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Avaliao da Radiao UV-C para esterilizao de gua para utilizao em grau Farmacutico
Dr. Ricardo Jos Augusto Farmacutico e Qumico Industrial

Parte deste trabalho foi realizado na Universidade Camilo Castelo Branco, que gentilmente cedeu s dependncias de seu laboratrio de bioqumica. O equipamento utilizado neste experimento, foi totalmente desenvolvido e construdo com recursos prprios, e manufaturado nas dependncias da minha oficina particular.

Para consultorias e Palestras Ligue :

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So Paulo 2011

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Dedicatria

Dra. Isabel Cristina G.M. Augusto , minha esposa, com amor, admirao e gratido, compreenso e carinho, presena e incansvel apoio ao longo do desenvolvimento deste trabalho.

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Agradecimentos

Ao Prof. Jorge Menezes, pelo apoio no desenvolvimento deste trabalho.

Ao Prof. Renato Sebastio Saladino, pela ajuda incondicional e pelos esclarecimentos que tornaram este possvel.

Universidade Camilo Castelo Branco, pela oportunidade da realizao do curso de Farmcia.

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Resumo

Jos Augusto, Ricardo, Profisso: Farmacutico. 2011. 100p. Trabalho de concluso de curso, Curso de Farmcia, Universidade Camilo Castelo Branco. So Paulo, 2011.

Palavras chaves: Profisses; Farmacutico; mbito Profissional.

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Abstract

Jos Augusto, Ricardo, Profession: Pharmaceutical. 2011. 100p. Conclusion Course Job, Pharmaceutical Course, University Camilo Castelo Branco, So Paulo, 2011.

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Lista de Ilustraes Ilustrao 1 Ilustrao 2 Ilustrao 3 Ilustrao 4 Ilustrao 5 Ilustrao 6 Ilustrao 7 Ilustrao 8 Ilustrao 9 Ilustrao 10 Ilustrao 11 Ilustrao 12 Ilustrao 13 Ilustrao 14 Ilustrao 15 Ilustrao 16 Ilustrao 17 Ilustrao 18 Ilustrao 19 Ilustrao 20 Ilustrao 21 Dr. Niels Ryberg Finsen 15

Comprimento de onda utilizada pelas lmpadas 16 UVC Estrutura Bacteriana Equipamentos para Radiao UV-C Equipamento de radiao UV-C por LEDs Foto do equipamento para esterilizao radiao UVC no laboratrio de Bioqumica Foto do equipamento para esterilizao radiao UVC no laboratrio semi-industrial 17 18 19 por 20 por 20

Imagem de placas de cultura em dutos de ar 22 condicionado Imagem Alcaligenes Imagem Pseudomonas Imagem Escherichia Imagem Flabobacterium Imagem Klebsiella Imagem Enterobacter Imagem Aeromonas Imagem Acinectobacter Imagem gar XLD Imagem gar MacConkey Imagem gar Bile Esculina Imagem gar Saboraud Imagem gar Casena 25 26 30 31 31 32 33 35 36 36 37 38 39

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Ilustrao 22 Ilustrao 23 Ilustrao 24 Ilustrao 25 Ilustrao 26 Ilustrao 27 Ilustrao 28 Ilustrao 29 Ilustrao 30 Ilustrao 31 Ilustrao 32 Ilustrao 33 Ilustrao 34 Ilustrao 35 Ilustrao 36 Ilustrao 37 Ilustrao 38 Imagem gar Manitol Salgado 40

Imagem Equipamento UV-C no laboratrio de 41 bioqumica da Unicastelo Imagem da preparao das amostras no laboratrio 42 de bioqumica da Unicastelo Imagem da preparao das amostras no laboratrio 42 de bioqumica da Unicastelo Imagem das placas de cultura em estufa 43

Imagem GAR XLD- PLACA DE CULTURA APS 44 48H TORNEIRA Imagem GAR XLD- PLACA DE CULTURA APS 44 48H UV-C Imagem GAR MACCONKEYCULTURA APS 48H TORNEIRA Imagem GAR MACCONKEYCULTURA AMOSTRA UV-C 48H PLACA PLACA DE 45 DE 45

Imagem GAR BILI ESCULINA PLACA DE 46 CULTURA 48H- TORNEIRA Imagem GAR BILE ESCALINA PLACA DE 46 CULTURA AMOSTRA UV-C APS 48H Imagem GAR SABOURAUD PLACA DE 47 CULTURA AMOSTRA TORNEIRA APS 48H Imagem GAR SABOURAUD- PLACA CULTURA AMOSRTA UV-C APS 48H Imagem GAR CASENA SOJAPLACA CULTURA AMOSTRA TORNEIRA APS 48H DE 47 DE 48

Imagem GAR CASENA SOJA PLACA DE 48 CULTURA AMOSTRA UV-C APS 48H Imagem GAR MANITOL SALGADO PLACA DE 49 CULTURA AMOSTRA TORNEIRA APS 48H Imagem GAR MANITOL SALGADO PLACA DE 49

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CULTURA AMOSTRA UV-C APS 48H

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Lista de Quadros

Quadro 1 .......................................................................................... 36 Quadro 2 .............................................................................................50

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Lista de abreviaturas

Anvisa ...................................... Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria CFF ......................................................... Conselho Federal de Farmcia CRF ....................................................... Conselho Regional de Farmcia SFB....................................................Segundo a Farmacopeia Brasileira

