Genetica Molecular

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Conceptos de Gentica
A comienzos de la dcada de 1940, ya no quedaban dudas sobre la existencia de los genes ni sobre el hecho de que estuviesen en los cromosomas. El momento crucial para la Gentica ocurri cuando los cientficos se concentraron en la pregunta acerca de cmo era posible que esos grumos de materia, los cromosomas, fuesen los portadores de lo que, segn haban llegado a comprender, era una u enorme cantidad de informacin, extremadamente compleja. Ligados a estas inquietudes, surgieron otros interrogantes: cmo estn codificadas las instrucciones en la molcula de DNA y cmo se traducen y ejecutan las acciones correspondientes?
Dra. Brandan, Nora C. Profesora Titular. itular. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE. Dra. Aguirre, Mara Victoria Profesora Adjunta. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE. Bqca. Llanos, Isabel Cristina Jefa de Trabajos Prcticos. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE. Rodrguez, Andrea Ayudante Alumna Adscripta. ripta. Ctedra de Bioqumica. Facultad de Medicina. UNNE.
Ao 2011
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INTRODUCCIN.1 NUCLETIDOS Y CIDOS NUCLEICOS..2-3 ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL DNA..3-4 LA HLICE DE DNA.4-5 FUERZAS QUE ESTABILIZAN LAS ESTRUCTURAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS...5 ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL RNA....6 REPLICACIN DEL DNA..7-8 SNTESIS DE PROTENAS..8-12 REPARACIN DEL DNA12-13 MUTACIONES GENTICAS.13-15 GENES Y CROMOSOMAS15-19 GENTICA MITOCONDRIAL..19-21 TECNOLOGA GENTICA.21-24 CONCEPTOS DE POLIMORFISMOS DE UN SOLO NUCLETIDO24-25 BASE GENTICA DE LAS ENFERMEDADES MULTIFACTORIALES.25-26 APLICACIN CLNICA.26 CONCLUSIN..27 BIBLIOGRAFA27
INTRODUCCIN
En cada organismo la fuente esencial de la informacin biolgica son los cidos nucleicos. La forma y las actividades de las clulas estn determinadas en gran medida por las instrucciones genticas contenidas en el DNA (o el RNA en ciertos virus). De acuerdo con el dogma central de la Biologa molecular, la secuencia de las bases nucleotdicas del DNA codifican para la secuencia de aminocidos (aa) de las protenas. Muchas de las protenas celulares son enzimas que catalizan los procesos metablicos dentro del organismo. Otras protenas tienen un papel estructural o regulador, o participan en el mantenimiento y la transmisin de la informacin gentica. Dos clases de cidos nucleicos, DNA y RNA, almacenan la informacin y la hacen accesible para la clula. La estructura de estas molculas debe ser consistente con las siguientes condiciones: 1. La informacin gentica debe almacenarse en una forma que sea manipulable en tamao y estable durante un periodo prolongado. 2. La informacin gentica debe codificarse, a menudo muchas veces, para utilizarse. La transcripcin es un proceso por el cual las secuencias de nucletidos del DNA se copian a RNA, de modo que puedan dirigir la sntesis de las protenas, un proceso conocido como traduccin. 3. La informacin contenida en el DNA o el RNA debe estar accesible a las protenas y otros cidos nucleicos. Estos agentes deben reconocer los cidos nucleicos (en muchos casos, en una forma especfica de secuencia) y unirse a ellos de un modo que altere su funcin. 4. La progenie de un organismo debe estar equipada con el mismo conjunto de instrucciones presente en sus progenitores. De esta manera, el DNA se replica (se hace una copia exacta) con el fin de que cada clula hija reciba la misma informacin. Como se podr imaginar, se requieren muchos componentes celulares para ejecutar todas las funciones de los cidos nucleicos. Sin embargo, estos son entidades casi inertes de slo lectura. En particular, el RNA, debido a su naturaleza de hebra simple, es una molcula dinmica que proporciona el andamiaje estructural, como tambin la actividad cataltica en numerosos procesos que decodifican la informacin gentica.
NUCLETIDOS Y CIDOS NUCLEICOS

Los cidos nucleicos son macromolculas que conforman las subunidades de las cadenas de DNA y RNA, y son clave en el almacenamiento y transmisin de la informacin gentica. Participan en numerosos procesos biolgicos, transportan energa, son parte de coenzimas esenciales y regulan numerosas funciones metablicas. Los nucletidos estn compuestos por tres partes integrales: Fosfatos, azcares y bases pricas o pirimdicas.
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Grupos fosfatdicos: Forman parte de los cidos nucleicos y nucletidos en forma de monofosfatos (un tomo de P), difosfatos (dos tomos de P) o trifosfatos (tres tomos de P). Residuos de azcares: Generalmente son derivados de una ribosa, como -D-ribosa (en el cido ribonucleico, RNA) o -D-desoxirribosa (en el cido desoxirribonucleico, DNA). Bases nitrogenadas de pirimidina: La citosina (C), la timina (T) y el uracilo (U) son las tres bases nitrogenadas de pirimidina. Ellas difieren entre s en sus cadenas laterales (-NH2 en el C4 de la citosina, -CH3 en el C5 de la timina, y O en el C4 del uracilo). Adems, la citosina posee un enlace doble entre el C3 y el C4. Bases nitrogenadas de purina: La adenina (A) y la guanina (G) son las dos bases nitrogenadas de purina. Ellas difieren en sus cadenas laterales y en la presencia de un doble enlace entre el N1 y el C6 (presente en la adenina, ausente en la guanina). Nuclesidos y nucletidos: Un nuclesido es un compuesto de un residuo de azcar (ribosa o desoxirribosa) y una base nitrogenada. La unin es entre el tomo de C en la posicin 1 del azcar y un tomo de N de la base (enlace N-glucosdico). Un nucletido es un compuesto de un residuo de un azcar unido a una base nitrogenada y un grupo fosfatdico. cido nucleico: Los cidos nucleicos se forman cuando los nucletidos se unen entre s por medio de puentes fosfodister entre el tomo de C3 de un nucletido y el C5 del siguiente.
ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL DNA

El DNA es una doble hlice, entrelazada y sumamente larga que almacena informacin gentica. Sus componentes se ordenan con una relacin qumica especfica, lo que determina la estructura tridimensional del DNA del cual derivan consecuencias funcionales. En la doble hlice, las bases enfrentadas se aparean y permanecen unidas por puentes de hidrgeno. Las bases apareadas deben ser siempre combinaciones de una purina con una pirimidina. No solamente las purinas no pueden aparearse con purinas, ni las pirimidinas con pirimidinas, sino que, a causa de las estructuras particulares de las bases, la adenina slo se aparea con la timina, formando dos puentes de hidrgeno (A=T) y la guanina solamente con la citosina, formando tres puentes de hidrgeno (G=C). Las bases apareadas son complementarias, y adems cumplen con la denominada Ley de Chargaff, que dice que la cantidad de adenina (A) es igual que la de timina (T) y que la de guanina (G) es igual que la de citosina (C): A=T y G=C, pero el nmero de A+T y el de G+C no son iguales entre s. Dado que una molcula de DNA puede tener miles de nucletidos de largo, es posible obtener una gran variedad de secuencias de bases diferentes, y la variedad es uno de los requisitos primarios del material gentico. Otra caracterstica de la cadena es que la misma tiene direccin: cada grupo fosfato est unido a un azcar en la posicin 5' -el quinto carbono en el anillo de azcar- y al otro azcar en la posicin 3' -el tercer carbono en el anillo de azcar-. As, la cadena tiene un extremo 5' y un extremo 3'.

Las dos cadenas corren en direcciones opuestas, es decir, la direccin desde el extremo 5' al 3' de cada cadena es opuesta y se dice que las cadenas son antiparalelas. Aunque los nucletidos dispuestos a lo largo de una cadena de la doble hlice pueden presentarse en cualquier orden, su secuencia determina el orden de los nucletidos en la otra cadena. Esto es necesariamente as, porque las bases son complementarias (G con C y A con T). La funcin principal de la secuencia de bases a lo largo de la hebra de DNA es almacenar y transmitir durante generaciones la memoria gentica para codificar la sntesis de todas las protenas (proteoma) del cuerpo humano. En cuanto a su funcin, podemos clasificar el DNA en dos grandes grupos: DNA codificante es el que estructura los genes cuya misin es codificar la sntesis de protenas y representa aproximadamente el 10% del total, y DNA no codificante que es el 90% del total, no codifica protenas (por lo tanto, sus mutaciones no van a afectar la estructura de estas) y tiene funciones de proteccin frente a cambios y de regulacin (hoy se est viendo que mutaciones en este tipo de DNA pueden tener tambin trascendencia patolgica). Adems, hay dos tipos de DNA no codificante, pero que forman parte de estructuras diferenciadas del cromosoma. Uno es el DNA centromrico constituyente de los centrmeros, que es un DNA alfoide que se dispone en conjuntos de repeticiones en tndem de unidades elementales de 171 pb que no son todas iguales. El otro es el telomrico que es el que forma los telmeros y es un DNA de secuencias muy repetitivas en tndem del hexanucletido TTAGGG, que se repite hasta formar conjuntos de longitud variable, de un promedio de 10 kb (1600 monmeros).
LA HLICE DE DNA
El DNA est formado por dos hebras de un polmero de desoxirribonucletidos unidos por enlaces fosfodister. La forma biolgica ms comn del DNA se conoce como B-DNA, que tiene las siguientes caractersticas: 1. Las dos hebras de polinucletidos antiparalelas se enrollan hacia la derecha alrededor de un eje comn para producir una doble hlice de aproximadamente 20 de dimetro. 2. Los planos de las bases nucleotdicas, que forman enlaces de hidrgeno apareados, son casi perpendiculares al eje de la hlice. En el B-DNA las bases ocupan el centro de la hlice, mientras que los esqueletos de azcar-fosfato se enrollan por fuera, y forman los surcos mayor y menor. Slo los bordes de las bases apareadas estn expuestos al solvente. 3. Cada apareamiento de bases tiene aproximadamente el mismo ancho, lo que justifica la simetra casi perfecta de la molcula de DNA, ms all de su composicin de bases. Los apareamientos AT y GC son intercambiables: pueden reemplazarse uno a otro en la doble hlice sin alterar las posiciones de los tomos C1 de los esqueletos de azcar-fosfato. De forma similar, los componentes de un apareamiento de Watson y Crick pueden alterarse (o sea, por medio del cambio de un GC a un CG o un AT a un TA). Por el contrario, cualquier otra combinacin de bases distorsionara la doble hlice en grado significativo. 4. La hlice de B-DNA ideal tiene 10,5 pares de bases (pb) por vuelta (un girode hlice de 36 por pb), y dado que las bases aromticas tienen el ancho de Van der Walls de 3,4 y se encuentran parcialmente apiladas una sobre otra, la hlice tiene un paso de hlice (pitch, avance por vuelta) de 34 . La doble hlice de DNA puede asumir varias estructuras diferentes en funcin de la composicin del solvente y la secuencia de bases. Las variantes

estructurales principales del DNA son el A-DNA y el Z-DNA. La forma A es compacta y presenta 11 bases por vuelta a diferencia de la forma B que presenta 10,5. El DNA-A es poco frecuente. Slo existe en estado de deshidratacin y difiere de la forma B por 20 en la rotacin del eje perpendicular de la hlice. El DNA-A posee un surco mayor y un surco menor chato. El DNA-Z muestra una conformacin hacia la izquierda en lugar de girar hacia la derecha. Su hlice posee una forma de mayor energa. Esto produce una mayor distancia entre los pares de bases (0,77 nm) que en el DNA-B y una forma zigzagueante del esqueleto de azcar-fosfato cuando se lo mira desde un costado (de ah el nombre de DNA-Z). El surco nico del DNA-Z posee una densidad mayor de molcula de carga negativa. Un segmento de DNA-B abundante en pares G-C puede convertirse en DNA-Z cuando se rotan las bases 180. En general, el DNA-Z es termodinmicamente inestable. Sin embargo, la transicin a DNA-Z se ve facilitada cuando una citosina se metila en la posicin 5 (C5). La modificacin del DNA por metilacin de la citosina es frecuente en ciertas regiones del DNA de los eucariontes. El DNA-Z cumple funciones biolgicas. Existen secuencias que favorecen la formacin de DNA-Z cerca de las regiones promotoras en donde el DNA-Z estimula la transcripcin.
FUERZAS QUE ESTABILIZAN LAS ESTRUCTURAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS

