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ISSN 1517-1981 ISSN1808-9968 Julho, 2012 Outubro 2000

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Produo in vitro de mudas de coroa-de-frade (Melocatus oreas Miq. - Cactaceae): uma espcie nativa da Caatinga de Potencial Ornamental

Produo In Vitro de Mudas de Coroa-de-Frade (Melocatus oreas Miq. - Cactaceae)...

ISSN 1808-9968 Julho, 2012

Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria Embrapa Semirido Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento 94

Produo In Vitro de Mudas de Coroa-de-Frade (Melocatus oreas Miq. - Cactaceae): uma Espcie Nativa da Caatinga de Potencial Ornamental
Ana Valria Vieira de Souza Danilo Diego de Souza Nerimar Barbosa Guimares da Silva Flvio Jos Vieira de Oliveira

Embrapa Semirido Petrolina, PE 2012

Produo In Vitro de Mudas de Coroa-de-Frade (Melocatus oreas Miq. - Cactaceae)...

Esta publicao est disponibilizada no endereo: www.cpatsa.embrapa.br Embrapa Semirido BR 428, km 152, Zona Rural Caixa Postal 23 Fone: (87) 3866-3600 sac@cpatsa.embrapa.br

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Comit de Publicaes da Unidade Presidente: Maria Auxiliadora Colho de Lima Secretrio-Executivo: Anderson Ramos de Oliveira Membros: Ana Valria Vieira de Souza Andra Amaral Alves Gislene Feitosa Brito Gama Jos Maria Pinto Juliana Martins Ribeiro Magna Soelma Beserra de Moura Mizael Flix da Silva Neto Patrcia Coelho de Souza Leo Sidinei Anunciao Silva Vanderlise Giongo Welson Lima Simes Superviso editorial: Sidinei Anunciao Silva Reviso de texto: Sidinei Anunciao Silva Normalizao bibliogrfica: Sidinei Anunciao Silva Tratamento de ilustraes: Nivaldo Torres dos Santos Editorao eletrnica: Nivaldo Torres dos Santos Foto(s) da capa: Ana Valria Vieira de Souza 1a edio (2012): formato digital Todos os direitos reservados A reproduo no autorizada desta publicao, no todo ou em parte, constitui violao dos direitos autorais (Lei no 9.610). permitida a reproduo parcial do contedo desta publicao desde que citada a fonte. CIP. Brasil. Catalogao na Publicao Embrapa Semirido Produo in vitro de mudas-de-coroa- de-frade (Melocatus oreas Miq. - Cactaceae): uma espcie nativa da Caatinga de potencial ornamental / Ana Valria Vieira de Souza [et al.]... Petrolina: Embrapa Semirido, 2012. 29 p. (Embrapa Semirido. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 94).

1. Bioma Caatinga. 2. Cactaceae. 3. Propagao de plantas. 3. Regulador de crescimento. I. Ttulo. II. Srie. CDD 631.52 Embrapa 2012

Sumrio

Resumo ......................................................................4 Abstract .....................................................................6 Introduo ..................................................................7 Material e Mtodos ......................................................9 Resultados e Discusso ..............................................11 Concluses ...............................................................24 Referncias ...............................................................25

Produo In Vitro de Mudas de Coroa-de-Frade (Melocactus oreas Miq. Cactaceae): uma Espcie Nativa da Caatinga de Potencial Ornamental
Ana Valria Vieira de Souza1; Danilo Diego de Souza2 ; Nerimar Barbosa Guimares da Silva3; Flvio Jos Vieira de Oliveira4

Resumo
Melocactus oreas uma cactaceae nativa da Caatinga que apresenta potencial ornamental. Considerando-se o risco de extino e a crescente demanda comercial, objetivou-se com este trabalho iniciar os estudos de micropropagao a fim de otimizar um protocolo para a produo de mudas em escala comercial. Os experimentos foram realizados no Laboratrio de Biotecnologia, casa de vegetao e viveiro de mudas da Embrapa Semirido. Para o estabelecimento in vitro, foram utilizadas sementes desinfestadas e inoculadas em meio de cultura MS/4 slido. Os experimentos de multiplicao foram realizados em meio de cultura MS/2 slido suplementado com diferentes concentraes de BAP ou KIN. Para aclimatizao, as brotaes foram transferidas para tubetes contendo substrato comercial e posteriormente para potes plsticos contendo solo da Caatinga. Na germinao das sementes, observou-se que os resultados diferiram estatisticamente entre as semanas avaliadas e os maiores valores foram obtidos a partir da terceira semana. Na multiplicao in vitro, na presena de BAP e KIN, no houve a induo de mltiplas brotaes,
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Engenheira-agrnoma, D.Sc. em Horticultura, pesquisadora da Embrapa Semirido, Petrolina, PE, ana. valeria@cpatsa.embrapa.br. 2 Estudante de Biologia, estagirio da Embrapa Semirido, Petrolina, PE, danilodiegos@hotmail.com. 3 Biloga, mestranda em Recursos Genticos Vegetais (UEFS), Feira de Santana, BA, nerimargirls@hotmail.com. 4 Engenheiro-agrnomo, D.Sc. em Cincias do Solo, Professor da UNEB, Juazeiro, BA, fvoliveira@uneb.br.

mas somente na regenerao dos brotos, que j apresentaram razes. Na aclimatizao observou-se 100% de sobrevivncia das plantas. Pode-se afirmar que a micropropagao uma tcnica que pode ser utilizada na produo de mudas de M. Oreas. Palavras-chave: cabea-de-frade, extino, micropropagao, regulador vegetal, aclimatizao.

In vitro Production of Coroa-de-Frade (Melocactus oreas) seedlings Cactaceae: a Caatinga Native Species Caatinga of Potential Ornamental
Ana Valria Vieira de Souza; Danilo Diego de Souza; Nerimar Barbosa Guimares da Silva; Flvio Jos Vieira de Oliveira;

Abstract
Melocactus oreas is a cactus native to the Caatinga featuring ornamental potential. Considering the risk of extinction and the growing demand for marketing, the aim of this work was to begin studies of micropropagation in order to optimize a protocol for the production of seedlings on a commercial scale. The experiments were performed at the Biotechnology Laboratory, greenhouse and plant nursery at Embrapa Semi-Arid. For the in vitro establishment, sterilized seeds were used and inoculated in the MS/4 solid. The multiplication experiments were performed in culture medium MS/2 solid supplemented with different concentrations of BAP or KIN. For acclimation, the shoots were transferred to tubes containing commercial substrate and then to plastic pots containing soil of the Caatinga. Seed germination, it was observed that the results differed among the week evaluated and the highest values were obtained from the third week. In vitro multiplication in the presence of BAP and KIN, no induction of multiple shoots, but only in the regeneration of shoots, which already had roots. In the acclimatization showed 100% survival of plants. It can be argued that micropropagation is a technique that can be used in the production of seedlings of M. Oreas. Keywords: cabea-de-frade, extinction, micropropagation, growth regulators, aclimatization.

