Resumen La meningitis es una infeccin del sistema nervioso central, se desarrolla a partir de complicaciones infecciosas en las vas respiratorias

que se dan con mas frecuencia en la poblacin infantil. Uno de los microorganismos ms recurrentes en estas infecciones es el S. pneumoniae, que debido a su patogenicidad se ha convertido en un problema de salud pblica en Mxico. En Guerrero no se aplican los mtodos para su identificacin, por lo tanto no hay registros de su prevalencia y distribucin en la poblacin del estado. Los mtodos usuales para la identificacin de meningitis causada por S. pneumoniae son principalmente bacteriolgicos. Sin embargo la aplicacin de mtodos moleculares es inexistente a pesar de su precisin y confiabilidad. Uno de los mtodos es la PCR que adems permite identificar y clasificar todos los serotipos. Por lo tanto consideramos que la estrategia que planteamos en este proyecto es de gran relevancia ya que aportara las bases para la realizacin de planes de prevencin, control, tratamientos y diseo de vacunas en base a la prevalencia de los serotipos locales. Para as contribuir Palabras clave: meningitis, s. pneumoniae, infecciones en las vas respiratorias, serotipos y La PCR.

PROBLEMA PARA EL TRABAJO INTEGRADOR FINAL DEL QUINTO TRIMESTRE

Grupo 504, Equipo 3. Asesor: Dr. Oscar del Moral Hernndez A pesar de los notables avances en la prevencin, diagnstico y tratamiento de las enfermedades infecciosas en las ltimas tres dcadas, las meningitis bacterianas permanecen como uno de los problemas ms importantes de salud pblica en todo el mundo, dentro de las 10 principales causas de muerte por enfermedades infecciosas, con uno a dos millones de casos anuales y 135,000 muertes; el problema es mayor en pases pobres y en algunas regiones de frica, Asia y Latinoamrica, en donde su mortalidad llega a ser de 17 a 60% de los casos, y en pases desarrollados, de 3 a 19%. Sus secuelas neurolgicas, como sordera, ceguera, retraso psicomotor, hidrocefalia, etctera, se presentan hasta en 54% de los que sobreviven. En Mxico, las meningitis bacterianas constituyen tambin una importante causa de morbilidad, mortalidad y secuelas neurolgicas, pero su epidemiologa y frecuencia evaluadas por cifras de mortalidad y morbilidad son poco confiables a causa de las deficiencias en su diagnstico microbiolgico, comunicacin de casos y registro de muertes. a) Mencione los factores de riesgo para presentar una infeccin menngea. b) Describa la epidemiologa de las infecciones menngeas causadas por bacterias en Mxico y en Gro. c) Enumere los microrganismos capaces de infectar meninges. d) Describa los signos y sntomas que presentan los pacientes infectados. e) Cuando sospechas de una infeccin menngea, como tomas, transporta, conservas y cultivas las muestras obtenidas de los pacientes infectados. Enfocarse en este problema: Describa la importancia de la aplicacin de vacunas para prevenir la meningitis causada por Streptococcus pneumoniae. Describe como identificas a S. pneumoniae de manera convencional y molecular. Indica que otros estudios de gabinete se solicita a los pacientes infectados y porque? Describa las pruebas bioqumicas que utilizaste para identificar a los patgenos obtenidos de las muestras clnicas. Describe como realizas el antibiograma para S. pneumoniae y en base a esto como reportara al mdico. Disea un canal de comunicacin para generar cultura en salud en los pacientes y para mantener actualizado al personal de salud.

1. Marco terico. 1.1 Generalidades El Sistema nervioso central (SNC) de los vertebrados est formado por el encfalo y la mdula espinal, est rodeado de capas de tejido nervioso y una cavidad central llena de lquido y revestida de epitelio. Tres capas membranales, denominadas meninges, se ubican entre los huesos y los tejidos del sistema nervioso central. Sirven para estabilizar el tejido nervioso y protegerlo de los golpes contra los huesos del esqueleto. Las membranas son:1) duramadre (se vincula con venas que drenan sangre desde el encfalo a travs de vasos y cavidades denominados senos) ,2) aracnoides esta unida laxamente a la piamadre y deja un espacio subaracnoideo entre la dos capas y,3) la piamadre es una membrana delgada que se adhiere a la superficie del encfalo y de la medula espinal. Silverthorn, D. E. et al (2009). Fisiologa humana. Madrid Espaa. Panamericana. P.296 La meningitis es una de las patologas infecciosas ms graves en pediatra, es un proceso inflamatorio agudo del SNC causado por microorganismos que afectan las meninges. Un 80% ocurre en la infancia, en nios menores de 5 aos siendo las ms frecuentes, provocadas por bacterias. Baquero-Artigao, F.et al (2007). Meningitis bacteriana.
Madrid-Espaa.asociacion espaola de pediatra.p.46

