APOSTILA DE CROMATOGRAFIA GASOSA

Verso 1.0

1. CROMATOGRAFIA 1.1 INTRODUO A descoberta da cromatografia como uma tcnica analtica geralmente, atribuda ao botnico russo M. Tswett o qual, no incio deste sculo, conseguiu separar pigmentos de cloroplastos contidos em folhas verdes de plantas utilizando um tubo de vidro cheio com carbonato de clcio. Apesar do fato de que D.T. Day separou fraes de petrleo utilizando esta tcnica na mesma poca, Tswett foi o primeiro a compreender e interpretar o processo cromatogrfico como hoje aceito, empregando o termo cromatografia para descrever as zonas coloridas que se moviam dentro da coluna de vidro.
ter de petrleo mistura de de pigmentos

CaCO3

pigmentos separados

Cromatografia = kroma [cor] + graph [escrever] (grego) 1.2 DEFINIES A expresso cromatografia abrange vrias tcnicas usadas para separar os diversos componentes de uma soluo. Apesar de muito diferentes entre si, todas essas tcnicas tm em comum a passagem da soluo-problema, conduzida por um solvente adequado, atravs de uma substncia que mantida fixa e que interage de maneiras distintas com os diversos solutos, de forma que, quanto mais forte a interao, maior o tempo gasto para eluir. So assim introduzidos alguns conceitos fundamentais: A substncia mantida fixa, responsvel pela separao dos diversos componentes, chamada de fase fixa ou estacionria; O conjunto soluo-teste mais solvente, chama-se fase mvel;

O solvente, responsvel pelo transporte da amostra atravs da fase fixa, chamase eluente, quando se trata de um gs, simplesmente gs de arraste; O tempo gasto por cada componente para atravessar toda a fase fixa chamado tempo de reteno (Tr);

Conforme se mudam as fases fixa e mvel, ou os equipamentos usados para montar o sistema cromatogrfico, a tcnica recebe nomes diversos , ou seja, definen-se diversos tipos de cromatografia, conforme se segue: Cromatografia de gs-slido: a fase fixa um slido e a fase mvel, um gs. muitas vezes chamada simplesmente de cromatografia de gs, ou cromatografia gasosa; Cromatografia de gs-lquido: a fase fixa um lquido embebido num slido inerte e a fase mvel, um gs. chamada tambm de cromatografia de permeao em gel, ou simplesmente GPC (do ingls gel permeation chromatography); Cromatografia de lquido-slido: a fase fixa um slido e a fase mvel, um lquido. chamada simplesmente de cromatografia lquida; Cromatografia de lquido-lquido: a fase fixa um lquido embebido num slido inerte e a fase mvel, um lquido. tambm chamada de cromatografia de partio.

importante frisar que a cromatografia essencialmente um mtodo de separao. Pode ser usada como tcnica de anlise quantitativa porque, mantidas as fases fixa e mvel juntamente com as condies instrumentais, os tempos de reteno de um componente so constantes. necessrio, portanto, conhecer o tempo de reteno de cada componente que se deseja analisar, e se preparar um padro com composio semelhante da amostra-problema.

2. TCNICAS CROMATOGRFICAS 2.1 Cromatografia em fase gasosa.

um procedimento fsico utilizado para separar uma amostra em seus componentes individuais. A base para esta separao a distribuio da amostra entre duas fases - uma fase estacionria e uma fase gasosa mvel. A fase mvel denominada 3