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Sumrio

1 Introduo ......................................................................................... 15 1.1 Teoria da Radiao UV-C ............................................................... 16 1.2 Equipamento de Radiao UV-C .................................................... 18 1.3 Radiao Ultravioleta (UV) SFB.......................................................22 2 Contaminantes Biolgicos SFB ......................................................... 23 2.1 Patgenos Mais Importantes SFB .................................................. 24 2.1.1 Alcaligenes.....................................................................................24 2.1.2 Pseudomonas................................................................................25 2.1.2.1 Familia Pseudomonas................................................................26 2.1.3 Escherichia.....................................................................................29 2.1.4 Flavobacterium...............................................................................30 2.1.5 Klebisiella.......................................................................................31 2.1.6 Enterobacter...................................................................................32 2.1.7 Aeromonas.....................................................................................32 2.1.8 Acinectobacter...............................................................................34 2.2 Meios de Cultura Utilizados..............................................................35 2.2.1 gar XLD.......................................................................................35 2.2.2 gar MacConkey...........................................................................36 2.2.3 gar Bile Esculina..........................................................................37 2.2.4 gar Sabouraud.............................................................................38 2.2.5 gar Casena.................................................................................38 2.2.6 gar Manitol Salgado.....................................................................40 3 Objetivo................................................................................................40

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4 Metodologia.........................................................................................40 5 Testes Prticos....................................................................................41 6 Dos Resultados Obtidos......................................................................43 7 Concluses..........................................................................................50 8 Referncias Bibliogrficas...................................................................51

1 INTRODUO
Sendo a gua o solvente universal mais utilizado na industria moderna, como

conseqncia da sua vasta utilizao, surgiram problemas gerados quanto a sua utilizao e purificao. Dentro das normas vigentes em nosso pas, tornou-se obrigatrio a validao dos sistemas de purificao e esterilizao, com o objetivo de assegurar a integridade qumico-biolgica da gua e dos produtos com ela obtidos. A gua muito utilizada na produo de vrias formas farmacuticas, exigindo para tal uma srie de especificaes fsico-qumicas e microbiolgicas, conforme descrito na farmacopia brasileira. Em formas farmacuticas como injetveis, colrios, solues otolgicas, xaropes, suspenses etc., gua um constituinte da prpria formulao, o que requer que suas qualidades fsico-qumicas e microbiolgicas sejam especficas ao uso (MACEDO, 2001). A purificao de gua por radiao ultravioleta aprovada por rgos de sade pblica mundial, podendo ser aplicada em vrios campos da atividade humana. Profissionais do tratamento de gua tm usado o sistema UV por mais de 60 anos e a tecnologia esta ainda avanando com novas descobertas e sistemas a cada ano. A descoberta do efeito dos emissores de UV-C no tratamento de doenas e purificao de gua, deu-se no inicio do sculo passado e foi feita pelo fsico dinamarqus Niels Ryberg Finsen, o que lhe conferiu o premio Nobel de 1904.

Ilustrao 1 Dr. Niels Ryberg Finsen http://www.google.com.br/images

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1.1 TEORIA DA RADIAO UV-C

A luz ultra-violeta faz parte do espectro eletro magntico no visvel , com comprimentos de onda entre 100 e 400 nanmetros ( nm ). semelhante a luz visvel, e abrange as faixas : UV-A, UV-B e UV-C. Luz ultravioleta a poro do espectro electromagntico que se encontra entre os raios x e y da luz visvel , sendo definidos quatro regies de espectro UV entre 100 e 200nm, UVC entre 200 e 280nm, UVB entre 280 e 315nm, e UVA entre 315 e 400nm (Meulemans, 1986). Aplicaes prticas de desinfeco por UV, depende da habilidade germicida de UVC e UVB ( ARTIGO TCNICO - H. B. Wright y W. L. Cairns Trojan Technologies Inc. 3020 Gore Road, London, Ontario, Canada N5V 4T7).

Manual do Tratamento e esterilizao de gua por radiao UV-C da Naturaltec- pag.2 Ilustrao 2

Nos microorganismos, a radiao UV-C absorvida pelos cidos nuclicos ocasionando a inibio da funo reprodutora das clulas, resultante da formao fotoqumica do dmero da pirimidina do DNA das clulas.

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Manual do Tratamento e esterilizao de gua por radiao UV-C da Naturaltec- pag.2 Ilustrao 3

. Isso ocorre de forma dependente do comprimento de onda com picos de cerca de 200 e 260 nm (Sonntag y Schuchmann, 1992). O UV absorbido promove a unio entre nucleotdeos adjacentes, criando molculas dimericas (Jagger, 1967). A formao de dmeros de tiamina-tiamina so os mais comuns, mas, podendo tambm tiamina, e dimerizao do uracila. ocorrer dmeros de citosina-citosina, citosina-

A formao de um nmero suficiente de dmeros dentro de um microrganismo, impede que este duplique seu DNA e RNA, impedindo assim sua reproduo.

A eficincia do processo depende das caractersticas do campo de radiao desenvolvido no foto reator, que neste caso, obtido atravs de lmpada geradora de radiao UV-C da marca PHILIPS com a especificao de 36W com gerao de radiao UV-C de 5,61 W e com tempo de vida til estimado em 8000 horas.

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Para a realizao dos testes de eficcia, a lmpada referida foi instalada em um equipamento especialmente construdo para a realizao deste trabalho. Com o intuito de melhorar a qualidade da gua obtida, o equipamento recebeu um hormetro digital para contagem do tempo de vida til da lmpada geradora de radiao.

1.2 EQUIPAMENTO DE RADIAO UV-C

A gua passa por um sistema de tubo em forma de fluxo contnuo ou estagnado. O tubo deve ser construdo em ao inoxidvel, para evitar o vazamento da radiao e assim, causar danos a sade humana.