El DNA no muestra la complejidad estructural de las protenas dado que tiene slo un repertorio limitado de estructuras secundarias y carece de estructuras terciarias o cuaternarias comparables. Esto quizs es esperable, dado que los 20 aa de las protenas tienen un espectro de propiedades qumicas y fsicas mucho mayor que las cuatro bases del DNA. Sin embargo, y de modo anlogo a las protenas, hay ciertas fuerzas que dan origen a las estructuras de los cidos nucleicos: Desnaturalizacin y renaturalizacin: A pesar de que cada uno de los puentes de hidrgeno entre las bases nitrogenadas es dbil, el DNA es estable a las temperaturas fisiolgicas debido a que las dos cadenas se mantienen unidas por muchos puentes de hidrgeno a lo largo de ms de cien millones de nucletidos. Las dos cadenas se pueden separar cuando se desenrollan al ser expuestas a una solucin de temperaturas crecientes o por accin de reactivos suaves (por ejemplo, lcalis, formamida o urea). A este proceso se lo conoce como desnaturalizacin. La temperatura a la cual las cadenas se separan (Tm, del ingls melting temperature), depende de muchos factores, incluidos la proporcin de pares G-C, ya que los tres puentes de hidrgeno entre G y C son ms estables que los dos puentes de los pares A-T. Las molculas resultantes de DNA de cadena simple se enrollan de forma aleatoria y no mantienen la estructura helicoidal. Cuando se las enfra, se aumenta la concentracin inica, o se neutraliza el pH, las cadenas se reasocian para formar una doble hlice (renaturalizacin), pero nicamente si son complementarias. Si son idnticas, hibridan rpidamente; si son muy parecidas, hibridan lentamente; si no se parecen, no hibridan. Ambos procesos son las bases para las tcnicas que analizan si las secuencias nucleotdicas de dos cadenas simples de DNA estn relacionadas (hibridacin del DNA). Este es un principio importante en el anlisis de los genes. El DNA tambin puede hibridarse al RNA. Apareamiento de bases: El apareamiento de bases parece ser un adhesivo que mantiene juntas las dobles hebras de cidos nucleicos. La geometra de Watson y Crick es la forma ms estable de apareamiento de bases en la doble hlice, aun cuando los otros apareamientos son tericamente posibles. Esto es as porque los pares de bases de Watson y Crick tienen una afinidad mutua mayor que los otros. Apilamiento de bases e interacciones hidrfobas: Las purinas y las pirimidinas tienden a formar extensos apilamientos de molculas planas paralelas. Estas interacciones de apilamiento son una forma de interaccin de Van der Waals. Las interacciones entre las bases G y C apiladas son mayores que las presentes entre las bases A y T apiladas, lo que justifica en gran medida la mayor estabilidad trmica de los DNA con alto contenido de G+C. Por lo que se puede afirmar que la energa de apilamiento de una doble hlice depende de la secuencia. Interacciones inicas: Cualquier teora sobre la estabilidad de las estructuras de los cidos nucleicos debe tomar en cuenta las interacciones electrostticas de sus grupos fosfatos cargados. Los cationes divalentes como Mg+2, Mn+2 y Co+2 se unen especficamente a los grupos fosfato, por lo tanto, son agentes que escudan los cidos nucleicos en forma mucho ms efectiva que los cationes monovalentes.
Vxwt wx U||vt@Ytvtw wx `xw|v|t@ hAaAaAXA Xw|v| ECDD ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL RNA
La estructura del RNA est estabilizada por las mismas fuerzas que estabilizan el DNA y su flexibilidad conformacional se encuentra limitada por muchas de las caractersticas que limitan la conformacin del DNA. De hecho, el RNA puede ser aun ms rgido que el DNA debido a la presencia de un nmero mayor de molculas de agua que forman enlaces de hidrgeno con los grupos 2-OH del RNA. Aun as, el RNA presenta una mayor variedad de formas y tamaos que el DNA, y en algunos casos tiene actividad cataltica. Aunque el DNA determina el tipo de producto bioqumico que la clula sintetiza, la transmisin y la decodificacin de la informacin necesaria para la sntesis de protenas las lleva a cabo el RNA, cuya formacin la dirige el DNA. La estructura general del RNA se diferencia de la del DNA en tres aspectos: el RNA es una molcula de cadena simple en lugar de doble; el azcar presente en cada nucletido de RNA es ribosa en lugar de desoxirribosa y en vez de la base timina, el RNA posee uracilo. Se conocen tres tipos de RNA: mRNA, tRNA y rRNA. Los tres tipos de RNA se sintetizan en el ncleo mediante enzimas RNA polimerasas bajo la direccin del DNA. Dado que el azcar ribosa del RNA es ms susceptible a la degradacin que la degradacin de desoxirribosa presente en el DNA, los tres tipos de molculas de RNA en el citoplasma celular pueden modificarse con rapidez en respuesta a seales extracelulares. RNA mensajero (mRNA): El mRNA es la plantilla para la sntesis de protenas. Es una molcula larga que contiene desde varios cientos a varios miles de nucletidos. Cada grupo de tres nucletidos forma un codn que se complementa exactamente con el triplete de nucletidos del DNA. El mRNA se forma mediante un proceso denominado transcripcin. RNA de transferencia (tRNA): La molcula de tRNA con forma de trbol contiene slo 80 nucletidos, y su funcin consiste en aportar la forma activada de los aa a molculas de protena en los ribosomas. Se conocen por lo menos 20 tipos distintos de tRNA, cada uno de los cuales reconocen y fijan un solo tipo de aa. Cada molcula de tRNA posee dos sitios de reconocimiento: el primero es complementario para el codn de mRNA y el segundo es complementario para el aa propiamente dicho. Cada tipo de mRNA transporta su aa especfico a los ribosomas, donde tiene lugar la sntesis de protenas; all el tRNA reconoce el codn apropiado sobre el mRNA y aporta el aa a la molcula proteica en formacin. RNA ribosmico (rRNA): El ribosoma es la estructura fsica en el citoplasma en la que tiene lugar la sntesis de protenas. El rRNA constituye el 60% del ribosoma; el resto est formado por protenas estructurales y enzimas necesarias para la sntesis de protenas. El rRNA se sintetiza en el ncleo, pero a diferencia de los otros tipos de RNA, este proceso se realiza en el nuclolo. El rRNA formado se combina protenas ribosmicas del ncleo para producir el ribosoma, el cual ms tarde es transportado al citoplasma. Al llegar all, la mayora de los ribosomas se fijan al retculo endoplasmtico y comienzan a sintetizar protenas.
REPLICACIN DEL DNA

Es el proceso por el cual se copia cada cadena del DNA para dar origen a una nueva cadena de DNA complementaria. Esto ocurre en cada divisin celular y asegura que la informacin gentica sea transmitida a ambas clulas hijas. La sntesis de DNA involucra la accin altamente coordinada de muchas protenas que se encuentran en un complejo denominado replisoma. Durante la replicacin cada cadena de DNA sirve como molde para la formacin de una nueva cadena. Esto se conoce como replicacin semiconservadora. Tambin existe replicacin durante la recombinacin y la reparacin del DNA daado. La replicacin del DNA comienza en una secuencia de nucletidos particular en el cromosoma: el origen de la replicacin. Ocurre bidireccionalmente por medio de dos horquillas de replicacin que se mueven en direcciones opuestas. Las enzimas helicasas desenrollan la doble hlice en cada horquilla de replicacin y protenas de unin a cadena simple estabilizan las cadenas separadas. Otras enzimas, las topoisomerasas, relajan el superenrollamiento de la hlice, ya que cortan las cadenas por delante de las horquillas de replicacin y luego las vuelven a unir. Para que pueda comenzar la replicacin se necesita una secuencia de cebador de RNA -sinetizado por la enzima RNA primasa-, con sus bases correctamente apareadas con la cadena molde. La adicin de nucletidos de DNA a la cadena es catalizada por las DNA polimerasas. Estas enzimas sintetizan nuevas cadenas slo en la direccin 5' a 3', aadiendo nucletidos uno a uno al extremo 3' de la cadena creciente.
La replicacin de la cadena adelantada es continua, pero la replicacin de la cadena rezagada es discontinua. En la cadena rezagada, fragmentos de Okazaki se sintetizan en la direccin 5' a 3'. Cuando un fragmento de Okazaki ha crecido lo suficiente como para encontrar a un cebador de RNA por delante de l, otra DNA polimerasa reemplaza a los nucletidos de RNA del cebador con nucletidos de DNA. Luego, la DNA ligasa conecta cada fragmento con el fragmento contiguo recin sintetizado en la cadena. En el proceso de replicacin del DNA se pierden nucletidos en los extremos de las molculas de DNA