gs de arraste ou gs portador, uma vez que se trata de um gs inerte cuja finalidade transportar as molculas a serem separadas, atravs da coluna. De acordo com a natureza da fase estacionria, possvel dividir-se, para efeitos didticos, a cromatografia gasosa em: cromatografia gs-lquido (C.G.L.) e cromatografia gs-slido (C.G.S.). No caso da cromatografia gs-slido, C.G.S. a fase estacionria um slido de grande rea superficial, usualmente um adsorvente como carvo vegetal, slica-gel, ou peneira molecular (zeolita sinttica). A adsorso diferencial dos componentes da mistura a ser separada sobre a superfcie slida a base para a separao cromatogrfica na C.G.S. a qual geralmente empregada na separao de gases como nitrognio, oxignio, monxido de carbono e outros. Na cromatografia gs-lquido, C.G.L., a fase estacionria uma pelcula delgada, a qual recobre um slido inerte denominado suporte. A base para a separao cromatogrfica, neste caso, a distribuio da amostra dentro e fora desta pelcula, ou seja, a partio da amostra entre a fase mvel e a fase lquida estacionria. A fase estacionria encontra-se acondicionada dentro da coluna, atravs da qual o gs de arraste flui continuamente. A amostra introduzida na coluna atravs de um injetor, onde o gs arrastar a amostra. As molculas da amostra iro distribuir-se ao equilibrar-se entre o gs de arraste e a fase lquida. As espcies mais solveis na fase lquida permanecero menos tempo no gs de arraste em movimento e, como conseqncia, iro deslocar-se mais lentamente atravs da coluna. Conectando-se um detetor sada da coluna, constata-se a eficincia da separao atravs do cromatograma registrado. Depois de separados, os componentes sero identificados e quantificados utilizando-se padres adequados. Caso se encontre uma fase lquida que apresente solubilidade seletiva para dois dados compostos, estes podero ser separados por cromatografia gs-lquido, devido diferena de solubilidade na fase lquida. Devido grande diversidade de fases lquidas disponveis, a cromatografia gslquido torna-se a mais verstil e seletiva forma de cromatografia em fase gasosa. Isto permite que sejam analisadas amostras slidas, lquidas ou gasosas desde que sejam volteis ou possam ser volatilizadas sem sofrerem decomposio no cromatgrafo. Desta forma prefervel a denominao cromatografia em fase gasosa uma vez que o processo cromatogrfico ocorre em fase gasosa, independente do estado fsico inicial da amostra.

CROMATOGRAFIA Princpio Bsico

Separao de misturas por interao diferencial dos seus componentes entre uma FASE ESTACIONRIA (lquido ou slido) e uma FASE MVEL (gs).

FM = Lquido

Cromatografia Lquida Cromatografia Gasosa (CG)

FM = Gs

Slida Em CG a FE pode ser: Lquida

Cromatografia Gs-Slido (CGS)

Cromatografia Gs-Lquido (CGL)

2.2 Instrumentao

1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso. 2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra. 3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna. 4 - Detector. 5 - Eletrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal. 6 - cromatograma (Registrador ou Computador).

2.2.1 Gs de arraste A funo do gs de arraste levar as molculas da amostra a ser separada do ponto de injeo at o detector, passando pela coluna onde a separao ir ocorrer. Idealmente, deve apresentar as seguintes caractersticas: no interagir com a fase estacionria nem com a amostra, ser barato e ser adequado ao detector em uso. Do ponto de vista prtico, este conjunto de condies no fcil de ser encontrado: o gs de arraste , usualmente, escolhido a partir do detector empregado. Alm da adequao do detector, devem-se ponderar alguns outros fatores quando da escolha do gs de arraste apropriado. O gs de arraste deve ser o mais puro disponvel no mercado e, ainda assim, dever ser passado por dispositivos especiais para 6

reter possveis impurezas como oxignio, traos de gua e compostos orgnicos dissolvidos. Uma alternativa colocar-se entre o tanque do gs de arraste e o cromatgrafo uma coluna empacotada com peneira molecular e slica gel. Resumo Fase Mvel em CG: NO interage com a amostra - apenas a carrega atravs da coluna. Assim usualmente referida como GS DE ARRASTE Requisitos: INERTE No deve reagir com a amostra, fase estacionria ou superfcies do instrumento. PURO Deve ser isento de impurezas que possam degradar a fase estacionria.

Impurezas tpicas em gases e seus efeitos:

H2O, O2 hidrocarbonetos oxida / hidroliza algumas FE incompatveis com DCE rudo no sinal de DIC

CUSTO Gases de altssima pureza podem ser muito caros.

