Вы находитесь на странице: 1из 67

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

INTEGRANTES DEL EQUIPO: CRISTIAN OSWALDO CANCINO URBINA #8 INGRID ANAH DE LA TORRE MENDEZ #11 KARLA GMEZ PREZ #21 RAMIRO PABLO HERNANDEZ GMEZ #26 CLAUDIA LARA PREZ #28 PENAGOS SOLS DANIELA DEL CARMEN #37

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS N92

LABORATORISTA CLNICO

EQUIPO #4

PROFRA.: LORENA GUADALUPE COSGALLA MALDONADO

5TO. F

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

NDICE INTRODUCCIN..3 BANCO DE SANGRE Y SU ORGANIZACIN4


Qu es un Banco de Sangre? Historia del banco de sangre Organizacin del banco de sangre (Organigrama) Croquis del banco de sangre

CARACTERSTICAS DEL DONADOR....6


Tipos de donadores Requisitos que debe cubrir un donador de sangre segura

APLICACIN LA NORMA NOM-003-SSA2-1993..9 TIPOS DE ANTICOAGULANTES PARA LA CONSERVACION DE LA SANGRE.13


Tipos de anticoagulantes Funcin de los anticoagulantes Mecanismos de accin de los anticoagulantes Ventajas y desventajas de los anticoagulantes EDTA y HEPARINA Requisitos de un anticoagulante Biometra Hemtica Hematocrito Velocidad de Sedimentacin Globular Determinacin de Hemoglobina Conteo de Glbulos Rojos Conteo de Glbulos Blancos Conteo de Plaquetas Chagas Panel de Hepatitis Virus de la Inmunodeficiencia Humana VDRL Rosa de Bengala

TCNICAS PRETRANSFUSIONALES16

TCNICAS SEROLGICAS.39

PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD48
Determinacin de los grupos sanguneos Prueba mayor y menor (Compatibilidad sangunea) Prueba de Coombs

REACCIONES POSTRANSFUSIONALES.52 HEMODERIVADOS55 TCNICAS DE SEPARACIN.6: CONSERVACIN Y TRANSPORTE DE HEMODERIVADOS65

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

INTRODUCCIN Las transfusiones sanguneas salvan vidas diariamente. El objetivo primordial de todos los Bancos de sangre, puestos de sangrado y servicios de transfusin, es contar con sangre y sus derivados en forma segura y en cantidades suficientes. La sangre y sus componentes son empleados ampliamente en la teraputica mdica rutinaria, sin embargo, pueden ser causantes de daos a la salud de disponentes, receptores y del personal de salud. Es por ello que el personal que labora en estas reas debe estar debidamente capacitado, desde Personal de Intendencia, Secretaria, Trabajo Social, Auxiliares de Laboratorio, Laboratoristas, Qumicos, Enfermeras y Mdicos Seleccionadores, para el adecuado funcionamiento de los mismos. Este manual se hizo con la finalidad de dar a conocer a qumicos, tcnicos y cualquier persona en general sobre la organizacin de un banco de sangre y principalmente sobre la extraccin, manejo, pruebas, conservacin, fraccionamiento, etc., de la sangre y de todos sus componentes y/o derivados.

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

BANCO DE SANGRE Y SU ORGANIZACIN


Qu es un Banco de Sangre? Un banco de sangre es una organizacin dedicada a recolectar, almacenar, procesar y suministrar sangre humana. Se encargan de analizar las muestras recolectadas y separar a la sangre en sus componentes. Los donadores deben ser personas voluntarias, por motivos altruistas o por ser cercanos a pacientes La sangre total se conserva a temperaturas de entre 2 y 6 C por 28 das. El concentrado eritrocitario o paquete globular se almacena en las mismas condiciones que la sangre total, solo que por 42 das. El concentrado plaquetario slo se puede conservar 5 das a 22 C. El plasma fresco se congela por debajo de -20 C. El crioprecipitado se obtiene de una congelacin rpida y luego una descongelacin lenta. Existen adems algunos productos que provienen del plasma como la albmina, concentrado de antitrombina III, factor IX, gammaglobulinas e inmunoglobulinas. Historia del banco de sangre En 1930 empiezan a funcionar los primeros bancos de sangre tanto en Europa como en Norteamrica. En la primera y segunda guerra mundiales incrementaron la necesidad de abrir nuevas investigaciones sobre la transfusin de sangunea para los heridos al mismo tiempo que el mundo se revoluciona y surgen nuevas tecnologas. Judith pool informo que si el plasma fresco congelado se descongelaba haban ms concentraciones del factor VII de la coagulacin que el plasma fresco original

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Organizacin del banco de sangre (Organigrama)


DIRECCIN DEL BANCO DE SANGRE

SUBDIRECCIN MDICA

DIVISIN DE SERVICIOS AUXILIARES DE DIAGNSTICO Y

JEFATURA DE BANCO DE SANGRE

TRATAMIENTO

SECCIN DE INMUNOHEMATOLGA Y SEROLOGA

SECCIN DE TOMA DE MUESTRA Y FLEBOTOMA

SECCIN DE SELECCIN DEL DONADOR

SECCIN DE PROMOCIN Y ORIENTACIN

SECCIN DE FRACCIONAMIENTO, CONSERVACIN Y SUMINISTRO DE

UNIDADES DE SANGRE

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

DONADORES DE SANGRE
Tipos de donadores

Los donadores deben ser personas voluntarias, por motivos altruistas o por ser cercanos a pacientes. Donante voluntario: persona que desea compartir su salud donando sangre, para el paciente que la necesite. Donante autlogo: es aquel paciente que tiene programada una ciruga electiva y dona su propia sangre en caso de requerir una transfusin. Donante directo: en algunas circunstancias clnicas el paciente puede beneficiarse del componente colectado de un donante especfico. Tipos de donacin Regular. Consiste en la extraccin de 450 ml de sangre en bolsas que contienen soluciones anticoagulantes que permiten su almacenamiento en condiciones adecuadas. De esta donacin se pueden obtener una bolsa de concentrado de hemates, otra de plasma y si fuera necesario una de plaquetas. Frecuencia. En hombres, un mximo de 4 donaciones al ao. En las mujeres, un mximo de 3 donaciones al ao. El periodo mnimo entre donaciones debe ser de 2 meses. Por afresis. Es un tipo especial de donacin en la cual, mediante procedimientos efectuados por mquinas, se extrae sangre, se separan sus componentes, se recogen los que se necesitan y el resto se restituye al donante. Es especialmente beneficioso para el paciente puesto que la cantidad del componente necesitado y extrado es mucho mayor que en una donacin convencional y, adems, se minimizan los riesgos. La capacidad de recuperacin del donante no se ve afectada. Frecuencia. Se puede repetir si es necesario cada 15 das. Es aconsejable dejar un intervalo de 30 das entre dos afresis. Hay que dejar un intervalo de 60 das entre una donacin normal y una afresis. Auto transfusin. Consiste en la extraccin a un paciente de una o varias unidades de sangre, en las semanas anteriores a una intervencin quirrgica, programada para cubrir las necesidades de transfusin derivadas de sta. De esta manera al paciente se le transfunde su propia sangre. Slo se aplica a pacientes razonablemente sanos

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Requisitos que debe cubrir un donador de sangre segura

Edad de 18 y 65 aos Presentar identificacin oficial con fotografa Peso mayor de 50kg. Persona clnicamente sana Traer un litro de agua embotellada No estar enfermo de gripe, tos, diarrea o haber tenido fuegos o otras enfermedades en la ltima semana Mujeres no estar menstruando o reglando, embarazadas o lactando No haber sido operado recientemente No ser alrgico a la penicilina No haber ingerido bebidas alcohlicas en los ltimos tres das Dormir bien un da antes de la donacin (mnimo 6hrs) Estar en ayuno Cenar dieta baja en grasas un da antes de la donacin No fumar 3 hrs. Antes de la donacin Aseo personal adecuado Tener disponibilidad de tiempo No haber recibido aplicacin de alguna vacuna en el ltimo mes No pueden donar personas con presin alta o baja, diabetes, epilepsia, o convulsiones y enfermedades de corazn No tener infecciones de piel No haber tenido tratamiento dental 72hrs. Antes de donar No tomar medicamentos una semana antes de la donacin

Razones para donar sangre

Con una donacin, se salvan tres vidas. La cantidad donada slo representa el 10% de la sangre que normalmente se posee, porcentaje que no interfiere con el funcionamiento normal del organismo. La donacin de sangre se puede hacer a cualquier hora del da, sin necesidad de condiciones especiales. Cada da 75 personas salvan su vida en Espaa gracias a las transfusiones. Los tratamientos de cncer, la ciruga compleja, los accidentes de trfico, los trasplantes de rganos,... seran imposibles sin donaciones de sangre. La sangre no puede fabricarse.

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Si piensas donar cuando haya una emergencia, ya llegas tarde. Tu sangre debe ser sometida a pruebas y procesos. Por lo tanto, es mejor acudir antes de que aparezca la necesidad. En verano, hace ms falta, al contrario de lo que se cree, por el aumento de los accidentes y la escasez de donantes en sus residencias habituales. Porque maana, a lo mejor, le hace falta a uno de los tuyos. Es el mejor donativo. Hacen un buen anlisis de tu sangre. Garantas de seguridad para el donante y el receptor. Disponibilidad gratuita de los productos sanguneos Utilizacin ptima de la donacin. La donacin de sangre, no puede ser motivo de comercio. Ni se compra ni se vende.

Recomendaciones despus de la donacin

Tomar abundante agua No fumar hasta 30 min. Despus de donar Evitar realizar ejercicio, levantar objetos pesados o cualquier actividad que utilic el brazo de la punciona hasta el da siguiente Si sangras en el sitio de la puncin eleva el brazo y presiona en el lugar de 5 a 10 min. Algunos esfuerzos pueden provocar mareos, nauseas o dolor de cabeza, si ello ocurre acustese con los pies elevados y se debe evitar por 24hrs. Trabajo que requiera fuerza, presin o rapidez Si en los das posteriores a la donacin te da gripa, tos, catarro, etc avisa ya que cuando donaste te encontrabas en un periodo de incubacin de la enfermedad y transmitirle tu sangre aun paciente seria muy peligroso para el.

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

APLICACIN LA NORMA NOM-003-SSA2-1993


1.1 Esta Norma tiene por objeto uniformar las actividades, criterios, estrategias y tcnicas operativas del Sistema Nacional de Salud, en relacin con la disposicin de sangre humana y sus componentes con fines teraputicos. 1.2 Esta Norma Oficial Mexicana es de observancia obligatoria para todos los establecimientos para la atencin mdica y, en su caso, para las unidades administrativas de los sectores pblico, social y privado del pas. 4 Disposiciones generales 4.1 Los disponentes alognicos de sangre y de sus componentes podrn corresponder a las categoras siguientes: - Altruista; - Familiar. 4.2 Los actos de disposicin de sangre y sus componentes para fines de transfusin autloga, podrn llevarse a cabo mediante los procedimientos siguientes: - Depsito previo; - Hemodilucin preoperatoria aguda; - Rescate celular transoperatorio y posoperatorio. 4.3 Los establecimientos que realicen cualquier acto de disposicin regulado por esta Norma, debern proporcionar a los disponentes originarios y, en su caso, a los secundarios, lo que a continuacin se seala: a) La informacin concerniente al procedimiento al cual van a ser sometidos, as como, el folleto de autoexclusin confidencial a que se refieren los apartados 5.1 y C.5 de esta Norma; b) Notificacin oportuna de alguna anormalidad en los resultados de las pruebas de laboratorio, as como, la informacin y orientacin que el caso amerite; c) Informe por escrito de los resultados de las pruebas de laboratorio, si el disponente as lo solicita. 4.4 En la realizacin de los actos de disposicin de sangre o de sus componentes, se debern emplear tcnicas seguras, aspticas y que permitan una identificacin precisa de las unidades recolectadas. Los equipos para la recoleccin y transfusin utilizados debern ser desechables y libres de pirgenos. 4.5 La sangre y sus componentes con fines transfusionales se podr recolectar por extraccin simple, afresis o por tcnicas de rescate perioperatorio. La venopuncin para recolectar sangre por extraccin simple, o algn componente sanguneo mediante afresis, deber hacerse en reas cutneas libre de lesiones y se realizar despus de su limpieza y antisepsia cuidadosas.

