MATERIALES REQUERIDOS PERO NO INCLUIDOS Espectrofotmetro capaz de realizar lecturas de absorbancia a 510 nm con 1 cm de paso de luz.

Pipetas serolgicas o automticas Cubetas o tubos de ensayo Agitador (tipo Vortex) Cronmetro.

Stanbio Creatinina LiquiColor

Para la determinacin cuantitativa colorimtrica cintica de creatinina en suero u orina

RECOLECCIN Y PREPARACIN DE LA MUESTRA PRINCIPIO Y RESUMEN En 1886 Jaffe1 describe un mtodo para la determinacin de creatinina haciendo reaccionar un filtrado libre de protenas con cido pcrico en una solucin alcalina. Aunque desde entonces se han descrito muchos mtodos, la reaccin clsica de Jaffe es la ms utilizada. Esta reaccin est sujeta a interferencias a causa de varias sustancias como protenas y glucosa2,3,4. Para combatir esta desventaja, se han desarrollado algunas modificaciones5. Los mtodos cinticos son los ms utilizados por ser ms rpidos, simples y sin interferencias. El presente mtodo se basa en una modificacin de reaccin de Fabinay y Eringshausen6.
Alcali Creatinina + Acido Pcrico Complejo de creatinina-picrato (amarillo-naranja)

Suero: Separar rpidamente el suero del cogulo para prevenir la hemlisis. Orina: Recolecte la orina de 24 horas, diluya la muestra 1:20 con agua destilada y mezcle bien. ESTABILIDAD DE LA MUESTRA La creatinina srica es estable durante 24 horas si se almacena a 2-8C y por varios meses a -20C en recipientes bien cerrados que eviten la evaporacin y la contaminacin de la muestra. La muestra de orina debe conservarse aadiendo 15 g de cido brico. La orina es estable de 4 a 7 das a temperatura ambiente (15-25C). SUSTANCIAS INTERFERENTES Varias sustancias afectan la exactitud de la determinacin de Creatinina. Ver lista completa en Young et al.7 PARMETROS DE PRUEBA Longitud de onda Tipo de reaccin Direccin de reaccin Temperatura de reaccin Relacin muestra/reactivo Tiempo de equilibrio Tiempo de lectura Lmite de absorbancia del Blanco Absorbancia mxima Valor Normal bajo Valor Normal alto Linealidad pH Absorbancia inicial Estndar 510 nm Cintica Creciente 37C 1:20 20 seg 60 seg > 0.200 A 0.625 A 0.7 mg/dL 1.5 mg/dL 20 mg/dL 12.4 1.0 < 0.500 5 mg/dL

La creatinina reacciona con el cido pcrico en un medio alcalino para formar un complejo de color el cual absorbe a 510 nm. La velocidad de formacin del color es proporcional a la concentracin de creatinina en la muestra. REACTIVOS Creatinina cida: Solucin acuosa de cido pcrico, 3.6 mmol/L.. Creatinina Base: Solucin acuosa de hidrxido de sodio, 240 mmol/L. Estndar de creatinina - 5 mg/dL: Solucin acuosa de creatinina con cloruro de zinc, 5.0 mg/dL. Presentacin: Equipo para 100 pruebas.

Precauciones. Unicamente para uso diagnstico in vitro. El hidrxido de sodio debe manejarse con cuidado por ser custico. El cido pcrico es un agente oxidante fuerte. Evite el contacto con la piel. Limpie cualquier salpicadura ya que el cido pcrico seco es explosivo. Preparacin del reactivo: Mezcle una parte del cido pcrico y una parte del reactivo Base para preparar el Reactivo de Trabajo. El estndar y el reactivo de trabajo estn listos para su uso
ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO Los frascos de reactivo sin abrir son estables a temperatura ambiente (15-30C) hasta su fecha de caducidad. El reactivo de trabajo es estable durante 30 das almacenado entre 15c Y 30 C. El estndar de creatinina es estable hasta su fecha de caducidad indicada en la etiqueta cuando se conserva a 15-30C. No utilice los reactivos si estos estn turbios.