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Introduo
A famlia Cactaceae, endmica do continente americano, constituda por 125 gneros e, aproximadamente 1.900 espcies, distribudas nas regies temperadas e tropicais em ampla variedade de habitats, desde regies ridas at florestas midas (ARECES, 2004; GIBSON; NOBEL, 1986; HUNT; TAYLOR, 1990). No Brasil esto registrados 35 gneros e um total de 160 espcies. Quatorze gneros apresentam espcies endmicas (BARBOSA et al., 1996; BARROSO et al., 1978; ORTEGABAES; GODINEZ-ALVEZ, 2006). O gnero Melocactus (L.) Link e Otto possui 37 espcies xerfilas, que ocorrem desde o Mxico at o Estado do Rio de Janeiro, sendo a maior concentrao na Regio Nordeste do Brasil, considerada o centro de diversidade primria deste gnero. No Bioma Caatinga podem ser encontradas vrias espcies de Melocactus sp., conhecidas popularmente como cabea-de-frade ou coroa-de-frade, amplamente utilizadas pela populao local para diversas finalidades, desde a culinria e medicina popular (ANDRADE et al., 2006), at a explorao do potencial forrageiro e, principalmente, paisagstico (ROCHA et al., 2002). Porm, ainda no se conhece sistemas de produo j estabelecidos para o cultivo dessas espcies e toda coleta das plantas neste ecossistema tem sido feita de forma extrativista, o que tem levado a uma drstica reduo das populaes naturais. Resende (2010) afirma que este fato torna o pas uma rea prioritria para a conservao das espcies de Melocactus, principalmente pelo risco de eroso gentica a que esto submetidas. De acordo com Fonseca (2004), o impacto da coleta extrativista irracional torna-se mais significativo porque as plantas so removidas inteiras da natureza e um dos fatos que pode contribuir de modo expressivo para a extino o crescimento lento das plantas (DAS et al., 1998; MACHADO, 2009). Considerandose o risco de eroso gentica decorrente da coleta extrativista, a valorao do potencial ornamental e o crescente interesse paisagstico pelas coroas-de-frade, torna-se cada vez mais urgente e relevante o desenvolvimento de pesquisas que viabilizem a conservao e a

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produo de mudas em larga escala, que podero ser utilizadas para recompor reas, bem como ser comercializadas para atender a demanda do mercado paisagstico nacional. A justificativa mais relevante para o estabelecimento de programas voltados produo e conservao, deve-se ao alto grau de endemismo, associado a fatores como explorao de areais, degradao de habitats, queimadas na Caatinga e coleta indiscriminada das plantas para comercializao em feiras livres e beiras de estradas. A produo de plantas in vitro representou no sculo passado um avano considervel para a obteno e comercializao de mudas de plantas frutferas, florestais e principalmente ornamentais. Por causa das vantagens que apresenta, como a possibilidade de obteno de elevado nmero de plantas, com excelentes condies fitossanitrias, em curto perodo de tempo e espao reduzido, essa tcnica tambm vem sendo realizada com xito em pesquisas com espcies nativas de potencial comercial e passveis de extino. Alm da produo de mudas, a micropropagao tambm uma das tcnicas de cultura de tecidos vegetais mais utilizadas em estudos de conservao, uma vez que possibilita, consequentemente, a preservao de espcies ornamentais nativas, por minimizar a coleta das plantas no seu habitat (RESENDE, 2010). Todavia, os estudos sobre micropropagao de espcies do gnero Melocactus, seja para produo de mudas para comercializao ou para conservao ex situ, ainda so incipientes. Os protocolos j estabelecidos precisam ser ajustados para otimizar a multiplicao e reduzir o tempo de obteno das plantas, no deixando de considerar as caractersticas peculiares de reproduo, crescimento e desenvolvimento da espcie. Considerando-se que ainda no existem pesquisas relacionadas micropropagao de M. oreas Miq., objetivou-se com este trabalho iniciar os estudos para a obteno de plantas in vitro, a fim de otimizar, posteriormente, um protocolo para a produo de mudas em escala comercial.

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Material e Mtodos
Os experimentos foram realizados no Laboratrio de Biotecnologia, em casa de vegetao e viveiro de mudas da Embrapa Semirido. Para o incio do cultivo in vitro, foram utilizadas sementes coletadas em uma planta da espcie mantida na coleo de cactceas da mesma instituio. A planta matriz de M. oreas Miq. foi coletada em Morro do Chapu, BA (111531 de latitude sul e 405631 de longitude oeste), em 19 de outubro de 2009 e mantida na coleo de trabalho. As sementes coletadas, antes da inoculao in vitro, foram lavadas em gua corrente, imersas em lcool 70% durante 5 segundos e posteriormente colocadas em agitao por 20 minutos em soluo de hipoclorito de sdio 0,5%. Em cmara de fluxo laminar, as sementes foram lavadas trs vezes em gua destilada autoclavada e em seguida, com o auxlio de uma micropipeta, inoculadas em frascos de vidro contendo o meio de cultura MS/4 (MURASHIGE; SKOOG, 1962) slido suplementado com 7,5 g L-1 de sacarose, pH aferido para 5,75,8 antes da autoclavagem e 6 g L-1 de gar para solidificao. Aps a inoculao das sementes, os frascos foram deixados em sala de crescimento com condies controladas de temperatura (25C1) e fotoperodo de 16 horas luz/8 horas escuro. O experimento foi instalado em delineamento experimental inteiramente casualizado (DIC) com 20 repeties, contendo dez sementes cada repetio. As avaliaes para verificar a contaminao e nmero de sementes germinadas foram realizadas semanalmente por um perodo de 30 dias aps a instalao do experimento. Os explantes foram retirados de fragmentos das plantas germinadas in vitro. Cada planta foi cortada verticalmente ao meio, originando dois fragmentos que foram colocados horizontalmente com a parte do corte voltada para o baixo, em contato com o meio de cultura para a induo de mltiplos brotos. Os explantes foram colocados em frascos de polietileno transparente autoclavveis contendo o meio de cultura MS/2 slido, suplementado com 15 g L-1 de sacarose, 6 g L-1 de gar para solidificao e diferentes concentraes das citocininas BAP (6-benzilaminopurina) ou KIN (cinetina). O pH do meio foi aferido para 5,7-5,8 antes da autoclavagem. Os tratamentos foram T1: MS/2;

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T2: MS/2 + 0,25 mg L-1 BAP; T3: MS/2 + 0,5 mg L-1 BAP; T4: MS/2 + 1 mg L-1 BAP; T5: MS/2 + 0,25 mg L-1 KIN, T6: MS/2 + 0,5 mg L-1 KIN; T7: MS/2 + 1 mg L-1 KIN. Os frascos contendo os explantes foram deixados em sala de crescimento com condies controladas de temperatura (25 C1) e fotoperodo de 16 horas luz/8 horas escuro e o experimento foi instalado em DIC com cinco repeties e seis explantes/repetio. As avaliaes foram realizadas quanto ao nmero de brotos regenerados e o nmero de brotos com raiz aos 30, 60 e 90 dias e quanto ao nmero de brotos necrosados e matria fresca das brotaes aos 90 dias. Aps a obteno dos dados de peso da matria fresca das brotaes em balana analtica digital, as plantas foram levadas para aclimatizao em casa de vegetao. Cada planta foi transferida para tubetes de polipropileno individuais (5,5 cm de dimetro x 11 cm de altura), contendo o substrato comercial. Aps o plantio, os tubetes foram tampados com plstico transparente durante 20 dias para manuteno da umidade. Aps a retirada do plstico, as mudas foram mantidas no mesmo ambiente por um perodo de 10 dias. Durante a aclimatizao em casa de vegetao, a irrigao foi feita de acordo com a necessidade das plantas, considerando-se a umidade do substrato. Aps o perodo de 30 dias, os tubetes foram transferidos para o viveiro de mudas com 25% de luminosidade, onde permaneceram por mais 30 dias. Posteriormente, cada planta foi transferida para potes de polietileno transparentes contendo solo da Caatinga como substrato, onde permaneceram por igual perodo. No viveiro, as plantas foram irrigadas diariamente durante 5 minutos, por microasperso a cada 2 horas. Ao final de 60 dias, os potes plsticos contendo as mudas foram transferidos para condio de pleno sol. Os dados obtidos em todos os experimentos foram submetidos anlise estatstica pelo teste de comparao de mdias - teste de Tukey a 5%, utilizando-se o software SISVAR (FERREIRA, 2003). Os resultados para as variveis nmero de brotos regenerados, nmero de brotos com raiz, nmero de brotos necrosados e matria fresca das brotaes aos 30, 60 e 90 dias, foram transformados pela equao raiz quadrada de Y + 1.0 - SQRT ( Y + 1.0 ).