Los agentes bacterianos ms frecuentes causantes de meningitis son: Haemophilus influenzae (Hi), Neisseria meningitidis (meningococo) y Streptococcus pneumonae (neumococo). Otros menos frecuentes son: Neisseria gonorrhoeae, Salmonella serotipo typhi, Shigella, Vibrio cholerae, E. coli, Listeria monocytogenes, Klebsiella spp y P. aeruginosa. Tambin los virus pueden causar meningitis, los agentes vricos ms frecuentes son los enterovirus (coxsackie, el virus la polio y el virus del herpes) aunque con menos frecuencia. OPS, (2009). Vigilancia
de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5 aos. http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp.

La meningitis bacteriana depende, principalmente de dos factores; a) edad ya que es ms comn en menores de 5 aos y b) horas de evolucin de infecciones en odo medio, senos nasales y pulmones provocada por Streptococcus pneumoniae. Gomez J.F. y Gomez L. F. et al (2008).Pautas de tratamiento en pediatra. Colombia. Editorial
universidad de Antioquina. P. 73.

Streptococcus pneumonae es un diplococo gram positivo - hemoltico, causante de procesos sistmicos invasivos como la bacteriemia sin foco evidente de infeccin, la neumona grave y la septicemia con o sin componente meningoenceflico. Tambin es el agente bacteriano ms frecuente en la etiologa de las infecciones respiratorias como la otitis media aguda, la sinusitis aguda y la

neumona.

Valeria Preado, J. (2001).conceptos microbiolgicos de streptococcus pneumoniae. Revista chilena de

infectiologia.18.1 2.

Los sntomas de la meningitis varan segn la edad y la causa de la infeccin. En recin nacidos no suelen presentarse manifestaciones tpicas de meningitis, apareciendo irritabilidad, vmitos, aletargamiento, rechazo de alimentacin y convulsiones recurrentes estn ausentes la fiebre y signos de irritacin menngea (rigidez de la nuca) .En las siguientes semanas ya es habitual encontrar fiebre, hipertensin de fontanela y signos de irritacin menngea como rigidez de la nuca que se manifiesta con una limitacin de la motilidad y dolor a la movilizacin del cuello. Los signos de irritacin menngea necesitan varas horas para desarrollarse a partir de que el microorganismos penetra el LCR, por ejemplo la rigidez de la nuca necesita de 12-14 horas de infeccin menngea. Torres Moreno, L.M. et al. (2002). Tratado
de cuidados crticos y emergencia. Espaa. Aran ediciones, S.L. p.2057 2058.

1.1.1 Diagnostico Es de gran importancia realizar un diagnostico oportuno de la meningitis bacteriana, para ello se necesitan tomar varios tipos de muestras para conocer el grado de infeccin del paciente y evitar que llegue a desarrollar meningitis bacteriana. Los tipos de muestras recomendados son: exudado nasofarngeo, farngeo, odo medio y LCR por puncin lumbar. La obtencin de una muestra de LCR es un procedimiento imprescindible para establecer la etiologa de una meningitis bacteriana. OPS, (2009). Vigilancia de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5
aos. http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp.

Se recomienda realizar como mnimo las siguientes pruebas de laboratorio en muestras de LCR de los casos sospechosos de meningitis: citoqumico, tincin de Gram y cultivo. En una meningitis bacteriana el LCR presenta las siguientes caractersticas de apariencia y citoqumicas: Turbidez, Leucocitos aumentados (>100/mm3), Elevacin de protenas (>100 mg/dl), Disminucin de la glucosa (<40 mg/dl). La tincin de Gram del LCR sugiere la etiologa bacteriana de la infeccin, por su aspecto microscpico. En los casos de meningitis bacteriana, en la tincin de Gram se pueden identificar: Cocobacilos gramnegativos (H. influenzae), Diplococos gramnegativos intra o extracelulares (meningococos),
4

 Diplococos grampositivos (neumococos).

microbiologico. Madrid espaa. Panamericana. P. 22 23.