CUSTO

C A B

A = 99,995 % (4.5) B = 99,999 % (5.0) C = 99,9999 % (6.0)

PUREZA
COMPATVEL COM DETECTOR Cada detector demanda um gs de arraste especfico para melhor funcionamento. Seleo de Gases de Arraste em Funo do Detector:

DCT DIC DCE

He , H2 N2 , H2 N2 (SS), Ar + 5% CH4 7

2.2.2 Injetor Existem dois sistemas para injeo de amostras; seringa e vlvula. Para injeo de amostras gasosas, a seringa utilizada deve ser do tipo denominada GAS TIGHT, apresentando vedao especial para gases. As vlvulas so mais caras, porm apresentam a vantagem de permitirem maior reprodutibilidade nas injees. Adicionalmente so de fcil manipulao e permitem automao do sistema com relativa facilidade. A amostra empurrada por uma soluo saturada de cloreto de sdio, passando pelo loop de amostragem, de volume fixo, em seguida passa por uma vlvula de seis vias indo para a atmosfera. Girando-se, ento, o rotor da vlvula, por um comando do cromatgrafo, o volume contido no loop injetado na coluna.

2.2.3 Introduo da Amostra A obteno de picos ideais em cromatografia gasosa altamente dependente da forma de se introduzir a amostra na coluna. Idealmente a amostra deveria ser injetada instantaneamente, o que no tem sido possvel at o momento com nenhum dos mtodos de injeo conhecidos. Uma forma de tentar contornar este problema introduzir a amostra na forma de uma banda, to estreita quanto possvel. A escolha apropriada das condies de injeo dependem, em larga escala, do estado fsico da amostra. A grande maioria das amostra lquidas requer, para sua rpida volatilizao, que a temperatura do injetor esteja 20 a 30C acima da temperatura de ebulio do componente menos voltil. O elevado coeficiente de expanso dos lquidos, quando vaporizados, permite que sejam injetados pequenos volumes, o que maximiza a resoluo do sistema e confere uma forma ideal aos picos eludos. Para a injeo de lquidos prefere-se, sem dvida, o uso de seringas cujos volumes so altamente flexveis. Apesar de largamente difundido em cromatografia lquida, o uso de vlvulas para injeo de lquidos no se popularizou ainda na cromatografia gasosa. Um dos provveis fatores que contribuem para isto a perda de reprodutibilidade e o encurtamento do tempo de vida quando a vlvula operada em temperaturas superiores a 150 C o que limita, portanto, seu uso a baixas temperaturas.

2.2.4 Coluna A coluna considerada o corao do sistema cromatogrfico, uma vez que nela que a separao ir ocorrer. A escolha da coluna apropriada para uma dada separao de suma importncia e, muitas vezes, difcil. As colunas para cromatografia gasosa podem ser classificadas em dois grandes grupos de acordo com o dimetro interno: colunas empacotadas, geralmente com 2 a 4 mm de dimetro interno, e colunas capilares tendo dimetro interno igual ou inferior a 1 mm. Para a anlise de gases fixos (H2, N2, O2, CO, CO2) tradicionalmente so usadas colunas empacotadas, feitas de ao inoxidvel. As dimenses ideais que uma coluna deve ter so determinadas pelo propsito do experimento e da eficincia desejada na separao. As colunas analticas empacotadas, por exemplo, possuem entre 0,5 e 10 metros de extenso. O comprimento das colunas capilares est acima de 25 m.