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Resultados e Discusso
A assepsia utilizada para a desinfestao das sementes e estabelecimento de M. oreas in vitro foi satisfatria, uma vez que ocorreu contaminao por fungo em apenas dois recipientes de cultivo durante todo o perodo de conduo do experimento. Em relao germinao das sementes, pde-se observar que houve um aumento considervel, com diferena estatstica significativa, entre a primeira e a quinta semana, sendo os valores mdios/parcela 0,9 e 6,2, respectivamente (Tabela 1). Tabela 1. Nmero de sementes de M. oreas germinadas in vitro.
Nmero de sementes germinadas Semana 1 CV (%) 26,34 0,90 c** Semana 2 4,2 b** Semana 3 5,5 a** Semana 4 5,9 a** Semana 5 6,2 a**

Mdias seguidas da mesma letra no diferem entre si pelo teste de Tukey (a 1%). **Significativo a 5% de probabilidade pelo teste de F.

Os trabalhos j publicados sobre o estabelecimento de protocolos de micropropagao para espcies nativas, em geral, com diferentes potenciais de explorao comercial, mostram diferenas significativas em cada etapa do processo, pois inmeros fatores podem contribuir para o sucesso ou insucesso dos resultados. No entanto, parece consenso entre os grupos que trabalham nessa linha de pesquisa, que as fases mais crticas tm sido o estabelecimento in vitro dos explantes, o enraizamento in vitro das brotaes e a aclimatizao das plantas. Quando so utilizados fragmentos retirados da planta matriz, como gemas, segmentos de caules e outros, podem ocorrer significativas contaminaes por microrganismos saprfitos no incio do processo, que podem comprometer todo o desenvolvimento do trabalho. A experincia de diversos grupos de pesquisas no pas que trabalham com micropropagao de espcies nativas, tem demonstrado que as etapas iniciais podem ser extremamente complexas quando o estabelecimento in vitro realizado a partir desses materiais vegetativos (MORAES et al., 2007).

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Desse modo, quando o objetivo a otimizao de protocolos de micropropagao para espcies nativas, tem-se optado por iniciar os trabalhos com o estabelecimento in vitro a partir da germinao de sementes. Alm de no ocorrer o processo de oxidao, se a assepsia for eficiente, tambm no haver contaminaes por fungos ou bactrias. Segundo Melo et al. (2008), as sementes so mais indicadas para estudos neste contexto, por serem menos contaminadas e resistirem melhor aos tratamentos de assepsia, alm de ser um benefcio para a manuteno da variabilidade gentica, o que extremamente relevante no caso de espcies passveis de extino (RESENDE, 2010). Estudos sobre micropropagao de cactceas a partir da germinao de sementes in vitro foram realizados por Perez-Molphe-Balch (2003), Santos-Daz et al. (2003) e Dvila-Figueroa et al. (2005) com diferentes resultados entre as espcies. Alguns autores ressaltam que o uso de sementes em pesquisas de micropropagao de cactceas reduz os riscos de contaminao, uma vez que a desinfestao de outros fragmentos ou tecidos dificultada por causa da presena de espinhos que abrigam elevada variedade de microrganismos (CHOREO-TAPIA et al., 2002; MEDEIROS et al., 2006; KHALAFALLA et al., 2007). Santos-Daz et al. (2003) observaram 100% de contaminao quanto utilizaram gemas axilares e segmentos de plantas de Pelecyphora aselliformis cultivadas ex vitro e introduzidas in vitro. Alm da produo de mudas, a micropropagao uma tcnica alternativa que pode ser utilizada como estratgia de conservao ex situ para determinadas espcies que requerem muitos anos para alcanar a fase reprodutiva ou que possuem sementes que perdem a viabilidade rapidamente aps longos perodos de armazenamento, como ocorre para algumas espcies do gnero Melocactus (ROJASARCHIGA; VSQUES-YANES, 2000; VILLALOBOS et al., 1991).

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Quando Resende (2010) utilizou sementes para o estabelecimento in vitro de M. glaucescens, observou que no houve contaminao a partir da desinfestao em lcool 96% durante 1 minuto e 2,5% de hipoclorito de sdio em agitao durante 10 minutos. Da mesma forma, Quiala et al. (2009) tambm no observaram contaminaes in vitro de sementes de Pilosocereus robinii quando estas foram imersas em soluo de 2% de hipoclorito de sdio em agitao durante 20 minutos. Nesses dois trabalhos, pode-se observar que a assepsia foi mais forte em comparao quela utilizada para M. oreas. Porm, Rgo et al. (2009) obtiveram 0% de contaminao quando realizaram a assepsia de sementes de Cereus jamacaru em soluo com menor concentrao de hipoclorito de sdio (1%). Quando as sementes foram imersas em 2% deste agente desinfetante, nenhuma semente germinou e os autores concluram que isso aconteceu por causa da atividade fitotxica. As respostas obtidas para as espcies M. glaucescens e P. robinii so interessantes porque o procedimento adotado para a desinfestao das sementes em soluo mais concentrada de hipoclorito de sdio no afetou a germinao das sementes in vitro (QUIALA et al. 2009; RESENDE, 2010). Esses resultados mostram que outros procedimentos para a assepsia e germinao in vitro de sementes de M. oreas devem ser realizados, quando devero ser testadas outras concentraes de hipoclorito de sdio alternando com tempo de imerso. Os tempos de germinao das sementes in vitro obtidos neste trabalho (Tabela 1) corroboram com os resultados encontrados por Resende (2010), quando avaliou a germinao por um perodo de 11 semanas, observando que o maior nmero de sementes germinadas de M. glaucescens ocorreu nas semanas iniciais da conduo do experimento. Mesmo que o perodo de avaliao para a espcie M. oreas tenha sido at a quinta semana, neste momento, foi obtido um valor mdio considervel de, aproximadamente, seis sementes germinadas/parcela, o que corresponde a 60% de germinao total. Porm, o nmero de sementes germinadas de M. glaucescens (> 90%), no mesmo tipo de meio de cultura, foi consideravelmente superior, quando comparado ao M. oreas. Esse resultado pode ser atribudo pr-embebio destas em soluo de giberelina antes da inoculao in vitro (RESENDE, 2010), o que no foi feito com a espcie em estudo.

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Em protocolos de micropropagao de espcies nativas, cujo estabelecimento in vitro realizado por meio da germinao de sementes, comum o procedimento da pr-embebio destas em soluo de giberelina, antes da inoculao in vitro. Porm, mais utilizado quando existem referncias sobre a ocorrncia de dormncia, relacionada imaturidade do embrio. Este mesmo procedimento foi adotado por Cardarelli et al. (2010), quando objetivaram estabelecer uma tcnica eficiente para a propagao e conservao in vitro de Obregonia denegrii, uma cactaceae em risco de extino. Aps o processo de assepsia, os autores imergiram as sementes em soluo de GA3 e observaram um resultado de 85% de germinao aps 7 dias da instalao do experimento. Contudo, Quiala et al. (2009), no embeberam as sementes P. robinii em soluo de giberelina e obtiveram um resultado com mais de 90% de sementes germinadas, quando se utilizou a metade da concentrao dos sais do meio MS. No foram encontrados relatos sobre dormncia de sementes para M. oreas. Contudo, pode ser interessante a realizao de testes para a pr-embebio de sementes desta espcie em estudos posteriores, quando devero ser testadas diferentes concentraes de soluo de giberelina e tempos de embebio. Os resultados de protocolos de micropropagao so significativamente diferentes entre as espcies mas, ainda assim, a produo de mudas in vitro de espcies de Melocactus via germinao de sementes in vitro, pode ser consideravelmente vantajosa quando comparada propagao convencional in vivo, principalmente por causa do lento desenvolvimento das plantas em condies naturais. Em estudos sobre germinao in vivo realizados com a espcie Melocactus bahiensis, no foi obtido nem 50% de sementes germinadas (LONE et al., 2007). Ao avaliar a multiplicao in vitro nos segmentos de M. oreas cultivados com diferentes concentraes de BAP e KIN, observou-se que no ocorreu a induo de mltiplas brotaes, mas somente a regenerao dos brotos. Os resultados obtidos nas avaliaes realizadas aos 30 e 60 dias, mostraram que no houve diferena estatstica significativa para o nmero de brotos regenerados entre os tratamentos, mas somente para nmero de brotos com raiz. Para estas variveis, aos 90 dias, os resultados foram inversos. Quando avaliou-se o nmero de brotos necrosados e a matria fresca das brotaes, observou-se que no houve diferena estatstica significativa entre os tratamentos para a primeira varivel analisada, mas somente para a segunda (Tabela 2).