Koneman, E. y Stephen E. (2008). Diagnostico

Para realizar los cultivos se utilizan las muestras de LCR y de sangre, por la posibilidad de aislar la bacteria en cualquiera de los dos. El cultivo permitir identificar con seguridad la bacteria causante de la enfermedad. Una vez que se tiene la cepa aislada es posible identificar el serotipo/serogrupo de esta bacteria y realizar los antibiogramas para establecer la susceptibilidad a los antimicrobianos probados. El cultivo es considerado la prueba de oro para el diagnstico etiolgico de bacterias. OPS, (2009). Vigilancia de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5
aos. http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp.

La identificacin de la bacteria causante de un caso de meningitis bacteriana y la determinacin de la susceptibilidad antimicrobiana posibilitan: Confirmar el diagnostico. Establecer el tratamiento especfico. Identificar el serotipo circulante. OPS,

(2009).

Vigilancia de las neumonas y meningitis

bacterianas en en menores de 5 aos.http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp.

Las pruebas de laboratorio tienen como objetivo principal establecer el diagnstico etiolgico de las neumonas y meningitis bacterianas, as como la susceptibilidad antimicrobiana. OPS, (2009). Vigilancia de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5
aos.http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp.

Se deben seguir ciertos pasos para obtener muestras de LCR, sangre y lquido pleural de buena calidad que permitan el aislamiento de la cepa. Siempre que sea posible, se debe tomar la muestra para cultivo antes de iniciar el tratamiento con antibiticos, ya que de lo contrario podran obtenerse resultados falsos negativos. Las muestras deben obtenerse bajo las condiciones estandarizadas de asepsia en todos los casos y los tcnicos que realizan el procedimiento (en este caso solo los mdicos pueden extraer el LCR dentro en el quirfano), deben usar guantes estriles y mascarilla. OPS, (2009). Vigilancia de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5
aos. http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp.

Una vez tomada la muestra para el cultivo, debe enviarse inmediatamente al laboratorio. El tiempo mximo para las muestras de sangre, LCR y lquido pleural al laboratorio es de dos horas. Mientras tanto, debe mantenerse a temperatura ambiente. Si hubiese que conservar la muestra por ms tiempo, se recomienda mantenerla en incubadora a una temperatura de 35 a 36 C (nunca debe
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almacenarse en refrigerador). No debe enviarse la muestra de LCR en ningn medio de cultivo. OPS, (2009). Vigilancia de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5
aos.http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp.

Para el transporte de este tipo de muestras debe cumplirse con los siguientes requisitos: Las muestras de sangre, LCR y lquido pleural para el cultivo no se deben refrigerar ni congelar durante el transporte. La muestra debe ir correctamente identificada e incluir una ficha epidemiolgica. El frasco, envuelto en papel aluminio o en papel de empaque estril, se debe embalar y colocar en una caja bien protegida con espuma o papel, con la finalidad de amortiguar los golpes y evitar que se rompan. Se debe indicar con una flecha el sentido en que los frascos han sido colocados para evitar que se volteen y se derramen las muestras. Identificar la caja con los datos del remitente y del destinatario. Identificar en la caja el tipo de material biolgico que contiene. OPS, (2009).
Vigilancia de las neumonas y meningitis http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp. bacterianas en en menores de 5 aos.

Las meningitis bacterianas permanecen como uno de los problemas ms importantes de salud pblica en todo el mundo, se encuentran dentro de las 10 principales causas de muerte por enfermedades infecciosas, con uno a dos millones de casos anuales y 135,000 muertes.
Barriga Angulo, G.et al. (2009). Caractersticas clnicas y epidemiologia de 3,183 casos de meningitis confirmados bacteriolgicamente (1980/2007).29 (3). P. 2-3.

1.2 Antecedentes Epidemiologia de los serotipos de Streptococus pneumoniae, se han caracterizado los serotipos y serogrupos circulantes de estas bacterias y ha establecido la susceptibilidad bacteriana a los antibiticos ms utilizados. La comprobacin de la calidad de los procedimientos de laboratorio ha estado a cargo del Programa de Evaluacin Externa del Desempeo (PEED). Con relacin al neumococo, en el periodo 1993-2004, la red logr procesar ms de 11.000 aislamientos obtenidos de procesos infecciosos invasivos en nios menores de 6 aos. Los aislamientos obtenidos en Argentina, Brasil, Chile, Colombia, Mxico y Uruguay en el perodo 2000-2005 mostraron que el serotipo predominante era el 14, con 29,2% del total de aislamientos, seguido por los
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serotipos 6B, 5 y 1. Para el periodo 2000-2005, se observ que 13 de 20 pases reportaron el serotipo 14 como el prioritario, siguiendo en orden de importancia el 6B, 5 y 1 que eran los mismos que prevalecieron en el periodo 2000-2003.
(2009). Vigilancia de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5 http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp. OPS, aos.