2.2.4.1 Colunas empacotadas Nas colunas empacotadas, a FE lquida depositada sob a forma de um filme fino e uniforme sobre partculas de um suporte adequado. O suporte deve ser um slido poroso com grande rea superficial, inerte e de boa resistncia mecnica. O tamanho das partculas e dos poros deve ser o mais uniforme possvel. O material mais empregado como suporte a diatomite, esqueletos fsseis de algas microscpicas (diatomceas), compostos principalmente de SiO2 amorfa e traos de xidos metlicos. Muitas vezes, o material submetido a tratamentos qumicos para diminuir a sua atividade superficial, e torn-lo mais inerte. A diatomite preparada para suporte de CG comercializada com o nome de "Chromosorb", dentre outros. Para preparar uma coluna empacotada, o material de enchimento (FE sobre suporte) colocado da forma mais uniforme e compacta possvel ("empacotado") em um tubo de comprimento e dimetro adequados. Os materiais mais usados para os tubos de colunas so o ao inox e o vidro, sendo o primeiro preferido pelo manuseio mais fcil. Se o material de enchimento no for colocado na coluna de forma compacta e uniforme, os espaos vazios resultantes funcionaro como cmaras de diluio para a amostra. O resultado sero picos mais largos e menor eficincia. O tamanho da coluna varivel. Tipicamente so usadas colunas com dimetros internos de 1 mm a 4 mm e 1 m a 3 m de comprimento. Quanto maior a coluna, maior a 9

eficincia; entretanto, tambm aumenta o tempo de anlise. Colunas muito longas oferecem uma resistncia muito alta passagem de gs, exigindo presses excessivamente altas. Alm da natureza da FE e da qualidade do empacotamento, existem duas variveis importantes que influem no desempenho de uma coluna empacotada: - A percentagem de FE no material de enchimento. A percentagem de FE sobre o suporte um parmetro que deve ser rigidamente controlado. Se a quantidade de FE for muito baixa, partes da superfcie do suporte ficaro expostas amostra, que poder ser adsorvida. O resultado o alargamento ou deformao dos picos. Quanto mais FE, maior a reteno. A seletividade tambm aumenta, porm s custas de aumento do tempo de anlise e diminuio da eficincia. Atualmente, colunas contendo de 2 % a 10 % de FE so as mais usadas. Dificilmente so empregadas colunas com mais de 30 % de carga. - O dimetro das partculas do suporte. Quanto menor o dimetro das partculas do suporte, maior a eficincia da coluna. A uniformidade das partculas tambm importante. Recheios com partculas cuja distribuio de tamanho seja muito grande sero pouco eficientes. Normalmente, empregam-se suportes com 80-100 mesh (149 Wm a 177 Wm de dimetro) ou 100-120 mesh (125 Wm a 149 Wm). Se for usado suporte com partculas excessivamente finas, a resistncia passagem de gs ser muito alta.

2.2.4.2 Colunas Capilares At o momento, discutiram-se sobre as colunas para cromatografia gasosa nas quais o suporte slido recoberto por uma fina camada de fase lquida, sendo que este conjunto acondicionado de forma bastante coesa em um tubo cromatogrfico. J.E. Golay introduziu no final da dcada de 50, um novo conceito de usar colunas "convencionais" com cerca de 4 mm de dimetro interno e reche-las com um suporte slido recoberto com uma fase lquida, como era comum na poca, Golay preferiu usar colunas com dimetro capilar e recobrir a parede interna do tubo com um filme bastante fino de fase lquida. Portanto, dispensou o uso do suporte slido, fazendo com que o interior do tubo capilar ficasse vazio, ou seja, tratava-se de uma coluna "aberta" com apenas uma pelcula da fase lquida recobrindo a parede interna. Estas colunas demonstraram um aumento no poder de separao quando comparadas com as colunas empacotadas convencionais, trazendo uma nova dimenso cromatografia em fase gasosa. Nas colunas empacotadas, o processo cromatogrfico limitado principalmente pela difuso lenta das molculas ao redor das partculas do suporte e dentro de seus 10

