Ano III Nmero 4

Informativo Tcnico

especial

Minimizando as interferncias da dosagem de creatinina

A determinao analtica da creatinina na urina, soro ou plasma pode ser realizada utilizando-se diferentes metodologias, sendo, aquelas baseadas na reao de Jaff, as mais comumente utilizadas no Brasil. A reao de Jaff foi descrita em 1886 e relata a formao de um complexo de cor vermelha quando a creatinina reage com picrato em meio alcalino. O complexo formado absorve fortemente em 520 nm. sabido que vrias substncias presentes no soro tambm formam complexo de cor vermelha com picrato em meio alcalino e desta forma interferem positivamente na determinao da creatinina. Dentre as substncias que interferem positivamente na reao de Jaff podemos citar as protenas plasmticas, glicose, cido ascrbico, acetona, cefalosporinas e cetocidos. A bilirrubina, de forma contrria, causa interferncia negativa, ou seja, resultados falsamente diminudos. Numerosas modificaes na reao de Jaff tm sido propostas com o objetivo de melhorar a especificidade na determinao da creatinina plasmtica. A determinao da creatinina pode tambm ser realizada utilizando-se a metodologia enzimtica. O princpio da reao envolve vrias enzimas, tais como a creatininase, creatina hidrolase, dentre outras. Este mtodo no sofre interferncia de protenas plasmticas, glicose e demais interferentes da reao de Jaff, apresentando excelente correlao com a HPLC, que considerado o mtodo definitivo para dosagem de creatinina. Conhecendo todas as limitaes da metodologia de Jaff e visando melhorar a especificidade do teste para determinao de creatinina em equipamentos automticos e semi-automticos, a Labtest desenvolveu o produto Creatinina K - Cat. 96. Este produto utiliza o princpio da reao de Jaff associado aplicao de um ndice de correo igual a 0,25 mg/dL para minimizar a ao de interferentes na determinao de creatinina. O ndice de correo deve ser subtrado do resultado final obtido no teste.

Creatinina K - Cat 96:

Estudos de Comparao de Mtodos

Para demonstrar a especificidade do produto desenvolvido, Creatinina K - Cat. 96, foi realizado estudo de comparao de mtodos, tendo sido empregado como mtodo comparativo um produto que utiliza metodologia enzimtica, aqui denominado Mtodo Enzimtico, e que apresenta resultados substancialmente equivalentes ao mtodo definitivo de determinao de creatinina (HPLC). Vinte (20) amostras de soro com concentraes dentro do intervalo operacional dos mtodos foram avaliadas em duplicata utilizando o sistema automtico Labmax 240.

Resultados
1. Comparao do produto Creatinina K - Cat. 96 e o Mtodo Enzimtico.

Tabela 1: Resultados do estudo comparativo.

Mtodo Enzimtico Nmero de amostras Intervalo de concentraes (mg/dL) Mdia das estimativas (mg/dL) Equao da regresso Coeficiente de correlao 20 0,52 a 11,0 3,30 0,9984

Creatinina K - Cat. 96 20 0,47 a 10,8 3,35

Creatinina K - Cat. 96 = 1,0073 x Mtodo Enzimtico + 0,0281 mg/dL

Aplicando a equao obtida na anlise de regresso (Tabela 1) para valores de creatinina iguais a 1,6 e 6,0 mg/dL, determinados com o Mtodo Enzimtico, os valores encontrados para o reagente Creatinina K - Cat. 96 so iguais a 1,64 e 6,02 mg/dL, respectivamente. Portanto, a diferena encontrada entre os dois mtodos 0,04 mg/dL (ou 2,3%) e 0,02 mg/dL (ou 0,3%) (Tabela 2). Esta diferena observada o erro sistemtico (ou bias), que nos informa sobre o grau de concordncia entre o valor obtido com o mtodo Creatinina K - Cat. 96 e o valor com o Mtodo Enzimtico, ou seja, a exatido do mtodo Creatinina K - Cat. 96 . Quanto menor o erro sistemtico maior a exatido do reagente em teste. Tabela 2: Erros sistemticos (bias) estimados em dois nveis de concentrao de cretinina.

Concentrao com o Mtodo Enzimtico (mg/dL) 1,60 6,00

Concentrao com o Reagente Creatinina K - Cat.96 (mg/dL) 1,64 6,02

Erro Sistemtico (diferena entre os valores obtidos entre os dois mtodos) mg/dL 0,04 0,02 % 2,3 0,3

*A concentrao foi estimada utilizando a equao obtida na anlise de regresso

O erro sistemtico obtido com o reagente Creatinina K - Cat. 96 significativamente menor que o erro sistemtico desejvel (< 3,4%) da especificao baseada nos componentes da variao biolgica para dosagem de Creatinina (Tabela 2). Fig. 1: Grfico da correlao entre o mtodo enzimtico e Creatinina K - Cat. 96.

12 11
Creatinina K - Cat 96(mg/dL)

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Mtodo Enzimtico (mg/dL)

possvel tambm, ver graficamente a correlao entre os dois mtodos atravs do diagrama de disperso (Figura 1). A linha azul do diagrama, denominada linha de equivalncia, corresponde disperso dos pontos quando os valores obtidos com o reagente Creatinina K Cat. 96 so exatamente iguais queles obtidos com o Mtodo Enzimtico. A linha preta, denominada linha de tendncia (ou linha de regresso), corresponde disperso verdadeira dos valores obtidos para o reagente Creatinina K - Cat. 96 em relao ao Mtodo Enzimtico. Quanto menor a diferena entre os valores obtidos com o reagente em teste e o mtodo comparativo, isto , quanto menor o erro sistemtico (bias), mais semelhante linha de equivalncia ser a linha de tendncia. Como se observa no grfico, linha de tendncia (preta) encontra-se praticamente sobreposta linha de identidade (azul), indicando que os resultados do produto Creatinina K - Cat. 96 so substancialmente equivalentes aos do Mtodo Enzimtico.