En un estudio de determinacin de frecuencia de serotipos y susceptibilidad a ocho antimicrobianos en Streptococcus pneumoniae aislados de la nasofaringe de una muestra representativa de nios menores de cinco aos de edad residentes en el distrito federal, muestra que en 573 nios se aisl S. pneumoniae. Los serotipos ms frecuentes fueron el 23F, 35 19F, I IA y 15; 46% de los serotipos encontrados no son cubiertos con la vacuna heptavalente.
pblica de Mxico. Vol. 47. P. 276. Solorzano Santos, F. et al. (2005). Serotipos prevalentes de Streptococcus pneumoniae colonizadores de nasofaringe, en nios del distrito federal. Salud

En estados unidos de norte Amrica se estiman 3 casos por 100 000 habitantes. En Mxico se registran al ao alrededor de 2,000 muertes que representan aproximadamente el 30% de los casos anuales, por lo que podran suponerse que se presentan alrededor de 6,000 cada ao. Duval, U. R. (Ed.).
bacteriologa medica. (350 vols.). Mxico. Academia de bacteriologa medica. P.260. et al. (2004). Manual de prcticas de

En Mxico, las infecciones de vas respiratorias continan siendo una de las 10 primeras causas de morbilidad y mortalidad en los menores de cinco aos de edad. En las infecciones de origen comunitario los principales agentes etiolgicos son virus y bacterias.
Secretaria de salud. (2011). Perfil epidemiolgico de la infancia en Mxico 2010. Junio del 2011, http://www.cenavece.salud.gob.mx/.

Mientras que en el estado de Guerrero se desconocen los casos de meningitis bacteriana debido a que no hay un diagnostico confiable y seguro. Adems no es obligatorio reportar los casos al sistema de vigilancia epidemiolgica.

2. Estrategia de solucin La meningitis causada por Streptococcus pneumoniae es una de las infecciones ms frecuentes en nios menores de 5 aos, por lo tanto es necesario establecer un diagnostico oportuno para la identificacin de este microorganismo y contribuir al tratamiento de los pacientes. Por lo tanto se propone una tcnica de diagnostico molecular por PCR para detectar los serotipos circulantes de Streptococcus neumoniae en la poblacin Guerrerense. Debido a que no se conocen y es de suma importancia para el diseo de la vacuna. 2.1 Desarrollo
Diseo epidemiolgico: se realizara un estudio transversal retrospectivo.

Tamao de la muestra: se buscaran cumplan con los criterios de inclusin.

500 infantes menores de 5 aos que

Lugar donde se realizara el estudio: En los laboratorios de microbiologa y biomedicina molecular de la unidad acadmica de ciencias qumico biolgicas de la ciudad de Chilpancingo Gro, durante del mes de abril. A los infantes seleccionados se les tomaran tres muestras independientes (de exudado farngeo, nasofarngeo, odo medio). Criterios de inclusin: Nios mayores de dos meses y menores de 5 aos que presente infecciones en el momento de la toma de muestra refieran infecciones en su historial clnico. Cuyos padres que firme la autorizacin por escrito de la toma de muestra. Que residan en el estado de guerrero. y/o

Criterios de exclusin: Nios Menores de dos meses y mayores de 5 aos. Aquellos que presenten infeccin y que estn bajo a tratamiento Los que no tengan el consentimiento de los padres a la toma de muestra. A los que tenga alguna enfermedad aguda. Que sean forneos.

Criterios de eliminacin: Muestra insuficiente o mal conservada Muestras contaminadas. Muestras no etiquetadas.

Variable dependiente. Presencia o ausencia del streptococcus pneumoniae.