poros. Ao usar uma coluna longa e de dimetro interno estreito ao invs de uma coluna empacotada, Golay conseguiu um "caminho aberto", sem restries, para o gs de arraste e as molculas da amostra ao longo do tubo da coluna. Uma vez que agora a fase lquida distribuda na forma de um filme fino o qual recobre a parede interna da coluna, a difuso das molculas dentro e fora deste filme ser muito maior do que no caso da coluna empacotada onde o suporte slido funciona como um "obstculo" difuso da amostra e do gs de arraste. A sua grande vantagem sobre as colunas empacotadas que, pelo fato de serem tubos abertos, podem ser feitas colunas capilares de grandes comprimentos. Como, quanto maior o comprimento, mais pratos tericos contm a coluna (e maior a sua eficincia), colunas capilares so muito mais eficientes que as empacotadas. Normalmente, encontram-se colunas de 5 m at 100 m, embora j tenha sido fabricada uma coluna com 2175 m. Podem-se empregar tubos metlicos, de vidro ou de slica fundida, sendo os ltimos atualmente os preferidos pela sua flexibilidade e inrcia qumica. Nas colunas empacotadas, o desempenho afetado pelo dimetro e uniformidade das partculas do recheio e pela carga de FE. Nas colunas capilares, so importantes o dimetro interno da coluna e a espessura do filme de FE. Quanto mais fina for a coluna, mais eficiente ela ser. Entretanto, colunas muito estreitas suportam pouca FE, o que diminui a sua seletividade. Tipicamente, usam-se colunas com dimetros internos entre 0,1 mm e 0,5 mm. A espessura do filme de FE equivale percentagem de FE das colunas empacotadas, de modo que quanto mais espesso for o filme, maior a reteno e a seletividade. Filmes excessivamente espesso causam alargamento dos picos e grandes tempos de anlise. Normalmente, empregam-se filmes de 0,1 Wm a 3,0 Wm. As FE so as mesmas usadas para colunas empacotadas. Muitas vezes, para minimizar as perdas de fase por volatilizao durante o uso, a FE fixada s paredes do tubo. Pode-se polimerizar parcialmente a fase aps a deposio (fases imobilizadas) ou ento lig-la quimicamente s paredes (fase ligada). A capacidade de processamento de amostra das colunas capilares menor que aquela das empacotadas. Dependendo da coluna, ela pode ser saturada com quantidades to pequenas quanto 0,001 Wl de amostra. Como a injeo direta de volumes de amostra desta ordem de grandeza invivel, deve-se recorrer ao artifcio da diviso de amostra na injeo. Porm, o uso de diviso de amostra apresenta alguns inconvenientes. difcil ajustar reprodutivelmente a razo de diviso (frao da amostra injetada que entra na coluna), o que pode acarretar erros na anlise quantitativa. Alm 11

disso, amostras contendo constituintes com volatilidades muito diferentes podem ser alteradas pela diviso: a frao da amostra que realmente vai para a coluna fica enriquecida com os componentes menos volteis. Dada a grande eficincia das colunas capilares, podem ser realizadas separaes de misturas extremamente complexas: fraes de petrleo, essncias, amostras biolgicas, etc. No caso especfico de anlises de interesse ambiental (poluentes em guas e ar, por exemplo), quase que obrigatrio o seu uso. A tendncia atual que a maioria das anlises seja feita com o uso de colunas capilares. Isto no significa que as colunas empacotadas esto sendo abandonadas, porm o seu uso deve ficar restrito aplicaes especficas.

2.2.3 Detectores O detector um dispositivo que indica e quantifica os componentes separados pela coluna. Um grande nmero de detectores tem sido descritos e usados em CG. Existem, entretanto, algumas caractersticas bsicas comuns para descrever seu desempenho: - Seletividade. Alguns detectores apresentam resposta para qualquer substncia diferente do gs de arraste que passe por ele. Estes so os chamados detectores universais. Por outro lado, existem detectores que respondem somente a compostos que contenham um determinado elemento qumico em sua estrutura, que so os detectores especficos. Entre estes dois extremos, alguns detectores respondem a certas classes de compostos (detectores seletivos). - Rudo. So os desvios e oscilaes na linha de base (sinal do detector quando s passa o gs de arraste). Pode ser causado por problemas eletrnicos, impurezas e sujeiras nos gases e no detector, etc. Por melhor que seja o funcionamento do sistema, sempre existe rudo. - Tipo de Resposta. Alguns detectores apresentam um sinal que proporcional concentrao do soluto no gs de arraste; em outros, o sinal proporcional taxa de entrada de massa do soluto no detector. Isto depende do mecanismo de funcionamento de cada detector. - Quantidade Mnima Detectvel (QMD). a quantidade de amostra mnima para gerar um sinal duas vezes mais intenso que o rudo. uma caracterstica intrnseca do detector. Quanto menor a QMD, mais sensvel o detector. - Fator de Resposta. a intensidade de sinal gerado por uma determinada massa de soluto, que depende do detector e do composto estudado. Pode ser visualizado como 12