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Tabela 2. Nmero de brotos regenerados (NBRREG), nmero de brotos com raiz (NBRRAIZ), nmero de brotos necrosados (NBRNEC), peso da matria fresca das brotaes (MFBROT) de Melocactus oreas produzidos in vitro aos 30, 60 e 90 dias.
30 DIAS TRAT T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 CV (%) N BR REG 2,2 a ns 3 a 3,6 a 2,8 a 2,8 a 2a 4,2 a 15,97 N BR RAIZ 2a* 1,6 ab 0b 0b 2,4 a 2,2 a 0,8 ab 16,10 60 DIAS N BR REG 2,2 a ns 3a 3,6 a 2,8 a 2,8 a 2a 4,2 a 15,97 N BR RAIZ 2a* 1,6 ab 0b 0b 2,4 a 2,2 a 0,8 ab 16,10 90 DIAS N BR REG 3 ab * 2 ab 2 ab 3 ab 2,8 ab 3,4 a 1,4 b 12,68 N BR RAIZ 2,8 a ns 1,4 a 2a 2,8 a 2,6 a 2,8 a 1,4 a ,8114 N BR NEC 2,2 a ns 3,8 a 3,2 a 2,8 a 2,8 a 2,4 a 4,2 a 14,29 MFBROT 0,056ab* 0,036 b 0,042 b 0,034 b 0,068 ab 0,11 a 0,042 b 15,35

Mdias seguidas da mesma letra no diferem entre si pelo teste de Tukey ( a 1%). (Tratamentos: T1: MS/2; T2: MS/2 + 0,25 mg L-1 BAP; T3: MS/2 + 0,5 mg L-1 BAP; T4: MS/2 + 1 mg L-1 BAP; T5: MS/2 + 0,25 mg L-1 KIN, T6: MS/2 + 0,5 mg L-1 KIN; T7: MS/2 + 1 mg L-1 KIN). Os dados foram transformados pela equao: Raiz quadrada de Y + 1.0 - SQRT ( Y + 1.0 )

O maior nmero de brotos foi obtido com a utilizao de KIN, porm, esse valor no diferiu dos tratamentos com BAP, assim como do controle, em que os segmentos foram cultivados somente em meio MS/2 sem suplementao com citocinina. Esses resultados se devem ao fato de no ter ocorrido induo de mltiplas brotaes com a utilizao de BAP ou KIN, nas concentraes testadas, mas somente a regenerao dos brotos. Todas as espcies vegetais cultivadas in vitro so capazes de regenerar novos indivduos quando colocadas em condies adequadas de crescimento e desenvolvimento, mesmo na ausncia de reguladores vegetais, por causa do fenmeno da totipotncia celular (GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998).

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Estudos realizados com diferentes espcies de cactceas apresentaram regenerao das brotaes, quando os explantes foram cultivados na ausncia de citocininas, no deixando de ressaltar que o objetivo dos autores era a multiplicao in vitro de Gymnocalycium buldiamur, Pelecyphora aselliformis, Pelecyphora strobiliformis, Mammillaria as-angelensis, Coryphantha mnima e Pilosocereus robinii (DVILAFIGUEROA, 2002; MALDA et al., 1999; PASQUAL; HOSHIJA, 1992; PREZ-MOLPHE-BALCH et al., 1998; PREZ-MOLPHE-BALCH; QUIALA et al., 2009; RUBLUO et al., 2002). A regenerao de brotaes na ausncia de reguladores vegetais, em M. oreas e outras espcies, sugere que hormnios endgenos so capazes de promover o desenvolvimento do explante via organognese direta, o que um processo raramente observado em plantas de Melocactus em condies naturais (RESENDE, 2010). Esses resultados discordam daqueles obtidos por Mauseth (1993), por considerar que a citocinina essencial para o desenvolvimento de brotos de cactos. A suplementao do meio com diferentes concentraes de BAP ou KIN no foi capaz de possibilitar a multiplicao in vitro de M. oreas. A obteno de melhores respostas na presena de KIN pode estar relacionada toxidez do BAP, observada para vrias culturas in vitro (GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998). Todavia, permanece a necessidade da realizao de outros experimentos mais elaborados, quando devero ser testadas outras concentraes das mesmas citocininas, de modo a confirmar tal inferncia sobre a toxidez para o M. oreas. A diferena de valores observados nas avaliaes entre 30, 60 e 90 dias, para esta varivel na concentrao de 1,0 mg L-1, pode ser atribuda morte/necrose de algum explante. A suplementao do meio de cultura com reguladores vegetais, a exemplo citocininas e auxinas, sempre realizada quando o objetivo aumentar a quantidade de brotos e/ou razes formadas, bem como para outras finalidades. Porm, o nmero de brotaes produzidas in vitro, pode variar consideravelmente de acordo com vrios fatores, como gentipo, tipo de explante utilizado, meio de cultura, tipo e concentrao do regulador vegetal, dentre outros (SOUZA; PEREIRA, 2007). Em experimentos de multiplicao in vitro, a concentrao de citocinina a ser utilizada est diretamente relacionada ao gentipo a ser cultivado.

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Segundo Hubstenberger et al. (1992), na fase de induo de mltiplas brotaes, a ausncia ou baixos nveis de auxinas combinados com moderados ou altos nveis de citocininas, podem aumentar a produo de brotos em cactos. Mas Resende (2010) afirma que uma das estratgias que possibilitam aumentar a produo de brotos nessas condies de cultivo a fragmentao e orientao do explante no meio de cultura, o que pode reduzir a quantidade de plantas utilizadas como doadora de explantes. Para a espcie M. oreas, alm da fragmentao longitudinal que originaram dois explantes, realizou-se tambm o seccionamento transversal para a obteno de explantes apicais, medianos e basais. Porm, no foi possvel a conduo deste experimento por causa da alta taxa de contaminao, que acarretou na perda total das plantas. O seccnionamento transversal talvez fosse o mais indicado para a induo de mltiplos brotos em M. oreas, pois a utilizao de fragmentos segmentados longitudinalmente contendo parte do pice meristemtico, pode ter prejudicado a produo de brotos, em decorrncia da presena de auxina nessa regio, que inibe o desenvolvimento das gemas axilares (JUREZ; PASSERA, 2002; TAIZ; ZEIGER, 2004). Quando Resende (2010) avaliou o nmero de brotos nas espcies M. glaucescens e M. paucispinus em meio MS/2 suplementado com 15 g L-1 de sacarose, sem adio de qualquer regulador vegetal, tambm se observou que no ocorreu multiplicao, uma vez que os valores mdios variaram entre 1 e 1,4; o que corresponde apenas regenerao do explante inoculado. Mas, quando os mesmos tipos de explantes foram cultivados com a utilizao de citocininas, foi possvel observar o surgimento de brotaes aps o intumescimento da aurola a partir da quarta semana de inoculao. Contudo, os resultados obtidos foram diferentes da espcie M. oreas, pois, Resende (2010) observou maior nmero de brotaes na presena de BAP, quando comparado com a KIN. Giusti et al. (2002) tambm observaram que a KIN foi mais eficiente para a espcie P. aselliformis quando comparada ao BAP. A citocinina BAP tem sido considerada como a mais efetiva em estudos de induo de mltiplas brotaes in vitro. Porm, para algumas espcies, concentraes acima de 1,0 mg L-1 tm sido consideradas txicas por promover a formao de calos e brotos com alteraes morfolgicas, alm de variao somaclonal (GRATTAPAGLIA;