Ilustrao 4 : WWW.tratamentodeareagua.com.br

Aps a passagem pelo sistema, esta radiao se dispersa com muita facilidade, no deixando resduos estando a gua pronta para uso, ou uma nova filtrao atravs de carvo ativado. Quanto maior o nmero de lmpadas, maior a capacidade de rea tratada, devido ao aumento da intensidade de emisso de radiao. Para pequenos volumes de gua, aproximadamente 50 litros/hora, a tubulao no deve exceder 50mm de dimetro com pelo menos 1 reator para sistemas de fluxo contnuo.

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No artigo publicado em 16 de novembro de 2010, Berlin-Alemanha, pela revista ScienceDirect, foi desenvolvido para teste de eficcia um equipamento para esterilizao de gua atravs de radiao UV-C utilizando como emissor de radiao atravs de LEDS, tendo como vantagem o baixo consumo de energia ( 0,33w ), em comparao a lmpada de UV-C tradicional (5,31w), e tambm, evita uma possvel contaminao por mercrio ( elemento comum na fabricao de lmpadas ), devido a choque trmico. Para evitar esse problema com as lmpadas comuns, utilizado um revestimento de vidro ( tubo ), onde a lmpada fica no interior desse tubo, portanto no tendo contato direto com a gua. O inconveniente que esse tubo protetor reduz a ao germicida da lmpada, obrigando a aumentar o numero de lmpadas, ou reduzir o dimetro do fluxo de gua. Em sistemas estticos, o UV-C gerado por LEDS pode ser uma boa opo, porm no vivel para usos de fluxo contnuo como em laboratrios e outros.

Ilustrao 5 journal homepage: www.elsevier.com/locate/watres -Application of GaN-based ultraviolet-C light emitting diodes e UV LEDs e for water disinfection , page 2

Existem diversos equipamentos disponveis no mercado porm, falta informaes sobre um sistema devidamente validado, avaliando eficcia em relao ao tempo de exposio a radiao UV-C, e o volume de gua tratado, no havendo um

controle real do tempo de uso do reator gerador de UV-C, e nem do fluxo de gua.

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Pensando nesse problema, decidi pela construo de um equipamento prprio, onde possvel controlar o tempo de uso do reator e, obter o controle do fluxo de gua, tornando possvel a validao do equipamento.

Neste equipamento, o fluxo da gua controlado atravs de uma vlvula eletrnica que s aberta aps a ativao do reator UV-C, dessa forma, a gua s sai do equipamento aps ter passado pela emisso de radiao, portanto sendo 100% tratada.

Ilustrao 6 Foto obtida no laboratrio semi-industrial da UNICASTELO

Ilustrao 7 Foto obtida no laboratrio semi-industrial da UNICASTELO

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Para realizar o controle de tempo de utilizao do reator, instalei no equipamento um temporizador digital lacrado, o que possibilita a contagem de tempo de vida til do reator, que no caso desse equipamento , um reator com vida til de 8000 horas. Aps obter a quantidade de gua desejada, basta interromper o processo desligando o sistema em um boto com lmpada indicativa. Neste momento o fluxo de gua interrompido porm, no ocorre o retorno da gua, ficando uma quantidade de aproximadamente um litro dentro do reservatrio do reator de UV-C. Ao ligar o equipamento, um led indicador realiza uma contagem retroativa indicando que a gua que est no reservatrio esta sendo tratada. Aps 15 segundos, o led se apaga indicando a liberao da obteno de gua tratada. Para evitar problemas com baixa presso da rede de gua, instalou-se uma bomba injetora, o que possibilita o tratamento de gua mesmo de fontes armazenadas como tanques de estoque de gua destilada e outros. Para atender as exigncias de qualidade do mercado, realizou-se a construo do equipamento todo em ao inox brilhante com tampa removvel para manuteno se assim se fizer necessrio. Toda a parte interna do equipamento foi construda em mdulos independentes, o que facilita a sua manuteno, ou seja, bloco reator, temporizadores, fonte geral, vlvula selenide, vvula esfera em ao inox, so todos montados de forma independente e interligados entre si.

A eficcia da inibio microbiolgica por radiao UV-C, pode ser observada na imagem abaixo, obtida no trabalho de pesquisa da UNIVAP. A pesquisa foi realizada utilizando-se o sistema de radiao UV-C em tubulaes de ar condicionado, em um perodo de sete dias.

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ilustrao 8 Imagem obtida na pesquisa de anlise microbiolgica de um sistema de radiao UV-C para dutos de ar condicionado. UNIVAP So Jos dos Campos pagina 3 XIII Encontro Latino Americano de Iniciao Cientfica e XI encontro Latino Americano de Ps-Graduao.

1.3

RADIAO

ULTRAVIOLETA

(UV),

SEGUNDO

FARMACOPEIA

BRASILEIRA 5 EDIO 2010 PG. 396.

A radiao UV utilizada em sistemas de purificao de gua em dois comprimentos de onda: 185 e 254 nm, que promovem dois efeitos: 185 nm + 254 nm Oxidao de compostos orgnicos e consequente reduo de sua concentrao, para atender aos limites da AP, AUP e API;

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254 nm Ao germicida nos diversos pontos da sequncia de purificao, onde necessrio reduzir a contagem microbiana.

Para a oxidao de orgnicos a gua deve estar no estgio final da purificao, e essa remoo ser mais efetiva quanto menor a carga de contaminantes. Outra limitao a presena de partculas, que se podem depositar na superfcie da lmpada, diminuindo a intensidade da radiao, e prejudicar a eficincia do mtodo.

Deve-se considerar ainda a profundidade / espessura do leito de gua, o fluxo de gua no local da radiao e a potncia e tempo de uso da fonte de radiao.

