Ciencias Biolgicas y de la Salud Departamento de Sistemas Biolgicos Licenciatura en Qumica Farmacutica Biolgica Modulo: Obtencin de materias primas para

la produccin de medicamentos.

Extraccin de timol de la planta de tomillo.

Docente: Dra. Julia Cassani Hernndez Alumnos: Martnez Gonzlez Luis enrique (2112031199) Snchez Calleja Jess Eduardo (210362286) Lpez Rocha Csar Javier (210237724) Trimestre: 12O

INDICE

Objetivo2 Antecedentes..2 Caractersticas del aceite esencial...3 Propiedades de los fenoles..4-5 Caractersticas del timol.....5-6 Procedimiento......6-7 Resultados7-8 Anlisis de resultados8

Objetivo: Aislar timol presente en el aceite esencial del tomillo seco. Antecedentes: Esta planta ha sido conocida desde hace siglos por su excelente aroma, que la convirti en una de las principales especies aromticas naturales de la cocina mediterrnea, tanto combinada con carnes como pescados o pastas. Adems, la infinidad de principios activos naturales de que consta y que le aportan numerosas propiedades beneficiosas a la salud humana, hacen que el tomillo est presente en muchas de las infusiones en forma de "remedios caseros" contra diversas enfermedades y anomalas. Es originario del Mediterrneo. Crece desde el norte de frica a Asia menor, zona meridional de Europa. Es muy abundante en Espaa. Es uno de los condimentos de la cocina europea y del Medio Oriente. Crece tanto en zonas fras como ridas. Existen cientos de variedades. El Tomillo es muy aromtico, huele a tierra y su sabor es un poco picante con un toque de clavo, alcanfor y menta. Se puede tomar tanto fresco como seco. Seco no pierde sus propiedades ni su olor. Tiene propiedades curativas, es indispensable en la cocina francesa, espaola, italiana y en Latinoamrica. En Estados Unidos e Inglaterra tambin se usa pero menos. El tomillo, de la familia de las labiadas alcanza de 15 a 30 centmetros de altura, muestra hojas opuestas, lanceoladas, con los bordes enrollados y densamente pilosas. Las flores del Tomillo son diminutas, agrupadas en racimos terminales muy densos, rosados o blanquecinos. Cliz de color rojizo vinoso, con la garganta obstruida por pelitos blancos. El labio superior muestra tres dientecitos cortos, y el inferior dos largas y estrechas lacinias. La corola mide entre 7 y 8 mm y aparece dividida en dos labios: el superior escotado y el inferior subdividido en tres lbulos divergentes. Toda la planta desprende un fuerte aroma al estar provista de glndulas esenciales; existiendo numerosas variedades como el Tomillo salsero o blanco, el Tomillo mejorado o el Tomillo de Foscos. Se recolectan primordialmente como plantas medicinales el Thymus Vulgaris y el Tomillo salsero o blanco. Los romanos lo introdujeron en la cocina, perfumando quesos y vinos.

Caractersticas del aceite esencial. Las plantas medicinales y aromticas sintetizan y acumulan aceites en estructuras glandulares que pueden estar distribuidas por toda la parte area de la planta, aunque, esta distribucin n es uniforme, ya que generalmente se suelen encontrar en hojas y flores. En general, los aceites esenciales son productos formados por la mezcla de numerosas sustancias, con una composicin qumica bastante compleja, obtenida a partir del metabolismo secundario de las plantas como son el timol y carvacrol. Tambin la presencia de aceites esenciales en estas plantas tambin se puede explicar como mtodo de defensa frente a la perdida de agua, tomando en cuanta q el tomillo se encuentra en lugares secos y clidos.

*en esta imagen se muestran los compuestos que contiene el tomillo en mayor proporcin.