lineales. En algunas clulas eucariticas, esta prdida es compensada por la actividad de la enzima telomerasa. En el curso de la sntesis de DNA, la DNA polimerasa corrige los errores, retrocediendo cuando es necesario para eliminar nucletidos que no estn correctamente apareados con la cadena molde. Otros errores en el DNA ocurren en forma independiente del proceso de replicacin y son usualmente reparados por distintos mecanismos. Los nucletidos, antes de ser incorporados a las cadenas crecientes de DNA, se encuentran en forma de trifosfatos. La energa requerida para impulsar la replicacin proviene de la eliminacin de dos fosfatos "supernumerarios" y la degradacin del enlace P ~ P.
SNTESIS DE PROTENAS
La informacin contenida en la secuencia nucleotdica de un gen es convertida en una funcin biolgica til en dos pasos principales: la transcripcin y la traduccin. En primer lugar, la informacin de la secuencia codificante de un gen es transcrita a una molcula intermediaria de RNA, cuya secuencia es idntica a la de la cadena codificante del DNA y complementaria a la de la cadena molde (transcripcin). Durante el segundo paso, la secuencia de la informacin en la molcula de mRNA es traducida a una secuencia de aminocidos correspondiente (traduccin). En los eucariontes, el RNA no se utiliza directamente para la traduccin, sino que en primer lugar es procesado para dar origen a una molcula de mRNA antes de que pueda ser utilizado.
Transcripcin
Es el proceso por el que un segmento de DNA que codifica la serie de aa, integrantes de una protena, transcribe este informacin a una cadena de mRNA cuyas bases tendrn una secuencia complementaria a las del DNA: C-G y A-U (recordar que en el RNA el uracilo sustituye a la timina). Este RNA se llama mRNA, pues es precisamente depositario del mensaje que el ncleo emite para la sntesis de una protena. Cada segmento de DNA que codifica un gen sintetizar una copia de RNA complementario que, a su vez, codificar la secuencia de la protena codificada por dicho gen. A cada base del DNA le corresponde una base complementaria del mRNA y la secuencia de tres bases del mRNA codifica un aa. Se debe aclarar que previamente a este proceso las dos hebras de ADN deben separarse para que queden libres de apareamiento sus bases y puedan servir de molde para la sntesis del ARNm. De las dos cadenas de ADN que se separan slo una es utilizada para la sntesis del ARNm y se llama hebra molde. La sntesis de la cadena complementaria del ARNm est catalizada por la enzima ARN-polimerasa II. La RNA polimerasa opera de la misma forma que la DNA polimerasa, movindose en direccin 3 a 5 a lo largo de la cadena molde de DNA, sintetizando una nueva cadena complementaria de nucletidos (en este caso, ribonucletidos) en la direccin 5 a 3. Sin embargo, a diferencia de la DNA polimerasa, la RNA polimerasa no requiere cebador para comenzar la sntesis de RNA, ya que es capaz de iniciar una nueva cadena uniendo dos ribonucletidos. Cuando va a iniciar la transcripcin, la RNA polimerasa se une al DNA en una secuencia especfica denominada secuencia promotora o promotor; luego, la hlice de DNA es abierta por un juego complejo de protenas y, as, quedan expuestos los nucletidos de una secuencia corta de DNA. Inmediatamente, la enzima va aadiendo ribonucletidos, movindose a lo largo de la cadena molde, desenrollando la hlice y exponiendo as nuevas regiones con las que se aparearn los ribonucletidos complementarios.

El proceso de elongacin de la nueva cadena de mRNA contina hasta que la enzima encuentra otra secuencia especial en el transcrito naciente, la seal de terminacin. En muchos, casos, esta seal est dada por la estructura secundaria del RNA. En otros, interviene adems un factor proteico (rho). En este momento, la polimerasa se detiene y libera a la cadena de DNA molde y la recin sintetizada cadena de mRNA.
Regulacin de la transcripcin
Para que las polimerasas inicien la transcripcin se requiere que unas protenas, denominadas factores de transcripcin les sealen el gen que deben transcribir. Esto ocurre porque a poca distancia del inicio del gen hay unas secuencias de ADN, llamadas regin promotora, a las que se unen los factores de transcripcin. La ARNpol reconoce este complejo, se activa e inicia la sntesis del ARN desde un punto concreto y predeterminado. Los factores de transcripcin son sintetizados por genes fsicamente alejados del lugar donde ejercen su accin y se llama accin trans. Los elementos que conforman una regin promotora actan de forma cis, puesto que su funcin se limita al gen que est situado a continuacin. Los reguladores en cis de la transcripcin de un gen son: 1. Secuencias promotoras: a. La caja TATA: est constituida por una secuencia TATAAA o muy similar y se localiza en posicin -25 (es decir, a unos 25 pb antes del triplete que indica el inicio de la transcripcin). b. La caja GC: constituida por una secuencia GGGCGC o similar. c. La caja CAAT: se encuentra en posicin -80, su secuencia es CCAAT y es el mayor determinante de la eficacia del promotor ARNm maduro, que se obtiene por corte y empalme. 2. Secuencias amplificadoras (enhacers). Son de pequeo tamao y, a diferencia de los elementos promotores cuya localizacin es relativamente constante, se encuentran a distancias variables

del inicio de la transcripcin. Su funcin en la regulacin de la transcripcin es independiente de su orientacin. Secuencias silenciadoras, cuya funcin es inhibir la actividad transcripcional de un determinado gen.
3.
Procesamiento del RNA

En los genes eucariontes las secuencias codificantes estn interrumpidas por secuencias no codificantes de longitud variable. Las regiones codificantes se llaman exones y las no codificantes, intrones. Los intrones son eliminados antes de que pueda comenzar la traduccin. Este proceso, la eliminacin de los intrones y la reunin de los exones (corte y empalme o splicing) se conoce como procesamiento del RNA. Luego de la transcripcin, el procesamiento del RNA comienza con la eliminacin de los segmentos no codificantes (intrones) del transcripto primario. Luego, los exones son conectados en un proceso llamado empalme. El empalme debe ser muy preciso para evitar un cambio indeseado del marco de lectura correcto. Los intrones casi siempre comienzan con los nucletidos GT en la cadena 5 a 3 (GU en el RNA) y terminan con AG. Las secuencias del extremo 5 de un intrn que comienzan con GT se llaman sitios dadores de empalme, y las del extremo 3, sitios aceptores de empalme. El empalme del RNA es un proceso mediado por un complejo grande de protenas y molculas de RNA llamado empalmosoma, que est constituido por cinco tipos de molculas del RNA nuclear pequeo (snRNA) y ms de 50 protenas. El mecanismo bsico de corte y empalme en forma esquemtica involucra el corte autocataltico en el extremo 5 del intrn, que da lugar a la formacin de un lazo. Esta es una estructura intermedia circular, formada por la conexin del extremo 5 (GU) a una base (A) dentro el intrn. Este sitio se llama punto de ramificacin. En el paso siguiente, el corte en el extremo 3 libera al intrn en forma de lazo. Al mismo tiempo, el exn derecho se liga (empalma) al exn izquierdo. El lazo es desramificado para dar lugar a un intrn lineal, que es degradado con rapidez. El punto de ramificacin identifica al extremo 3 para un corte preciso en el sitio aceptor del empalme.
Traduccin
Es el proceso especfico de la sntesis de protenas. Tiene lugar en el citosol y para ello es necesario que las cadenas del ARNm salgan del ncleo y se desplacen hasta l. En el proceso de la traduccin se necesitan los siguientes tipos de molculas diferentes: Ribosomas, soporte fsico para el proceso de la sntesis de protenas. ARNm, que lleva la informacin para sintetizar cada protena. ARNt, que aporta cada uno de los aa. Los aa que se necesitan como eslabones de cada protena. Enzimas para catalizar cada una de las reacciones involucradas. Para que este proceso tenga lugar, antes se debe haber sintetizado el ARNt, que es una cadena de ARN que tiene los tripletes de bases que codifican para los diferentes aa, y cada uno de estos tripletes se conoce como anticodn, pues es el que va a materializar el mensaje que codifica el codn del ARNm. Los ARNt se unen a los ribosomas mediante unos enlaces especficos que se llaman lugares A, P y E. Los ARNt se sintetizan por los mecanismos comunes de la sntesis del ARN mediante genes especficos. Los genes que codifican el ARNt se agrupan en 49 familias, repartidos por todos los cromosomas, excepto el 22 y el Y. La transcripcin del ARNt se realiza por la accin de la ARN-polimerasa III. La unin de cada
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triplete de ARNt con su aa se lleva a cabo mediante reacciones bioqumicas que precisan aporte de energa a travs del ATP. La traduccin se realiza en tres etapas diferenciadas: 1. Iniciacin. La cadena del ARNm se fija a un ribosoma en el RER. 2. Elongacin. Los ARNt se unen a travs de sus bases de forma complementaria a la cadena del ARNm fijada en el ribosoma y los aa que se van colocando secuencialmente se unen entre s mediante el enlace peptdico (-CO-NH-). Este proceso tiene lugar por orden de un triplete de
3.
bases iniciador (starting codon) que tiene la secuencia AUG que, a su vez, es reconocido por el ARNt-iniciador. El ribosoma se va desplazando por el ARNm codn a codn y en cada paso fija el anticodn correspondiente de ARNt. Finalizacin. La lectura del ltimo codn que da la seal de final de cadena termina el proceso y suelta la cadena de la protena recin sintetizada en el citosol. En este proceso se sintetiza una cadena de aa con una secuencia especfica, que es la estructura primaria de la protena, pero una vez en el citosol, esta cadena lineal sufre una serie de modificaciones que se conocen como modificaciones postraduccionales (o postranslacionales), que son cambios de su estructura lineal a una secundaria, debidos a la unin de diversos aa mediante puentes de hidrgeno, y una estructura terciaria, mediante una serie de repliegues sobre s misma por mecanismos que se conocen como hlice alfa y hoja plegada, que transforman la cadena lineal inicial en una molcula tridimensional con mltiples zonas de pliegues y repliegues, que definitivamente conforman la protena en su configuracin funcional. Este proceso se conoce como protein folding. Cuando una enzima para que sea funcional precisa del acoplamiento de varias protenas diferentes, el conjunto funcional se conoce como estructura cuaternaria.
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Sin embargo, en este proceso de pliegues y repliegues de la molcula de la protena se pueden producir alteraciones que no modificarn su secuencia de aa, pero que podrn modificar su configuracin espacial y, por lo tanto, se podr modificar su funcin biolgica, y estas modificaciones, que tambin pueden estar ligadas a enfermedades, se conocen como postranslacionales y en la actualidad son motivo de estudio en determinados procesos.
REPARACIN DEL DNA