2 CONTAMINANTES BIOLGICOS SEGUNDO A FARMACOPIA BRASILEIRA 5 EDIO - 2010 Pagina 391

So representados principalmente por bactrias e apresentam um grande desafio qualidade da gua. So originrios da prpria microbiota da fonte de gua e, tambm, de alguns equipamentos de purificao. Podem surgir, tambm, devido a procedimentos de limpeza e sanitizao inadequados, que levam formao de biofilmes e, por consequncia, instalam um ciclo contnuo de crescimento a partir de compostos orgnicos que, em ltima anlise, so os prprios nutrientes para os microorganismos. So detectados e quantificados por filtrao em porosidade de 0,45 m, para cultura posterior do filtro em meio adequado.

As bactrias podem afetar a qualidade da gua por desativar reagentes ou alterar substratos por ao enzimtica, aumentar o contedo em COT, alterar a linha de base (rudo de fundo) em anlises espectrais e produzir pirognios e endotoxinas.

A contagem de bactrias reportada em unidades formadoras de colnias por mililitro (UFC/mL) e, em geral, aumenta com o tempo de estocagem da gua.

Os contaminantes mais frequentes so bastonetes gram negativos, principalmente dos gneros Alcaligenes, Pseudomonas, Escherichia, Flavobacterium, Klebsiella,

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Enterobacter, Aeromonas e Acinectobacter. O padro microbiolgico especificado, em paralelo aos contaminantes qumicos, e consiste na ausncia de coliformes totais e termo tolerantes (micro-organismos patognicos de origem fecal), alm de enterovrus, cistos e oocistos de protozorios, como Giardia sp e Cryptosporidium sp em amostra de 100 mL.

Para atender a esses limites, as estaes de tratamento utilizam processos de desinfeco com substncias qumicas contendo cloro ou outros oxidantes, empregadas h dcadas, e consideradas relativamente seguras para os seres humanos. Entretanto, esses oxidantes podem reagir com o material orgnico de origem natural e gerar produtos secundrios da desinfeco, como trihalometanos, cloraminas ou ainda deixar resduos dos prprios desinfetantes. Esses produtos indesejveis requerem ateno especial, por parte dos legisladores e usurios.

As cloraminas, em particular, podem danificar irreversivelmente um equipamento de declorao integrante de um sistema de purificao, alm de apresentarem risco de formao e liberao de amnia. Alm desses dois grupos fundamentais de contaminantes, existem os particulados, constitudos por slica, resduos da tubulao ou colides e que, alm de ser um risco qualidade da gua purificada, podem provocar entupimentos e prejudicar gravemente o processo de purificao, por reduzir seu desempenho, ou at mesmo causar danos irreversveis aos equipamentos.

Podem ser detectados por filtrao, combinada com gravimetria ou microscopia. Mas em geral no necessrio identificar o tipo de partcula, apenas remov-la.

2.1

PATGENOS

MAIS

IMPORTANTES

SEGUNDO

FARMACOPIA

BRASILEIRA 5 EDIO 2010-pg 391

2.1.1 Alcaligenes

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Gnero de bactrias gram-negativas, aerbias e com motilidade que ocorrem na gua e no solo. Algumas so habitantes comuns do trato intestinal de vertebrados. Estas bactrias ocasionalmente causam infeces oportunistas em humanos.
(http://www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php?term=Alcaligenes&lang=3 )

Ilustrao 9 on the genus Alcaligenesmicrobewiki.kenyon.edu

2.1.2 Pseudomonas

A Pseudomonas sp. uma bactria Gram negativa, mvel que produz diversas exotoxinas proteicas com atividade biolgica. A espcie de Pseudomonas aeruginosa sp a de maior importncia clnica, entretanto raramente est implicada como causa primria da patologia. Alm disto, a Pseudomonas sp. classificada como uma bactria psicrotrfica, responsvel pela liberao de enzimas lipoltica e proteolticas durante o tratamento trmico alterando as caractersticas organolpticas dos produtos lcteos.

A maioria dos membros do gnero Pseudomonas sp. encontram-se no solo e gua, caracterizado-se como um microrganismo ambiental. (www.revista.ulbrajp.edu.br/seer/inicia/ojs/include/getdoc.php?id..)

25

Ilustrao 10 http://www.google.com.br/search?q=pseudomonas&hl=ptBR&biw=1280&bih=633&prmd=ivnsb&source=lnms&tbm=isch&ei=flhdTrTkMorfgQfhweCCAg&sa=X&oi=mode_li nk&ct=mode&cd=2&ved=0CA0Q_AUoAThQ

2.1.2.1 Familia Pseudomonas P. aeruginosa group P. aeruginosa P. alcaligenes P. anguilliseptica P. argentinensis P. borbori P. citronellolis P. flavescens P. mendocina P. nitroreducens P. oleovorans P. pseudoalcaligenes P. resinovorans P. straminea P. chlororaphis group P. aurantiaca P. aureofaciens P. chlororaphis P. fragi P. lundensis P. taetrolens P. fluorescens group P. antarctica P. azotoformans 'P. blatchfordae' P. brassicacearum

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P. brenneri P. cedrina P. corrugata P. fluorescens P. gessardii P. libanensis P. mandelii P. marginalis P. mediterranea P. meridiana P. migulae P. mucidolens P. orientalis P. panacis P. proteolytica P. rhodesiae P. synxantha P. thivervalensis P. tolaasii P. veronii P. pertucinogena group P. denitrificans P. pertucinogena P. putida group P. cremoricolorata P. fulva P. monteilii P. mosselii P. oryzihabitans P. parafulva P. plecoglossicida P. putida P. stutzeri group P. balearica P. luteola P. stutzeri P. syringae group P. amygdali P. avellanae P. caricapapayae P. cichorii P. coronafaciens