10

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

4.6 La recoleccin de sangre o de sus componentes, deber hacerse en un ambiente y condiciones que garanticen seguridad, bienestar y respeto para el disponente, el receptor y el personal de salud. Estos requisitos y condiciones debern mantenerse cuando la recoleccin de sangre se realice en unidades mviles. 4.7 Los componentes sanguneos se podrn obtener mediante los procedimientos siguientes: - Sedimentacin por gravedad (de unidades de sangre); - Centrifugacin a temperatura controlada (de unidades de sangre); - Afresis. 4.8 Los procedimientos para los anlisis de laboratorio que se requieren en los actos de disposicin regulados por esta Norma, debern emplear una metodologa sensible y especfica aceptada por la Secretara. 4.9 La sangre y sus componentes se podrn emplear con fines teraputicos en las modalidades de: a) Sangre total, fresca o no; b) Componentes (o fracciones) celulares que se prepararn como concentrados de: - Eritrocitos (y variantes tales como, eritrocitos lavados, eritrocitos pobre en leucocitos y eritrocitos congelados y desglicerolados mediante lavado); - Leucocitos; - Plaquetas. c) Componentes (o fracciones) acelulares que son: - Plasma (que podr ser: envejecido, fresco, fresco congelado y desprovisto de crioprecipitado); - Fracciones del plasma (como por ejemplo, crioprecipitado). 5 Manejo y seleccin de disponentes alognicos 5.1 El personal del banco de sangre deber proporcionar a los disponentes previamente a la recoleccin de sangre o de componentes sanguneos, el folleto de autoexclusin confidencial (vase el apartado C.5 de esta Norma), con la finalidad de permitir que un candidato (o disponente) se pueda excluir mediante cualquiera de los mecanismos siguientes: a) Que se autoexcluya antes de la seleccin mdica, condicionado por el material educativo que contiene el folleto; b) Que el sujeto inquiera con el mdico las incgnitas que le hubiesen surgido con la informacin contenida en el folleto y, mediante su interlocucin, el mdico pueda identificar prcticas o condiciones de riesgo a las que el candidato hubiese estado expuesto y de esta manera lo excluya; c) Que el sujeto con antecedentes o con prcticas de riesgo para adquirir los virus de la inmunodeficiencia humana o de la hepatitis, que ya hubiese proporcionado su sangre o componentes sanguneos, tenga la facilidad, mediante el taln a que hace referencia el inciso

11

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

d) del apartado C.5 de esta Norma, para notificar confidencialmente que no considera apta su sangre o componentes de sta para uso transfusional y consecuentemente se les d destino final inmediatamente despus de su recoleccin. 5.2 El banco de sangre deber proporcionar a los disponentes despus de la recoleccin de sangre o de componentes sanguneos, lo que a continuacin se indica: a) Alimento lquido y slido con un valor calrico mnimo de 400 kCal y con un volumen mnimo de 500 mL; b) Prescripcin de suplementos de hierro a disponentes que proporcionen sangre, cuando se juzgue indicado. 5.3 Los candidatos a proporcionar sangre o componentes sanguneos con fines de transfusin alognica, se sometern a una valoracin cuidadosa, que se registrar en una historia clnica conforme a las disposiciones que seala el apartado C.4 de esta Norma y que permita excluir a los siguientes: 5.3.1 Menores de 18 aos y mayores de 65 aos. 5.3.2 Los sujetos carentes del uso pleno de sus facultades mentales o aqullos coartados del ejercicio libre de su propia voluntad. 5.3.3 Los sujetos que a continuacin se indican y que, por razn de sus prcticas sexuales o por exposicin a condiciones de alto riesgo, tienen mayor probabilidad de adquirir infeccin por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana o por los virus de la hepatitis: a) Homosexuales masculinos; b) Bisexuales; c) Heterosexuales con varios compaeros sexuales; d) Quienes ejercen la prostitucin; e) Farmacodependientes que usan la va intravenosa; f) Hemoflicos y politransfundidos; g) Exproveedores remunerados de sangre o plasma; h) Aquellos con antecedente de haber sido internos en instituciones penales o de enfermedades mentales; i) Los compaeros sexuales de personas infectadas por virus de la inmunodeficiencia humana o de cualquiera de los individuos que indica este apartado. 5.3.4 Los que tengan cualquiera de los antecedentes personales que se enlistan a continuacin: a) Hepatitis; b) Positividad en marcadores serolgicos para los virus B o C de la hepatitis, o ambos; c) Positividad en la prueba serolgica para el Virus de la Inmunodeficiencia Humana, de cualquiera de sus tipos;

12

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

d) Manifestaciones clnicas o patolgicas que puedan estar asociadas o no a enfermedad por Virus de Inmunodeficiencia Humana, entre las que figuran a continuacin:

Cuadro sugestivo de infeccin aguda por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana; Prdida de peso involuntaria del 10 % o mayor del peso corporal habitual, ocurrida en un lapso de seis meses o menor; Fiebre, diarrea, odinofagia o astenia con duracin igual o mayor de un mes; Candidiasis orofarngea, vulvovaginal persistente, frecuente o con mala respuesta a tratamiento; Herpes zoster, dos episodios distintos o que abarquen ms de un dermatoma; Herpes simple, mucocutneo de ms de un mes de duracin; Encefalopatas, sndromes demenciales, neuropata perifrica o mielopata; Displasia cervical moderada o grave, enfermedad plvica inflamatoria o absceso tuboovrico; Prpura trombocitopnica; Tuberculosis extrapulmonar

13

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

TIPOS DE ANTICOAGULANTES PARA LA CONSERVACION DE LA SANGRE


Tipos de anticoagulantes

Un anticoagulante es una sustancia de distinta naturaleza qumica que afecta al proceso de coagulacin. Poseen un efecto biolgico, lo cual permite que se puedan dividir en dos tipos: Anticoagulantes de accin indirecta: Este tipo de anticoagulantes son aquellos que por medio de su intervencin con otras protenas alteran el funcionamiento de las cascadas de coagulacin, esta accin tambin sucede cuando actan en otras vas metablicas. Entre los anticoagulantes de accin indirecta se encuentran:

Inhibidores medianos de antitrombina III Inhibidores de sntesis de factores de coagulacin Derivados del dicumarol Heparina no fraccionada Heparina de bajo peso molecular Danaparoi de sdico

Anticoagulantes de accin directa:

Estos anticoagulantes son aquellos que son capaces de inhibir la cascada de la coagulacin. Entre los anticoagulantes de accin directa, se encuentran:

Inhibidores directos de trombina Hirudina Argatroban

Funcin de los anticoagulantes

En algunos casos son llamados disolventes de sangre, pero este tipo de medicamentos no disuelven los cogulos que ya se hayan formado con anterioridad, si no que pueden llegar a impedir que dichos cogulos se agranden, provocando problemas serios a la salud. Los anticoagulantes pueden administrarse ya sea va subcutnea o endovenosa. Adems, de que tienen la capacidad de reducir la capacidad coagulante de la sangre, lo cual ayuda a prevenir la formacin de cogulos dainos en los vasos sanguneos.

14

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Mecanismos de accin de los anticoagulantes

EDTA: El EDTA puede ser aplicado intravenosa o tpicamente. Aunque se puede dar oralmente y su absorcin en la va digestiva es buena, se prefiere administrar intravenosamente en virtud de ser ms eficaz para aumentar la tasa de excrecin urinaria de los quelatos. Tras la administracin IV el frmaco se absorbe y despus de 6 horas puede detectarse en orina de un 60 a un 90% de la cantidad administrada. A las 25 horas puede recuperarse hasta un 99%. El resto aparece en las heces fecales. Los efectos farmacolgicos del EDTA resultan de la formacin de quelatos con metales divalentes y trivalentes en el cuerpo. En la forma de edetato de calcio disdico se aplica para quelar metales con gran afinidad al quelante ms que al calcio inico. Es de gran utilidad para quelar el plomo que se encuentra en hueso. En sangre, el frmaco puede encontrarse en plasma y debido a que se excreta por va urinaria, el paciente debe ser evaluado cuidadosamente y certificar que tiene una funcin renal adecuada. Se ha detectado un pequeo porcentaje en el fluido espinal. HEPARINA: La heparina es una sustancia natural de la sangre que interfiere con el proceso de la coagulacin sangunea. Acta sobre una sustancia llamada trombina, que juega un importante papel en la formacin del cogulo en la sangre. La heparina clsica ejerce su efecto anticoagulante acelerando la formacin de complejos moleculares entre la antitrombina III y los factores II(trombina), IX, X, XI, XII, los que quedan activados. Sin embargo, los factores ms importantes que quedan inactivados son el factor II y el factor X
Ventajas y desventajas de los anticoagulantes EDTA y HEPARINA

EDTA: Una excesiva prolongacin con el anticoagulante hace que se altere las clulas sanguneas. Se recomienda realizar un frotis sanguneo si el envo se prolonga ms de 24 horas. Tambin es el anticoagulante de eleccin para Test de Coombs y para realizar tinciones citoqumicas

15

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Heparina: Las alteraciones que se producen son: degeneracin nuclear de los neutrfilos, deg No es APTA para estudios de inmunohematologa: Test de Coombs. No se utiliza para las tinciones citoqumicas.

Requisitos de un anticoagulante

La administracin de ACO exige la realizacin de controles peridicos que informen sobre el grado de anticoagulacin del paciente al objeto de administrar dosis eficaces con la mnima incidencia de sangrado (5). La prueba de laboratorio utilizada como control del tratamiento anticoagulante oral (TAO) es el tiempo de protrombina (TP) (6), prueba que ha sido estandarizada internacionalmente desde el ao 1983 en forma del denominado "International Normalized Ratio" (INR) o "Cociente Normalizado Internacional", que permite comparar los resultados obten i d o s p o r d i f e r e n t e s l a b o r a t o r i o s c o n d i s t i n t o s reactivos: INR = (TP paciente/TP control) ISI. El par-metro ISI (ndice de Sensibilidad Internacional) indica la sensibilidad del reactivo a la reduccin de factores vitamina K dependientes; debe ser lo ms prximo posible a 1. Si el INR es igual a 2, nos indica que el TP del paciente es el doble del TP control. Si el INR es 3, ser el triple del control. Por tanto, los resultados se expresan como un ndice referido a la actividad de una tromboplastina patrn (7-11). Los mrgenes o rangos del INR han sido establecidos por la experiencia acumulada con la observacin clnica de los pacientes (12-14).

