted en esta clase y teniendo la posibilidad de conocer parte de la secuencia de su genoma. Qu tcnica propondra para su deteccin ms rpida? De ser as que cuidados especiales deben tenerse en la implementacin de dicha tcnica?

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TRABAJO PRCTICO N 10. TECNOLOGA DEL DNA RECOMBINANTE.

Ac hay una foto muy buena de Pablito jugando con su palitos chinos

Ese da el intentaba hacer a un dinosaurio.

Eso se supone que es un dinosaurio?

No!! No, es un modelo del DNA de un dinosaurio, el intentaba clonarlo

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1. Usted necesita obtener mltiples copias de un gen previamente purificado por su compaero. En el siguiente esquema se muestran los sitios de restriccin en el fragmento a clonar como en el vector. Responda: a) Elegira el sitio de restriccin para Hae III. Justifique su respuesta. b) Qu enzima de restriccin elegira para realizar la unin del gen de inters con el vector? c) Para el vector de clonado, complete los cuadros en blanco con las partes de un vector e indique su funcin.
Hind III Eco RI AluI

Hae III

AluI

BamHI

Pst I

GEN DE INTERES

Alu I Sau 3AI

HaeIII

VECTOR DE CLONADO

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2. En el siguiente esquema complete los cuadros en blanco.

1-

2-

3-

4-

5-

46

3. Realice un esquema (resummido) describiendo cada uno de los pasos de: a) Clonacin de restriccin. b) Clonacin por tailing o cola homopolimerica. c) Clonacin mediante el uso de conectores.

4. Para los siguientes fragmentos de DNA que vector resultara ms conveniente (plsmido, fago , csmido): a) 4kb. b) 20kb. c) 35kb. 5. Nombre y describa brevemente las estrategias de clonacin para transferir genes en clulas eucariotas. 6. Un genetista utiliza un plsmido para la clonacin que tiene un gen que confiere resistencia a la penicilina y el gen lacZ. El genetista inserta una pieza de DNA extrao en un sitio de restriccin localizado dentro del gen lacZ y transforma las bacterias con el plsmido. Explique el modo en que el genetista puede identificar las bacterias que contienen una copia de un plsmido con el DNA extrao. 7. Mediante un esquema explique cmo se elabora comercialmente el factor VIII, su clonacin y unin de secuencias codificantes. 8. La diabetes miellitus es una enfermedad caracterizada por la incapacidad del individuo de metabolizar glucosa de manera normal debido a una deficiencia total o parcial de la hormona insulina, por lo que en algunos casos estos pacientes son controlados mediante la aplicacin de insulina. La sntesis natural de la insulina comienza con la produccin y procesamiento de una protena precursora llamada proinsulina. Posteriormente, esta protena sufre degradacin en el centro, dando lugar a 2 protenas (cadenas Ay B) unidas mediante 2 puentes disulfuro; esta molcula es la insulina madura. Hasta 1983 toda la insulina utilizada para el tratamiento de la diabetes era extrada de pncreas de porcino y bovino sin embargo, su uso prolongado en algunos individuos provoco una respuesta inmune.

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Con la informacin brindada en el siguiente grfico: a) Podra usted sugerir una manera diferente a la obtencin de insulina por extraccin de pncreas porcino y bovino? Cmo? b) En el grfico se indica el uso de 2 plsmidos para obtencin de insulina Se podra emplear uno solo? En ese caso cmo seria la produccin de la insulina. 9. Lea la siguiente nota y responda: Nueva estrategia para generar plantas tolerantes a salinidad Publicado el : 10/03/2005 Actualmente se estn desarrollando plantas tolerantes a la salinidad en todo el mundo, con el fin de maximizar el empleo de todos los tipos de suelos para la mayor cantidad posible de cultivos comerciales. Estas plantas, sin embargo, suelen tener bajos rendimientos, especialmente si se considera que las condiciones en las que crecen no son las ideales para ninguna planta, sea sta transgnica o no. El Dr. Narendra Tuteja y sus colegas del Centro Internacional para la Biotecnologa y la Ingeniera Gentica de Nueva Delhi, desarrollaron una nueva tcnica de produccin de planta tolerantes a altas concentraciones de sal. Basaron su trabajo en el gen que codifica para una helicasa, una enzima responsable del desenrollamiento del ADN durante la replicacin del genoma o la transcripcin de los genes. En particular, encontraron que la helicasa de la arveja, denominada PDH45, aumentaba en respuesta a altas concentraciones de sal, a la deshidratacin y a las altas temperaturas. Cuando transfirieron este gen a plantas de tabaco, 48

estas plantas transgnicas continuaron creciendo a pesar de las altas concentraciones de sal y generaron una descendencia con esta nueva caracterstica. Es decir, no slo resultaron tolerantes a la salinidad sino que tambin alcanzaron la madurez necesaria para florecer y originar semillas, cuyas caractersticas fueron idnticas en tamao y nmero a las no transgnicas creciendo en ausencia del estrs salino. a) Mediante un esquema proponga como se elabor esta planta transgnica. Identifique el organismo dador de la caracterstica y el organismo aceptor. 10. Usted descubri un gen en los ratones similar a un gen en las levaduras Cmo podra determinar si este gen es esencial para el desarrollo en los ratones? 11. La hormona del crecimiento, GH o tambin denominada somatotropina es segregada por la glndula pituitaria anterior, estimula la sntesis de protenas en msculo y a nivel heptico la secrecin de hormonas que participan en el crecimiento: somatomedinas. En ganadera la hormona del crecimiento ha sido utilizada y lo es en muchos pases para incrementar la produccin de leche. Mediante ingeniera gentica se ha conseguido la clonacin del gen que codifica la hormona en un plsmido de expresin de E.Coli. Este sistema no lleg a cubrir la necesidad de mercado, que en el caso puntual de la ganadera es de varias toneladas anuales. Observe el grfico:

a) Podra a existir otra manera de obtener GH? Cul? b) Qu beneficios tendra? y algn peligro? 49

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