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P. ficuserectae 'P. helianthi' P. meliae P. savastanoi P. syringae 'P. tomato' P. viridiflava incertae sedis P. abietaniphila P. acidophila P. agarici P. alcaliphila P. alkanolytica P. amyloderamosa P. asplenii P. azotifigens P. cannabina P. coenobios P. congelans P. costantinii P. cruciviae P. delhiensis P. excibis P. extremorientalis P. frederiksbergensis P. fuscovaginae P. gelidicola P. grimontii P. indica P. jessenii P. jinjuensis P. kilonensis P. knackmussii P. koreensis P. lini P. lutea P. moraviensis P. otitidis P. pachastrellae P. palleroniana P. papaveris P. peli P. perolens P. poae P. pohangensis P. psychrophila P. psychrotolerans P. rathonis

28

P. reptilivora P. resiniphila P. rhizosphaerae P. rubescens P. salomonii P. segitis P. septica P. simiae P. suis P. thermotolerans P. tremae P. trivialis P. turbinellae P. tuticorinensis P. umsongensis P. vancouverensis P. vranovensis P. xanthomarina
(ANZAI, Y; KIM, H.; PARK, J. Y.; WAKABAYASHI, H. (2000). "Phylogenetic affiliation of the pseudomonads based on 16S rRNA sequence". Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: 156389. PMID 10939664. (1997) "The phylogeny of the genera Chryseomonas, Flavimonas, and Pseudomonas supports synonymy of these three genera". Int J Syst Bacteriol 47 (2): 24951. PMID 9103607)

2.1.3 Escherichia

Escherichia um gnero de bactrias gram-negativas, facultativamente anaerbias e em forma de bastonete encontradas no intestino grosso de seres humanos e outros animais de sangue quente, a maioria das espcies so ou no patognicas ou patgenos oportunistas. E.colli sp a principal espcie e forma a maior parte da flora intestinal normal. Algumas cepas de que pode causar infeces do trato urinrio, abscessos, conjuntivite e septicemia, por vezes, bem como as doenas diarreicas, especialmente em crianas.
(http://translate.google.com.br/translate?hl=pt-BR&sl=en&u=http://medicaldictionary.thefreedictionary.com/Escherichia&ei=_VxdTuL5Ica1tge_tdXqAw&sa=X&oi=translate&ct=result&resnu m=6&ved=0CE4Q7gEwBTge&prev=/search%3Fq%3Descherichia%26start%3D30%26hl%3DptBR%26sa%3DN%26biw%3D1280%26bih%3D633%26prmd%3Divnsb)

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Ilustrao 11 http://www.google.com.br/search?q=escherichia&hl=ptBR&prmd=ivnsb&source=lnms&tbm=isch&ei=_VxdTuL5Ica1tge_tdXqAw&sa=X&oi=mode_link&ct=mode&cd=2&v ed=0CBYQ_AUoATge&biw=1280&bih=633

2.1.4 Flavobacterium

Flavobacterium sp so encontrados no solo, gua, plantas, produtos alimentcios e quase todos os sistemas de gua, incluindo as linhas de gua destilada e unidades de spray dental em cadeiras odontolgicas. Eles tambm podem sobreviver em anestsicos intravenosos, olhos, urina e fezes. A maioria das espcies so amarelas e tem hastes pigmentadas. Motilidade no observado em gota suspensa. Algumas cepas formam colnias invasoras. Algumas espcies so produtoras de cido. Flavobacterium sp , que so bacilos gram-negativos no-fermentadores, mas uma espcie produz indol que uma caracterstica nica entre os no fermentadores. H 312 cepas de Flavobacterium sp, incluindo a cepa responsvel pela meningite. (http://filebox.vt.edu/users/chagedor/biol_4684/Microbes/Flavobacterium.html)

Ilustrao 12

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http://www.google.com.br/search?q=flavobacterium&hl=ptBR&prmd=ivnsb&source=lnms&tbm=isch&ei=Ul9dTrjoDqbK0AG8zMXQAg&sa=X&oi=mode_link&ct=mode&cd=2 &ved=0CBAQ_AUoAQ&biw=1280&bih=633

2.1.5 Klebsiella

Klebsiella sp um gnero de bactrias bacilares gram-negativas, no-mveis, capsuladas, da famlia Enterobacteriaceae. Ocorrem em fezes, em anlises clnicas, na gua, no solo, no trato gastrointestinal, em vegetais, frutas e nos cereais. Provoca pneumonias, infeces no trato urinrio, infeces nos servios de cuidados intensivos e infeces neonatais. Infees causadas por bacilos gram-negativos multirresistentes produtores de lactamase tem ocorrido com muita freqncia nas UTIs Neonatais e so associadas com significante morbimortalidade. Devido resistncia a numerosos agentes antimicrobianos, o tratamento pode ser desafiador. (GRIMONT, P.A.D.; GRIMONT, F. Genus XVI. Klebsiella Trevisan 1885. In: GARRITY, G.M. (ed.). Bergey's Manual of Systematic Bacteriology - The Proteobacteria Part B. 2 ed. Nova Iorque: Springer, 2005. p. 685-693.)