16

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

TCNICAS PRETRANSFUSIONALES
Biometra Hemtica

En medicina el hemograma o CSC (conteo sanguneo completo) o biometra hemtica es uno de los elementos diagnsticos bsicos. Es un cuadro o frmula sangunea en el que se expresan el nmero, proporcin y variaciones de los elementos sanguneos. Recoge: 1. Nmero de hemates, hematocrito, hemoglobina e ndices eritrocitarios 2. Recuento y frmula leucocitaria 3. Nmero de plaquetas El hemograma incluye la cuenta plaquetaria, cuenta leucocitaria (WBC), cuenta eritrocitaria (RBC) hemoglobina, hematocrito y los ndices. La biometra hemtica es el hemograma mas la cuentadiferencial.La biometra hemtica completa (BHC) es una prueba de deteccin bsica y constituye la tcnica dellaboratorio que se pide con mas frecuencia. Los datos que se proporcionan constituyen informacindiagnostico muy valioso sobre el sistema hematolgico y otras partes del cuerpo, pronostico, respuestaal tratamiento y recuperacin.Consta de una serie de pruebas que determinan el nmero, variedad, porcentaje, concentracin ycalidad de las clulas sanguneas:

FORMULA BLANCA
Cuenta leucocitaria: Constituye una gua muy til sobre la gravedad de la enfermedad. Endistintos padecimientos, se observan patrones especficos de la respuesta leucocitaria. Cuenta leucocitaria diferencial: Se expresa en forma de porcentaje del numero total deleucitos, es importante tanto la distribucin de los glbulos blancos como el tipo de leucocitos yel grado con el que aumentan y disminuyen, el porcentaje es relativo de cada tipo de leucocito presente en la sangre.

17

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

FORMULA ROJA
Cuenta eritrocitaria: Medicin muy importante para determinar la anemia o policitemia, determina el nmero total de glbulos rojos o eritrocitos en 1 mm3 (cubico) de sangre. Hematocrito: Determina la masa eritrocitaria, los resultados se expresan como porcentaje de eritrocitos en un volumen de sangre completa, constituye una medida muy importante de la anemia o policitemia. Hemoglobina: La medicin de la hemoglobina forma parte de la biometra hemtica, sirve para detectar enfermedades que se acompaen de anemia, ayuda a determinar la intensidad de anemia, a vigilar la respuesta al tratamiento y valorar la policitemia. Indices eritrocitarios: Se utilizan para diferenciar las anemias, si se utilizan en conjunto al examinarse los glbulos rojos en el frotis es posible obtener un cuadro muy claro de la morfologa de los glbulos rojos. Con base a los ndices a los eritrocitos se clasifican en normales o anormales, en cuanto a volumen o contenido de hemoglobina. Volumen corpuscular medio (VCM) El mejor ndice para clasificar las anemias es el tamao de cada clula. Este ndice expresa el volumen que ocupa un solo eritrocito y se mide en micras cbicas del volumen medio. El volumen corpuscular medio expresa si el tamao del glbulo rojo es normal (normocitico), menor (microcitico) o mayor (macrocitico). Hemoglobina corpuscular medio (MCH La cuantificacin de la hemoglobina corpuscular media es el promedio del peso de la hemoglobina por glbulo rojo. Este ndice es muy importante en el diagnostico de pacientes con anemias muy graves.3. Concentracin de hemoglobina media (MCHC): Esta prueba mide la concentracin promedio de hemoglobina en glbulos rojos. La MCHC es muy til para vigilar el tratamiento de la anemia debido a que las determinaciones hematolgicas mas precisas(hemoglobina y hematocrito) son las que se utilizan para calcular esta prueba.

CUENTA PLAQUETARIA:
Est indicada cuando al cuenta plaquetaria es menor de lo normal, es til para estudiar los trastornos hemorrgicos que acompaan hepatopatas ,trombocitopenia, uremia y tratamiento con plaquetas, as como despus de enfermedades que se acompaan de insuficiencia de mdula sea. VPM (volumen plaquetario medio): Esta prueba proporciona informacin sobre el tamao delas plaquetas. Se lleva a cabo para estudiar enfermedades hematolgicas como prpura trombocitopenica, leucemias y para estudiar a los alcohlicos que se encuentran bajo tratamiento.

18

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Hematocrito

OBJETIVO Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micromtodo, conocer su importancia en el diagnstico de enfermedades y la forma adecuada de su procedimiento. FUNDAMENTO El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre que est compuesta de glbulos rojos. Esta medicin depende del nmero de glbulos rojos y de su tamao. El resultado se expresa en porcentaje. El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguneo completo (hemograma). Para la realizacin de esta prueba, con el macromtodo, la sangre se extrae tpicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano. Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras slo sienten un pinchazo o sensacin de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensacin pulstil. Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el plasma de la sangre y las clulas, depositndose en el fondo y presentando un color rojo intenso. Para la realizacin del micromtodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado, llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este ltimo es el ms usado, por ser ms rpido y menos riesgoso al usar sangre capilar. Para su lectura se usa una escala estandarizada. MATERIAL Tubo de Wintrobe Tubos capilares azules o Microcentrifuga graduado de 0-100 mm rojos Alcohol al 70% Pipetas Pasteur Plastilina Sangre venosa Equipo para Encendedor o cerillos venopuncion (Tubo lila) Centrifuga PROCEDIMIENTO Para macrohematocrito: Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica puncin venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA

19

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre extrada con anticoagulante ayudndose de una pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo cuidado de no provocar espuma ni dejar burbujas en el tubo.

Se recomienda como medida de precaucin tapar el tubo con un tapn de goma para evitar la evaporacin Centrifugar a 3000 rpm durante 30 minutos

Leer directamente de la graduacin la columna de glbulos rojos y anotar resultados Para Microhematocrito: Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70-80% del capilar, sin dejar burbujas de aire.

Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con plastilina o sellando con fuego Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la microcentrifuga, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma

Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 y 12 000 rpm

20

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Para leer el resultado, se lleva a cabo una regla de tres, midiendo el volumen total de plasma y eritrocitos o por medio de la regleta. Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la lnea hroizontal correspondiente al cero Desplazar el tubo a travs de la escala hasta que la lnea marcada con el 1.0 quede al nivel del tope del plasma. El tubo debe de encontrarse completamente en posicin vertical.

La lnea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fraccin del volumen de estos. RESULTADOS En el tubo de Wintrobe se mide directamente el nivel de la columna de glbulos rojos, comparando el nmero de la lectura con los siguientes porcentajes: Hombres: 47.0 5.0% Mujeres: 42.0 5.0% Nios (5 aos) 38%-44% Lactantes (3 meses): 37-42% Recin nacidos: 50-58% La sangre era de Edgar Osvaldo Prez Garca, y el tubo de Wintrobe demostr un 49% de eritrocitos, estando en un rango normal. En el tubo capilar, al comparar con la regleta, se obtubo un valor de 49%, al igual que el Wintrobe. Sin embargo con los calculos matematicos hubo una pequea diferencia. Se considera a la medida total de eritrocitos, leucocitos y plasma en mm como un 100% y con la medida de solo los eritrocitos tambien en mm se obtiene su porcentaje con respecto a este por medio de una regla de tres: Medida total= 58 mm (eritrocitos, leucocitos y plasma) Medida de eritrocitos= 29 mm 58 mm -------------------------- 100% 29 mm ------------- x (hematocrito) HEMATOCRITO: 50 %

21

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Velocidad de Sedimentacin Globular

OBJETIVO Que el alumno realice una prueba de Velocidad de Sedimentacin Globular y que analice los factores que la determinaron. FUNDAMENTO Cuando se deja una muestra de sangre anticoagulada en reposo, los hemates como tienen mayor densidad que el plasma, tienden a sedimentar, la velocidad de cada depende de la tendencia que tienen los eritrocitos a formar pilas y esta a su vez depende de la interaccin de dos fuerzas opuestas: Una fuerza de atraccin: Las fuerzas de Van der Waals y una fuerza de repulsin: El potencial Z. El equilibrio entre estas dos fuerzas puede ser alterado por la presencia de ciertas molculas asimtricas plasmticas, especialmente el fibringeno (Protena de fase aguda )y las gama globulinas cuando estn muy aumentadas, estas protenas funcionan como dielctricos disminuyendo el potencial Z, por lo tanto priman las fuerzas de atraccin y se acelera la velocidad de sedimentacin. La velocidad de sedimentacin tambin depende de una serie de otros factores muchos de ellos an no identificados como: Dao orgnico, respuesta tisular y relacin con la circulacin, nmero de eritrocitos, etc. Cuando hay un proceso infeccioso o inflamatorio en general aumenta el fibringeno y por lo tanto la velocidad de sedimentacin se acelera. MATERIAL Tubo de Wintrobe Pipeta Pasteur o pipeta de transferencia Gradilla para tubos de Wintrobe Sangre venosa con EDTA. PROCEDIMIENTO 1. Tome Sangre Del Tubo O Frasco Con Una Pipeta Pasteur, Transfirala A Un Tubo De Wintrobe Y Llnelo Hasta La Marca De "0". Debe Procurar Que Al Vaciar La Pipeta La Punta De sta Quede Al Fondo Del Tubo E Ir Vaciando La Sangre Suavemente, Al Mismo Tiempo Que Se Va Retirando La Pipeta Del Fondo. 2. Lleve El Tubo De Wintrobe A La Gradilla E Inicie El Conteo De Tiempo, Dejando Reposar La Muestra Durante Una Hora. :

22

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

VALORES NORMALES Para las mujeres: menor de 15 mm/hora (M. Wintrobe) Para los hombres: menor de 12 mm/hora (M. Wintrobe) CAUSAS DE ERROR

Errores que podran haber aumentado la velocidad de sedimentacin


Desviacin de la verticalidad de la pipeta. Elevacin de la temperatura ambiente. Error en el anticoagulante. Mal enrase a cero Errores que podran haber disminuido la velocidad de sedimentacin Utilizacin tarda de la sangre. Error en el anticoagulante.
Determinacin de Hemoglobina

OBJETIVO El alumno aprender a realizar la prueba de determinacin de hemoglobina, a utilizar la boquilla, la pipeta de Sahl y aprender cmo calibrar y utilizar el espectrofotmetro FUNDAMENTO La hemoglobina es una protena contenida dentro del eritrocito, es la encargada de combinarse, de forma reversible, con el oxgeno para llevarlo de los pulmones a todas las clulas y favorecer as los procesos de oxidacin y con ello la de energa. A su vez recibe el dixido de carbono generado en los procesos de oxidacin intracelular y lo lleva a los pulmones para ser desechado al medio ambiente.

23

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Existen varios mtodos para su determinacin como hematina cida, hematina alcalina, oxihemoglobina, carboxihemoglobina y cianometahemoglobina; ste ltimo es el de eleccin por que es estable en soluciones diluidas, porque existen en el mercado estndares de cianometahemoglobina y porque las lecturas se pueden hacer en espectrofotmetro de uso comn y corriente. La sangre se hemoliza por agregado de un agente densoactivo, con el ferrocianuro de potasio se oxidan el tomo de fierro de ferroso a frrico para producir metahemoglobina. El cianuro de potasio estabiliza la metahemoglobina pasando de cianometahemoglobina. La cloracin producida es directamente proporcional a la concentracin de hemoglobina presente. MATERIAL Boquilla Pipeta de Sahl Gradilla Tubo de ensayo Gasas Celdas para espectrofotmetro Espectrofotmetro Reactivo de Drabkin (solucin de cianomatahemoglobina) PROCEDIMIENTO -ferrocianuro de potasio -cianuro de potasio -bicarbonato de potasio Sangre venosa con EDTA.