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MACHADO, 1998). Nesse caso, outras opes de citocininas em diversas concentraes devem ser testadas, de modo que se atinja o objetivo principal da multiplicao massal. Para a espcie em estudo, ainda no se pode afirmar que houve toxidez naqueles explantes cultivados com BAP, pois a amplitude de concentraes testadas foi baixa e no foi possvel observar calos e/ou brotos com alteraes morfolgicas. Pasqual e Hoshika (1992) observaram baixo nmero de brotaes quando o meio de cultivo foi suplementado com 4 mg L-1 de BAP. Porm, Retes-Pruneda et al. (2007) obtiveram boas respostas para a induo de mltiplos brotos com valores que variaram entre 3,4 e 11,8 com o emprego de diferentes concentraes de BAP e 2-isopenteniladenina (2-iP) A seleo do regulador vegetal ideal em estudos de micropropagao para qualquer espcie deve priorizar no s a quantidade de brotaes a ser obtida na etapa de multiplicao, mas tambm a qualidade e a manuteno da fidelidade gentica dos novos brotos produzidos, principalmente no caso de espcies ameaadas de extino. Quiala et al. (2009) salientam que a manuteno da estabilidade gentica em espcies passveis de extino essencial para o estabelecimento de programas de conservao. Para a varivel nmero de brotos com raiz, aos 30 e 60 dias, os maiores valores tambm foram obtidos na presena de KIN na menor concentrao testada, porm, estes no diferiram do controle. Na avaliao realizada aos 90 dias, os valores no diferiram entre os tratamentos. Moderados ou altos nveis de citocininas, esto relacionados produo de brotos e no induo de razes. Quando o objetivo o enraizamento in vitro, o meio de cultura deve ser suplementado com auxinas, que tm o efeito direto de induzir a formao de razes adventcias nessas condies de cultivo (SOUZA; PEREIRA, 2007). Vrios autores confirmam o papel fundamental das auxinas no processo de rizognese in vitro (ASSIS; TEIXEIRA, 1998; BLAZICH, 1988; DAVIS; SANKHLA, 1988; FORD, 2001; GASPAR; HOFINGER, 1988; GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998; MCCOWN, 1988; ONO; RODRIGUES, 1996; PASQUAL, 2001). Resultados obtidos para algumas espcies do gnero tm mostrado que pode ocorrer a formao de razes adventcias em brotos na etapa de multiplicao in vitro, o que pode ser uma vantagem no sentido de diminuir o tempo de obteno das mudas e possibilitar a reduo de custos. Quando os explantes possuem nveis de auxina endgena adequados e no degradados durante o cultivo in vitro, o enraizamento

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pode ocorrer j na etapa de multiplicao, como observado para M. oreas. Vale ressaltar, para essa espcie que, a segmentao dos explantes com a manuteno de parte do pice meristemtico, pode ter inibido a induo de mltiplos brotos mesmo na presena de citocinina, mas favorecendo o enraizamento, por causa da presena de auxina nessa regio (JUREZ; PASSERA, 2002; TAIZ; ZEIGER, 2004). A suplementao de auxinas ao meio de enraizamento usual, entretanto, h espcies que enrazam com facilidade e no necessitam da presena destes reguladores, o que pode ser explicado pelo elevado nveis endgenos desses fitohormnios (GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998; PINTO; LAMEIRA, 2001). Na Figura 1, podem ser observadas sementes inoculadas de M. oreas no incio do processo de germinao in vitro, explantes em processo de regenerao durante a etapa de multiplicao e detalhes das brotaes com razes.
Fotos: Ana Valria V. de Souza

Figura 1. a) Germinao in vitro de sementes de M. oreas; b) multiplicao in vitro de M. oreas. c) detalhes das razes nas brotaes durante a etapa de multiplicao in vitro.

As espcies M. glaucescens e M. paucispinus tambm apresentaram razes na etapa de multiplicao. Resende (2010) obteve bons resultados para esta varivel, quando os explantes de M. glaucescens (>50%) e M. paucispinus (>70%) foram cultivados em meio MS/2 suplementado com 15 g L-1 de sacarose, sem adio de qualquer regulador vegetal. Esses resultados so interessantes e corroboram com aqueles obtidos para M. oreas. Essas espcies devem possuir nveis satisfatrios de auxina endgena, que possibilitem a induo de razes adventcias mesmo na ausncia de auxinas sintticas. Contudo, anlises bioqumicas devem ser realizadas a fim de confirmar tal afirmao.

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Quiala et al. (2009) obtiveram 100% de enraizamento em brotos de Pilosocereus robinii em meio MS livre de qualquer regulador vegetal, assim como Dvila-Figueroa et al. (2005), que conseguiram resultados de enraizamento das espcies de cactceas Turbinicarpus laui, T. lophophoroides, T. pseudopectinatus, T. schmiedickeanus subsp. flaviflorus, T. schmiedickeanus subsp. klinkerianus, T. schmiedickeanus subsp. schmiedickeanus, T. subterraneus, e T. valdezianus que variaram entre 54,2% a 94,2%, em meio de cultura MS na metade da concentrao salina sem auxina. Mas o enraizamento de P. aselliformis (89%) e P. strobiliformis (87%) ocorreu em meio de cultura suplementado com carvo ativado e auxinas (PEREZ-MOLPHE-BALCH; DVILA-FIGUEROA, 2002). Quando existe a necessidade da suplementao do meio de cultura com auxinas sintticas para acontecer a formao de razes adventcias em determinadas espcies, a auxina endgena age como um ativador de gene alavancando a formao precoce do primrdio radicular e a aplicao de auxinas sintticas favorece a conjugao entre o AIA endgeno e aminocidos que promovem a sntese de protenas especficas necessrias para a formao dessas razes iniciais (ALOUFA, 2003; ASSIS; TEIXEIRA, 1998; GASPAR; HOFINGER, 1988; ONO; RODRIGUES, 1996). Em geral, aps aplicao da auxina sinttica, ocorre um aumento imediato no nvel endgeno de auxina natural e consequentemente h o incio da formao de razes primordiais (GASPAR; HOFINGER, 1988). Mas, alm das auxinas sintticas, o uso do carvo ativado em meio de cultura tambm tem sido realizado para promover o enraizamento adventcio, por causa de seus efeitos benficos de adsoro de substncias prejudiciais ao enraizamento, como os compostos fenlicos ou a simulao de uma condio de escuro, que a situao mais favorvel ao desenvolvimento de razes adventcias (GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998; SOUZA; PEREIRA, 2007). De acordo com McCown (1988), o efeito do carvo no desenvolvimento da planta in vitro depende da composio qumica do meio e do gentipo da planta. Em relao ao meio de cultura, tem-se observado, de acordo com muitos trabalhos, que o uso de meios menos concentrados tem permitido melhores resultados quando o objetivo o enraizamento in vitro (ALOUFA, 2003; GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998; LIMA, 2004; MCCOWN, 1988; PINTO; LAMEIRA, 2001; PASQUAL, 2001; SOUZA et al., 2004). A alta concentrao de sais que compem o meio bsico MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962), mesmo em presena de auxinas, pode inibir o enraizamento in vitro (MCCOWN, 1988).

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Diluies deste, para 1/2, 1/3 e at 1/4 de sais, tm possibilitado melhores resultados para muitas espcies de plantas. Meios bsicos menos concentrados como WP, White, Knop, Heller podem ser igualmente favorveis (ALOUFA, 2003; GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998; PINTO; LAMEIRA, 2001; PASQUAL, 2001). A utilizao da concentrao mais diluda do meio MS para o cultivo in vitro de M. oreas, tambm pode ter favorecido a induo das razes j na etapa de multiplicao. As melhores respostas para a varivel matria fresca das brotaes foram obtidas na presena de 0,5 mg L-1 de KIN (Tabela 2) e, ainda nas condies in vitro, j foi possvel observar o melhor desenvolvimento das brotaes na presena desta citocinina. Os explantes eram bem maiores quando comparados ao tratamento controle ou na presena de BAP. Como no houve induo de mltiplas brotaes a partir de um nico explante, pode no ter ocorrido competio entre os mesmos e, com isso, houve maior disponibilizao dos nutrientes do meio de cultura beneficiado pela presena de KIN. Resultados semelhantes foram encontrados por Quiala et al. (2009), quando observaram que o crescimento de brotos de P. robinii foi reduzido com o aumento da concentrao de BAP no meio de cultura. Taiz e Zeiger (2004) afirmam que a aplicao de citocininas em doses elevadas pode inibir o processo de alongamento de caules e tecidos. A diversidade na resposta morfogentica in vitro, tanto entre espcies quanto entre gentipos da mesma espcie, mostra a necessidade de otimizao de protocolos diferenciados e especficos (GRATTAPAGLIA; MACHADO, 1998; JOHNSON; EMINO, 1979a, 1979b). Aps a finalizao do processo in vitro, as plantas obtidas foram levadas ao ambiente ex vitro para a etapa de aclimatizao e, nessa fase, foi possvel observar 100% de sobrevivncia destas, em condies de substrato em casa de vegetao e viveiro. A aclimatizao um perodo necessrio para adaptao de plantas produzidas in vitro, que permitir sua sobrevivncia nas condies de cultivo em campo. Porm, pode ser a etapa mais crtica em um protocolo de micropropagao e comprometer completamente a produo das mudas micropropagadas de algumas espcies, uma vez que as plantas so expostas a mudanas drsticas no que se refere s condies ambientais, passando de uma condio heterotrfica para autotrfica. Nesse caso, a perda de gua o principal problema