Ilustrao 13 http://www.google.com.br/search?q=klebsiella&hl=ptBR&biw=1280&bih=633&prmd=imvnsb&source=lnms&tbm=isch&ei=wYWgTr27KuSHsALb3rmcBQ&sa=X&oi=mo de_link&ct=mode&cd=2&sqi=2&ved=0CBkQ_AUoAQ

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2.1.6 Enterobacter

So patgenos oportunistas que causam diversos tipos de infeces, incluindo at 5% de hospital-adquirida septicemias, 5% das pneumonias nosocomiais, 4% das infeces hospitalares do trato urinrio, e 10% de ps-cirrgicas em casos de

peritonite (lista de Hoffmann e Roggenkamp 2003 ). Estas bactrias tambm tm alguma utilidade para os seres humanos, por exemplo, Enterobacter cloacae sp utilizado no controle biolgico de doenas de plantas.

Ilustrao 14 http://www.google.com.br/search?q=enterobacter+sp&start=10&hl=ptBR&sa=N&biw=1280&bih=633&prmd=imvnsfd&tbm=isch&tbo=u&source=univ&ei=JeCdTtOt

2.1.7 Aeromonas

Aeromonas um bacilo Gram negativo pertencente famlia Aeromonadaceae, cujas espcies so em sua maioria mveis e podem ser patognicas ao homem, causando gastrenterites e outras infeces. um patgeno emergente cuja identificao das espcies complexa, necessitando invariavelmente de ferramentas

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moleculares, como a associao de amplificao e restrio enzimtica do fragmento 16S rDNA. Aeromonas est presente principalmente em ambientes de gua doce, salgada e salobra, e o isolamento destes microrganismos j foi relatado em gua de abastecimento pblico, com e sem tratamento prvio. Isolados de Aeromonas de diversas fontes expressam resistncia a antimicrobianos,

especialmente beta-lactmicos, devido presena de enzimas Beta-lactamases e seus determinantes genticos. A patogenicidade das espcies se deve a uma virulncia multifatorial, que compreende a produo de enterotoxinas (Act, Alt e Ast), de elastase e presena de flagelo, entre outros. Neste estudo foi realizado a identificao das espcies A. jandaei, A. hydropihla, A. caviae e A. sobria isoladas do ambiente, por meio de amplificao (PCR) e digesto enzimtica do fragmento 16S rDNA, alm da pesquisa por PCR de genes codificadores de Beta-lactamases responsveis pela resistncia a Beta-lactmicos de amplo espectro, e dos genes act, alt e ast, responsveis pela virulncia e patogenicidade das cepas. Os resultados demonstram a identificao molecular das espcies, alm de relatar a presena ou ausncia de genes de resistncia e virulncia nas cepas estudadas. (http://www.bv.fapesp.br/pt/projetos-regulares/25992/genotipagem-aeromonas-sppisoladas-amostras/).

Ilustrao 15

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http://www.google.com.br/search?q=aeromonas+spp&hl=ptBR&biw=1280&bih=633&prmd=imvns&source=lnms&tbm=isch&ei=MeKdToehFofPmAXzv4GFCQ&sa=X&oi=mo de_link&ct=mode&cd=2&ved=0CA0Q_AUoAQ

2.1.8 Acinectobacter

um bacilo gram-negativo aerbio (similar na aparncia aos Haemophilus influenzae no Gram); comumente isoladas do ambiente hospitalar e, em pacientes hospitalizados. A. baumannii sp um organismo que preferencialmente, coloniza ambientes aquticos. Este organismo muitas vezes cultivado em amostras de escarro de pacientes hospitalizados ou secrees respiratrias, feridas, e na urina. Em um ambiente hospitalar, Acinetobacter geralmente coloniza solues irrigantes e solues intravenosas. Espcies de Acinetobacter tem baixa virulncia, mas so capazes de causar infeco, mas quando ocorrem, geralmente envolvem os sistemas de rgos que tm um alto contedo lquido (por exemplo, do trato respiratrio, lquor, lquido peritoneal, trato urinrio); manifestando-se como pneumonia nosocomial , infeces associadas a dilise peritoneal ambulatorial contnua (CAPD), ou associada a

cateter (bacteriria). Pneumonias Acinetobacter podem ocorrer em surtos e so normalmente associados com colonizao respiratria em equipamentos de apoio ou fluidos. Meningite hospitalar pode ocorrer em pacientes tubos de drenagem externa ventricular. neurocirrgicos com

A baumannii sp multirresistente um bacilo gram-negativo aerbico, sendo pouco sensveis overview). aos antibiticos. (http://emedicine.medscape.com/article/236891-

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Ilustrao 16 http://www.google.com.br/search?q=aeromonas+spp&hl=ptBR&biw=1280&bih=633&prmd=imvns&source=lnms&tbm=isch&ei=MeKdToehFofPmAXzv4GFCQ&sa=X&oi=mo de_link&ct=mode&cd=2&ved=0CA0Q_AUoAQ#hl=ptBR&tbm=isch&sa=X&ei=muOdTq_OJ8apsALR46XfCQ&ved=0CDkQBSgA&q=acinetobacter&spell=1&bav=on.2, or.r_gc.r_pw.,cf.osb&fp=465adea46f9f2033&biw=1280&bih=633

2.2 MEIOS DE CULTURA UTILIZADOS :

2.2.1- GAR XLD

ilustrao 17 http://www.google.com.br/search?hl=ptBR&biw=1280&bih=633&tbm=isch&sa=1&q=agar+xld&btnG=Pesquisar&oq=agar+xld&aq=f&aqi=&aql=&gs_sm= s&gs_upl=2083831l2087589l0l2088518l18l13l0l3l3l0l445l1588l2.6.1.0.1l10l0

Finalidade de Uso:

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Agar seletivo recomendado para isolamento e enumerao de Salmonella sorotipo Typhi e outras espcies de Salmonella. (http://www.himedialabs.com.br/produtos/detail.asp?iType=37&iPic=1087 )