1. Coloque La Boquilla De Una Pipeta De Shali En La Boca Y Aspire La Sangre Contenida En El Tubo En El Tubo De Ensayo, Hasta La Marca De 20 Cm.

24

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

2. La Sangre Contenida En La Pipeta Debe Depositarla En Un Tubo De Ensaye Que Contenga 5 Ml. De Ferrocianuro De Potasio Y Solucin De Cianuro De Potasio (Reactivo De Drabkin), Procure Que Esta Mezcla Quede Homognea.

3. Deje Reposar Por Espacio De 10 Minutos, Obtenindose As La Cianometahemoglobina.

4. La Densidad ptica De Este Pigmento Es Medida Posteriormente En El Espectronic 20 A 540 Nm Y Multiplique El Valor Obtenido Por El Factor ( 37.7) Que Se Obtiene De La Curva Estndar Correspondiente Al Reactivo. Parmetros Normales En Adultos Para La Ciudad De Mxico. En El Hombre Es De 15 A 20 G/100 Ml. En La Mujer 12.5 A 17.5 G/100 Ml.

25

MANUAL DE BANCO DE SANGRE


VALORES NORMALES

Mujeres: 12 -14 gr/dl Mujeres embarazadas: 11-14 gr/dl Hombres: 13-19gr/dl Recin nacidos: 13.19gr/dl CAUSAS DE ERROR Empleo de anticoagulantes no recomendados Coagulacin parcial de la sangre No eliminacin del exceso de sangre adherida a las paredes externas del capilar antes de introducirlo en el reactivo Dilucin incompleta de la sangre en el reactivo Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o vencido Lectura antes del tiempo necesario para la completa transformacin de la Hb en cianometahemoglobina Empleo de instrumentos no calibrados Soluciones turbias de cianometahemoglobina Conservacin del reactivo en botellas de polietileno: se pierden grupos CN con formacin exclusiva de metahemoglobina, en vez de cianometahemoglobina, con lo que los valores de concentracin de Hb obtenidos son inferiores a los reales
Conteo de Glbulos Rojos

OBJETIVO Aprender a realizar un recuento de Eritrocitos por milmetro cbico de sangre, interpretar el resultado, as como adiestrarse en el manejo de la cmara de Neubauer y la pipeta de Thoma FUNDAMENTO Para el conteo de eritrocitos, se usan mtodos sistemticos que son ms rpidos y precisos, y los mtodos manuales. Todo mtodo manual de recuento celular incluye 3 fases: Dilucin de la sangre Muestreo de la sangre diluida en un volumen Recuento de clulas en ese volumen Una suspensin celular se caracteriza por presentar un nmero de partculas microscpicas dispersas en un fluido. Habitualmente ser necesario determinar tanto la densidad de las clulas en la suspensin como el porcentaje de stas que son viables. Para determinar la densidad de las clulas se emplean diferentes tcnicas, desde la relativamente simple cmara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que utiliza la cmara de Neubauer

26

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Para el conteo de eritrocitos, es necesario diluir la sangre con el lquido de Hayem, en una proporcin exacta. Luego se examina en el microscopio con una cantidad pequea colocada en la cmara de Neubauer, contando el nmero de elementos que se encuentran en el retculo de la cmara y mediante una operacin se obtiene el nmero total. Para la realizacin del conteo manual se necesita un lquido de dilucin, una cmara de recuento, una pipeta diluidora y un microscopio. MATERIAL Pipeta de Thoma para Tubo de plstico Gasas glbulos rojos (perla Tubos de ensayo Alcohol al 70% roja) Papel parafin Sangre venosa Equipo para venopuncion Cmara de Neubauer Liquido de Hayem (Tubo lila) Cubrehematimetro Boquilla roja Microscopio PROCEDIMIENTO 1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica puncin venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA 2. Colocar el tubo de plstico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3. Llenar la pipeta de glbulos rojos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilucin de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilucin ser 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

4. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (Hayem) y llenar de lquido de dilucin hasta la marca de 101

27

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

5. Se tapa la punta con papel parafin y se coloca en un rotador automtico o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos

6. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequea cerca de un extremo de la cmara para que por capilaridad se llene exactamente. Dejar 2 minutos que los eritrocitos se sedimenten

7. Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. luego con el objetivo de 40x contar sobre el cuadro grande central de la cmara solo en 5 cuadrados pequeos: uno central y cuatro angulares (80 cuadritos del total)

8. En el recuento se incluyen las clulas que cubren o tocan por dentro o por fuera las lneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeo de recuento y no se consideran los que estn en los lmites inferior y derecho. OBSERVACIONES

28

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Cmara de Neubauer, 10x El rayado de la cmara de Neubauer cubierta de miles de eritrocitos, que destacan por su forma redonda y gran cantidad.

Cmara de Neubauer, 40x Enfocando el cuadro central de los cuadros pequeos, se aprecian claramente los 16 cuadritos pequeos donde se tienen que contar los eritrocitos que hay en ellos. RESULTADOS Los recuentos de eritrocitos se expresan como concentraciones, que en este caso seran nmero de clulas por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3 Despus de contar los hemates de los 5 cuadrados pequeos, se suman y con dicha cantidad de hace el siguiente clculo: N de hemates x mm3 = altura x dilucin x rea N de hemates x mm3 = 1/10 x 1/200 x 1/5 = 1/10 000 N de hemates x mm3 = hemates contados x 10 000 En el anlisis hecho, el nmero de eritrocitos fue de 491, que al multiplicarse por 10 000 daba como resultado 4 910 000/mm3, lo que indica un ndice normal pues el paciente era una mujer de 11 aos de edad.

29

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

VALORES DE REFERENCIA (Millones de clulas/mm3) Hombres:..4 500 000-5 500 000 Mujeres:....4 000 000-5 000 000 Nios (4 aos):.........................4 200 000-5 200 000 Lactantes (1-6 meses):.....3 800 000-5 200 000 Recin nacidos:..5 000 000-6 000 000
Frotis sanguneo

OBJETIVO Que el alumno aprenda a hacer una buena extensin de sangre o frotis sanguneo, con la cantidad ideal de sangre, el grueso indicado, la forma adecuada, etc. FUNDAMENTO Una extensin o frotis sanguneo consiste en recubrir parcialmente un portaobjetos con una gota de sangre, de tal manera que las clulas de sta se dispongan formando una sola capa de ellas. Esto puede hacerse manual o automticamente. Lo ltimo se realiza mediante un aparato (spinner) que centrifuga rpidamente el portaobjetos con la sangre depositada en su centro. Con este aparato se obtienen unos frotis que presentan una distribucin celular muy homognea. PARTES DE UNA EXTENSIN. CABEZA.

Es la zona inicial de la extensin. Es la regin ms gruesa. En ella se encuentra una mayor proporcin de linfocitos, y los hemates forman aglomerados (pilas de monedas). CUERPO. Es la zona media del frotis. Su espesor es el apropiado. En ella existe una adecuada proporcin entre los distintos tipos de leucocitos. Contiene la "zona ideal" de observacin, que corresponde a la porcin que limita con la cola. COLA. Es la zona final de la extensin. Suele tener un aspecto redondeado. Es la regin ms fina.

30

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

En ella se encuentra una mayor proporcin de leucocitos grandes (granulocitos y monocitos), y adems. los hemates estn deformados y presentan una tonalidad uniforme. En su porcin terminal suelen ser ms abundantes las plaquetas, sobre todo si son grandes. BORDES. Contienen una mayor proporcin de leucocitos grandes. Si estn deshilachados, en ellos las clulas son difciles de reconocer por estar deformadas o destruidas CARACTERSTICAS DE UNA BUENA EXTENSIN.

La cabeza ha de estar cerca de uno de los extremos del portaobjetos. La cola debe estar cercana al otro extremo del portaobjetos, pero sin llegar a l. El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado. Ese fino deshilachamiento recibe el nombre de "barbas". Toda la extensin ha de ser fina y homognea. Los bordes laterales de la extensin deben estar separados de los bordes del porta por 1 mm aproximadamente. Una extensin normal ha de tener una longitud de las partes del portaobjetos. El uso de teidores automticos exige la realizacin de extensiones ms cortas que las consideradas normalmente como correctas (con una longitud de la mitad del portaobjetos). MATERIAL 2 portaobjetos bien limpios y desengrasados. Pipeta Pasteur Algodn Alcohol al 70% Muestra de sangre venosa con EDTA

31

MANUAL DE BANCO DE SANGRE


DESARROLLO DE LA TCNICA

CAUSAS DE ERROR

32

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Conteo de Glbulos Blancos

OBJETIVO Aprender a realizar y aplicar la metodologa para un recuento de Leucocitos por milmetro cbico de sangre e interpretar el resultado. FUNDAMENTO Para el conteo de leucocitos, se usan mtodos sistemticos que son ms rpidos y precisos, y los mtodos manuales. Todo mtodo manual de recuento celular incluye 3 fases: Dilucin de la sangre Muestreo de la sangre diluida en un volumen Recuento de clulas en ese volumen Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a los campos 1, 3,7 y 9. Para su dilucin, se hace lo mismo que para los hemates pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solucin que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el lquido de Turk. El lquido de Turk es hipotnico de modo que se destruyen los hemates y as no entorpecen en el recuento. El lquido de Turk consta de cido actico glaciar 2ml, violeta de genciana disolucin de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deber filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos. En un principio es un poco difcil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los hemates hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son ms refringentes (ms brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hemates. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmtica y de la membrana nuclear (a veces ms) como lneas finas y brillantes. Esto se observa fcilmente moviendo el microscopio hacia delante y hacia atrs Pipeta de Thoma para glbulos blancos (perla blanca) Equipo para venopuncion (Tubo lila) Boquilla blanca MATERIAL Tubo de goma Tubos de ensayo Papel parafilm Cmara de Neubauer Cubrehematimetro Microscopio Gasas Alcohol al 70% Sangre venosa Liquido de Turk

33

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

PROCEDIMIENTO Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica puncin venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA Colocar el tubo de plstico y la boquilla para aspirar en la pipeta

Llenar la pipeta de glbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilucin de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.

Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador automtico o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos

Montar la laminilla de vidrio en la cmara para recuento. Debe estar limpia y seca. Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequea cerca de un extremo de la cmara para que por capilaridad se llene exactamente.