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(GRATTAPAGLIA; MACHADO 1998; PASQUAL, 2001). Contudo, para a espcie em estudo, observou-se que a mudana do metabolismo heterotrfico para o autotrfico, no foi um fator limitante para a aclimatizao das plantas. Este resultado interessante porque mostra que os brotos enraizados no necessitam passar por uma etapa intermediria de rustificao ainda em condies de laboratrio antes da transferncia para o substrato em casa de vegetao. Alguns autores afirmam que procedimentos de retirada das tampas dos recipientes de cultivo ainda em sala de crescimento uma forma benfica para pr-adaptar as plantas s condies de ambiente externo (GRATTAPAGLIA; MACHADO 1998; PASQUAL, 2001; SANTANA, 2003). Nesse caso, pode ocorrer induo de modificaes anatomo-fisiolgicas nas plantas, que podem favorecer a sobrevivncia durante a transferncia do cultivo in vitro para as condies ex vitro (SANTANA, 2003). Rout et al. (2006) no comentam sobre esta necessidade de rustificao ainda em condies de laboratrio. Os autores ressaltam, apenas, a necessidade da aclimatizao gradual de plantas micropropagadas do ambiente de alta umidade para o de baixa umidade, o que capacita as plantas a sobreviverem sob condies climticas adversas, como foi realizado para o M. oreas quando os brotos j em tubetes, foram cobertos com plstico transparente em casa de vegetao para manuteno da umidade nos dias iniciais aps a transferncia. Na Figura 2 pode-se observar a aclimatizao das brotaes de M. oreas produzidas in vitro, desde o momento da transferncia para os tubetes contendo o substrato, at a finalizao do processo com a transferncia das plantas para condies de sol pleno.
Fotos: Ana Valria V. de Souza.

Figura 2. a) Brotaes de M. oreas logo aps transferncia para substrato; b) detalhe da planta logo aps transferncia para o viveiro; c) detalhe da planta em condies de sol pleno.

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De acordo com Rout et al. (2006), plantas cultivadas in vitro so expostas a condies controladas no que se refere nutrio, luminosidade, fontes de carbono, trocas gasosas, presena de determinadas substncias como os reguladores vegetais, dentre outras, que promovem o crescimento rpido e a multiplicao. No entanto, essas condies podem induzir a ocorrncia de mudanas morfolgicas e fisiolgicas, que podem dificultar, sobremaneira, a sobrevivncia quando as plantas so transferidas diretamente para o campo (ROUT et al., 2006). Os resultados variam significativamente entre espcies e, em alguns casos, no existe dificuldade para a finalizao do processo quando as plantas so transferidas diretamente das condies in vitro para o campo. Resende (2010) obteve mais de 90% de sobrevivncia das plantas micropropagadas de M. glaucescens quando retirou os brotos enraizados das condies in vitro e transferiu diretamente para o campo com 100% de luminosidade. Resultados semelhantes tambm foram obtidos por Jurez e Passera (2002), para a espcie O. ellisioana. Malda et al. (1999) observaram que a perda de gua aps 20 dias de aclimatizao no afetou a sobrevivncia dos cactos Coryphanta minina e O. denegrii. Aps esse perodo, as plantas menos vigorosas iniciaram um processo satisfatrio de recuperao. Este processo tambm foi observado na espcie em estudo, aps a transferncia das plantas para os frascos de polietileno transparentes contendo solo da Caatinga como substrato. Durante um perodo de duas semanas, aproximadamente, as plantas apresentaram-se ressecadas, com sintomas de perda de gua. Contudo, recuperaram-se espontaneamente. As espcies de Melocactus possuem caractersticas especiais como ceras, espinhos, parnquima aqufero, sistema radicular fasciculado, alm do metabolismo cido das crassulceas (CAM), que permite sua sobrevivncia em ambientes ridos e com baixa disponibilidade de gua (ARRUDA et al., 2005; KHALAFALLA et al., 2007; SRISKANDARAJAH; SEREK, 2004). Essas caractersticas podem favorecer a eliminao da etapa de rustificao em protocolos de micropropagao, o que pode ser uma vantagem considervel na reduo do tempo para obteno das mudas e dos custos.

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Nesse caso, permanece a necessidade da realizao de outros experimentos de aclimatizao de M. oreas para a efetiva otimizao do protocolo de micropropagao, uma vez que o tempo para a transferncia das mudas para condies plena de luminosidade foi consideravelmente longo, sendo necessrio outros experimentos, para diminuir o tempo de obteno das mudas. A tcnica da micropropagao vantajosa, pois o tempo completo para a obteno das mudas produzidas in vitro consideravelmente menor, quando comparado s condies naturais de reproduo e propagao. O sucesso obtido na etapa de aclimatizao de espcies de cactceas, com mais de 90% de sobrevivncia das plantas, pode ser conferido em vrios trabalhos para as espcies Turbinicarpus laui (94-100%) (MATA-ROSAS et al., 2001), Ariocarpus kotschoubeyanus (95-100%) (MOEBIUS-GOLDAMMER et al., 2003), Escobaria mnima (92%), Mammillaria pectinifera (76,3%), Melocactus curvispinus (75%), Pelecyphora aselliformis (81,3%) (Retes-Pruneda et al., 2007) e Pilosocereus robinii (91,6%) (QUIALA et al., 2009). Quiala et al. (2009) afirmam que existe uma recomendao para se utilizar o substrato mais adequado para o plantio de espcies de cactceas, que composto por uma mistura de areia grossa lavada, hmus, carvo vegetal e matria orgnica, de acordo com o Jardim Botnico Nacional de Cuba. Contudo, estes mesmos autores ressaltam que substratos simples so viveis para o cultivo de espcies de cactos.

Concluses
A produo de mudas de M. oreas pode ser realizada com xito por meio da tcnica de micropropagao, uma vez que foi possvel produzir plantas em condies in vitro, perfeitamente adaptadas s condies de cultivo em ambiente ex vitro. Contudo, mesmo que o protocolo utilizado para a conduo deste trabalho tenha sido adequado para a produo de mudas, o mesmo precisa ser melhor otimizado no sentido de provocar a induo de mltiplas brotaes nos explantes, mas principalmente a fim de reduzir o tempo total para a obteno das mudas. Experimentos futuros devero ser realizados quando dever se buscar metodologias eficientes para propiciar maior germinao das sementes em menor tempo e diminuir o perodo da aclimatizao das plantas produzidas in vitro. Porm, vale ressaltar que, mesmo o tempo de germinao e aclimatizao tenham sido relativamente longo, o protocolo foi eficiente porque eliminou a etapa de enraizamento das brotaes, o que um benefcio em protocolos de micropropagao de espcies nativas.