Organismos (AATC) Proteus vulgaris (13315) Proteus mirabilis (25933) S. sorotipo Enteritidis (13076) S. sorotipo Paratyphi A S. sorotipo Paratyphi B S. sorotipo Typhi (6539) S. sorotipo Typhimurium (14028) Shigella sonnei (25931) Shigella dysenteriae (13313) Enterobacter aerogenes (13048) Esherichia coli (25922) Staphylococcus aureus (25923)

Crescimento Bom-Abundante Bom-Abundante Bom-Abundante Bom-Abundante Bom-Abundante Bom-Abundante Bom-abundante Bom-Abundante Bom-Abundante Pobre Pobre Inibido
Quadro 1

Cor da Colnia Amarela Amarela Vermelha com centros pretos Vermelha Vermelha com centros pretos Vermelha com centros pretos Vermelha com centros pretos Vermelha Vermelha Amarela Amarela -

(http://www.himedialabs.com.br/produtos/detail.asp?iType=37&iPic=1087 )

2.2.2- GAR MACCONKEY

Ilustrao 18 http://www.google.com.br/search?hl=ptBR&biw=1280&bih=633&tbm=isch&sa=1&q=macconkey+agar&oq=maccon&aq=0L&aqi=gL10&aql=&gs_sm=c&gs_upl=106l6489l0l9117l33l13l0l0l0l5l312l1793l3.3.4.1l13l0

Finalidade de Uso:

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O Meio Agar MacConkey recomendado para isolamento e diferenciao de bactrias entricas fermentadoras de lactose e no-fermentadoras de lactose e tambm para isolamento de Streptococci fecal. (http://www.lookformedical.com/search.php?lang=3&q=alcaligenes&src=web)

2.2.3- GAR BILE ESCULINA

Ilustrao 19 http://www.google.com.br/search?hl=ptBR&biw=1280&bih=633&tbm=isch&sa=1&q=agar+bile+esculina&btnG=Pesquisar&oq=agar+bile+esculina&aq=f& aqi=&aql=&gs_sm=s&gs_upl=92803l100660l0l100811l33l23l1l11l0l3l380l1579l2.3.3.1l11l0

Finalidade de Uso:

O gar bile-esculina um meio seletivo e diferencial recomendado para a diferenciao de enterococos e do grupo Streptococcus bovis de outros estreptococos. Os enterococos e certos estreptococos hidrolisam a esculina produzindo esculetina e glicose. A esculetina reage com o citrato frrico da frmula formando um complexo marrom escuro ou negro. A bile de boi utilizada para inibir bactrias gram-positivas, com exceo dos enterococos. (http://www.newprov.com.br/uploads/bula/%C1gar%20Bile%20Esculina.pdf)

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2.2.4 -GAR SABOURAUD

Ilustrao 20 http://www.google.com.br/search?hl=ptBR&biw=1280&bih=633&tbm=isch&sa=1&q=agar+saboraud&btnG=Pesquisar&oq=agar+saboraud&aq=f&aqi=&a ql=&gs_sm=s&gs_upl=66942l73810l0l74142l35l28l7l13l19l1l329l1699l1.2.4.1l8l0

Finalidade de Uso:

O Agar Sabouraud Maltose utilizado como um excelente meio para a propagao de bolores e leveduras, particularmente os fungos parasitas relacionados com leses de pele e escalpo. Meio Sabouraud Maltose so formulados para o cultivo de fungos. (http://www.splabor.com.br/meios-de-cultura/meios-para-seletividade/agarsabouraud-maltose-modelo-m062.html)

2.2.5-GAR CASENA

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Ilustrao 21 http://www.google.com.br/search?hl=ptBR&biw=1280&bih=633&tbm=isch&sa=1&q=agar+caseina&btnG=Pesquisar&oq=agar+caseina&aq=f&aqi=&aql= &gs_sm=s&gs_upl=75940l79529l0l79902l15l12l0l7l7l0l366l934l2.1.0.2l5l0

gar de Soja-Casena Digerida na Farmacopeia dos Estados Unidos da Amrica (USP) e na Farmacopeia Europeia (EP) para a parte da contagem total de agentes microbianos aerbios dos procedimentos de teste de limite microbiano. O meio preparado utilizado para uma variedade de fins, incluindo a manuteno de culturas de reserva, contagem de placas, isolamento de microrganismos

provenientes de uma variedade de materiais. Faz parte do compndio de mtodos para a examinao de guas, guas residuais e alimentos. Com relao aos bolores e leveduras, o caldo de casena-soja apresenta a mesma eficincia do meio de Sabouraud lquido. O caldo de casena-soja, usado em paralelo aos meios tioglicolato e Sabouraud, proporciona maior confiabilidade aos testes de esterilidade de meios de cultura usados em cultura celular, vacinas virais e de imunolgicos em geral. (http://www.bd.com/resource.aspx?IDX=9084)

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2.2.6-GAR MANITOL SALGADO

ilustrao 22 http://www.google.com.br/search?hl=ptBR&biw=1280&bih=633&tbm=isch&sa=1&q=agar+manitol+salgado&btnG=Pesquisar&oq=agar+manitol+salgado &aq=f&aqi=&aql=&gs_sm=s&gs_upl=117032l122232l0l122458l22l21l0l15l15l1l444l1164l3.1.0.1.1l6l0

Finalidade de uso:

Meio seletivo para o isolamento e contagem de estafilococos em alimentos e amostras clnicas. (http://www.biocendobrasil.com.br/pdf/manitol_salgado.pdf).

3 OBJETIVO

Avaliar a eficcia da radiao UV-C em esterilizao de gua grau farmacutico.