Los parmetros antes mencionados deben ser empleados en la programacin de los analizadores automatizados para Colesterol Total. Consulte su manual del usuario para programar las instrucciones. PROCEDIMIENTO MANUAL 1. Coloque las celdillas del espectrofotmetro a 37C. 2. Lleve a cero el espectrofotmetro con un blanco de agua a 510 nm. 3. Pipetee 1 mL del reactivo en cada tubo de ensayo y preincube por 3 minutos a 37C. 4. Transfiera 0.05 mL (50 L) del estndar en el tubo de

ensayo, mezcle inmediatamente y pase a una celdilla de lectura. 5. Transcurridos exactamente 20 segundos, lea y registre la absorbancia (A1). 6. Exactamente 60 segundos despus de la lectura inicial lea y registre la absorbancia final (A2). 7. Calcule el cambio de absorbancias A restando (A2 A1). 8. Corra los controles y las muestras de los pacientes como se indica en los pasos del 1 al 7. NOTA: Los volmenes pueden ser incrementados al doble si el instrumento requiere un volumen mayor a 1.0 mL para realizar la lectura. CONTROL DE CALIDAD Incluya en cada corrida de muestras un suero y/o orina controles con valores conocidos analizados por este mtodo. RESULTADOS Los valores resultan de comparar el cambio de absorbancia (A) de la muestra (M) con el estndar (S) tratado de forma idntica.
A(M) de la muestra Creatinina srica (mg/dL) = A(S) del estndar x5

Linealidad: Hasta 20 mg/dL. Muestras que excedan de estos valores debern diluirse al doble con solucin salina, repetir el ensayo y multiplicar el resultado por 2. Precisin: Intraensayo
Media (mg/dL) 0.9 8.6 SD 0.08 0.09 Interensayo Media (mg/dL) 1.1 8.4 SD 0.08 0.16 CV% 4.8 2.6 CV% 4.0 2.1

Exactitud: Se analizaron muestras de suero y/o control con valores de creatinina entre 0.6 y 2.0 mg/dL por el mtodo descrito y por el procedimiento cintico. Sensibilidad: Basada en la resolucin del instrumento de A = 0.001, el mtodo presentado muestra una sensibilidad de 0.16 mg/dL.
REFERENCIAS 1. Jaffe M.Z. Physiol. Chem. 10:391, 1886. 2. Digiorgio L., In Clinical Chemistry . Principles and Technis, R.J. et al., Eds. Harper and Row, Hagerstown, MD. 1974, pp 549 - 550. 3. Cook JGH, Ann clin. Biochem 12:219, 1975 4. Tausky HH, In Estndar Methods of Clinical Chemistry vol. 3, D. Seligson, Ed. Academic Press, New York, 1966, pp 99. 5. Heinegard D. Tiederstrom G. Clin. Chem. Acta 43:305, 1973. 6. Fabiny DL, Ertinghausen G. Clin. Chem. 17: 696, 1971. 7. Young DS et al. Clin. Chem. 21:286 D 1975 (Speccial Issue) 8. Larse K. Clin. Chem. Acta 41:209, 1972. 9. Stanbio Laboratory Data.

donde A(M) y A(S) son los cambios de absorbancia (incrementos) de la muestra y del estndar respectivamente, y 5 es la concentracin del estndar (mg/dL).
Au Creatinina urinaria (mg/dL) = As x 5 x 20 (Factor de Dilucin)

Creatinina urinaria (mg/L) = Creatinina Urinaria (mg/dL) x 10 24 h (mL) Creatinina urin. (mg/L/24 h) = Creatinina urin. (mg/L) x 1000

VALORES ESPERADOS Hombres: (Suero) (Orina) (Suero) (Orina) 0.9 - 1.5 mg/dL 1000 - 2 000 mg/24 horas. 0.7 - 1.4 mg/dL 600 - 1 500 mg/24 horas. Fabricado en EUA por: Stanbio Laboratory 1261 North Main Street Boerne TX; 78006. Distribuido en Mxico por: CARACTERSTICAS

Mujeres:

Correlacin: Muestras de suero y control (n = 38) con valores de creatinina entre 0.6-25 mg/dL fueron analizados por el mtodo aqu descrito y por otro procedimiento cintico similar. El anlisis estadstico revel un coeficiente de correlacin ( r ) de 0.998, con una ecuacin de regresin de y = 0.96 x + 0.046.

Laboratorios Licon S.A. Viveros del Roco No. 33 Col. Viveros de la Loma C.P. 54080 Tlalnepantla, Edo. de Mxico Tel.: (55) 5362-0299 Fax: (55) 5362-1792