Propiedades de los fenoles. Los fenoles son ampliamente distribuidos en la naturaleza, y muy utilizados como intermediarios en las sntesis industriales. Los fenoles al igual que los alcoholes, tienen la misma geometra alrededor del O lo cual hace que al igual que los alcoholes y el agua tengan puntos de ebullicin relativamente altos debido a los puentes de hidrogeno. Los fenoles son casi un milln de veces ms cidos que los alcoholes por lo que son solubles en NaOH por lo que pueden extraerse fcilmente de una mezcla por extraccin bsica en disolucin acuosa seguida por una reacidificacion.

Los fenoles sustituidos pueden ser ms o menos cidos que el fenol dependiendo si su sustituyente es atractor o donador de electrones. Los fenoles son mucho ms cidos que los alcoholes, el enlace qumicamente activo en los fenoles puede representarse como ArO-H, mientras que los alcoholes como R-OH. La acidez de los fenoles se explica por medio de la resonancia ya que las formulas correspondientes a las estructuras se encuentran en la resonancia. Contribuye con la energa de resonancia al aumentar la estabilidad de la molcula del fenol, por el oxigeno cargado positivamente, como consecuencia del desplazamiento de los electrones negativos hacia el anillo. Por esto el tomo H que es positivo queda retenido con menor firmeza, lo cual explica la tencin creada en el enlace ArO-H. En las disoluciones alcalinas de fenol, el ion H+ se libera y se genera el ion fenoxido C6H5O-, ms estable por resonancia que la molcula original, esto hace que se elimine el efecto de separacin de cargas y permite interacciones ms fuertes de los pares electrnicos del tomo de O con los electrones del anillo. Como consecuencia de sus propiedades acidas los fenoles reaccionan con bases inorgnicas para formar sales. Caractersticas del timol. Como el timol es un fenol tambin conocido como, 5-metil-2-(1-metiletil) fenol (Figura 1), es una sustancia de origen natural que se encuentra presente en gran nmero de plantas, sobre todo en especies de la familia de las labiadas: romero, albahaca, melisa, menta, salvia, tomillo, ajedrea, organo, etc.

Figura 1.

En el caso del tomillo, el timol puede llegar a suponer el 50% del contenido de su aceite esencial. El timol est presente en aceites esenciales de ctricos (0,030,1%) que se usan ampliamente en la industria de las bebidas refrescantes. Adems posee una actividad antioxidante comparable a la de BHA (2,6-Bis-(1,1dimetiletil)-4-metilfenol), y BHT ((1,1-dimetiletil)-4-metoxifenol), antioxidantes de sntesis que se emplean en alimentacin (figura 2) y cuyo uso cada vez es ms discutido.

Figura 2. El hecho de que el timol sea un componente natural de la dieta y que se use de forma generalizada como aditivo alimentario, adems de que sea rpidamente metabolizado y eliminado cuando es ingerido, hace que los posibles residuos que puedan quedar de un tratamiento con esta sustancia no sean considerados txicos para el hombre.

MATERIALES Y METODOS Para la realizacin de este proyecto, en donde se realizo la extraccin del aceite esencial del tomillo y la extraccin de fenoles se aplicaron conocimientos terico prcticos obtenidos en el trascurso de este trimestre. Se utilizaron 500g de tomillo para poder obtener una muestra considerable y as poder trabajar con ella.

Equipo Rotavapor Balanza Analtica Parrilla Material 2 Soporte Universal 4 pinzas 1 refrigerante 1 matraz bola de 500mL 1 esptula 1 pipeta de 1mL 4 vasos de precipitado de 50mL 1 pipeta pasteur 1 embudo Papel filtro 38 tubos de ensaye 1 agitador de vidrio Pinzas para tubo de ensaye Papel tornasol 1 gradilla 1 embudo de separacin 1 mechero 2 vidrios de reloj 6 portaobjetos 1 bureta de 25mL