4 METODOLOGIA

O trabalho foi desenvolvido em duas partes : a- Terica : descreve o conhecimento sobre radiao UV-C, incluindo o que est descrito na Farmacopeia Brasileira 5 Edio 2010. b- Prtica Descreve atravs de anlises biolgicas realizadas no Laboratrio da Universidade Camilo Castelo Branco, a eficcia da utilizao da

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radiao UV-C, em amostras de guas previamente obtidas e identificadas em duplicata, sendo :

Amostra A - Placa de cultura in natura. Amostra B Placa de cultura aps tratamento UV-C.

5 TESTES PRTICOS

Testes realizados no laboratrio de Bioqumica da Unicastelo.

Ilustrao 23 Foto obtida no laboratrio semi-industrial da UNICASTEO

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Ilustrao 24 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

As amostras in natura foram obtidas diretamente da torneira da pia da bancada do laboratrio de bioqumica da UNICASTELO em fluxo contnuo. As amostras obtidas para inoculao aps a radiao UV-C, foram obtidas em fluxo contnuo da mesma fonte obtida para as amostras in natura, mas conectada a mquina de esterilizao, portanto , todas as amostras obtidas passaram pelo gerador de radiao UV-C antes de serem inoculadas. Logo aps a inoculao, todas as placas de cultura obtidas, foram armazenadas em estufa com temperatura apropriada para o crescimento microbiolgico.

Ilustrao 25 foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

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Ilustrao 26 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

6 DOS RESULTADOS OBTIDOS

Avaliao visual comparativa atravs de fotografias obtidas das placas de cultura no momento da inoculao e aps 48 horas. O critrio de avaliao a observao do crescimento ou no de colnias e a intensidade desse crescimento em determinadas placas de cultura, conforme descrito, dessa forma avaliando a eficcia do equipamento e da radiao UV-C por ele emitida.

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GAR XLD- PLACA DE CULTURA APS 48H TORNEIRA

Ilustrao 27 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

GAR XLD- PLACA DE CULTURA APS 48H UV-C

Ilustrao 28 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

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GAR MACCONKEY- PLACA DE CULTURA APS 48H TORNEIRA

Ilustrao 29 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

GAR MACCONKEY- PLACA DE CULTURA AMOSTRA UV-C 48H

Ilustrao 30 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

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GAR BILI ESCULINA PLACA DE CULTURA 48H- TORNEIRA

Ilustrao 31 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

GAR BILE ESCALINA PLACA DE CULTURA AMOSTRA UV-C APS 48H

Ilustrao 32 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

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GAR SABOURAUD PLACA DE CULTURA AMOSTRA TORNEIRA APS 48H

Ilustrao 33 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

GAR SABOURAUD- PLACA DE CULTURA AMOSRTA UV-C APS 48H

Ilustrao 34 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

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GAR CASENA SOJAPLACA DE CULTURA AMOSTRA TORNEIRA APS 48H

Ilustrao 35 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

GAR CASENA SOJA PLACA DE CULTURA AMOSTRA UV-C APS 48H

Ilustrao 36 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

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GAR MANITOL SALGADO PLACA DE CULTURA AMOSTRA TORNEIRA APS 48H

Ilustrao 37 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

GAR MANITOL SALGADO PLACA DE CULTURA AMOSTRA UV-C APS 48H

Ilustrao 38 Foto obtida no laboratrio de Bioqumica da UNICASTELO

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Quadro 2 Crescimento X Inibio

Meios de cultura

Amostra in natura

gar XLD Sim gar No Macconley gar Bile Sim Esculina gar Sim Saboraud gar Casena Sim gar Manitol Sim Salgado - no houve crescimento + pouco crescimento ++ crescimento moderado +++ crescimento abundante

Intensidade de Crescimento + + +++ ++ +

Amostra aps tratamento UV-C No No No No No No

Intensidade de Crescimento -

7 CONCLUSES:

de fcil observao que dos seis tipos de meio de cultura utilizados neste experimento, foi possvel observar o crescimento de microrganismos em 4 ( quatro ) deles, sendo amostras in natura, nos seguintes meios : a- GAR XLD b- GAR SABOURAUD c- GAR CASENA SOJA d- GAR MANITOL SALGADO Os mesmos meios de cultura, mas sendo as amostra aps tratamento UV-C, no apresentaram nenhuma forma de crescimento.

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O fato de no ocorrer crescimento biolgico nos 4 (quatro), meios de cultura citados acima, caracterizam a eliminao de salmonela, fungos e estafilococos, conforme o descrito na Farmacopeia Brasileira 5Edio 2010. Portanto, conclui-se que a utilizao de Radiao UV-C para esterilizao de gua grau farmacutico, perfeitamente eficaz, devendo apenas , realizar um procedimento de validao e certificao para os equipamentos utilizados para esta finalidade.

8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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Ana Caroline de Souza1, Gisele Ferreira Freymann2, Aline H. Araujo Machado3 1UNIVAP / FEAU, Av.: Shishima Hifumi, n2911, anacar oline.souza@gmail.com 2Irmandade da Santa Casa de Misericrdia de So Jos dos Campos, R: Dolzani Ricardo, 610,gisele.freymann@gmail.com 3UNIVAP / FEAU, Av.: Shishima Hifumi, n2911, alineh @univap.br TABELA PAGINA 54 - H. B. Wright y W. L. Cairns Trojan Technologies Inc. 3020 Gore Road, London, Ontario, Canada N5V 4T7 IMAGEM DA ESCALA DE RADIAO http://www.fisica.net/quantica/curso/escala_de_radiacoes_eletromagneticas.php journal homepage: www.elsevier.com/locate/watres -Application of GaN-based ultraviolet-C light emitting diodes e UV LEDs e for water disinfection , page 2

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