El DNA es un material altamente estable, tal como requiere el almacenamiento de informacin gentica, pero tambin es una molcula orgnica que puede sufrir cambios espontneos, incluso en las condiciones normales de la clula, que, si no son reparados, pueden conducir a mutaciones. El DNA sufre cambios importantes como resultado de fluctuaciones trmicas: por ejemplo, cada da el DNA de cada clula humana pierde alrededor de 5000 bases pricas (A y G) porque los enlaces N-glucosdicos entre estas bases y la desoxirribosa se hidrolizan espontneamente en una reaccin llamada despurinacin. De forma similar, en el DNA tambin se produce una desaminacin de citosina a uracilo a una tasa de aproximadamente 100 bases por clula y da. Las bases de DNA tambin se pueden daar ocasionalmente mediante metabolitos reactivos (como las formas reactivas del oxgeno) o por productos qumicos del ambiente. Asimismo, la luz ultravioleta del sol puede favorecer la formacin de un enlace covalente entre dos bases de pirimidina del DNA formndose, por ejemplo, un dmero de timina. Muchos de estos cambios podran llevar, si no se corrigieran, a la eliminacin de uno o ms pares de bases, o bien a la sustitucin de un par de bases de la cadena de DNA hija. Entonces la mutacin se propagara a la siguiente generacin celular cuando el DNA se replicara. Una tasa tan alta de cambios al azar en la secuencia de DNA tendra consecuencias desastrosas para un organismo. Los mecanismos de reparacin comprenden las enzimas que simplemente revierten las modificaciones qumicas de las bases nucleotdicas y tambin los sistemas multienzimticos ms complicados que dependen de la redundancia inherente de la informacin en la doble hebra del DNA para recuperar la molcula daada. Reversin directa del dao: Varias enzimas reconocen y revierten ciertos tipos de dao al DNA. Una caracterstica comn de las enzimas que alteran qumicamente las bases del DNA como parte de las vas de reparacin o del metabolismo normal (por ejemplo, metilacin de citosina) es catalizar el salto de las bases. Reparacin por escisin de una base: Las bases daadas que no pueden repararse en forma directa pueden eliminarse y reemplazarse mediante un proceso que se conoce como reparacin por escisin de una base (BER). Esta va comienza con la eliminacin de la base daada. Las clulas contienen una variedad de DNA glucosilasas donde cada una escinde el enlace glucosdico de un tipo particular de nucletido alterado y deja un residuo de desoxirribosa sin base unida alguna. Estos sitios apurnicos o apirimidnicos (AP o sitios absicos) tambin son resultado de la hidrlisis espontnea ocasional de los enlaces glucosdicos. Luego el residuo de desoxirribosa se escinde en uno de sus lados por una AP endonucleasa; por medio de la accin de una exonucleasa celular (quizs asociada con una DNA polimerasa) se eliminan la desoxirribosa y varios residuos adyacentes, y el hueco se completa y se sella por la accin de una DNA polimerasa y una DNA ligasa, respectivamente. Reparacin por escisin de nucletidos: Todas las clulas tienen una va ms elaborada, la reparacin por escisin de nucletidos (NER), para corregir los dmeros de pirimidina y otros daos al DNA en los que las bases estn desplazadas de su posicin normal o tienen sustituyentes muy voluminosos. El sistema NER parece responder a las distorsiones de la hlice en lugar de hacerlo al reconocimiento de cualquier grupo en particular. En seres humanos la NER es la defensa principal contra dos carcingenos importantes, la luz solar y el humo del cigarrillo. El defecto gentico de la NER causa la xerodermia pigmentosa y el sndrome de Cockayne. Reparacin de apareamientos errneos: Cualquier apareamiento errneo de la replicacin que haya eludido las funciones de edicin de varias de las DNA polimerasas participantes puede corregirse por un proceso conocido como reparacin de apareamientos errneos (MMR). El sistema MMR tambin puede corregir inserciones o deleciones de hasta cuatro nucletidos
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(que surgen como consecuencia del desplazamiento de una hebra en relacin con la otra en el sitio activo de la DNA polimerasa). La importancia de la reparacin de los apareamientos errneo se pone en evidencia porque los defectos en el sistema de reparacin de apareamientos errneos en seres humanos da como resultado una incidencia elevada de cncer, el ms destacado es el sndrome del cncer colorrectal no polipsico hereditario, que afecta varios rganos y puede ser la predisposicin al cncer hereditario ms comn. Reparacin proclive al error: La presencia de polimerasas proclives al error proporciona un mecanismo infalible para replicar DNA estirados que no pueden ser corregidos por la maquinaria de replicacin estndar. De hecho, esas DNA polimerasas alternativas generalmente exceden en nmero a las polimerasas dedicadas a la replicacin normal. Por ejemplo, los eucariontes contienen al menos cinco de estas polimerasas de desvo que pueden actuar con diferentes grados de exactitud. Sin embargo, los errores generados por estas polimerasas de desvo aun pueden ser corregidos por los sistemas de reparacin de apareamientos errneos.
La unin de extremos repara las roturas de la doble hebra

Las vas de reparacin por escisin de una base y reparacin por escisin nucleotdica actan cuando el dao afecta slo a una hebra del DNA. Sin embargo, el DNA puede sufrir roturas en la doble hebra (DSB), a menudo causadas por las radiaciones ionizantes o los radicales libres como subproductos de metabolismo oxidativo. Las DSB no reparadas o reparadas en forma errnea pueden ser letales para la clula o causar aberraciones cromosmicas que pueden conducir al cncer. En consecuencia, la reparacin eficiente de las DSB es esencial para la viabilidad celular y la integridad del genoma. Las clulas tienen dos mecanismos generales para reparar las DSB: La reparacin por recombinacin y la unin de extremos no homlogos (NHEJ).
MUTACIONES GENTICAS
Concepto de mutacin
Todo cambio permanente ocurrido en la secuencia de bases de un gen se llama mutacin. A su vez, las mutaciones pueden ser espontneas o adquiridas. Las mutaciones espontneas son las que ocurren en condiciones medioambientales normales, y las mutaciones inducidas son aquellas que para que se produzcan precisan necesariamente de un agente externo, llamado mutgeno, que acta como acelerador de la tasa de mutaciones espontneas. Es decir, el mutgeno per se no producir mutaciones especficas, sino que causa una mayor frecuencia de todo tipo de mutaciones. Constantemente se estn produciendo mutaciones y son precisamente imprescindibles para la evolucin biolgica. Las mutaciones se pueden clasificar atendiendo a un criterio puramente morfolgico en funcin del cambio estructural que produce en el gen, o bien atendiendo a un criterio funcional, es decir en relacin con la enfermedad que producen.
Tipos de mutaciones segn un criterio morfolgico

1. Puntuales. Son mutaciones que afectan a una sola base y se conocen de forma abreviada como SNP. En general, y de forma directa, no producen ninguna enfermedad y en la mayora de las personas permanecen asintomticas. Slo pueden manifestarse por induccin por agentes externos, medioambientales o iatrognicos, principalmente. Tambin la asociacin de varios SNP que afecten a una misma funcin puede producir una enfermedad que individualmente sera asintomtica. Se trata, por lo tanto, de la sustitucin de una base, y se llaman transiciones cuando se cambian bases pricas o pirimidnicas entre s, y transversiones cuando el cambio es de una base prica por una pirimidnica o viceversa.
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2. De extensin variable. Es cuando la mutacin afecta a ms de una base, y obviamente puede ser muy variable, de dos a decenas de bases. Pueden ser deleciones, inserciones o repeticiones.
Tipos de mutaciones segn un criterio funcional