Sustancias * Eter Etilico Tolueno Cloroformo KOH HCl Silica gel

Extraccin de timol

Procedimiento. Primero se coloca el tomillo seco en un baln con agua suficiente para lograr la suspensin de la muestra. Se busca la menor manipulacin posible de la muestra con el objetivo de no degradar los aceites esenciales que son la fuente principal del compuesto a purificar. Por ello, para la extraccin del aceite esencial de tomillo se usa una destilacin con arrastre de vapor. Debido a la volatilidad y la insolubilidad del aceite en agua se esperara que el producto presente dos fases. Una vez obtenidas las fases se realizara un salting-out para lograr una mayor separacin entre ellas. Posteriormente se hace una extraccin para separar el aceite esencial puro con un embudo de separacin. Se separa el aceite esencial en un recipiente tapado y protegido de la luz para evitar la descomposicin lumnica. Con la parte acuosa se hizo una nueva extraccin con ter para lograr as separar finalmente los excedentes de aceite que queden solubilizados en esta fase. A la fase etrea se le extrajeron las trazas de agua remanente con sulfato de sodio como desecante. Para reducir la cantidad de componentes a separar mediante cromatografa se realizo una extraccin cido-base. Debido a que los fenoles son los compuestos del aceite esencial que parecen tener mayor acidez. Para la obtencin de los fenoles, entre los cuales se encuentra el timol, se hace una extraccin cido-base. En primer lugar se coloca en el embudo de separacin los aceites obtenidos junto con agua destilada. Luego se agrega hidrxido de potasio 1N haciendo que los fenoles, por ser los compuestos ms cidos presentes en aceite, sean solubles en la fase acuosa. Una vez aislada la fase acuosa del resto se la lleva a un nuevo embudo de separacin para su acidificacin con cido clorhdrico 2N y se agrega ter. De esta manera se obtienen solamente los fenoles en fase etrea. Se juntan todas las fases etreas y se filtraron con sulfato de sodio anhidro como desecante para eliminar las trazas de agua. Posteriormente se llevo el compuesto a calentar en bao mara para evaporar el ter y obtener as los fenoles aislados. Para lograr separar el timol del resto de los fenoles se utiliza el mtodo de cromatografa en capa delgada y en columna. Para elegir el eluyente en la cromatografa en columna se hace primero una cromatografa en capa fina para determinar el eluyente se utilizo cloroformo y tambin tolueno. Una vez elegido el eluyente se llevaron los fenoles a la columna de cromatografa. En dicha columna se encuentra la slica gel que funciona como fase fija. Despus se hace la recolecta de muestras y se dejan evaporar posteriormente se hace cromatografa en capa fina para determinar cul era el timol.
UAM - Xochimilco Pgina 9

Extraccin de timol

Diagrama de Flujo:
Al obtener el destilado agregar NaCl para que de esta manera el aceite esencial pueda separarse con mayor efectividad, Posteriormente se hace una extraccin para separar el aceite esencial puro con un embudo de separacin.

Llevar a cabo la destilacin por arrastre de vapor con el Tomillo seco para as obtener el aceite esencial del Tomillo, esto lleva alrededor de 6 horas.

Con la parte acuosa se hizo una nueva extraccin con ter para lograr as separar finalmente los excedentes de aceite que queden solubilizados en esta fase. A la fase etrea se le extrajeron las trazas de agua con sulfato de sodio y filtrarlo.

Juntar la fase etrea y el aceite en una ampolleta de decantacin y agregar 50ml de KOH 1N. La fase acuosa obtenida se coloca en otra ampolleta y se agregan 50ml de HCl 2N y 50ml de ter, de esta manera los fenoles quedan en la fase etrea. Para mejorar el rendimiento se se Para mejorar el rendimiento propuso realizar 3 extracciones de la fase acuosa propuso realizar 3 extracciones de obtenida acuosa obtenida utilizando la fase utilizando ter como solvente ter como solvente

UAM - Xochimilco

Pgina 10

Extraccin de timol

Se juntan todas las fases etreas y se filtraron con sulfato de sodio anhidro como desecante para eliminar las trazas de agua. Posteriormente se llevo el compuesto a calentar en bao mara para evaporar el ter y obtener as los fenoles aislados.