34

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Dejar 3 minutos que los leucocitos se sedimenten

Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar en los 4 cuadrados angulares. el recuento se incluyen las clulas que cubren o tocan por dentro o por fuera las lneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeo de recuento y no se consideran los que estn en los lmites inferior y derecho. OBSERVACIONES

Cmara de Neubauer, 40x Enfocando uno de los cuadros laterales, se aprecian claramente los 16 cuadros pequeos donde se tienen que contar los leucocitos que hay en ellos. Se debe de tener cuidado de no confundir los restos de eritrocitos hemolizados con los leucocitos, que deben de aparecer como puntos purpuras o negros, como los que estn a las 9

35

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

RESULTADOS Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos, se expresan como concentraciones, que en este caso seran nmero de clulas por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3 Despus de contar los glbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente clculo: N de leucocitos x mm3 = altura x dilucin x rea N de leucocitos x mm3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000 N de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50 N de leucocitos x mm3 = N de leucocitos contados x 50 En el anlisis hecho, los resultados de la cuenta de clulas quedaron as por casilla:

El nmero de leucocitos fue de 111, que al multiplicarse por 50 daba como resultado 5 550/mm3, lo que indica un ndice normal, sin embargo apenas y supera el mnimo, pues el paciente era un hombre, de 41 aos de edad. VALORES DE REFERENCIA (Millones de clulas/mm3) Hombres y Mujeres:..5 000-10 000
Conteo de Plaquetas

OBJETIVO Realizar e interpretar la tcnica para la cuenta de trombocitos o plaquetas en la cmara de Neubauer. FUNDAMENTO Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemosttico del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 , de bordes irregulares, pero pueden tener forma esfrica u ovalada, carecen de ncleo y son muy frgiles. Provienen de una clula gigante que mide de entre 50-100 de dimetro llamada megacariocito.

36

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los mecanismos de la hemostasia (Hemos=sangre, stasis=detencin) adhirindose entre ellas y a las paredes de los vasos sanguneos lesionados, para formar as el trombo plaquetario o tapn hemosttico. El lquido diluyente puede ser una solucin estril de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo (85 milimolar) y cloruro de sodio (31 milimolar). Este lquido se provee listo para usar y su conservacin es indefinida en refrigerador (2 - 10 C) o puede ser tambin oxalato de amonio al 1%. El fundamento del mtodo consiste en la produccin de hemlisis por la utilizacin de un lquido hipotnico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas y sin agrumar por la presencia de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo. MATERIAL Pipeta de Thoma para Tubo de goma Gasas glbulos rojos (perla Tubos de ensayo Caja de Petri roja) Papel parafilm Papel filtro Equipo para Cmara de Neubauer Alcohol al 70% venopuncion (Tubo lila) Cubrehematimetro Sangre venosa Boquilla roja Microscopio Diluyente de plaquetas PROCEDIMIENTO 1. Obtener 10 ml de sangre venosa, en un tubo con anticoagulante EDTA 2. Agitar la sangre de manera suave en el tubo para mezclarla con el anticoagulante 3. Llevar la sangre hasta la marca 1.0 de la pipeta de Thoma. Limpiar la punta con una gasa

4. Aforar con liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 101 de la pipeta (Dilucin 1:100) 5. Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto

6. Colocar la Cmara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el cubrehematmetro sobre las mesetas

37

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

7. Descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la cmara, depositndola entre la meseta y el cubrehematmetro y dejarla difundir por capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen burbujas o se derrame el lquido hacia los surcos

8. Colocar la cmara de Neubauer ya cargada en el interior de una caja de Petri, con papel filtro humedecido en agua para evitar la evaporacin, dejar en reposo de 10 a 15 minutos

9. Observar al microscopio contando en la cuadricula central (para glbulos rojos) las plaquetas que aparecen mucho ms pequeas que los hemates, redondas, alargadas u ovales, altamente refringentes 10. El cuadro central de la cuadricula mide 1.0 mm por lado y est dividido en 16 cuadritos ms pequeos, de tal manera que el nmero total de estos ltimos es de 400, mismos en los que se lleva a cabo el recuento de plaquetas. OBSERVACIONES

38

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Cmara de Neubauer, 10x Enfocando la cuadricula central se aprecian los 25 cuadros centrales, con una gran cantidad de plaquetas en ellos. Se pueden distinguir solo algunos eritrocitos, mucho mayores que las plaquetas, que desprenden gran brillo

Cmara de Neubauer, 40x Uno de los cuadros centrales, lleno de plaquetas, de forma redonda la mayora u ovalada. RESULTADOS Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos, se expresan como concentraciones, que en este caso seran nmero de clulas por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3 Despus de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el nmero obtenido se multiplica por el factor de dilucin de la siguiente manera: N de plaquetas x mm3 = No. De plaquetas contadas X dilucin X 10 Dilucin: 1:100 Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm3 ya que el volumen de la cmara es de 0.1 mm3 El nmero de plaquetas fue de 535, por lo que al realizar los clculos quedaron as: No. de plaquetas = 535 X 100 X 10= 535 000 plaquetas por mm3, lo que indica un ndice elevado de plaquetas. VALORES DE REFERENCIA (Millones de clulas/mm3) Hombres y Mujeres:..150 000 - 450 000

39

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

TCNICAS SEROLGICAS
Chagas

La enfermedad de Chagas o trypanosomosis americana es una infeccin sistmica causada por el protozoo Trypanosoma cruzi. Es una zoonosis en la que participan un gran nmero de reservorios vertebrados y transmisores triatminos. Su importancia radica en su elevada prevalencia, su incurabilidad, las grandes prdidas econmicas por incapacidad laboral, y la muerte repentina de personas aparentemente sanas. Es considerada una "enfermedad desatendida" (neglected disease). La infeccin se transmite principalmente por triatminos, que son hempteros (chinches), de la Subfamilia Triatominae. Otros modos de transmisin son: transfusional, congnito, transplantes de rganos y oral. Se estima que en la regin de las Amricas, se presenta en 21 pases, afecta a unos 8 millones de personas, y se encuentran en riesgo de adquirir la infeccin aproximadamente 100 millones de personas, con 56.000 nuevos casos anuales y 12 000 muertes/ao. La enfermedad se considera, de manera histrica, un severo problema de salud en reas rurales de Mxico, Amrica Central y Sudamrica, con manifestaciones clnicas y caractersticas epidemiolgicas variables. Actualmente, se reportan con mayor frecuencia casos provenientes de ciudades de Latinoamrica, as como de EUA, Europa y Japn, debido a la migracin de personas. Cabe sealar que EUA no puede ser clasificado como un rea de no endemicidad, ya que los estados sureos presentan transmisin enzootica de T. cruzi, aunque la OPS no lo incluye en el mapa de transmisin.
MATERIAL Muestra de suero del paciente Cassette para Chagas Pipeta automtica con puntilla PROCEDIMIENTO 1. Tomar 25 um de suero del paciente 2. Depositarla en el cassete 3. Depositar el reactivo de Chagas 4. Esperar de cinco a diez minutos 5. Observar el resultado.

40

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Panel de Hepatitis

La palabra "hepatitis" significa, simplemente, inflamacin del hgado, sin apuntar a ninguna causa especfica. Una persona con hepatitis puede: Padecer uno o varios trastornos, incluyendo una infeccin vrica o bacteriana del hgado. Presentar lesiones hepticas provocadas por una toxina (una especie de veneno). Presentar lesiones hepticas provocadas por la interrupcin de la irrigacin sangunea normal del hgado. Padecer un trastorno autoinmunitario que afecta al hgado. Haber sufrido un traumatismo abdominal en la zona del hgado. La hepatitis haya sido provocada por uno de los siguientes tres virus: el virus de la hepatitis A el virus de la hepatitis B el virus de la hepatitis C En casos muy poco frecuentes, el virus Epstein Barr (que provoca la mononucleosis) tambin puede desencadenar una hepatitis porque puede provocar inflamacin heptica. Hay otros virus y bacterias que tambin pueden provocar hepatitis, incluyendo los virus de las hepatitis D y E, el virus de la varicela y elcitomegalovirus (CMV). La hepatitis A En los nios, la forma de hepatitis ms frecuente es la hepatitis A (tambin denominada hepatitis infecciosa). Este tipo de hepatitis est causado por el virus de la hepatitis A (VHA), que se encuentra en las heces de las personas infectadas. Las heces infectadas pueden estar presentes en pequeas cantidades en alimentos y objetos (desde el picaporte de una puerta hasta los paales de un beb). El virus de la hepatitis A se contagia: Cuando alguien ingiere algo contaminado con heces infectadas por el VHA (esto facilita su transmisin en condiciones de hacinamiento e insalubridad). A travs del agua, la leche y los alimentos contaminados, sobre todo el marisco. Puesto que la hepatitis A puede ser una infeccin leve, particularmente en la infancia, es posible que algunas personas no se den cuenta de que han contrado la enfermedad y sta pase desapercibida y quede sin diagnosticar. De hecho, aunque las pruebas mdicas indican que alrededor de un 40% de los norteamericanos que viven en medios urbanos han padecido la hepatitis A, slo alrededor de un 5% recuerdan haber estado enfermos. A pesar de que el virus de la hepatitis puede provocar una enfermedad de larga duracin

41

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

(de hasta seis meses), generalmente slo provoca enfermedades de corta duracin y noes causa de enfermedad heptica crnica. La hepatitis B La hepatitis B (tambin denominada hepatitis srica) est causada por el virus de la hepatitis B (VHB). El VHB puede provocar un amplio abanico de sntomas, desde malestar general hasta enfermedad heptica crnica que, a la larga, puede desembocar en un cncer de hgado. El virus de la hepatitis B se contagia: A travs de fluidos corporales infectados, como la sangre, la saliva, el semen, las secreciones vaginales, las lgrimas, y la orina. Mediante transfusiones de sangre contaminada (lo que es muy poco frecuente en EE.UU.). Al compartir agujas o jeringuillas infectadas para inyectarsedroga. Al mantener relaciones sexuales con una persona infectada por el VHB. Mediante el contagio de un recin nacido por su madre infectada. La hepatitis C La hepatitis C se transmite a travs del contacto directo con la sangre de una persona infectada. Los sntomas provocados por el virus de la hepatitis C pueden ser muy parecidos a los provocados por los virus de las hepatitis A y B. No obstante, la infeccin por el virus de la hepatitis C virus puede conducir, a la larga, a una enfermedad heptica crnica y es el principal motivo de transplante de hgado en EE.UU. El virus de la hepatitis C se contagia: Al compartir agujas y jeringuillas para inyectarse droga. Al hacerse tatuajes o piercings con instrumental no esterilizado. Mediante transfusiones de sangre (especialmente antes de 1992; desde entonces, en EE.UU. se hacen controles sistemticos de la sangre donada para detectar esta enfermedad). Mediante el contagio de un recin nacido por su madre infectada. A travs de las relaciones sexuales (aunque se trata de una va de contagio menos habitual). La hepatitis C es tambin un riesgo habitual en los centros de dilisis. Raramente las personas que conviven con un enfermo de hepatitis C se pueden contagiar al compartir artculos que pueden contener la sangre del enfermo, como maquinillas de afeitar o cepillos de dientes.

42

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

MATERIAL Suero del paciente Tira reactiva para hepatitis TCNICA 1. Introducir la tira para deteccin de la hepatitis dentro del tubo con suero hasta la lnea marcada y dejarla hasta que absorba hasta la lnea. 2. Esperar de 5 a 10 minutos. 3. Observar los resultados.

Virus de la Inmunodeficiencia Humana

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) infecta a las clulas del sistema inmunitario, alterando o anulando su funcin. La infeccin produce un deterioro progresivo del sistema inmunitario, con la consiguiente "inmunodeficiencia". Se considera que el sistema inmunitario es deficiente cuando deja de poder cumplir su funcin de lucha contra las infecciones y enfermedades. El sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) es un trmino que se aplica a los estadios ms avanzados de la infeccin por VIH y se define por la presencia de alguna de las ms de 20 infecciones oportunistas o de cnceres relacionados con el VIH. El VIH puede transmitirse por las relaciones sexuales vaginales, anales u orales con una persona infectada, la transfusin de sangre contaminada o el uso compartido de agujas, jeringuillas u otros instrumentos punzantes. Asimismo, puede transmitirse de la madre al hijo durante el embarazo, el parto y la lactancia.