Independientemente de la cuanta de la mutacin, lo que en la prctica interesa es si producen o no algn proceso patolgico. 1. Silenciosas. No tienen ninguna repercusin en el fenotipo. Son mutaciones que aun afectando a nucletidos de un exn, es sobre codones en los que la mutacin da lugar a otro codn que codifica el mismo aa. Tambin son mutaciones que se producen en zonas de intrones o de DNA satlite, aunque produzcan un cambio en la protena que codifican. 2. No silenciosas. Son aquellas que producen algn efecto en el fenotipo. Las causas ms frecuentes son las siguientes: a. De cambio de sentido. Producen el cambio de un solo aa que, dependiendo de si modifica o no la configuracin espacial de la protena, podr ser susceptible de alguna alteracin funcional o equipararse a una silenciosa. b. Sin sentido. Es una situacin en la que el cambio de una sola base puede producir una enfermedad importante. Dicho cambio da origen a un codn que es similar a los que dan la seal de final de lectura y, por lo tanto, su consecuencia es que se detendr, en este codn, la sntesis de la protena, lo que dar lugar a una cadena polipeptdica amputada en relacin con la que debera haberse sintetizado. c. De cambio de marco. Son alteraciones que se producen por delecin o insercin. Se produce, por lo tanto, un cambio en el marco de lectura de los tripletes, al intercalarse o suprimirse una base en la secuencia del DNA. d. De genes de control. Si la mutacin afecta a secuencias de un promotor o de un intensificador, las consecuencias sobre el fenotipo pueden ser tambin importantes. e. De repeticin de tripletes. Se produce la repeticin, una o varias veces, de un determinado triplete de bases. Pueden dar lugar a enfermedades graves y se ha visto que algunas frecuentes de herencia dominante se deben a este tipo de alteracin. Algunas son la corea de Huntington y el sndrome del X frgil. En todas las mutaciones, para que se produzcan manifestaciones en el fenotipo las alteraciones de la secuencia deben ser reproducibles a lo largo de las posteriores divisiones
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celulares, pues en caso de que esto no sucediera, no habr ninguna enfermedad, ya que la mutacin morira con la apoptosis de la clula afectada. 3. Mutaciones somticas. En general, las mutaciones que pueden afectar al fenotipo se refieren a mutaciones en las clulas germinales. Hay mutaciones que pueden afectar a las clulas somticas y que son capaces de formar clones. Las mutaciones somticas son causas importantes de cncer y otros tumores asociados con una diferenciacin y un crecimiento celulares descontrolados. Cada ao se producen cientos de miles de alteraciones aleatorias de la molcula de DNA debido a la accin de factores ambientales o accidentes metablicos. Afortunadamente, menos de 1 de cada 1.000 alteraciones de los pares de bases dan por resultado mutaciones significativas. La mayora de estos defectos son corregidos por los mecanismos de reparacin del DNA. Una vez establecido que puede haber modificaciones en la estructura del DNA, aparece el concepto de enfermedad gentica, que es la derivada de una o ms mutaciones en el DNA que den lugar a la sntesis de una o varias protenas alteradas que no pueden cumplir adecuadamente su funcin biolgica, total o parcialmente. Cuando las alteraciones de dicha enfermedad son variadas pero constantes y descritas por primera vez por determinado autores o autores se les suele llamar sndrome de, con el nombre de los descubridores o las caractersticas ms importantes de la enfermedad.
GENES Y CROMOSOMAS
Cdigo gentico
Segn define la Real Academia Espaola, un cdigo es una combinacin de signos que tiene un determinado valor dentro de un sistema establecido o un cifrado para formular y comprender mensajes secretos. De acuerdo con estas definiciones, el cdigo gentico es la correspondencia entre la serie de nucletidos que forman los cidos nucleicos y las series de aa en que se basa la estructura de las protenas. Es como un diccionario que permite traducir la informacin gentica (nucletidos) a estructura de protenas. A, T, C y G son las letras de cdigo gentico que representan a las cuatro bases utilizadas para configurar la estructura del DNA. Tres de estas bases forman un codn, y un codn codifica un aa. Es decir, una palabra de tres de estas cuatro letras se traducir, en la protena, con un determinado aa. Ahora bien, como hay cuatro bases diferentes, que se toman de tres en tres, hay 64 combinaciones posibles y slo hay 20 aa formadores de protenas. La consecuencia prctica es que un aa podr ser codificado por tripletes de bases diferentes, por lo que se dice que el cdigo est degenerado. Todos los aa pueden ser codificados por varios codones, excepto la metionina (ATG) y el triptfano (TGG). El nombre de los aa se reduce a tres letras, y ms recientemente a una sola. Las principales caractersticas de este cdigo son: 1. Es universal: es compartido por todos los organismos vivos. Slo se han encontrado excepciones en algunas mitocondrias, en las que algn triplete tiene un significado distinto. 2. Est organizado en tripletes o codones: cada aa est determinado por tres nucletidos. Los codones que traducen el mismo aa son llamados sinnimos. La mayora de los sinnimos difieren solamente en la ltima base del triplete. Los cambios en el DNA que conllevan la formacin de tripletes sinnimos no producen cambios en la secuencia peptdica final; 61 de los 64 codones traducen un determinado aa.
Concepto de gen
Un gen puede definirse como un segmento de DNA que codifica la informacin requerida para sintetizar un producto biolgico que, en general, ser una protena estructural o enzimtica y es la unidad bsica de la herencia biolgica. En concepto ms til a la biologa molecular, un gen se puede definir como un segmento de DNA que contiene una unidad de transcripcin y sus secuencias reguladoras principales (promotor). Un gen puede contener desde varios cientos a casi un milln de pares de bases; el tamao de un gen es directamente proporcional al tamao del producto proteico que codifica. El producto intermedio del proceso es el RNA, que en determinados casos per se podr actuar tambin como producto funcional. El conjunto del material gentico del organismo se llama genoma y todo el genoma est almacenado en los cromosomas, que son las estructuras fundamentales del ncleo de las clulas.
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Un gen tiene la capacidad de desencadenar reacciones especficas en el seno de la clula. Estas reacciones que mediante la sntesis de protenas- desencadenan los genes pueden ser seales para iniciar una reaccin, detener una reaccin o sintetizar elementos reguladores del metabolismo y, la cuantitativamente ms importante, codificar la sntesis de todas las protenas del organismo tanto estructurales como enzimticas. Cada gen se localiza en un determinado punto de un cromosoma que se llama locus, que es el mismo en cada individuo de una especie. Los humanos, como todos los organismos que se reproducen sexualmente, tienen dos copias de cada gen, una de cada progenitor, a excepcin de los genes localizados en el cromosoma Y que tiene una sola copia de dichos genes. Cada copia de un gen que proviene de un progenitor se llama alelo y, por lo tanto, en una misma persona los dos alelos pueden ser diferentes en alguna secuencia de su DNA y ello puede dar lugar a diferencias en los productos de expresin de dicho gen. La presencia de diferentes alelos en el conjunto de la poblacin es la base de su diversidad gentica, englobada en su conjunto personal de genes llamada genotipo, y esta diversidad dar lugar a cada persona, nica e irrepetible, con sus caractersticas (altura, color de los ojos, color del pelo, rasgos de la cara, rasgos del cuerpo, etc.), lo que se conoce como fenotipo. Mientras que cuando se habla de genotipo no se hace referencia al conjunto de todos los genes, sino a un gen especfico, cuando se habla de un conjunto de genes, y ms concretamente a una combinacin determinada de alelos, que se localizan muy prximos unos de otros en el cromosoma y que, debido a su proximidad, suelen heredarse juntos, se habla de haplotipo.
Estructura de un gen
Aunque hay muchas variantes, se puede decir que la estructura de un gen est formada por segmentos discontinuos de DNA que codifican aa, los exones, separados por secuencias no codificantes de aa, los intrones. El conjunto del gen (exones ms intrones) tiene adems una estructura corta que antecede al primer exn, denominada secuencia anterior, no traducida en la porcin anterior 5(SANT), y tambin al final del ltimo exn del gen suele haber una secuencia generalmente de bastante longitud, llamada secuencia posterior, no traducida en 3(SPNT), que contiene la seal de poliadenilacin del transcripto primario, que se representa por la letra griega . Es decir, un gen queda empaquetado entre ambas secuencias. Este conjunto forma la llamada unidad de transcripcin, a la que hay que aadir las secuencias reguladoras inmediatas del proceso que se llaman promotores y tambin secuencias reguladoras alejadas que se llaman intensificadores o silenciadores de dicho gen, segn sea su funcin, y todo este conjunto, unidad de transcripcin-promotores-intensificadores-silenciadores forman una unidad gentica funcional.
Patrones de herencia
Las caractersticas heredadas de los progenitores se inscriben en pares de genes que se localizan a lo largo de los cromosomas. Existe la posibilidad de formas alternas de un mismo gen (es decir, un gen heredado de la madre y otro del padre), y cada uno puede ser responsable de diferencias del aspecto de un rasgo.
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En aquellos casos en los que la informacin gentica es transmitida por un solo par de genes se utiliza el trmino rasgo monognico, que se heredan segn las Leyes de Mendel. En los organismos diploides hay tres posibles genotipos con respecto a dos alelos en cualquier locus: 1- Homocigtico para un alelo 2- Heterocigtico para los dos alelos diferentes 3- Homocigtico para el otro alelo Los alelos pueden diferenciarse segn puedan reconocerse en el estado heterocigtico o slo en el homocigtico. Si pueden reconocerse en el estado heterocigtico se llaman dominantes. Si pueden ser reconocidos slo en estado homocigtico, se llaman recesivos. Si ambos alelos pueden reconocerse a la vez en estado heterocigtico se denominan codominantes. La herencia polignica se relaciona con mltiples genes en loci diferentes y cada gen ejerce un efecto aditivo en la determinacin de un rasgo. La mayora de los rasgos humanos estn determinados por mltiples pares de genes y muchos de estos poseen cdigos alternos, lo cual explica algunas diferencias de la expresin de ciertos trastornos genticos en distintas personas. La herencia multifactorial es similar a la herencia polignica por el hecho de que el resultado final depende de mltiples genes en distintos loci, pero se diferencia en que la herencia multifactorial incluye efectos del medio ambiente sobre los genes. Se conocen muchas otras interacciones entre los genes. Entre ellas se encuentran la epistasia, en la que un gen enmascara los efectos fenotpicos de otro gen no allico, los alelos mltiples, donde ms de un alelo afecta un mismo rasgo (por ejemplo, los grupos sanguneos AB0), los genes complementarios, en los cuales cada gen depende mutuamente del otro y los genes colaboradores, en los que dos genes distintos que afectan un mismo rasgo interactan para generar un fenotipo que ninguno de ellos puede producir por s solo.
Penetrancia de un gen
La penetrancia de un gen se refiere a la proporcin entre las personas que tienen una determinada mutacin gentica y que manifiestan en su fenotipo los signos y sntomas de dicha mutacin y las que no la expresan. Si pocas personas manifiestan la enfermedad atribuida a una determinada mutacin de gen, se dice que tiene poca penetrancia o penetrancia incompleta. No se ha llegado a un consenso sobre qu porcentaje corresponde al concepto poca. Se puede citar como ejemplo, que las mujeres con mutaciones en los genes BRCA1 o BRCA2 tienen un alto riesgo de padecer cncer de mama, pero no necesariamente como ocurre en las mutaciones que dan lugar a las enfermedades de transmisin mendeliana. Esta diferente penetrancia explica por qu para que la enfermedad se manifieste hacen falta otros factores que incidan sobre la manifestacin de la mutacin, y pueden ser factores epigenticos entre los que cabe destacar: medioambientales, estilo de vida y tipo de alimentacin, entre otros.
Expresividad variable de un gen

En general, los trastornos genticos se manifiestan clnicamente con pocas variaciones entre los afectados, pero puede haberlas. El trmino expresividad variable se refiere al rango de signos y sntomas que pueden ocurrir entre diferentes personas con la misma alteracin gentica. Por ejemplo, en el sndrome de Marfan, muchas personas manifiestan solamente talla alta y delgada con dedos largos y delgados, mientras que otras tambin manifiestan complicaciones de salud de diferente grado, principalmente de tipo cardiovascular, y a pesar de este abanico de procesos, la mutacin de todos ellos est en el mismo gen (FBN1). En este caso se cree que los factores epigenticos pueden tener ms importancia que los factores medioambientales y de estilo de vida.
Regulacin de la expresin gentica

Aunque todas las clulas contienen los mismos genes, no todos los genes estn activos todo el tiempo, y los genes activos no son los mismos en todos los tipos de clulas. Por el contrario, slo un pequeo grupo de genes selectos dirigen activamente la sntesis de protenas en la clula y este grupo difiere de una clula a otra. Para que el proceso de diferenciacin celular tenga lugar en los distintos tejidos y
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rganos del cuerpo, en algunas clulas la sntesis de protenas debe ser diferente que en otras. Para adaptarse a un medio ambiente siempre cambiante es posible que algunas clulas deban sintetizar cantidades y tipos variables de protenas. Ciertas enzimas, como la anhidrasa carbnica, son sintetizadas por todas las clulas, dado que son necesarias para procesos metablicos esenciales para la preservacin de la vida. El grado de actividad de un gen o un conjunto particular de genes se conoce con el nombre de expresin gentica. La expresin gentica puede ser incrementada mediante un importante proceso llamado induccin. Salvo en una fase temprana del desarrollo embrionario, la induccin es promovida por influencias externas. El fenmeno conocido como represin gentica es un proceso mediante el cual un gen regulador acta para reducir o abolir la expresin gentica. Algunos genes se encuentran en estado latente en condiciones normales pero pueden ser activados por sustancias inductoras, otros genes son naturalmente activos y pueden ser inhibidos por sustancias represoras. La sntesis de protenas es controlada por al menos dos tipos de genes: los genes estructurales, los cuales determinan la secuencia de aa especfica para una cadena polipeptdica, y los genes reguladores, que cumplen una funcin reguladora sin especificar la estructura de las molculas proteicas. La regulacin de la sntesis de protenas es controlada por una secuencia de genes, denominada opern, localizada en sitios vecinos de un mismo cromosoma. Un opern est compuesto por un conjunto de genes estructurales que codifican las enzimas necesarias para la sntesis de una protena dada y un sitio promotor que fija la RNA polimerasa y desencadena la transcripcin de los genes estructurales. La funcin del opern tambin es regulada por factores activadores y represores que inducen o reprimen, respectivamente, la funcin del promotor. Los sitios activadores y represores en general monitorizan los niveles del producto sintetizado y regulan la actividad del opern a travs de un mecanismo de retroalimentacin negativa. La disminucin del nivel del producto de sntesis activa la funcin del opern, mientras que una elevacin del nivel la reprime. Genes reguladores presentes en otros sitios del complejo gentico pueden ejercer control sobre un opern mediante sustancias activadoras o represoras. No todos los genes estn sujetos a procesos de induccin y represin.
La organizacin del cromosoma