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Referncias
ALOUFA, M. A. I. Enraizamento in vitro de plantas lenhosas: dificuldades e solues. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE FLORICULTURA E PLANTAS ORNAMENTAIS, 14.; CONGRESSO BRASILEIRO DE CULTURA DE TECIDOS DE PLANTAS, 1., 2003, Lavras. Anais... Lavras: UFLA, 2003. p. 3-5. ANDRADE, C. T. S.; MARQUES, J. G. W.; ZAPPI, D. C. Utilizao medicinal de cactceas por sertanejos baianos. Revista Brasileira de Plantas Medicinais, Botucatu, v. 8, n. 3, p. 36-42, 2006. ARECES, A. Cactaceae. In: SMITH, N.; MORI, S. A.; HENDERSON, A.; STEVENSON, W. D.; HEALD, S. V. (Ed.). Flowering plants of the Neotropics. Princeton: Pinceton University Press; Oxford: New York Botanical Garden, 2004. p. 73-76. ARRUDA, E.; MELO-DE-PINNA, G. F.; ALVES, M. Anatomia dos rgos vegetativos de Cactaceae da Caatinga pernambucana. Revista Brasileira de Botnica, So Paulo, n. 28, p. 589-601, 2005. ASSIS, T. F.; TEIXEIRA, S. L. Enraizamento de plantas lenhosas. In: TORRES, A. C.; CALDAS, L. S.; BUSO, J. A. (Ed.). Cultura de tecidos e transformao gentica de plantas. Braslia, DF: Embrapa-SPI: Embrapa-CNPH, 1998. p. 261-96. BARBOSA, M.; MAYO, S.; CASTRO, A.; FREITAS, G.; PEREIRA, M.; NETO, P.; MOREIRA, H. Checklist preliminar das angiospermas. In: SAMPAIO, E.; MAYO, S.; BARBOSA, M. (Ed.). Pesquisa botnica nordestina: progresso e perspectivas. Recife: SBB, 1996. p. 253-415. BARROSO, G.; GUIMARES, E.; ICHASO, C.; COSTA, C.; PEIXOTO, A. Sistemtica das angiospermas do Brasil. So Paulo: LCT: Edusp, 1978. BLAZICH, F. A. Chemicals and formulations used to promote adventitious rooting. In: DAVIS, T. D.; HAISSIG, B. E.; SANKHLA, N. (Ed.). Adventitious root formation in cuttings. Portland: Dioscorides Press, 1988. p. 132-149. CARDARELLI, M.; BORGOGNONE, D.; COLLA G. In vitro propagation of Obregonia denegrii FRIC. (CACTACEAE). Propagation of Ornamental Plants, Sofia, v. 10, n. 1, p. 29-36, 2010. CHOREO-TAPIA, J. M.; GONZLEZ-ROSAS, H.; TERRAZAS-SALGADO, T.; HERNNDEZDAS, A. B.; MOHANTY, S.; DAS, P. Variation in kariotype and 4-C DNA content in six species of Melocactus of the family Cactaceae. Cytologia, [Tokyo], v. 63, n. 1, p. 9-16, 1998. DVILA-FIGUEROA, C. A.; ROSA-CARRILLO, M. L.; PREZ-MOLPHE-BALCH, E. In vitro Celular an Development Biology-Plant, 41:540-545, 2005. DAVIS, T. D.; SANKHLA, N. Effect of shoot growth retardants and inhibitors on adventitious rooting. In: DAVIS, T. D.; HAISSIG, B. E.; SANKHLA, N. Adventitious root formation in cuttings. Portland: Dioscorides Press, 1988. v. 2, p.174-84.

26

Produo In Vitro de Mudas de Coroa-de-Frade (Melocatus oreas Miq. - Cactaceae)...

ESTRADA-LUNA, A. A.; MARTNEZ-HERNNDEZ, J. J.; TORRES-TORRES, M. E.; CHABL-FERREIRA, D. F. SISVAR: sistema de anlises estatsticas: verso 4.3. Lavras: UFLA, 2003. 1 CD-ROM. FONSECA, R. B. S. Fenologia reprodutiva e disperso de Melocactus glaucescens Buining e Brederoo e M. paucispinus G. Heimen e R. Paul (Cactaceae) no Municpio de Morro do Chapu, Chapada Diamantina Bahia Brasil. 2004. 123 f. Dissertao (Mestrado) Universidade Estadual de Feira de Santana, Feira de Santana. FORD, Y. Y.; Bonham, E. C.; CAMERON, R. W. F.; BLAKE, P. S.; JUDD, H. L.; HarrisonMurray, R. S. Adventitious rooting: examining the role of auxin in easy and a difficult-toroot plant. Plant Growth Regulation, Sofia, v. 10, p. 1-11, 2001. GASPAR, T.; HOFINGER, M. Auxin metabolism during adventitious rooting. In: DAVIS, T. D.; HAISSIG, B. E.; SANKHLA, N. (Ed.). Adventitious root formation in cuttings. Portland: Dioscorides Press, 1988. v. 2, p. 117-131. GIBSON, A.; NOBEL, P. The cactus primer. Cambrigdeok: Havard University Press, 1986. 986 p. GIUSTI, P.; VITTI, D.; FICCHETTE, F.; COLLA, G. In vitro propagation of three endangered cactus species. Scientia Horticulturae, [Maryland Heights], v. 95, p. 319332, 2002. GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M. A. Micropropagao. In: TORRES, A. C.; CALDAS, L. S.; BUSO, J. A. (Ed.). Cultura de tecidos e transformao gentica de plantas. Braslia, DF: EMBRAPA-SPI: EMBRAPA-CNPH, 1998. v. 1, p. 183-260. HUBSTENBERGER, J. F.; CLAYTON, P. W.; PHILLIPS, G. C. Micropropagation of cacti. In: BAYAY, Y. P. S. (Ed.). Biotechnology in agriculture and forestry. Berlin: Springer-Verlag, 1992. v. 20, p. 49-68. HUNT, D.; TAYLOR, N. The genera of Cactaceae: progress toward consensus. Bradleya, [Hornchurch], n. 8, p. 85-107, 1990. JOHNSON, J. L.; EMINO, E. R. Tissue culture in the Cactaceae. Cactus and Succulent Journal, Claremont, n. 51, p. 275-277, 1979a. ______. In vitro propagation of Mammillaria elongata. HortScience, Alexandria, n. 14, p. 605-606, 1979b. JUREZ, M. C.; PASSERA, C. B. In vitro propagation of Opuntia ellisiana Griff. and acclimatization to field conditions. Biocell, Mendoza, n. 26, p. 319-324, 2002. KHALAFALLA, M. M.; ABDELLATEF, E.; MOHAMED-AHMED, M. M.; OSMAN, M. G. Micropropagation of cactus (Opuntia ficus-indica) as strategic tool to combat desertification in arid and semi arid regions. International Journal of Sustainabe Crop Production, [Toronto], n. 2, p. 1-8, 2007.

27

Produo In Vitro de Mudas de Coroa-de-Frade (Melocatus oreas Miq. - Cactaceae)...