43

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

MATERIAL Suero del paciente Cassette para el diagnstico del virus del VIH Pipeta automtica con puntillas PROCEDIMIENTO 6. Tomar 25 um de suero del paciente 7. Depositarla en el cassete 8. Depositar el reactivo para VIH 9. Esperar de cinco a diez minutos 10. Observar el resultado.

VDRL

La sfilis es una enfermedad de transmisin sexual (venrea),causada por la bacteria Treponema pallidum. Esta enfermedad consta de tres etapas que pueden prolongarse durante muchos aos de vida. La prueba de VDRL es una prueba de deteccin para sfilis. Este examen mide sustancias, llamadas anticuerpos, que se pueden producir en repuesta al Treponema pallidum. La reaccin de floculacin es una prueba de agrupamiento microscpico del antgeno y el anticuerpo. Los resultados positivos de una prueba de este tipo dependen del grado de material floculante formado en la substancia de prueba. La prueba de VDRL comenz a desarrollarse antes de la Primera Guerra Mundial, con la participacin de August von Wassermann y AlbertLudwig Sigesmund Neisser, esta prueba durante el transcurso de investigaciones fue modificada, ya que la prueba de VDRL emplea marcadores indirectos de la

44

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

enfermedad, por estarazn a esta prueba se le conoce como una prueba no-treponemica para la identificacin del sfilis. MATERIAL Suero del paciente Antgeno VDRL Control positive y negative Aplicadores Placa Agitador de placas Pipeta

PROCEDIMIENTO 1. Tomar con la pipeta un poco de suero del paciente.

2. Colocar una gota de suero en la placa

3. Colocar una gota de control positivo y otra del control negativo

45

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

4. Colocar el reactivo para VDRL sobre las tres gotas previamente colocadas.

5. Extender con un aplicador los lastres gotas

6. Poner la placa sobre el agitador de placas durante 4 minutos

7. Observar los resultados.

46

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

Rosa de Bengala

La brucelosis o Fiebre de Malta es una enfermedad infecciosa causada por la bacteriaBrucella, que normalmente se transmite entre animales y afecta al ganado vacuno (B. abortus), cabras y ovejas (B. melitensis), perros (B. canis) y cerdos (B. suis) siendo, por tanto, una enfermedad ms comn en zonas rurales. Esta enfermedad se trasmite al ser humano mediante el consumo de productos lcteos no pasteurizados, contacto directo con rganos de animales infectados y mediante la inhalacin de aerosoles infectados. La enfermedad puede dar formas crnicas y persistir durante aos. La brucelosis es todava comn en la regin mediterrnea, Oriente Medio, Asia central y algunas partes de Latinoamrica, aunque en los ltimos diez aos la infeccin ha resurgido con gran prevalencia en pases de Europa del Este, los Balcanes y Eurasia. La infeccin por Brucella melitensis se sigue reconociendo como un importante reto de salud pblica que supone una gran carga econmica y financiera en aquellos pases en los que esta enfermedad es endmica. Brucella melitensis es muy contagiosa en humanos y la enfermedad puede cronificarse y afectar a varios sistemas del organismo, a no ser que se diagnostique y trate de forma rpida y eficaz. Sin embargo, la OMS considera esta enfermedad como una de las siete enfermedades zoonticas que ha sido histricamente desatendida. Las caractersticas fundamentales as como la epidemiologa de la brucelosis humana son conocidas, aunque muchas veces esta enfermedad no se detecta. MATERIALES Antgeno de Rosa de Bengala Suero del paciente Portaobjetos limpio agitador de placas Aplicadores Pipeta automtica Placa PROCEDIMIENTO 1. Tomar un poco de suero del paciente con la pipeta

47

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

2. Colocar una gota del suero en la placa

3. Colocar una gota del antgeno de Rosa de Bengala

4. Mezclar con un agitador

5. Realizar movimientos rotatorios

6. Observar resultados

48

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD
Determinacin de los grupos sanguneos

Un grupo sanguneo es una clasificacin de la sangre de acuerdo con las caractersticas presentes o no en la superficie de los glbulos rojos y en el suero de la sangre. Las dos clasificaciones ms importantes para describir grupos sanguneos en humanos son losantgenos (el sistema ABO) y el factor Rh. El sistema ABO fue descubierto por Karl Landsteiner en 1901, convirtindolo en el primer grupo sanguneo conocido; su nombre proviene de los tres tipos de grupos que se identifican: los de antgeno A, de antgeno B, y "O". Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reaccin inmunolgica que puede desembocar enhemlisis, anemia, fallo renal, shock y muerte. El motivo exacto por el que las personas nacen con anticuerpos contra un antgeno al que nunca han sido expuestas es desconocido. Se piensa que algunos antgenos bacterianos son lo bastante similares a estos antgenos A y B que los anticuerpos creados contra la bacteria reaccionan con los glbulos rojos ABOincompatibles. El cientfico austraco Karl Landsteiner recibi el Premio Nobel de Fisiologa o Medicina en1930 por sus trabajos en la caracterizacin de los tipos sanguneos ABO. Adems de los grupos mayoritarios, hay otros treinta y dos muchsimo ms escasos. MATERIAL Centrfuga 6 tubos de ensayo 3 pipetas pasteur 5 aplicadores Solucin de albmina al Eritrocitos humanos tipo 22% A, B y O en suspensin al Sueros tipificadores 5% con solucin salina. (antiA, antiB y antiAB) Muestra de suero PROCEDIMIENTO 1. Rotular 3 tubos como antiA, antiB, antiAB y los otros 3 como A, B y O y otro como autotestigo. 2. Realizar una suspensin de eritrocitos al 5% con solucin salina con la sangre que se coagulo. 3. Agregar una gota de suero tipificador antiA, B y AB segn corresponda, en el tubo de autotestigo colocar una gota de albmina bovina. 4. Centrifugar a 1000rpm por 1min 5. Desprender el botn de clulas que queda en el fondo del tubo agitndolo suavemente y observar la aglutinacin. 6. Anotar resultados 7. Colocar una gota del suero del paciente en los tubos marcados como A, B y O y colocar 2 gotas de la suspensin de eritrocitos A, B y O segn corresponda. 8. Mezclar suavemente 9. Centrifugar a 1000rpm por 1min 10. Desprender el botn del fondo agitndolo suavemente y observar aglutinacin 11. Anotar resultados

49

MANUAL DE BANCO DE SANGRE


RESULTADOS

GRUPO

A B AB O

Reaccin de los eritrocitos con los antisueros tipificadores ANTI-A ANTI-B ANTI-AB + + + + + + + -

Reaccin del suero con antgenos conocidos A B O + + + + -

Prueba mayor y menor (Compatibilidad sangunea)

Estas pruebas determinan si existe compatibilidad sangunea entre el donante y el receptor a travs de enfrentar sus sueros y eritrocitos en una prueba in vitro. De esta manera se descartan anticuerpos irregulares y de otros grupos 29sanguneos diferentes al ABO y Rh que pudieran reaccionar al momento de la transfusin. MATERIAL Centrfuga Solucin de albmina Tubo con sangre y EDTA Bao Mara bovina al 22% (tanto del receptor como Tubos de ensayo Solucin salina isotnica el donador) Pipetas pasteur Suero (tanto del receptor Suero de Coombs como el donador) PROCEDIMIENTO FASE SALINA: 1. Con la sangre con EDTA, realizar el lavado de eritrocitos con solucin salina (lavar 3 veces). 2. Colocar en un tubo de ensaye 2 gotas de suero del donador y dos gotas de eritrocitos del receptor 3. Colocar en el otro tubo de ensaye 2 gotas del suero del receptos y dos gotas de eritrocitos del donador 4. Colocar en ambos tubos 2 gotas de solucin salina isotnica 5. Centrifugar por 1000rpm por 1min 6. Observar el botn del fondo, agitar suavemente hasta que se disuelva. FASE DE ALBMINA: 1. En dos tubos limpios, realizar los pasos 1 y 2 de la tcnica anterior. 2. Colocar 1 gota de albumina bovina y agitar suavemente. 3. Centrifugar a 1000rpm por 1min 4. Observar el botn del fondo y agitar suavemente hasta que se disuelva. FASE DE COOMBS (CONFIRMATORIA) 1. Realizar los pasos 1 y 2 nuevamente 2. Colocar 1 gota de reactivo de Coombs y agitar suavemente. 3. Centrifugar a 1000rpm por min 4. Observar el botn del fonso y agitar suavemente hasta que se disuelva.

50

MANUAL DE BANCO DE SANGRE


RESULTADOS

Si en ninguna de las fases se observa aglutinacin el resultado es que ambas sangre son compatibles, si en alguna se observa algn tipo de aglutinacin o no se disuelve el botn de sangre, las sangre no son compatibles mutuamente.
Prueba de Coombs

Permite demostrar la presencia de anticuerpos incompletos mediante el uso de un segundo anticuerpo, que es una antiglobulina. Prueba de COOMBS DIRECTA: se emplea la antiglobulina para la deteccin de anticuerpos incompletos antieritrocitarios, que ya se encuentran unidos "in vivo" a los hemates. Prueba de COOMBS INDIRECTA: se emplea la antiglobulina para la deteccin de anticuerpos incompletos antieritrocitarios no unidos "in vivo" a los hemates. Por ello se realiza en dos fases, en la primera se enfrentan los anticuerpos frente a hemates de antigeinicidad conocida para provocar su unin, y posteriormente se aade al antiglobulina hemaglutinante. COOMBS DIRECTA MATERIAL: Centrfuga Bao Mara Solucin salina isotnica Reactivo de Coombs Suspensin de eritrocitos problema y eritrocitos normales previamente lavados al 2% 2 tubos de ensaye PROCEDIEMIENTO Colocar en 1 tubo de ensaye 2 gotas de suspensin de eritrocitos problema al 2% Aadir 2 gotas del suero de Coombs Preparar de la misma forma un tubo con suspensin de eritrocitos normales (testigo) Centrifugar ambos tubos a 1000rpm por 1min Buscar aglutinacin desprendiendo el botn del fondo.

1. 2. 3. 4. 5.

RESULTADOS La aglutinacin de los eritrocitos problema con el suero de Coombs indica que dichos eritrocitos estn recubiertos con anticuerpos especficos. El tubo testigo no debe presentar aglutinacin.