Los cromosomas son visibles como estructuras separadas slo durante la mitosis; durante la interfase aparecen como una masa enredada llamada cromatina. La densidad de la cromatina vara, denominada como heterocromatina o eucromatina. Esto se relaciona con la actividad de los genes: eucromatina para los genes activos, heterocromatina para genes inactivos. Durante la interfase, el DNA y sus protenas asociadas (las histonas) estn fuertemente empaquetados en la cromatina. La subunidad fundamental de la cromatina es el nucleosoma. Un nucleosoma consiste en un centro (core) de ocho molculas de histona (octmero), dos copias de cada una de H2 A, H2 B, H3 y H4, y alrededor de 150 pb de DNA enrollado alrededor de l. El octmero de histonas forma un centro en forma de disco. Entre 140-150 pb estn enrollados 1,67 veces en vueltas a la izquierda alrededor del centro de histonas para formar un nucleosoma de aproximadamente 11 nm de dimetro y 6 nm de alto. El DNA entra y sale del nucleosoma en puntos cercanos unos a otros. Un quinto tipo de histona, H1, se localiza en este lugar y se une al DNA entre dos nucleosomas. Cada nucleosoma est separado del otro por 50-70 pb de DNA conector. Antes de la mitosis, los cromosomas en interfase son condensados volvindose cromosomas en mitosis. El cambio de cromosomas en interfase a mitticos requiere de una clase de protenas denominadas condensinas. Estas usan energa de la hidrlisis de ATP para enrollar cada cromosoma en interfase volvindolo un cromosoma en mitosis.
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Estructura de los cromosomas
En la distribucin de metafase cada cromosoma adopta la forma de una cromtida y presenta la configuracin en letra X o espoleta. Los cromosomas humanos se dividen en tres tipos segn la posicin del centrmero. Si el centrmero se localiza en el centro y los brazos poseen una longitud similar, se dice que el cromosoma es metacntrico metacnt ; si no est centrado y los brazos tienen una longitud claramente distinta, se denomina submetacntrico; y si el centrmero se encuentra cerca de un extremo, se lo llama acrocntrico. El brazo corto del cromosoma se designa con la letra p (por pequeo), y el brazo largo, con la letra q (por seguir a la letra p en el alfabeto). Los brazos de un cromosoma se indican con el nmero de cromosoma seguido por cualquiera de estas dos letras. Los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22 poseen pequeas masas de cromatina denominadas satlites unidas a sus brazos cortos mediante pedculos finos. En los extremos de los cromosomas se observan secuencias de DNA especiales denominadas telmeros. Los telmeros t permiten la replicacin completa del extremo de la molcula de DNA.
GENTICA MITOCONDRIAL
Una mitocondria es un orgnulo semiautnomo que se reproduce por s mismo y que se encuentra en el citoplasma de las clulas eucariontes. Tiene un dimetro de 1-2 2 m y contiene mltiples m copias de DNA mitocondrial circular (mtDNA) de 16.569 pares de bases en el hombre. El nmero de mitocondrias por clula y su forma difiere en los diferentes tipos celulares y puede cambiar. 3 4 Una clula eucarionte en promedio contiene 10 -10 copias de mitocondrias. Las mitocondrias de las clulas animales y los cloroplastos de las clulas vegetales son los sitios de los procesos esenciales de aporte de energa.
El genoma mitocondrial del hombre

El genoma mitocondrial de mamferos mam es pequeo y compacto. No contiene intrones y en algunas regiones los genes se superponen, de modo que casi todos los pares de bases pertenecen a algn gen. Las diferencias entre el mtDNA y el nuclear son fundamentalmente tres: 1. La herencia del mtDNA es exclusivamente materna. Ello explica por qu su localizacin en la clula es en una estructura del citoplasma y, por lo tanto, independiente del DNA nuclear. Los varones heredan el mtDNA de sus madres, pues en los espermatozoides hay muy pocas mitocondrias mitocondrias y adems en el momento de la fertilizacin no penetran en el vulo, cuyo citoplasma es mucho mayor que el de los espermatozoides y que, por lo tanto, no contribuyen con mitocondrias en la fecundacin. Durante la divisin celular, las mitocondrias se distribuyen distribuyen al azar entre las clulas hijas. Una misma clula puede tener molculas de mtDNA diferentes, con mutaciones o sin ellas, de ah la gran heterogeneidad en los fenotipos de afectados de enfermedades por mutaciones en el mtDNA.
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3. Precisamente por no estar protegido por el recubrimiento protenico con histonas, como el nuclear, y estar en la mitocondria, compartimiento subcelular donde se genera la mayor parte de los radicales libres del organismo, tiene una alta tasa de mutaciones espontneas, unas 10 veces ms que en el DNA nuclear.
Los genomas mitocondriales de los seres humanos fueron secuenciados y contienen grandes homologas con los de los ratones. El genoma mitocondrial humano posee 16.569 pares de bases (16,5 kb) y contiene 37 genes ya diferenciados y que codifican 2 tipos de rRNA, 22 de tRNA y 13 de mRNA que codifican para 13 protenas para cuatro procesos metablicos: 1. 2. 3. 4. Para la NADH deshidrogenasa Para el complejo de la citocromo c oxidasa (subunidades 1, 2 y 3) Para el citocromo b Para las subunidades 6 y 8 de la ATPasa
A diferencia de las levaduras, el DNA mitocondrial de mamferos contiene siete subunidades para la NADH deshidrogenasa (ND1, ND2, ND3, ND4L, ND4, ND5 y ND6). El 60% de la capacidad codificante mitocondrial se utiliza para estas siete subunidades. Cada mitocondria contiene 2-10 molculas de DNA. Se pueden diferenciar una cadena simple pesada (H) y otra simple ligera (L) mediante un gradiente de densidad. La mayora de los genes se encuentran en la cadena H. La cadena L codifica para una protena (subunidad 6 de la ND) y 8 tRNA. A partir de la cadena H se transcriben dos RNA, uno corto para los rRNA y otro largo para mRNA y 14 tRNA. De la cadena L se produce un solo transcrito.
Cooperacin entre el genoma mitocondrial y el nuclear

Muchas protenas mitocondriales son agregados de productos gnicos de genes nucleares y mitocondriales. Estos productos gnicos se transportan hacia la mitocondria despus de la transcripcin nuclear y la traduccin citoplasmtica. En las mitocondrias forman protenas funcionales a partir de subunidades de productos gnicos mitocondriales y nucleares. Esto explica por qu algunos trastornos genticos mitocondriales presentan herencia mendeliana, mientras que las alteraciones determinadas puramente por las mitocondrias muestran herencia por va materna de forma exclusiva.
Acontecimientos principales en las mitocondrias

Cada mitocondria est rodeada por dos membranas muy especializadas, las membranas externa e interna. La membrana interna est plegada en numerosas crestas y encierra el espacio de la matriz. El proceso esencial de generacin de energa en las mitocondria es la fosforilacin oxidativa (OXPHOS). Los transportadores de energa relativamente simples como NADH (nicotinamida adenina dinucletido reducido) y FADH2 ( flavina-adenina dinucletido reducido) se producen por la degradacin de carbohidratos, grasas y otros nutrientes mediante la oxidacin. El importante transportador de energa adenosintrifosfato (ATP) se forma por OXPHOS del adenosindifosfato (ADP) por medio de una serie de reacciones bioqumicas en la membrana mitocondrial interna (cadena respiratoria). Otra funcin importante es la transferencia intracelular de oxgeno.
OXPHOS en las mitocondrias