a inclinao da reta que correlaciona o sinal com a massa de um soluto (curva de calibrao). Quanto maior o fator de resposta, mais confivel a anlise quantitativa. - Faixa Linear Dinmica. a razo entre a menor e a maior massa entre as quais o fator de resposta de um detector para um soluto constante, isto , onde a curva de calibrao linear. Os dois detectores mais significativos em CG so o TCD (Thermal Conductivity Detector) ou Detector por Condutividade Trmica (DCT) e o FID (Flame Ionization Detector) ou Detector por Ionizao em Chama (DIC).

2.2.3.1 Detector por Condutividade Trmica O funcionamento do DCT baseado no fato de que a velocidade de perda de calor de um corpo quente para um corpo mais frio proporcional, dentre outros fatores, condutividade trmica do gs que separa estes corpos. Um filamento metlico muito fino (de W, Au ou liga W-Re) aquecido pela passagem de uma corrente eltrica constante. Este filamento fica montado dentro de um orifcio em um bloco metlico (cela), aquecido uma temperatura mais baixa que aquela do filamento, por onde o gs de arraste proveniente da coluna passa continuamente (Figura 3). Enquanto passar gs de arraste puro pela cela, a taxa de perda de calor do filamento para o bloco constante e a temperatura do filamento no varia. Quando um componente eluido da coluna, ele sai misturado com o gs de arraste e passa pelo detector. Se a condutividade desta mistura for diferente daquela do gs de arraste puro, o filamento passa a perder calor para o bloco numa taxa diferente daquela do equilbrio. Por exemplo, se a taxa de perda de calor diminuir, o filamento se aquece quando a amostra eluida. O aquecimento do filamento causa uma variao na sua resistncia eltrica e a resistividade de um metal aumenta com a temperatura. O filamento montado em um circuito de ponte de Wheatstone, que converte a variao na resistncia eltrica do filamento numa variao de voltagem, que coletada em um registrador gerando o cromatograma.

Figura 3 - Cela de um detector de condutividade trmica.

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O DCT um detector universal, sensvel concentrao do soluto no gs de arraste. Geralmente, quando se usa DCT, o gs de arraste He ou H2. Pelo fato destes gases terem condutividades trmicas altssimas, as misturas gs de arraste mais o soluto sempre tero condutividades trmicas menores que a do gs de arraste puro, o que impede sinais negativos, alm de se obter maiores fatores de resposta. Entretanto, ele considerado um detector pouco sensvel. A QMD de um modelo moderno, para propano, de 400 pg/ml de gs de arraste, com faixa linear de 106. Apesar disso, o fato de ser universal, barato e de operao simples, o faz extremamente til para anlises que no necessitem de alta sensibilidade.

2.2.3.2 Detector por ionizao de chama Durante a queima de um composto orgnico, so formados diversos ons e como consequncia, a chama resultante torna-se condutora de eletricidade. O funcionamento do DIC baseia-se neste fenmeno. O gs de arraste saindo da coluna cromatogrfica misturado com H2 e queimado com ar ou O2. A chama resultante fica contida entre dois eletrodos, polarizados por uma voltagem constante (Figura 4). Como a chama de H2 forma poucos ons, ela um mau condutor eltrico e quase nenhuma corrente passa entre os eletrodos. Ao eluir um composto orgnico, ele queimado e so formados ons na chama, que passa a conduzir corrente eltrica. A corrente eltrica resultante, da ordem de pA, amplificada e constitui o sinal cromatogrfico.