51

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

COOMBS INDIRECTA MATERIAL Centrfuga Bao Mara Suspensin de eritrocitos O Rh positivos al 5% Solucin salina isotnica 3 tubos de ensaye Suero anti-D diluido a ttulo de subaglutinante Suero problema Suero de Coombs PROCEDIMENTO Colocar en un tubo 2 gotas del suero problema y aadir 2 gotas de la suspensin de eritrocitos O Rh positivos al 5% Colocar en otro tubo (testigo) dos gotas de suero anti-D y 2 gotas de la suspensin de eritrocitos O Rh positivo Centrifugar a 1000rpm por 1min Desprender botn del fondo en busca de aglutinacin, en caso de no existir o ser dbil se resusupenden y se incuban por 20 minutos a 37C. Lavar eritrocitos una vez. Aadir 2 gotas de suero de Coombs Mezclar bien y centrifugar a 1000rpm por 1min Desprender botn y buscar aglutinacin. RESULTADOS La aglutinacin de los eritrocitos con el suero problema indica la presencia de anticuerpos aglutinantes. La aglutinacin de los eritrocitos con suero problema y suero de Coombs seala la presencia de Anticuerpos no aglutinantes en el suero problema

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

52

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

REACCIONES POSTRANSFUSIONALES
Se denomina reaccin postransfusional a los efectos desfavorables que pueden aparecer en un paciente durante o despus de la transfusin de algn hemoderivado a consecuencia del mismo. A pesar de los avances desarrollados en la obtencin y conservacin de la sangre, la transfusin conlleva riesgos que no hay que olvidar a la hora de su indicacin que derivan de la naturaleza del producto ( diversidad antignica , potencial infectivo), alteraciones del producto en su almacenamiento y cambios de volumen y de electrolitos en el sujeto. Desde la aparicin del SIDA la actitud de la poblacin frente a la transfusin ha cambiado, demandando una transfusin sin riesgos. Dicha demanda no es actualmente alcanzable. Se distinguen reacciones transfusionales inmediatas y tardas segn el momento de aparicin.

REACCIONES POSTRANSFUSIONALES INMEDIATAS.


1.- Reacciones hemolticas agudas por incompatibilidad eritrocitaria . Se producen por la lisis intravascular de los hematies transfundidos. Suelen deberse a incompatibilidad ABO (muy frecuentemente en relacin con error en la identificacin del paciente o de la muestra de sangre ), ms raramente pueden causar reacciones hemolticas los sistemas Kidd y Duffy. Los sntomas observados son fiebre, escalofros, urticaria, opresin torcica, dolor lumbar, taquicardia , nuseas y vmitos. Si la reaccin es severa se produce un colapso circulatorio debido a la activacin del complemento por la lisis intravascular y liberacin de sustancias vasoactivas . En ocasiones se desarrolla coagulacin intravascular diseminada ( CID ) a consecuencia de la liberacin de sustancias intraeritrocitarias ( tromboplastina tisular ) que activan la coagulacin. Como consecuencia de la hipotensin ( colapso ) y CID se puede producir oliguria y anuria ( insuficiencia renal aguda ). El diagnstico se realiza tras repetir la prueba cruzada que demuestra la incompatibilidad y observar la evidencia de hemlisis (hemoglobinuria, hemoglobinemia, LDH, bilirrubina total y no conjugada). La prueba de Coombs directa es positiva. El tratamiento se basa en promover la diuresis ( procurar flujo urinario mayor de 100 ml/hora ) y mantener la tensin arterial( tensin arterial sistlica mayor de 100 mm de Hg ) mediante adecuada hidratacin/transfusin y diurticos ( furosemida / manitol ) . En caso de CID, el tratamiento sustitutivo mediante plasma fresco congelado segn sea preciso. Si fuera necesario por fracaso renal se realizar hemodilisis.

53

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

2.- Reacciones febriles no hemolticas. Suelen estar causadas por anticuerpos antileucocitarios ( leucoaglutininas ). Se producen en pacientes previamente sensibilizados a antgenos del sistema HLA con historia de transfusiones previas o embarazos. Clnicamente se manifiestan por fiebre y escalofros. Son las ms frecuentes. El tratamiento dada la escasa repercusin del cuadro es con antipirticos tipo paracetamol u otro. En caso de no ceder se pueden emplear derivados opiceos tipo meperidina. Se pueden prevenir este tipo de reacciones en pacientes con antecedentes mediante medicacin pretransfusional ( esteroides + antihistamnicos + antitrmicos ) y utilizando sangre pobre en leucocitos. 3.- Reacciones alrgicas. En general, no suelen ser graves. Se atribuyen a anticuerpos en el receptor contra las protenas del plasma del donante. Se producen en 1-2% de las transfusiones y se manifiestan con signos y sntomas de urticaria. Responden al tratamiento con antihistamnicos como polaramine, no siendo preciso suspender la transfusin. Las reacciones anafilcticas son muy raras. La causa suele ser la existencia de anticuerpos antiinmunoglobulina A en individuos con dficit hereditario de dicha inmunoglobulina. Son reacciones muy graves que precisan tratamiento urgente mediante hidratacin, adrenalina, esteroides y otras medidas de soporte vital. 4.- Reacciones por sobrecarga circulatoria. Se producen ms fcilmente en pacientes con alteraciones cardiolgicas que adems se ven agravadas por la situacin de anemia. La infusin demasiado rpida o de demasiado volumen son factores contribuyentes a esta complicacin, sobre todo en caso de sangre con largo periodo de almacenamiento. Por este motivo, en este tipo de enfermos se debe transfundir muy lentamente, aunque sin sobrepasar las 4 horas lmite con cada unidad y valorar el volumen a infundir. Se recomienda tambin transfundir la sangre ms fresca posible y la administracin de un diurtico previo. 5.-Edema pulmonar no cardiognico 6.-Hemlisis no inmunolgicas. 7.- Sepsis bacteriana

54

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

8.-Complicaciones por transfusin masiva

EFECTOS ADVERSOS RETARDADOS.


Son aquellos efectos atribuibles a la transfusin que aparecen en un periodo no inmediato ( al cabo de das, semanas o meses ). 1.-Reacciones hemolticas demoradas o tardas. Se deben a la produccin de anticuerpos de forma rpida frente a antgenos transfundidos, haya o no existido inmunizacin previa por embarazo o transfusin. Se detecta anemizacin del paciente unos das despus de la transfusin. Pueden producirse escalofros o fiebre, as como aumento de la bilirrubina y positivizacin de la prueba de Coombs. Ocasionalmente pueden ser graves con marcada hemoglobinemia y hemoglobinuria. La mayor destruccin eritrocitaria se produce entre el da 4 y el 13 postransfusin. El tratamiento pasa por la identificacin del anticuerpo y la transfusin si es preciso de hematies que carezcan del antgeno, y conseguir una buena hidratacin y diuresis. 2.-Transmisin de enfermedades infecciosas. A pesar de los avances en los tests microbiolgicos a que se someten todas las donaciones de sangre , y el test de autoexclusin previo a la donacin, el riesgo de transmisin de enfermedades no est completamente erradicado. Tan slo los productos que pueden ser tratados con las ltimas tcnicas tienen un riesgo prcticamente nulo como es el caso de las inmunoglobulinas, albmina y los factores de concentrados de la coagulacin. Los principales agentes infecciosos que pueden ser trasmitidos a travs de la transfusin son los siguientes : *Hepatitis C. *Hepatitis B * Virus de la inmunodeficiencia humana - VIH -. *Sfilis. * Otras infecciones (Malaria, otras hepatitis , Citomegalovirus, Toxoplasmoxis )

55

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

HEMODERIVADOS
La sangre es un tejido muy particular, que posee numerosas propiedades. La sangre circulante est compuesta por elementos celulares (hematies, leucocitos, plaquetas) suspendidos en una solucin acuosa de sales y proteinas (plasma).Constituye el medio de transporte del oxgeno y otras sustancias necesarias para el metabolismo celular. Algunos componentes ofrecen proteccin contra la invasin de organismos extraos. Otros preservan la integridad de los vasos sanguneos sanos, limitan la prdida de los vasos lesionados y mantienen la fluidez de la sangre. La mayora de pacientes ingresados en unidades de cuidados intensivos requerirn uno o ms componentes sanguneos durante su estancia. Actualmente es posible reponer cualquier componente sanguneo mediante transfusiones. Sin embargo cuando se introduce cualquier material extrao en el organismo pueden producirse graves reacciones entre el tejido del donante y las defensas del receptor. Es importante, por tanto, comprender la constitucin gentica nica del individuo, la capacidad del organismo para reconocer antgenos extraos y producir anticuerpos contra ellos, y la naturaleza de los antgenos que se encuentran en las clulas sanguneas. Se efectan pruebas de laboratorios para asegurar que la sangre y los hemoderivados son estrictamente compatibles con el receptor y que los riesgos de la transfusin se reducen a un mnimo. LOS HEMODERIVADOS SE COMPONEN DE:

SANGRE TOTAL: La sangre total es aquella que se colecta de un solo donador, en una bolsa de 500 ml. Diluida de 1: 8 con anticoagulante y conservadores (citrato de sodio, fosfato, dextrosa y adenina). Es de uso limitado a los procedimientos de exanguinotransfusin, sobre todo en neonatos y algunos casos de sangrado agudo profuso. En un adulto de 70 kg de peso, la transfusin de 1 unidad de sangre total produce un incremento de casi 1 a 1.5 g/dl de hemoglobina y de 3 a 5% de hematocrito, y se hace evidente en 48 a 72 hrs. El punto teraputico medular de la transfusin sangunea es

56

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

incrementar la demanda de oxgeno de acuerdo con las necesidades del paciente. los beneficios asumidos de un incremento en la masa eritrocitaria no siempre se traducen en los verdaderos beneficios en trminos de transporte de oxgeno en pacientes crticos.

PAQUETE GLOBULAR: El paquete globular tiene un volumen aproximado de 250 a 300 ml y contiene todos los eritrocitos de 1 unidad de sangre, pero slo una pequea fraccin de plasma (hematocrito 80%), as como plaquetas y leucocitos en pequeas cantidades no funcionales. debe mantenerse en refrigeracin a 4 c. No debe mantenerse fuera de refrigeracin por ms de 6 hrs. Casi nunca requiere calentamiento para ser trasfundido y esto no debe ser hacerse si no es en un incubador especfico a 37 c. La transfusin est indicada para incrementar la masa eritroctica en un paciente en quien se requiera aumentar la capacidad de transporte de oxgeno por sndrome anmico.

PLASMA: Una unidad de plasma tiene un volumen aproximado de 200 a 250 ml. Si es separado y congelado a -30 c dentro de las 6 horas siguientes a la obtencin, conserva la actividad de todos los factores de la coagulacin y si se mantiene a esta temperatura posee una vigencia hasta de un ao.

57

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

PLASMA FRESCO CONGELADO: El plasma se separa inmediatamente despus de la recoleccin de sangre por centrifugacin en fro y se congela enseguida, esto permite conserva la actividad prcticamente ntegra de todos los factores de coagulacin.

PLASMA DE BANCO O REFRIGERADO: Si no se congela y se conserva en refrigeracin, los factores lbiles de la coagulacin (v y viii) pierden su actividad procoagulante y, por tanto, no es til para el tratamiento de enfermos con deficiencias de estos factores.

BOLSAS PARA FRACCIONAR SANGRE: Artculo de uso mdico, estril, elaborado con materiales plsticos, metlicos y ltex, atxico, libre de pirgenos y no reactivo tisular. Consiste en una serie de bolsas unidas

58

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

entre s, mediante tubos de dimensiones apropiadas, una de las cuales puede contener una solucin aditiva. la bolsa principal debe contener un anticoagulante y estar unida a un tubo transportador primario equipado con aguja.