El ATP desempea un papel central en el intercambio de energa en los procesos biolgicos. Se forma a partir del NADH y el ADP mediante la OXPHOS. El ATP es un nucletido constituido por adenina, una ribosa, y una unidad de trifosfato. Es rico en energa porque la unidad de trifosfato contiene dos enlaces fosfoanhidros. Cuando el ATP se hidroliza para formar ADP se libera energa (energa libre). La energa contenida en el ATP y unida al fosfato se libera, por ejemplo, durante la contraccin muscular.
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Transferencia de electrones en la membrana mitocondrial interna
Los genomas de las mitocondrias contienen genes para la formacin de diferentes componentes de la cadena respiratoria y la OXPHOS. Tres complejos enzimticos regulan la transferencia de electrones: el complejo de la NADH deshidrogenasa, el complejo b-c1 y el complejo citocromo oxidasa. Los intermediarios son los derivados de la quinona, como la ubiquinona y el citocromo c. El transporte de + electrones conduce a la formacin de protones (H ). Esto lleva a la conversin del ADP y el Pi (fsforo inorgnico) en ATP (OXPHOS). El ATP representa un reservorio de energa en forma de enlace de fosfato, que sirve como suministro de energa para todos los sistemas biolgicos. Por lo tanto, es comprensible que los defectos genticos en las mitocondrias se manifiesten en primer trmino como enfermedades con reduccin en la fuerza y otros signos degenerativos.
Enfermedades mitocondriales
Las mutaciones o deleciones en el mtDNA del ser humano causan un grupo numeroso, complejo y heterogneo de enfermedades. El espectro clnico y la edad de comienzo de las enfermedades mitocondriales varan ampliamente. Los rganos con requerimientos energticos altos son en especial vulnerables a las enfermedades mitocondriales: el cerebro, el corazn, el msculo esqueltico, el ojo, el odo, el hgado, el pncreas y el rin. Normalmente, con la edad se acumulan mutaciones mitocondriales adquiridas. Las mutaciones mitocondriales se transmiten por herencia materna. El DNA mitocondrial tiene una tasa de mutacin diez veces superior a la del DNA nuclear. Se generan mutaciones durante la OXPHOS por medio de vas que involucran molculas de oxgeno reactivas. Se acumulan mutaciones por la falta de una reparacin efectiva del DNA e histonas protectoras. Al nacer, la mayora de las molculas de mtDNA son idnticas (homoplasmia); luego, difieren como resultado de las mutaciones acumuladas en diferentes mitocondrias (heteroplasmia).
TECNOLOGA GENTICA
Tcnicas de DNA recombinante
Durante las ltimas dcadas, la ingeniera gentica permiti la manipulacin de cidos nucleicos y genes recombinantes (DNA recombinante) para formar molculas hbridas que pueden insertarse en microorganismos unicelulares y reproducirse innumerables veces. Cada molcula hbrida produce una poblacin gnicamente idntica denominada clon que refleja su ancestro comn. Las tcnicas de aislamiento y de clonacin genticos se basan en el hecho de que los genes de todos los organismos, desde las bacterias hasta los mamferos, poseen una organizacin molecular fundamental similar. La clonacin gentica consiste en la seccin de una molcula de DNA para modificar y reordenar sus fragmentos y producir copias del DNA modificado, su mRNA y su producto gentico. La molcula de DNA se cliva mediante una enzima bacteriana llamada enzima de restriccin que se fija al DNA en sitios en los que encuentra una secuencia corta de pares de bases dada y cliva la molcula en un sitio especfico de la cadena de nucletidos. Este mtodo permite clivar una molcula de DNA larga en fragmentos ms pequeos con la intencin de que el gen de inters se localice en uno de estos fragmentos. El fragmento gentico seleccionado se replica mediante la insercin en un microorganismo unicelular; por ejemplo, una bacteria. Para ello se utiliza un vector de clonacin del tipo de un virus bacteriano o un pequeo crculo de DNA que se encuentra presente en la mayora de las bacterias y se conoce con el nombre de plsmido. Los virus y los plsmidos utilizados como vectores se replican en forma autnoma en la clula bacteriana husped. Durante la clonacin gentica, un vector bacteriano y el fragmento de DNA se mezclan y a esta mezcla se agrega una enzima especial denominada DNA ligasa. Los vectores recombinantes formados se introducen en un cultivo de bacterias apropiado y luego se permite que las bacterias se repliquen y expresen el gen vector recombinante. A veces se utiliza mRNA derivado de un tejido que expresa un nivel alto del gen para producir una molcula de DNA complementario (cDNA)
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que luego se puede utilizar en el proceso de clonacin. Debido a que durante este proceso se utilizan fragmentos de toda la molcula de DNA, es necesario aplicar mtodos para identificar y separar el clon que contiene el gen de inters. En la actualidad se utilizan diversos vectores y anfitriones para la clonacin (p. ej., plsmidos, fagos, bacterias y cromosomas artificiales de levaduras). Muchos de ellos sirven para crear bibliotecas, es decir, acumulaciones de clones de DNA. Una biblioteca genmica representa un conjunto de clones derivados del DNA genmico. Estos fragmentos solapantes de DNA conforman el genoma completo y se pueden disponer segn su orden lineal. Las bibliotecas de cDNA reflejan clones derivados del mRNA, comnmente de una fuente hstica concreta. En lo que respecta a la investigacin y la tecnologa biolgicas, la clonacin permite identificar la secuencia de DNA en un gen y producir la protena que este codifica. La secuencia de nucletidos especfica de un fragmento de DNA clonado a menudo puede identificarse mediante el anlisis de la secuencia de aa y los codones de mRNA de su producto proteico. Las secuencias de pares de bases cortas se pueden sintetizar, marcar con un istopo radiactivo y despus utilizarlas para identificar sus secuencias complementarias. Este mtodo permite identificar estructuras genticas normales y anormales. Las protenas que antiguamente se encontraban disponibles slo en pequeas cantidades pueden fabricarse en grandes cantidades despus del aislamiento de sus respectivos genes. Por ejemplo, la clonacin de genes que codifican una insulina y la hormona del crecimiento (GH) permiti producir cantidades importantes de ambas hormonas para uso farmacolgico.
Estudios de hibridacin
Un descubrimiento biolgico reciente revel que dos clulas somticas de distintas especies cultivadas juntas en el mismo cultivo en ocasiones se fusionan para formar una nueva clula hbrida. En los estudios genmicos se utilizan dos tipos de mtodos de hibridacin: hibridacin de clulas somticas e hibridacin in situ. La hibridacin de clulas somticas consiste en la fusin de clulas somticas humanas con las de una especie diferente (por lo general, el ratn) para obtener una clula que contenga los cromosomas de ambas especies. Dado que estas clulas hbridas son inestables, comienzan a perder cromosomas de ambas especies durante las divisiones celulares ulteriores. Este fenmeno permite obtener clulas con combinaciones parciales distintas de cromosomas humanos. El estudio de las enzimas producidas por estas clulas indica que la deteccin de la produccin de una enzima slo es posible en presencia de un cromosoma dado; este hallazgo implica que el cdigo para la produccin de esta enzima se localiza en ese cromosoma. La hibridacin in situ consiste en la utilizacin de secuencias especficas de DNA o RNA para localizar genes que no se expresan en el cultivo celular. El DNA y el RNA se pueden marcar qumicamente con marcadores radiactivos o fluorescentes. Estas secuencias marcadas de DNA o RNA se utilizan como sondas para detectar la localizacin de los genes. La sonda se agrega a una distribucin cromosmica (spread) despus de separar las cadenas del DNA. Si la sonda es idntica al DNA complementario de un segmento del cromosoma, se hibrida y permanece en un lugar preciso del mismo (de all el trmino in situ). Los marcadores radiactivos o fluorescentes se utilizan para detectar la ubicacin de la sonda. La hibridacin de los cidos nucleicos constituye un principio fundamental de la biologa molecular que aprovecha la unin sumamente especfica, o hibridacin, de dos hebras complementarias de cidos nucleicos. El objetivo de la hibridacin consiste en detectar secuencias especficas de cidos nucleicos (DNA o RNA) inmersas en un complejo formado por muchas otras secuencias. Esta tcnica se utiliza en las transferencias de Southern y Northern y para el cribado de bibliotecas. El perfeccionamiento de las tcnicas de hibridacin ha culminado en el desarrollo de biochips o chips de DNA en micromatrices.
Transferencia de Southern
Esta tcnica se emplea para saber si se han eliminado o reordenado ciertos genes. Se utiliza, asimismo, para detectar polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restriccin (restriction fragment length polymorphisms, RFLP). El DNA genmico se digiere con endonucleasas de restriccin y se separa
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mediante electroforesis sobre gel. A continuacin, se transfieren los fragmentos a una membrana y se detectan tras su hibridacin con sondas radiactivas de DNA. Como los apareamientos incorrectos de un solo par de bases interrumpen a veces la hibridacin de sondas cortas de DNA (oligonucletidos), una variante del mtodo de Southern, denominada hibridacin especfica de oligonucletidos (oligonucleotide-specific hybridization, OSH), se sirve de oligonucletidos cortos para distinguir los genes normales de los mutantes.
Transferencia Northern
Las transferencias Northern se emplean para analizar las pautas y los niveles de expresin gnica en los distintos tejidos. Mediante esta tcnica, el mRNA se separa sobre un gel y se transfiere a una membrana; los transcritos especficos se detectan mediante sondas de DNA marcado. Esta tcnica se est sustituyendo con rapidez por otros mtodos ms sensibles y completos, como la reaccin en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (reverse transcriptase, RT)-PCR y las matrices para la expresin gnica con biochips de DNA.
Tecnologa micromatricial
Para los estudios genmicos se utiliza un mtodo en continuo desarrollo consistente en micromatrices o biochips de DNA. Estn formados por miles de secuencias sintticas de cidos nucleicos alineadas en una superficie de vidrio fino o de silicio. La muestra problema de DNA o RNA marcada con fluorescencia se hibrida al chip y luego, un lector ptico computadorizado detecta las secuencias apareadas. Las micromatrices indican variaciones de las secuencias de DNA y se utilizan para anlisis de mutaciones y para la genotipificacin. Adems, con las micromatrices genmicas o de cDNA se puede conocer por hibridacin la pauta de expresin de muy diversos transcritos de mRNA. Este mtodo posee un enorme potencial en esta era de la genmica funcional (digamos, para un anlisis extenso de los perfiles de expresin gnica). Por ejemplo, las micromatrices se pueden utilizar para desarrollar huellas dactilares genticas de los distintos tipos de linfomas, que proporcionarn informacin de utilidad para su clasificacin, fisiopatologa, pronstico y tratamiento.
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

La tcnica introducida en 1985, ha revolucionado los anlisis de DNA y se ha convertido en una de las bases de la biologa molecular y de los anlisis genticos. En esencia, la PCR proporciona una forma rpida de clonar (ampliar) in vitro fragmentos especficos de DNA. El empleo de cebadores de PCR, diseados para una secuencia de DNA determinada, confiere una especificidad extraordinaria a este mtodo. La ampliacin geomtrica del DNA despus de varios ciclos proporciona una sensibilidad notable. Por consiguiente, la reaccin en cadena de la polimerasa permite ampliar el DNA obtenido de muestras minsculas, incluidas clulas aisladas. Estas propiedades facilitan tambin la ampliacin del DNA de diversos tejidos, como muestras de sangre, biopsias, muestras quirrgicas o necroscpicas o clulas de los cabellos o de la saliva. La PCR se emplea adems para estudiar el mRNA. En este caso, primero se emplea la enzima RT para convertir el RNA en DNA, y, a continuacin, este se ampla con la PCR. Este procedimiento, denominado comnmente RT-PCR, aporta una medida cuantitativa de la expresin gnica. La PCR representa un elemento esencial del diagnstico molecular, ya que supone una estrategia de ampliacin rpida del DNA (o del mRNA) que facilita el anlisis de mutaciones mediante una amplia gama de tcnicas, incluida la secuenciacin del DNA. La PCR se utiliza asimismo para la ampliacin de secuencias repetidas y sumamente polimorfas de dinucletidos o de trinucletidos; as, se pueden rastrear diversos alelos polimorfos en los estudios de asociacin o de ligamiento gentico. La PCR se emplea cada vez ms para diagnosticar distintos patgenos microbianos.
Secuenciacin del DNA

La secuenciacin del DNA constituye en la actualidad un procedimiento automatizado. Aunque se cuenta con muchos protocolos, el ms habitual se basa en el mtodo de Sanger: se usan didesoxinucletidos para detener al azar la polimerizacin del DNA por una de las cuatro bases (A, G, T, C). Una vez separado el conjunto de fragmentos interrumpidos de DNA mediante electroforesis sobre gel de alta resolucin o capilar, se puede deducir la secuencia de DNA examinando el avance en longitud de los distintos fragmentos generados en cada una de las reacciones con los cuatro nucletidos. El uso de didesoxinucletidos fluorescentes facilita la deteccin automtica de las distintas bases y el anlisis
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directo de la secuencia del DNA con una computadora. En la actualidad se estn desarrollando otras tecnologas de secuenciacin del DNA ms rpidas y rentables. Entre ellas se encuentran la espectrometra de masas; la deteccin de bases fluorescentes por citometra de flujo; la lectura directa de la secuencia del DNA mediante microscopia de barrido, por efecto tnel o de fuerza atmica; y el anlisis de la secuencia con biochips de cido desoxirribonucleico.
Terapia gentica
Aunque difieren bastante de la insercin de material gentico en un organismo unicelular, existen tcnicas que permiten insertar genes en el genoma de plantas y animales multicelulares enteros. Los adenovirus son vehculos promisorios para estos genes. Estos virus son los vehculos ideales porque su DNA no se integra al genoma del husped; sin embargo, a menudo se requieren inoculaciones repetidas debido a que el sistema inmune del husped en general ataca las clulas que expresan protenas adenovirales. Los liposomas con estabilidad estrica tambin son vehculos de DNA promisorios. Este tipo de modalidad teraputica representa uno de los mtodos ms prometedores para el tratamiento de trastornos genticos, algunos procesos malignos, la fibrosis qustica y numerosas enfermedades infecciosas. La genoterapia se basa en dos enfoques principales: los genes transferidos pueden reemplazar a los genes defectuosos o pueden inhibir en forma selectiva genes deletreos. La genoterapia en general utiliza secuencias de DNA o ribosomas clonados. Sin embargo, la introduccin del gen clonado en el organismo multicelular puede afectar slo a las escasas clulas que incorporan el gen. Este problema podra solucionarse mediante la insercin del gen en un espermatozoide o en un vulo, dado que despus de la fertilizacin el gen se replicara en todos los tipos de clulas diferenciadas. No obstante ello, las tcnicas de insercin celular son limitadas. Las limitaciones para estos procedimientos no son slo de ndole moral o tica, sino que tambin se relacionan con el hecho de que las tcnicas disponibles en la actualidad no permiten dirigir el DNA insertado de manera que se fije a un cromosoma particular o reemplace a un gen preexistente desplazndolo del sitio que ocupa en el cromosoma.
Fingerprinting de DNA
La tcnica de fingerprinting de DNA se basa en parte en los mtodos utilizados en las tcnicas de DNA recombinante y las tcnicas de la gentica mdica originalmente utilizadas para detectar ligeras variaciones del genoma de distintas personas. El empleo de endonucleasas restrictivas permite clivar el DNA en regiones especficas. Los fragmentos de DNA se separan mediante electroforesis segn el tamao (es decir, Southern blot) y se transfieren a una membrana de nylon. Posteriormente, los fragmentos se separan y se lleva a cabo el apareamiento con una serie de sondas radiactivas especficas para regiones de cada fragmento. Una autorradiografa revela los fragmentos del DNA sobre la membrana. Cuando se utiliza en Medicina Legal, este procedimiento se lleva a cabo en muestras de la persona sospechosa y en la muestra obtenida por el forense. Luego se analizan los patrones de bandeo para determinar si son compatibles entre s. Con los mtodos convencionales de anlisis de enzimas en sangre existe una probabilidad de 1/100-1/1.000 de que dos muestras sean iguales por motivos puramente aleatorios, mientras que la determinacin del fingerprinting reduce esta probabilidad a 1/100.000-1/1.000.000.
CONCEPTOS DE POLIMORFISMOS DE UN SOLO NUCLETIDO