2. Comparao do reagente sem aplicao do ndice de correo e o Mtodo Enzimtico. Para ressaltar a importncia da aplicao do ndice de correo na minimizao da ao dos interferentes presentes na amostra so apresentados tambm os resultados obtidos com o produto desenvolvido sem a aplicao do ndice de correo e o Mtodo Enzimtico. Tabela 3: Resultados do estudo comparativo.

Mtodo Enzimtico Nmero de amostras Intervalo de concentraes (mg/dL) Mdia das estimativas (mg/dL) Equao da regresso Coeficiente de correlao 20 0,52 a 11,0 3,30 0,9984

Creatinina K - Cat. 96
(sem aplicao do ndice de correo)

20 0,72 a 11,0 3,60

Reagente sem ndice de correo = 1,0073 x Mtodo Enzimtico + 0,2781 mg/dL

Aplicando a equao obtida na anlise de regresso (Tabela 3) para valores de creatinina iguais a 1,6 e 6,0 mg/dL, determinados com o Mtodo Enzimtico, os valores encontrados com o reagente Creatinina K - Cat. 96 sem o ndice de correo igual a 1,89 e 6,32 mg/dL, respectivamente (Tabela 4). Portanto, a diferena encontrada entre os valores obtidos com o produto desenvolvido e o mtodo comparativo 0,29 mg/dL (ou 18,1%) e 0,32 mg/dL (ou 5,4%).

Tabela 4: Erro sistemtico (bias) estimado em dois nveis de concentrao de creatinina.

Concentrao com o Mtodo Enzimtico (mg/dL) 1,60 6,00

Concentrao com o Reagente Creatinina K - Cat.96 (mg/dL) 1,89 6,32

Erro Sistemtico (diferena entre os valores obtidos entre os dois mtodos) mg/dL 0,29 0,32 % 18,1 5,4

*A concentrao foi estimada utilizando a equao obtida na anlise de regresso

O erro sistemtico obtido com o reagente Creatinina K - Cat. 96, sem a aplicao do ndice de correo, significativamente maior que o erro sistemtico desejvel (< 3,4%) da especificao baseada nos componentes da variao biolgica para dosagem de Creatinina. Fig. 2: Diagrama de disperso: Comparao entre o mtodo enzimtico e Creatinina K - Cat. 96 sem utilizao do ndice de correo.
12

Creatinina K - Cat 96(mg/dL) sem aplicao do ndice de correo

11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Mtodo Enzimtico (mg/dL)

A figura 2 demonstra que, quando no se aplica o ndice de correo aos resultados obtidos com o produto Creatinina K - Cat 96, a linha de tendncia (preta) se distancia da linha de equivalncia (azul), indicando aumento do erro sistemtico (bias). As linhas se dispem paralelamente, indicando que este erro sistemtico constante, portanto independente da concentrao do analito sendo decorrente da ao de interferentes presentes nas amostras.

Concluses
Analisando-se os resultados descritos anteriormente conclui-se que o produto Creatinina K - Cat. 96, quando utilizado conforme suas Instrues de Uso (aplicando-se o ndice de correo), apresenta uma excelente correlao com o mtodo enzimtico, que substancialmente equivalente ao mtodo definitivo de determinao da creatinina (HPLC). Ao avaliar os erros sistemticos estimados, verifica-se que o produto Labtest atende a especificao desejvel para o erro sistemtico para dosagem da creatinina baseada nos componentes da variao biolgica (< 3,4%). O erro sistemtico do reagente sem aplicao do ndice de correo no atende as especificaes baseadas nos componentes da variao biolgica por apresentar um erro constante na medio, que se deve a ao dos interferentes. Os resultados demonstram que o produto Creatinina K - Cat. 96 apresenta desempenho analtico adequado para determinao da creatinina.

Referncias Bibliogrficas
1. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, Burtis CA, Ashwood ER eds, 2. edio, Philadelphia: W.B. Saunders Co., 1994. 2. Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular, Base de datos de Variacin biolgica. Disponvel em:<http://www.seqc.es/article/articleview/330/1/170/>. 3. Labtest: Dados de Arquivo.

Creatinina K

Expediente
Infotec - Informativo Tcnico da Labtest Tiragem: 2.000 exemplares Distribuio gratuita. Equipe Labtest: Presidente: Dr. Jos Carlos Basques Diretor executivo: Alexandre Guimares Gerente de Pesquisa e Desenvolvimento: Dr. Pedro Vidigal Gerente Comercial: Marcus Lindgren Coordenadora de atendimento ao Cliente: Frida Wilke Diagramao e editorao: Pub Publicity LABTEST DIAGNSTICA SA Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 Lagoa Santa / MG - Brasil CEP 33400-000 Fone: (+5531)3681-9288 SAC (DDG): 0800-313411 E-mail: sac@labtest.com.br
Visitando nossa pgina na internet seu laboratrio dinamiza suas rotinas consultando: - Manuais de automao de diversos produtos; - POP's (Procedimentos Operacionais Padro); - Instrues de uso dos produtos Labtest; - Notcias sobre o mercado.

www.labtest.com.br