Variables independientes La edad Las infecciones recurrentes. La alimentacin. Inmunosupresin Automedicacin

2.2 Consideraciones ticas y de seguridad. Para el desarrollo de esta estrategia debemos de contar con el consentimiento informado de los padres o tutores de los infantes en estudio. De no autorizarlo no podrn tomar las muestras. La muestra se tomaran de acuerdo a la NOM-017-STPS-1993 relativa al equipo de proteccin personal para los trabajadores en el laboratorio que
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deben de

considerar al momento de tomar las muestras es el uso de bata, guantes y cubre bocas. Los residuos peligrosos biolgicos infecciosos (RPBI) que se utilizaran en el estudio, se desecharan de acuerdo a la NOM-087-ECOL-SSA1-2002, en bolsas de polietileno de color rojo. 2.3 Tcnica molecular para la identificacin de serotipos. Despus de haber realizado el aislamiento del microorganismo y haber confirmado la presencia del Streptococcus pneumoniae por tcnicas microbiolgicas como agente causal, se proceder a realizar la tipificacin del serotipo presente en la muestra aislada. Por lo tanto se implementara una tcnica de diagnostico molecular por PCRmultiplex para detectar los serotipos 11A, 15A, 19F Y 23 F que se han reportado como los ms frecuentes en otros estudios realizados en Mxico.
Salud pblica de Mxico. Vol. 47. P. 276. Solorzano Santos, F. et al. (2005). Serotipos prevalentes de Streptococcus pneumoniae colonizadores de nasofaringe, en nios del distrito federal.

En primer lugar se proceder al diseo de sondas y primers para la deteccin del gen blanco que se desea amplificar para su anlisis. Hay que tomar en cuenta que se debe conocer la secuencia y las caractersticas fenotpicas y bioqumicas del Streptococcus pneumoniae. Los primers sern diseados con base en la secuencia de los genes de la autolisina y pneumolisina, los cuales son factores de virulencia capsulares del Streptococcus pneumoniae, e identifican a cada uno de los serotipos. Los primers que se usaran fueron diseados especficamente para los serotipos 11A, 15A, 19F y 23F por investigadores del Departament of Pediatrics, Seul National University Childrens Hospital Seul,c Ki. Wook Yun, ki. et
al.(2011, march).Streptococcus pneumonioae. Type determination by multiplex Polymerase chain reaction. J Korean med sci. vol. 26. P. 971-978.

Una vez que se cuente con los oligos se extraer el ADN. De una colonia confirmada de Streptococcus pneumoniae se realizara una suspensin para proceder a extraer el ADN por la tcnica fenol cloroformo. Brito, D. A., Ramirez M. and de
lencastre H. (2003, june). Serotyping streptococcus pneumoniae by multiplex PCR. Journal clinical microbiology. Vol. 41. P. 2379-2383.

Para la realizacin de la PCR multiplex se har la siguiente mezcla de reaccin:

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ADN Primers 11 A-f 11 A-r 15 A-f 15 A-r 19 F-t 19 F-r 23 F-f 23 F-r Taq polimerasa, dNTPs MgCl2 H2O Buffer para PCR 10X Volumen total

1 ug 3 l 3 l 3 l 3 l 3 l 3 l 3 l 3 l 3 l 1.2 l 5 l 3 l 10 l 10l 52.2l

Reactivos utilizados para la realizacin de la PCR-multiplex. La PCR multiplex a diferencia de la PCR convencional nos permitir identificar varios serotipos a la vez en la muestra y poder identificar en un solo gel hasta 10 productos de PCR diferentes, en nuestro caso pretendemos identificar solo 4 (11A,23F,19FY 15A .Este resultado nos permitirn tipificar al Streptococcus pneumoniae. Se usara como control positivo una cepa de referencia de Streptococcus pneumoniae CVCM 650. Y los controles negativo correspondiente. Es de suma importancia el diseo de los primers, as como la exactitud en cuanto al tamao (bp) ya que de no ser as se podra tener una tipificacin errnea o tener una amplificacin de bandas inespecficas.

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A continuacin la tabla 1. Muestra la secuencia de los primers y algunas de sus caractersticas.

Primers Secuencia (5-3) (3-5) Gen Serotipo Tamao de producto (bp)
463

11A-f 11A-r 15A-f 15A-r 19F-f 19F-r 23F-f 23F-r

GGA CAT GTT CAG GTG ATT TCC CAA TAT AGT G GAT TAT GAG TGT AAT TTA TTC CAA CTT CTC CC ATT AGT ACA GCT GCT GGA ATA TCT CTT C GAT CTA GTG AAC GTA CTA TTC CAA AC GTT AAG ATT GCT GAT CGA TTA ATT GAT ATC C GTA ATA TGT CTT TAG GGC GTT TAT GGC GAT AG GTA ACA GTT GCT GTA GAG GGA ATT GGC TTT TC CAC AAC ACC TAA CAC TCG ATG GCT ATA TGA TTC

wzy

11A

wzy

15A

434

wzy

19F

304

wzy

23F

384

En esta tabla se especifican los primers que se utilizarn para la realizacin de la

PCR multiplex en especfico para cada gen, serotipo y tamao de producto.