CRIOPRECIPITADO: Se obtienen por congelacin del plasma fresco congelado, con menos de 6 horas de extrado y descongelacin lenta entre 1 y 6 c, o bien usando un horno de microondas especial. El crioprecipitado contiene 80 a 100 u de factor viii, aproximadamente 250 mg de fibringeno, 30% de actividad PLASMTICA DEL FACTOR XIII, 40 A 70 % DE FACTOR DE VON WILLEBRAND Y FIBRONECTINA. Debe conservarse en congelacin entre 20 y 30 c hasta 12 meses. y deben de descongelarse a 37 c antes de su aplicacin y transfundirse en cuento sea posible, dentro de las 4 a 6 horas. es el indicado para el tratamiento de pacientes con hemofilia a. LEUCOCITOS:

Los nicos leucocitos que se usan para transfusin son los granulocitos y la utilidad principal est dada en pacientes con neutropenia intensa y un proceso infeccioso donde, a pesar del uso de antimicrobianos, la morbi mortalidad por neutropenia es elevada. La indicacin es en neutropenia menor de 0.5 x 109 /l (500 neutrfilos por microlitos). Los granulocitos tienen un recambio rpido debido a lo corto de su permanencia intravascular (aproximadamente 6 horas).

59

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

La utilidad nicamente ha sido ms evidente en recin nacidos. los granulocitos de 1 unidad de sangre son insuficientes y poco tiles; debe usarse procedimiento de afresis utilizando un separador celular de flujo continuo o intermitente, que en el lapso de 2 o 3 horas permita obtener suficientes granulocitos Deben utilizarse lo ms pronto posible despus de su extraccin, pero puede ser visible si se conservan sin agitar a 22 c, hasta de 8 a 24 horas. los mejores parmetros para la valoracin son la negativizacin de los cultivos, datos clnicos, ms que el incrementos de las cifras. PLAQUETAS: El empleo de plaquetas es una prctica que se ha incrementado en el curso de los ltimos aos sobre todo en los pacientes oncohematolgicos. Esto es debido a la mayor disposicin de concentrados plaquetarios de varios o un solo donador, por medio de afresis . Cada unidad de plaquetas obtenida de sangre fresca por centrifugacin contiene aproximadamente 5.5 x 10 10 plaquetas en un volumen de 50 ml de plasma. Debe almacenarse a 22 c (+/- 2) en agitacin continua y suave, y conservar su viabilidad hasta por 72 horas en sistemas plsticos con anticoagulante.

60

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

TCNICAS DE SEPARACIN
Precipitacin espontnea Reposo 24-48 horas a 4C Interaccin diferencial campos fsicos: Centrifugacin electroforesis Interaccin diferencial con medios slidos: intercambio inico Ultrafiltracin cromatografa TECNICAS: 1. FRACCIONAMIENTO DE LA SANGRE FUNDAMENTO La eleccin cuidadosa del elemento a fraccionar favorece el aprovechamiento ptimo de la sangre, es decir la donacin de una persona puede beneficiar a cuatro pacientes al separarse en: Concentrados eritrocitarios, plasma fresco congelado, plasma desprovisto de F-VIII, concentrado plaquetario y concentrado de factor VIII crioprecipitado. MATERIAL Y EQUIPO Tijeras Centrfuga Refrigerada. Balanza. Prensa. Hematron. Bolsas de coleccin de sangre. Pinzas Rodillo. Pinzas de Kelly

61

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

PROCEDIMIENTO A) Preparacin de glbulos rojos (Bolsa doble) y plasma fresco congelado (P.F.C.). 1) Para este procedimiento se debe de usar una unidad de recoleccin que tenga una bolsa de transferencia. 2) La separacin del plasma de los glbulos rojos puede ser o hacerse de la siguiente forma: Por centrifugacin entre (3000) RPM Durante 15 minutos la temperatura de la centrfuga debe ser de 4C. TECNICA DE SEPARACION 3) Una vez centrifugadas las bolsas de sangre, Colocar la bolsa de sangre centrifugada en el extractor de plasma. 4) Libere el mecanismo de presin suavemente 5) Cierre con una pinza hemosttica el tubo que comunica a una de las bolsas satlite. 6) Romper el sello de la bolsa madre y dejar fluir el plasma en la otra bolsa satlite. Se debe usar una bolsa para medir la cantidad de plasma obtenido. 7) Cerrar con otra pinza hemosttica el tubo de comunicacin , por el cual esta fluyendo el plasma , cuando haya pasado la cantidad estipulada, sellar el tubo piloto con un sellado relectrnico (hematrn). 8) Identificar la unidad de plasma con el mismo sistema que se us para la bolsa madre, cortar el piloto despus de haber sellado. 9) Pilotear con una separacin de 5 10 cm. de separacin todo el tubo piloto que qued en la bolsa del concentrado eritrocitario y colocarlo a un costado de la bolsa para pruebas futuras. 10) Del mismo modo para el paquete de plasma como se indic anteriormente , pilotear el tubo y adicionarlo al extremo de la bolsa. 11) El concentrado eritrocitario debe ser guardado en un refrigerador especial a una temperatura entre 4 y 6C para su conservacin. 12) El plasma se guarda o se debe mantener a una temperatura de -20C para su conservacin

62

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

2) BOLSA TRIPLE FUNDAMENTO B) Preparacin de Concentrados Plaquetarios: En la recoleccin de sangre para preparar plaquetas, se debe observar la siguiente recomendacin: Dejar la sangre a temperatura ambiente que es entre 20-24C , hasta que inicie el proceso de separacin. Es necesario practicar dos centrifugaciones, la primera a baja velocidad produce el plasma rico en plaquetas (PRP) y la segunda a alta velocidad , produce un concentrado de plaquetas ms una unidad de plasma pobre en plaquetas (PPP). Se sealan tres factores importantes en este procedimiento: 1. El tiempo y la fuerza gravitacional de centrifugacin. 2. La tcnica de re suspensin de plaquetas despus de la centrifugacin .3. El pH del plasma. MATERIAL Centrfuga Refrigerada. Hematron. Bolsas de coleccin de sangre. Pinzas Rodillo. Pinzas de Kelly Extractor Etiquetas Agitador para plaquetas PROCEDIMIENTO 1. La centrfuga refrigerante debe tener una temperatura de 20C. 2. Centrifugar a 1800 RPM, durante 10 minutos. 3. Colocar la bolsa de sangre en el extractor y separar el plasma rico en plaquetas en una bolsa satlite, pinzar el tubo piloto por donde fluye el plasma o sellar una vez terminado el paso de separacin de PRP y cortar. 4. Anotar datos del donador como son nombre, grupo sanguneo y Rh. sin poner la etiqueta que quedar al final. (Esto es para tener un mejor control en la identificacin de los productos a obtener.

63

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

5. Centrifugar el plasma rico en plaquetas P.R.P. a una velocidad de 3000 R.P.M. x 10 minutos, a una temperatura de 20C. 6. Colocar la bolsa en el extractor y transferir el plasma sobrenadante a la segunda bolsa satlite, dejar un volumen de plasma , no menor de 50ml., as las plaquetas sern conservadas a 20C. 7. Identificar los productos, tanto el PRP, como el C.P. con las etiquetas elevadas sealndola fecha, hora de preparacin y vencimiento. 8. Colocar los concentrados plaquetarios en un agitador para plaquetas a +20C, (es aproximadamente de 1 a 2 horas.) de 3 a 5 das de la bolsa colectora. 9. El plasma pobre en plaquetas se guarda y conserva a una temperatura de -20C para su almacenamiento por un ao.

3) CRIOPRECIPITADO DE FACTOR VIII FUNDAMENTO El Crioprecipitado de factor VIII o factor anti hemoflico (FAH) (es la porcin del plasma que precipita en frio, despus de que el P.F.C. ha sido descongelado bajo condiciones congeladas.) Contiene la mayor parte del factor VIII y cierta cantidad de fibringeno, de los existentes en la unidad original de plasma. Es la protena que precipita a temperatura de -120C y posteriormente de descongelar el plasma MATERIAL Centrifuga Bolsas triples y satelite Extractor Balanza Hematron Etiquetas

64

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

PROCEDIMIENTO 1. Colocar la sangre total del donador en bolsas triples y una vez obtenida y centrifugar a3000 RPM durante 15 minutos. 2. Pasar con un extractor el plasma a una bolsa satlite , pesando en una balanza para precisar el volumen, sellar el tubo piloto y separar el P.G. refrigerndolo de 2 a 6C. 3. Poner los datos correspondientes a la bolsa del plasma (no etiqueta) 4. Congelar el plasma rpidamente con hielo seco y acetona para que de un proceso de congelacin (completa o dejar congelar a una temperatura de 20C durante toda una noche 14 a 18 Horas) de -120C. 5. Una vez congelado el plasma, descongelarlo a una temperatura de 1 a 6C. 6. Ya que estn descongelados, centrifugar el plasma a 4000 RPM durante 15 minutos, a una temperatura de 4C. 7. Terminada la centrifugacin, colocar la bolsa en un extractor de bolsas y separar el plasma en la segunda bolsa satlite. 8. Separado ya el plasma, etiquetar debidamente los productos ya fraccionados con todos los datos. 9. Los plasmas y crioprecipitados se guardarn a una temperatura de -20C para su conservacin

65

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

CONSERVACIN Y TRANSPORTE DE HEMODERIVADOS


CONSERVACION DE HEMODERIVADOS

PRODUCTO Concentrado eritrocitario Concentrado eritrocitario Concentrado eritrocitario Plasma fresco congelado

ANTICUAGULANTE

CONSERVADOR

ADSOL

41 das

C.P.D o A.C.D

21 dias

C.P.D.A

35 dias

1 ao

Plasma sin factor VII Plasma pobre en plaquetas Factor VIII o crioprecipitado

1 ao

1ao

1 ao

66

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

TRANSPORTE DE HEMODERIVADOS

Las unidades de sangre y componentes sanguneos, debern mantenerse durante su traslado a la temperatura ideal de conservacin, de acuerdo al componente de que se trate Las unidades se colocarn en el interior de contenedores termoaislantes, de tal forma, que no sufran movimientos violentos, especialmente cuando se trate de unidades celulares en estado lquido. Los contenedores no debern colocarse en los compartimentos de carga de camiones o autobuses Tratndose de transportacin area, las unidades de sangre y componentes sanguneos, se debern trasladar en cabinas presurizadas, salvo aqullas que se conservan en congelacin.

Se har una estimacin de la temperatura y aspecto fsico de las unidades al momento de su recepcin

67

MANUAL DE BANCO DE SANGRE

BILIOGRAFA

Balcells, Alfonso, La clnica y el laboratorio, 18 Edicin, Editorial Masson, Mxico 2001,Pginas: 158, 169, 178, 183,185, 187. Fisbach, Talasaka, Frances, Manual de pruebas diagnosticas, 5 Edicin, Editorial McGraw HillInteramericana, Mxico, 1997,Pagina:32,34,38,39,44,45,47,48,54,57,59,64,67,68,69,125,126,127. Guerrero, Garca, Rafael, Manual de laboratorio de Hematologa, 1 edicin, UniversidadVeracruzana, 1997, Xalapa, Ver, paginas: 73, 81,85. Mckenczie, B.,Shirlyn, Hematologa clnica,2 edicin , Editorial el manual moderno,Mxico,2000, pagina:733,736

http://www.scielo.org.ve/scielo.php?pid=S0798-04692002000200004&script=sci_arttext
encontroiberico.no.sapo.pt/docs/Serologia_UHofle.pdf www.monografias.com Biologia

Вам также может понравиться