INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DEL SUR DEL ESTADO DE YUCATN

Organismo Pblico Descentralizado del Gobierno del Estado de Yucatn

MTODOS DE CONSERVACION DE CULTIVOS

Los objetivos de la conservacin de los cultivos se podran resumir en los siguientes aspectos: preservar la pureza gentica del cultivo sin prdida de ninguna de sus propiedades bioqumicas; preservar los niveles de su productividad inicial; lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado con facilidad. Esto ltimo puede ser un factor esencial en la seleccin de un mtodo de preservacin. La conservacin de cepas microbianas o Mtodo de eleccin o de conservacin a largo plazo Conservacin por congelacin Conservacin por liofilizacin Mtodos Alternativos Conservacin por transferencia peridica o subcultivos Conservacin por suspensin en agua destilada o en agua de mar esteril Mtodos Restringidos Desecacin en papel de filtro Desecacin en suelos,arenasilicagel,etc Desecacin en bolitas de alginato Desecacin en sal gorda para halobacterias

MTODOS DE CONSERVACIN A LARGO PLAZO.

Son los mejores porque en ellos se detiene el crecimiento de las clulas microbianas, sin provocar la muerte, garantizando la estabilidad gentica, al evitarse la aparicin de generaciones sucesivas. An asno se puede descartar algn cambio originado por el mtodo preparatorio en si mismo. CONGELACIN: Disminuye la actividad metablica de una clula a muy bajas temperaturas por la disminucin del agua disponible.Mantenimiento apropiada tanto para perodos de tiempo cortos como largos. Tcnica favorecida al utilizar nitrgeno lquido (-196 C) Sin embargo, existen una serie de problemas que debemos tener en cuenta. La formacin de cristales de hielo pueden romper las clulas, adems al eliminar el agua lquida por convertirse en hielo existe una concentracin de sales que puede ser perjudicial. Para evitar estos problemas se deben utilizar suspensiones que contengan el mnimo de sales posibles as como utilizar agentes protectores como el glicerol (25%) o dimetilsulfxido (DMSO c.a. 10%) que neutralizan el efecto de las sales. El realizar el proceso de congelacin de una forma rpida o gradualmente no est claro. Algunos recomiendan una bajada gradual (1C/min) hasta -20C para posteriormente enfriar rpidamente. Sin embargo, la descongelacin debe ser rpida.

Las distintas temperaturas que se utilizan para la conservacin de los microorganismos por congelacin son: -30C: congelador de frigorfico. No se recomienda debido a la formacin de eutcticos (suspensin con distintos puntos de congelacin debido a los solutos que pueden daar a las clulas). -70C: nieve carbnica (CO2 slido) o ultracongeladores. Es el mtodo ms utilizado en los laboratorios de microbiologa. -196C: nitrgeno lquido. Se utiliza para la conservacin de bacterias, virus y lneas celulares. Existen varios problemas prcticos: el nitrgeno se evapora continuamente por lo que se debe rellenar regularmente; se deben utilizar recipientes que resistan bien estas temperaturas y que estn bien cerrados para evitar la entrada de nitrgeno lquido. LIOFILIZACIN: Es el mtodo ms utilizado por las colecciones internacionales de cultivos tipo para la conservacin de los microorganismos. Bsicamente consiste en congelar rpidamente una suspensin de microorganismos y eliminar el agua como vapor de agua directamente del hielo sin pasar por el estado intermedio lquido. Por lo tanto, combina las dos tcnicas anteriormente citadas ya que es una desecacin por sublimacin. El sistema requiere tres componentes: mecanismo de congelacin, bomba de vaco y una trampa de agua. Los lifilos se conservan entre 0 y 5C durante muchos aos. Para su recuperacin se resuspende el lifilo en el medio de cultivo adecuado y se incuban a la temperatura adecuada. No obstante, hay que estudiar, como en los casos anteriores (desecacin y congelacin), las condiciones ptimas de supervivencia de nuestro microorganismo.

MTODOS ALTERNATIVOS
SUBCULTIVO SERIADO: Consiste en resembrar el microorganismo cada cierto tiempo en un medio adecuado; generalmente se utiliza agar inclinado ya que en medio slido se detectan mejor los contaminantes que en medio lquido y el hacerlo inclinado tiene por objeto el evitar la desecacin rpida del medio. Este mtodo es vlido para cortos perodos de tiempo (semana - 15 das) por lo que deben ser resembrados con frecuencia lo que incrementa el riesgo de contaminacin. Adems, al mantenerlos a temperatura ambiente, pueden crecer y espontneamente cambiar sus caractersticas genticas (mutacin, prdida de plsmidos, etc.) que pueden afectar al carcter por el que fueron seleccionados. Estos dos inconvenientes pueden subsanarse en parte enlenteciendo el metabolismo de los microorganismos al mantenerlos a 4C con lo que su crecimiento es inferior y la necesidad de hacer subcultivos se prolonga a 1 - 3 meses. En microbiologa industrial hay que pensar en mantener las colecciones durante perodos de aos y no de meses, por lo tanto se utilizan otras tcnicas que nos ahorran trabajo y disminuyen los riesgos.

MANTENIMIENTO BAJA CAPA DE ACEITE: Tcnica simple y efectiva para prolongar la conservacin de muchos organismos y consiste en cubrir completamente el cultivo despus de su desarrollo en medio slido, con una capa de aceite mineral o vaselina estril.Los cultivos en esta forma se pueden conservar a temperatura ambiente o an mejor en refrigeracin por perodos de varios aos (hasta los tres aos de mantenimiento).

MTODOS RESTRINGIDOS.
PRESERVACIN EN CELULOSA: Soporte de papel en condiciones de ausencia de agua es un procedimiento adecuado y sencillo para conservar cepas. La tcnica consiste en embeber tiras de papel filtro con una suspensin densa de organismos en suero, glutamato de sodio u otro agente. Posteriormente se colocan en tubos para secarlas al vaco. Ejemplos, cepas de Streptomyces y Salmonella conservadas por perodos de hasta 2 aos a temperatura ambiente. CULTIVOS EN TIERRA: Tierra estril se inocula con un cultivo y se incubada varios das para inducir la esporulacin de bacilos aerobios y anaerobios. Una vez que la misma se manifiesta, la tierra es secada (desecador) y el cultivo mantenido de esta forma en una atmsfera seca o en refrigerador. Otra forma, es agregar una suspensin de esporas. El mtodo til para hongos y actinomicetos, que pueden mantenerse por varios aos.

Bibliografa
Juan. (16 de Enero de 2011). Slideshare. Recuperado el 24 de Febrero de 2013, de Slideshare: http://www.slideshare.net/cesarturo26/tema-2-10conservacioncepas Madigan, M. T., Martinko, J. M., & Parker, J. (2004). Biologia de los Microorganismos (Decima ed.). Madrid, Espaa, Espaa: Editorial Pearson-Prentice Hall. Prescott, L. M., Harley, J. P., & Klein, D. A. (1999). Microbiologia (Cuarta ed.). Madrid, Espaa, Espaa: Mac Graw Hill Interamericana .