LIMA, E. C. Induo e enraizamento in vitro de brotaes em segmentos nodais de sangra dgua. 2004. 71 f. Dissertao (Mestrado em Fisiologia Vegetal) Universidade Federal de Lavras, Lavras. LONE, A. B.; TAKAHASHI, L. S. A.; FARIA, R. T.; DESTRO, D. Desenvolvimento vegetativo de Melocactus bahiensis (Cactaceae) sob diferentes nveis de sobreamento. Revista Ceres, Viosa, MG, n. 56, p. 199-203, 2007. MACHADO, M. C. The genus Melocactus in eastern Brazil: part I: an introduction to Melocactus. British Cactus & Succulent Journal, [Hornchurch], n. 27, p. 1-16, 2009. MALDA, B. G.; BACKHAUS, R.A.; MARTIN, C. Alterations in growth and crassulacean acid metabolism (CAM) activity of in vitro cultured cactus. Plant Cell Tissue and Organ Culture, Heidelberger, n. 58, p. 1-9, 1999. MATA-ROSAS, M.; ROSA, M. A. M. de la; MOEBIUS-GOLDAMMER, K.; CHVEZ-AVILA, V. M. Micropropagation of Turbinicarpus laui Glass et Foster, an endemic and endangered species. In vitro Cellular and Developmental Biology-Plant, Heidelberger, n. 37, p. 400404, 2001. MAUSETH, J. D. Water-storing and Cavitation-preveting adaptations in wood of cacti. Annals of Botany, Oxford, n. 72, p. 81-89, 1993. MCCOWN, B. H. Adventitious rooting of tissue cultured plants. In: DAVIS, T. D.; HAISSIG, B. E.; SANKHLA, N. Adventitious root formation in cuttings. Portland: Dioscorides Press, 1988. v. 2, p. 289-302. MEDEIROS, L. A.; SALVADOR, R. C. S.; GALLO, L. A.; OLIVEIRA, E. T.; DEMATT, M. E. S. P. In vitro propagation of Notocactus magnificus. Plant Cell Tissue and Organ Culture, Heidelberger, n. 84, p. 165-169, 2006. MOEBIUS-GOLDAMMER, K.G.; MATA-ROSAS, M.; CHVEZ-AVILA,V.M. Organogenesis and somatic embryogenesis in Ariocarpus kotschoubeyanus (Lem.) K. Schum. (Cactaceae), an endemic and endangered Mexican species. In vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, Heidelberger, n. 39, p. 388-393, 2003. MORAES, R. M.; CALDAS, L. S.; SILVEIRA, C. E. S.; SOUZA, A. V.; BERTONI, B. W.; PEREIRA, A. M. S. Micropropagao e banco de germoplasma in vitro para produo e conservao de plantas nativas do Cerrado. In: PEREIRA, A. M. S. (Org.). Recursos genticos e conservao de plantas medicinais do Cerrado. Ribeiro Preto: Legis Summa, 2007. v. 1, p. 185-214. MURASHIGE, T.; SKOOG, F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Phsysiology Plantarum, Hoboken, n. 15, p. 473-497, 1962. ONO, E. O.; RODRIGUES, J. D. Aspectos da fisiologia do enraizamento de estacas caulinares. Jaboticabal: FUNEP, 1996. 83 p.

28

Produo In Vitro de Mudas de Coroa-de-Frade (Melocatus oreas Miq. - Cactaceae)...

ORTEGA-BAES, P.; GODNEZ-ALVAREZ, H. Global diversity and conservation priorities in the Cactaceae. Biodiversity and Conservation, Heidelberger, n. 15, p. 817-827, 2006. PASQUAL, M. Cultura de tecidos. Lavras: UFLA: FAEPE, 2001. 165 p. PASQUAL, M.; HOSHIKA. E. Efeito do cido naftaleno cetico e 6-benzilaminopurina sobre a proliferao in vitro de Cactos Gymnoclicium buldiamar L. e Mammillaria bocassana L. Pesquisa Agropecuria Brasileira, Braslia, DF, v. 4, n. 27, p. 589-593, 1992. PREZ-MOLPHE-BALCH, E.; DVILA-FIGUEROA, C. A. In vitro propagation of Pelecyphora aselliformis Ehrenberg and P. strobiliformis Werdermann (Cactaceae). In vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, Heidelberger, n. 38, p. 73-78, 2002. PREZ-MOLPHE-BALCH, E.; REYES, M. E. P.; AMADOR, E. V.; RANGEL, E. M.; RUIZ, L. R. M.; VIRAMONTES, H. J. L. Micropropagation of 21 species of Mexican cacti by axillary proliferation. In vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, Heidelberger, n. 34, p. 131-135, 1998. PINTO, J. E. B.; LAMEIRA, O. A. Micropropagao e metablitos secundrios in vitro de plantas medicinais. Lavras: UFLA: FAEPE, 2001. QUIALA, E.; MATOS, J.; MONTALVO, G.; FERIA, M.; CHVEZ, M.; CAPOTE, A.; PREZ, N.; BARBN, R.; KOWALSKI, B. In vitro propagation of Pilosocereus robinii (Lemaire) Byles et Rowley, endemic and endangered cactus. Journal of the Professional Association for Cactus Development, [Atkinsons], n. 11, p. 18-25, 2009. RGO, M. M.; ARAJO, E. R.; RGO, E. R.; CASTRO, J. P. In vitro seed germination of mandacaru (Cereus jamacaru D.C.). Revista Caatinga, Mossor, v. 22, n. 4, p. 34-38, 2009. RESENDE, S. V. Micropropagao e conservao in vitro de Melocactus glaucescens Buining e Brederoo e M. paucispinus G. Heimen e R. Paul (Cactaceae), espcies endmicas da Bahia e ameaadas de extino. 2010. 139 f. Tese (Doutorado em Botnica) Universidade Estadual de Feira de Santana, Feira de Santana. RESENDE, S. V.; LIMA-BRITO, A.; SANTANA, J. R. F. Influncia do substrato e do enraizamento na aclimatizao de Melocactus glaucescens Buining e Brederoo propagados in vitro. Revista Ceres, Viosa, MG, v. 57, n. 6, p. 803-809, 2010. RETES-PRUNEDA, J. L.; VALADEZ-AGUILAR, M. L.; PREZ-REYES, M. E.; PREZMOLPHE-BALCH, E. Propagacin in vitro de especies de Echinocereus, Escontria, Mammillaria, Melocactus y Polaskia (Cactaceae). Boletn de la Sociedad Botnica de Mxico, Distrito Federal, Mxico, n. 81, p. 9-16, 2007. ROCHA, E. A.; AGRA, M. F. Flora do pico do Jabre, Paraba, Brasil: Cactaceae juss. Acta Botnica Braslica, Feira de Santana, v. 16, n. 1, p. 15-21, 2002. ROJAS-ARCHIGA, M.; VSQUEZ-YANES, C. Cactus seed germination: a review. Journal of Arid Environments, [Maryland Heights], v. 44, p. 85-104, 2000.

29

Produo In Vitro de Mudas de Coroa-de-Frade (Melocatus oreas Miq. - Cactaceae)...

ROUT, G. R.; MOHAPATRA, A., MOHAN JAIN, S. Tissue culture of ornamental pot plant: a critical review on present scenario and future prospects. Biotechnology Advances, [Maryland Heights], n. 24, p. 531-560, 2006. RUBLUO, A.; MARN-HERNNDEZ, T.; DUVAL, K.; VARGAS, A.; MRQUEZ-GUZMN, J. Auxin induced morphogenic responses in longterm in vitro subcultured Mammillaria san-angelensis Snchez-Mejorada (Cactaceae). Scientia Horticulturae, [Maryland Heights], n. 95, p. 341-349, 2002. SANTANA, J. R. F. Controle da morfognese in vitro em algumas espcies de Annonaceae. 2003. 237 f. Tese (Doutorado em Fisiologia Vegetal) Universidade Federal de Lavras, Lavras. SANTOS-DAZ, M. S.; MNDEZ-ONTIVEROS, R.; ARREDANDO-GMEZ, A.; SANTOSDAZ, M. L. In vitro organogenesis of Pelecyphora aselliformis Erhenberg (Cactaceae). In vitro Cellular & Developmental Biology-Plant, Heidelberger, n. 39, p. 480-484, 2003. SRISKANDARAJAH, S.; SEREK, M. Regeneration from phylloclade explants and callus cultures of Schlumbergera e Rhipsalidopsis. Plant Cell Tissue and Organ Culture, Heidelberger, v. 78, p. 75-81, 2004. SOUZA, A.V.; PINTO, J. E. B. P.; Bertolucci, S. K. V.; Teixeira, R. N. Enraizamento in vitro de arnica (Lychnophora pinaster Mart.), uma planta medicinal. Revista Brasileira de Plantas Medicinais, Botucatu, v. 7, n. 1, p. 86-91, 2004. SOUZA, A. V.; PEREIRA, A. M. S. Enraizamento de plantas cultivadas in vitro. Revista Brasileira de Plantas Medicinais, Botucatu, v. 9, n. 4, p. 103-117, 2007. TAIZ, L.; ZEIGER, E. Fisiologia vegetal. 3. ed. Porto Alegre: Artmed, 2004. 719 p. VILLALOBOS, V. M.; FERREIRA, P.; MORA, A. The use of biotechnology in the conservation of tropical germoplasm. Biotechnology Advanced, [Maryland Heights], n. 9, p. 197-215, 1991.

30

Produo In Vitro de Mudas de Coroa-de-Frade (Melocatus oreas Miq. - Cactaceae)...

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