En la figura se muestras las temperaturas con las que se pretende amplificar los diferentes serotipos de Streptococcus pneumoniae. Figura 1. Programa de ciclaje para la amplificacin de la PCR.
10 min.
94 C

30 94 C
90

60 72 C 57 C

10 min. 72 C

4 C

representa el proceso de la PCR, de acuerdo a los tres pasos que esta recurre, los cuales son: Desnaturalizacin, Alineamiento y Extensin. En base a su recorrido y temperatura que estabiliza cada uno de los procesos. Y muestra el paso final del ciclo permitiendo finalizar el ciclo y/o su almacenamiento.

Todas las reacciones se realizarn por duplicado, en un termociclador para PCR punto final Eppendor.22331.
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El producto de la reaccin de PCR se correr por electroforesis en gel de agarosa al 2%. A continuacin figura 2.Muestra un ejemplo de lo que se espera obtener al amplificar y comprobar la presencia de distintos serotipos en comparacin con la cepa control.

PCR1 1 pb. 910 780 650 520 390 260 130 2 3 4 5

A11 15A 19F 23F Figura 2. Se muestran los productos de la amplificacin por PCR de S. pneumoniae. En el carril 1 se muestra una banda de 463 pb que corresponde al serotipo 11A. En el carril 2 muestra una banda de 434 pb que corresponde al serotipo 15A. En el carril 3 muestra una banda de 304 pb que corresponde al serotipo 19F. En el carril 4 muestra una banda de 389 pb que corresponde al serotipo 23F.

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Nios menores de 5 aos

Nios enfermos

Residen en guerrero

Historial clnico

Autorizacin de los padres

Exudado farngeo.

Exudado nasofarngeo.

Exudado de odo medio.

Pruebas microbiolgicas

Colonias aisladas de streptococcus pneumoniae

Extraccin de ADN Tcnica Fenol cloroformo

Diseo de oligos y zondas para cada serotipos

Investigar secuencia del S. pneumoniae y de los serotipos requeridos.

PCR multiplex

Extensin (74-76 C)

Desnaturalizacin (94-96 C) Alineamiento (50-60 C)

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2.4 Alcance de la estrategia planteada. Establecer un registro de los infantes en el estado los cuales presentan el factor de riesgo ms importante para desarrollar meningitis por