Figura 4 - Cela de um detector por ionizao de chama.

Quase todos compostos orgnicos podem ser detectados pelo DIC. Apenas substncias no inflamveis (CCl4, H2O) ou algumas poucas que no formam ons na 14

chama (HCOOH) no do sinal. Assim, ele um detector praticamente universal. De um modo geral, quanto ligaes C-H tiver o composto, maior a sua resposta (maior sensibilidade). Ele muito mais sensvel que o DCT, pois dependendo do composto, podem ser detectados entre 10 pg e 400 pg, com faixa linear dinmica de 107. Provavelmente o detector mais usado em CG. A CG uma tcnica eminentemente quantitativa. O princpio bsico da quantificao que a rea dos picos registradas no cromatograma proporcional massa do composto injetada. Assim, fundamental para a confiabilidade da anlise que a rea dos picos seja medida a mais exata e reprodutvel possvel. Existem vrios modos de se medir a rea de um pico cromatogrfico - Tcnicas Manuais. Quando o cromatograma coletado por um registrador analgico, usualmente a rea dos picos medida manualmente. O procedimento mais empregado consiste em supor que o pico cromatogrfico se aproxima de um tringulo issceles. Mede-se a altura do pico (h) e a sua largura de base (wb) ou meia-altura (wh), e calcula-se a rea pelas frmulas usadas para clculo de rea de tringulo:

ou

A convenincia de se usar uma ou outra forma depende da largura do pico, da assimetria, etc. Pode-se tambm substituir a rea pela altura do pico. Isto s possvel para picos estreitos e simtricos. Integradores Eletrnicos. Integradores so dispositivos baseados em

microprocessadores que coletam o sinal cromatogrfico, digitalizam-no (transformam o sinal eltrico em nmeros), detectam a presena de picos e calculam a sua rea. Integradores so muito mais precisos e rpidos que qualquer mtodo manual de medida, desde que empregados convenientemente. Embora sejam dispositivos caros, quando necessria rapidez na produo de resultados, o seu uso quase mandatrio. - Computadores. O integrador pode ser substitudo por um computador, desde que este tenha um dispositivo para converter o sinal eltrico em nmeros que possam ser guardados em memria (conversor analgico-digital), e se disponha de programas adequados para fazer a anlise do cromatograma digitalizado. O custo de um computador com os acessrios necessrios para coletar e analisar cromatogramas , via de regra,

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inferior ao de um bom integrador. Alm disso, com um software e operao adequada, pode fornecer resultados mais confiveis que este ltimo. Qualquer que seja o modo usado para medir a rea dos picos, o procedimento geral de uma anlise quantitativa por CG envolve a obteno do cromatograma da amostra, a medida da rea dos picos de interesse e o clculo da massa correspondente a cada um dos picos. Este clculo deve ser feito empregando uma curva de calibrao: um grfico correlacionando a rea do pico com a massa do composto. A curva de calibrao obtida analisando padres contendo massas conhecidas dos compostos a serem quantificados. Para cada substncia, deve ser feita uma curva de calibrao prpria, j que cada composto responde de maneira diferente ao detector. O esquema geral proposto acima chamado de padronizao externa. Como muito difcil conseguir boa reprodutibilidade entre injees diferentes, ele muitas vezes sujeito grande impreciso e inexatido. Para contornar este problema, pode-se usar a chamada padronizao interna, onde a cada soluo a ser injetada adiciona-se uma quantidade exatamente igual de um composto que seja separvel dos componentes da amostra, e que no exista nela (padro interno). Como para todas as solues, tanto das amostras como dos padres existe a mesma massa do padro interno, a rea do seu pico dever ser a mesma. Este fato faz com que este pico possa ser usado para corrigir a rea dos picos dos constituintes da amostra e dos padres, eliminando-se, pelo menos parcialmente muitas deficincias da injeo.

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Anexos Cromatogramas (cromatografia gasosa)

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