Para poder separar al Timol de los dems fenoles se realiz una cromatografa en capa fina para la identificacin y despus una cromatografa en columna.

Una vez armada la columna se procedi a separar los componentes fenlicos con cloroformo, se recolectaron y se hizo una cromatografa en capa fina para la determinacin del Timol

Para elegir el eluyente en la cromatografa en columna primero se hizo una cromatografa en capa fina utilizando silica gel y cromatoplacas. Los eluyentes que se utilizaron fueron cloroformo y tolueno.

UAM - Xochimilco

Pgina 11

Extraccin de timol

Resultados. Destilacin de 500 g de tomillo. 700 ml. 200 ml. 20 ml

Total destilado Separado con embudo (ter y componentes de tomillo). Total sin ter (evaporado). Extraccin acido base.

Total de extracto sin ter + KOH 1N Separado con embudo ( fase acuosa) Fase acuosa + HCl 2 N + ter Separado con embudo ( fase etrea) Total fenoles sin ter (evaporado). Fenoles evaporados por un1 dia

120 ml 50 ml 140 ml 30 ml 15 ml 0.25gr

Rendimiento= peso real / peso teorico*100 0.25g/2*100 = 12.5 % *peso teorico= 1 g por cada 250g de tomillo. Cromatografa capa fina. (eleccin de eluyente). No adecuado. Ideal.

Tolueno. Cloroformo. Cromatografa columna.

Muestra 1-9 Muestra 10-20 Muestra 21-29 Muestra 30 -35

Compuestos con polaridad media-baja No hay compuestos. No hay compuestos. Compuestos con una polaridad muy alta.

UAM - Xochimilco

Pgina 12

Extraccin de timol

Anlisis de resultados. Se llevo a cabo la destilacin por arrastre de vapor de 500g de tomillo obtenindose 20g de aceite esencial, a este se le realizo una extraccin acidobase (ya que los fenoles son los compuestos de mayor acidez). Se obtuvo 0.25g de fenoles lo cual nos representa un rendimiento bajo ya que lo esperado eran 2g de producto, esto se debi a que no se le dio el tiempo necesario a la destilacin para obtener dicha cantidad de producto (2g). Se tomo una muestra de los 0.25g de producto que se obtuvo para realizarle una cromatografa en capa fina con la finalidad de cerciorarnos que en dicho producto obtenido estaban presentes los fenoles, en la Fig.1 se pueden observar 7 manchas con diferente tonalidad de color estas representan a los fenoles presentes en el aceite esencial del tomillo. Se realizo la cromatografa en columna con nuestro eluyente ideal, cloroformo un disolvente con el que nuestras muestras corrieron mejor que con el tolueno, debido a que el cloroformo es un poco ms polar que el tolueno. Se tomo una de las ltimas muestras (muestra 30-35) que arrojo la columna en la cual se intua que se encontraba el timol debido a su polaridad, se le realizo una cromatografa en capa fina (Fig.2) en donde se observan dos manchas en el centro de la placa, esto nos indica que nuestro mtodo de cromatografa en columna para separar los fenoles no fue eficiente ya que las manchas corresponden a dos compuestos diferentes con polaridades similares. Podemos suponer que las manchas que se presentaron en la placa son de los fenoles timol y carvacrol ya que ambos compuestos tienen una polaridad muy similar y estn presentes en gran cantidad en el aceite esencial del tomillo, 50% y 10% respectivamente. En conclusin, la destilacin y la extraccin de los fenoles se llevo acabo satisfactoriamente, la cromatografa en columna no fue eficiente en la separacin de nuestro compuesto por lo tanto no se cumpli con el objetivo, adems de que no llevamos a cabo la identificacin de los dos compuestos que aislamos mediante resonancia magntica nuclear, lo cual nos habra ayudado a afirmar o desmentir si nuestras manchas obtenidas eran timol y carvacrol.

UAM - Xochimilco

Pgina 13

Extraccin de timol

Fig.1

Fig.2

Fig. 3
UAM - Xochimilco Pgina 14