Streptocococcus pneumoniae. complementar el diagnostico microbiolgico por medio de un diagnostico molecular. .sugerir el diseo de una vacuna dirigida contra los serotipos de mayor frecuencia. 2.5 Metas Obtener 500 muestras (de exudado farngeo, exudado nasofarngeo y de odo medio). Aislar a Streptococcus pneumoniae por un pruebas microbiolgicas a partir de alguna de las muestras. Identificar los serotipos (11A, 15A, 23F, 19F) y establecer su frecuencia en la poblacin estudiada ms frecuentes causantes de la meningitis bacteriana por tcnica molecular de PCR multiplex. Sugerir desarrollo una vacuna que cubra los serotipos encontrados ms frecuentes en la poblacin Guerrerense. 3. Conclusiones: Es de suma importancia conocer la frecuencia de los serotipos de acuerdo de que la vacuna no cubre todos. Es necesario realizar un diagnostico integral que sea complementario al diagnostico microbiolgico como lo es la PCR multiplex. Complementar o implementar tcnicas moleculares para el diagnostico de prevalencia de Streptococcus pneumoniae en nios menores de 5 aos del estado de Guerrero. En base a la frecuencia de los serotipos encontrados en Guerrero sugerir el diseo de una vacuna local y en base a esto disminuir los casos de infecciones en las vas respiratorias por Streptococcus pneumoniae.
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4. Glosario. Irritabilidad: Se considera como una capacidad homeosttica de los seres vivos para responder ante los estmulos que daan su bienestar o su estado natural. Liquido intersticial: El lquido intersticial o lquido tisular es el lquido contenido en el intersticio o espacio entre las clulas. Alrededor de una sexta parte de los tejidos corporales corresponden. Meninges: son unas estructuras que a modo de sabanas o envoltorios cubren la parte noble del cerebro. De esta forma, evitan que los grmenes o cualquier proceso traumtico afecten directamente al cerebro. Morbilidad: conjunto de complicaciones derivadas de un procedimiento medico. Pueden ser efectos secundarios o complicaciones de procedimientos tcnicos (diagnostico o teraputico) Neumona: la neumona es un trmino general que hace referencia a una infeccin de los pulmones, que puede ser provocado por diversos microorganismos, entre los que se incluyen virus, bacterias, hongos y parsitos Otitis media: inflamacin del odo medio, esta inflamacin suele ser resultado de una infeccin proveniente de la garganta, ya que esta se comunica con el odo a travs de la trompa de Eustaquio. Puncin lumbral: La puncin lumbar (PL) es una tcnica invasiva realizada por personal mdico, cuyo fin es obtener lquido cefalorraqudeo (LCR). Septicemia: es una infeccin grave y potencialmente mortal que empeora en forma muy rpida y que puede surgir de infecciones en todo el cuerpo, entre ellas infecciones en los pulmones, el abdomen y las vas urinarias Sinusitis: la sinusitis es el trmino que se utiliza para designar la inflamacin (irritacin e hinchazn) de los senos nasales. Suele estar provocada por una infeccin. Ventrculos: estn compuestos por varias partes: los ventrculos laterales, el tercer ventrculo y el cuarto ventrculo. El lquido cefalorraqudeo se encuentra en el interior de este sistema. Su misin principal es servir de fluido amortiguador de los posibles traumatismos que pueda sufrir el sistema nervioso central y la medula espinal, as como tambin nutrir a ciertas clulas nerviosas y eliminar los desechos metablicos de alguna de ellas.

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5. Referencias 1. -2. Silverthorn, D. E. et al (2009). Fisiologa humana. Madrid Espaa. Panamericana. P.296. 3. Baquero-Artigao, F.et al (2007). Meningitis bacteriana. MadridEspaa.asociacion espaola de pediatra.p 46. 4. OPS, (2009). Vigilancia de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5 aos. http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp. 5. Gomez J.F. y Gomez L. F. et al (2008).Pautas de tratamiento en pediatra. Colombia. Editorial universidad de Antioquina. P. 73. 6. Valeria Preado, J. (2001).conceptos microbiolgicos de streptococcus pneumoniae. Revista chilena de infectiologia.18.1 2. 7. Torres Moreno, L.M. et al. (2002). Tratado de cuidados crticos y emergencia. Espaa. Aran ediciones, S.L. p.2057 2058. 8. Koneman, E. y Stephen E. (2008). Diagnostico microbiologico. Madrid espaa. Panamericana. P. 22 23. 9. 17. OPS, (2009). Vigilancia de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5 aos. http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp. 18. Barriga Angulo, G.et al. (2009). Caractersticas clnicas y epidemiologia de 3,183 casos de meningitis confirmados bacteriolgicamente (1980/2007).29 (3). P. 2-3. 19. OPS, (2009). Vigilancia de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5 aos. http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp. 20. OPS, (2009). Vigilancia de las neumonas y meningitis bacterianas en en menores de 5 aos. http://www.paho.org/search/DbSReturn.asp. 21. Solorzano Santos, F. et al. (2005). Serotipos prevalentes de Streptococcus pneumoniae colonizadores de nasofaringe, en nios del distrito federal. Salud pblica de Mxico. Vol. 47. P. 276. 22. Duval, U. R. (Ed.). et al. (2004). Manual de prcticas de bacteriologa medica. (350 vols.). Mxico. Academia de bacteriologa medica. P.260. 23. Secretaria de salud. (2011). Perfil epidemiolgico de la infancia en Mxico 2010. Junio del 2011, http://www.cenavece.salud.gob.mx/. 24. Secretaria de salud. (2011). Perfil epidemiolgico de la infancia en Mxico 2010. Junio del 2011, http://www.cenavece.salud.gob.mx/. 25. Wook Yun, ki. et al.(2011, march).Streptococcus pneumonioae. Type determination by multiplex Polymerase chain reaction. J Korean med sci. vol. 26. P. 971-978. 26. Serotyping streptococcus pneumoniae by multiplex PCR. Journal clinical microbiology. Vol. 41. P. 2379-2383.
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