Estamos ante el concepto que ms se va a utilizar en los anlisis del DNA (o RNA) con fines de medicina predictiva como base cientfica para aplicar una medicina preventiva personalizada de la era posgenmica. Las mutaciones genticas que dan lugar a una enfermedad de tipo mendeliano son de una dimensin importante dentro de la estructura del gen, y la alteracin inducida en la protena sintetizada es de magnitud suficiente para producir directamente una enfermedad. Hay tambin polimorfismos, es decir cambios en porciones de DNA, de dimensin mucho ms pequea que un gen involucrado en enfermedades de tipo mendeliano y, segn los nucletidos afectados, se conocen como tandem repeat segments, que pueden ser microsatlites (tienen 2-100 repeticiones de nucletidos), y minisatlites, cuando tienen repeticiones de 1-20 kb.
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Todos somos portadores de miles de alteraciones genticas que afectan a un solo nucletido del DNA, lo que dar lugar a la alteracin de una sola base en el RNA y finalmente a un solo aa (o a ninguno debido a lo ya conocido del cdigo gentico degenerado) en la cadena de la protena producto final de proceso. Esto se llama SNP (single nucleotide polimorphism o polimorfismo de nucletido nico; pronunciado snips), cuantitativamente viene a ser el 90% de todas las variaciones de nucletidos en nuestro genoma. Se estima que hay un SNP cada 200-300 pb. Recordando que la porcin de DNA codificante est concentrada en los exones y supone slo el 2% de todo el DNA, es lo que tenemos que estudiar para la bsqueda de SNPs con posible inters clnico. Adems, no hay que olvidarse de las regiones promotoras del DNA, que tambin pueden tener SNPs y, segn su situacin podrn o no derivar en un cambio de expresin. As, los SNPs de las zonas promotoras pueden ser silentes, no hay cambios, pueden disminuir la expresin o pueden aumentarla. Actualmente, tras la secuenciacin del genoma humano y la disponibilidad de microarrays que pueden detectar simultneamente miles de SNPs, se estn realizando estudios sobre la incidencia en la poblacin de los diferentes tipos de SNPs. Cuando una mutacin SNP aparece en ms del 1% de la poblacin, se registra como susceptible a ser estudiada como causante de algunas alteraciones en el grupo de herencia multifactorial, y si un SNP aparece en el 5-10% o ms de la poblacin est justificado realizar su determinacin en grupos de enfermedades que se sospechan sean multifactoriales, como por ejemplo, obesidad, hipertensin arterial, diabetes mellitus tipo II. Los SNPs actan como improntas de nacimiento y su variedad caracteriza al grupo poblacional. Cada individuo es portador de un patrn propio de SNPs que lo identifica y que comparte con su grupo tnico. Las investigaciones estn dirigidas a analizar sectores del ADN portadores de un SNP asociado al o los genes responsables de determinada anomala, con el o los cuales co-segrega. Su identificacin puede permitir establecer un registro genmico de enfermedades humanas. La mayora de estas enfermedades son el producto de desrdenes genmicos complejos ya que son pocos los casos en que la alteracin de un solo nucletido conduce a la enfermedad. Sin embargo, tanto si la anomala proviene de un solo gen (monognicas) o de varios (polignicas), el fenotipo resultante constituye el reflejo tanto de las interacciones con otras secuencias gnicas como de diversas variables epigenticas. La evaluacin de estos factores no genticos, que incluyen cambios ambientales, dietarios y estilos de vida, permite una mejor interpretacin del comportamiento gnico. El test gentico consiste en un estudio de asociacin, comparando el patrn de SNPs de la poblacin enferma, cuyo gen responsable es conocido, con el de individuos sin esa enfermedad y permite, a travs de la expresin gnica, identificar a la poblacin susceptible de contraerla. Los SNP son, en gran medida, la causa de la variabilidad gentica interindividual observada. Se pueden distinguir varios tipos de SNP: los rSNP (aleatorios [random]) son los que estn situados en la zona silenciosa del genoma y representan el 90% del total; los gSNP (gen asociado), que podran influir en el control de los genes, supondran cerca de 1 milln, y los cSNP (de codn), que se encuentran en zonas codificantes y a menudo influyen en la funcin del gen.
BASE GENTICA DE LAS ENFERMEDADES MULTIFACTORIALES

Las enfermedades multifactoriales resultan de la interaccin simultnea de distintos polimorfismos (SNPs) distribuidos en diferentes genes, donde el factor gentico acta como predisponente y el factor ambiental es el agente desencadenante. Por lo tanto, la Gentica aporta el conocimiento fisiopatolgico, la identificacin diagnstica de diferentes fenotipos o presentaciones clnicas de la enfermedad, favoreciendo la deteccin de individuos de riesgo y su pronstico, establece la respuesta a drogas, clasificando a los pacientes como
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respondedores y no respondedores (Farmacogentica) y ofrece la posibilidad de desarrollar nuevas drogas. La deteccin de polimorfismos permitir establecer conductas teraputicas especficas evitando fracasos teraputicos, detectando a los individuos de riesgo e implementando medidas preventivas de acuerdo a la variacin gentica. Es por eso que debemos estar preparados para el desafo que impone la Medicina Personalizada Posgenmica.
APLICACIN CLNICA
La HF es una enfermedad autosmica codominante caracterizada por concentraciones muy elevadas de colesterol de las lipoprotenas de baja densidad (cLDL) en sangre, aumento del riesgo de enfermedad coronaria prematura y depsitos extravasculares de lpidos como son los xantomas tendinosos y el arco corneal en las primeras dcadas de la vida. La HF se produce por mutaciones en el gen que codifica el receptor celular de las LDL (LDLR). Su ligando natural es la apoliprotena B (apoB), que es la protena mayoritaria de las LDL. La HF es una enfermedad frecuente, ya que en la mayora de los pases la prevalencia de HF se sita en 1/500 sujetos en su forma heterocigota. La HF es la causa ms frecuente (70%) y mejor conocida de las hipercolesterolemias autosmicodominantes (HAD) caracterizadas por la presentacin familiar de hipercolesterolemia con un claro patrn bimodal en las concentraciones de cLDL entre sus miembros16. Otras causas menos frecuentes (5%) de HAD son: a) las mutaciones en el gen de apoB, y entonces la HAD se denomina apoB-100 defectuosa familiar; b) mutaciones con ganancia de funcin en PCSK9 (< 1%), proteasa que est involucrada en la degradacin del LDLR y se denomina FH3, y c) la hiperlipoproteinemia(a), que es la causa de HAD en aproximadamente un 2-3% de los casos. Aproximadamente, en un 30% de las HAD se desconoce el defecto gentico que las origina, aunque en algunas de ellas un aumento en la absorcin intestinal de esteroles pudiera desempear un papel patognico importante.
Diagnstico gentico de HF
Se conocen ms de mil mutaciones diferentes en LDLR y al menos tres en APOB causantes de HF, aunque la mutacin CGG/CAG en el codn 3500 que sustituye glutamina por arginina (R3500Q) es la ms frecuente causa de apoB defectuosa familiar. La confirmacin de una mutacin funcional en los genes del LDLR o apoB es de eleccin en la HF porque proporciona un diagnstico de certeza. La utilidad del diagnstico gentico ha sido confirmada en muchos estudios, ya que identifica precoz e inequvocamente a sujetos con riesgo cardiovascular elevado, facilita el consejo gentico, estratifica mejor el pronstico de acuerdo con el tipo de mutacin28, ayuda a la bsqueda de familiares afectos, facilita al mdico la indicacin de tratamiento y a los pacientes, su cumplimiento. No obstante, el anlisis gentico no puede aplicarse todava a grandes grupos de poblacin debido su coste, su disponibilidad y su complejidad.
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De una forma muy suscinta, se ha tratado de explicar los conceptos de gentica en la asignatura Bioqumica; los cuales son fciles de olvidar cuando se llevan muchos aos de prctica mdica asistencial, por lo tanto, se debe destacar que es imprescindible recordarlos si se desea incorporar a la prctica mdica la aplicacin de los conocimientos aportados por la secuenciacin del Genoma Humano. Si no se es capaz de ordenar e ir actualizando estos conceptos, cualquier trabajo relacionado con la Gentica y riesgo de enfermedad demandar un esfuerzo intil con el agravante de mantener al mdico en el mundo pregenmico y sin que pueda adentrarse progresivamente en el mundo posgenmico. Finalmente, se estara privando a los pacientes de la aplicacin personalizada con conocimientos de eficacia ya demostrados y que ayudaran a lograr mejores diagnsticos, prevencin, pronstico o tratamiento de sus dolencias.
BIBLIOGRAFA
Voet D; Voet JG; Pratt C. Fundamentos de bioqumica. La vida a nivel molecular. 2 ed. Buenos Aires: Mdica Panamericana, 2007. Carroll EW. Control gentico de la funcin celular y herencia. En: En: Porth C M. Fisiopatologa: salud-enfermedad, un enfoque conceptual. 7 ed. Buenos Aires - Madrid: Mdica Panamericana; 2007. p. 119-34. Curtis H; Barnes NS. Biologa. 6 ed. Buenos Aires: Mdica Panamericana, 2000. Passarge E. Gentica. Texto y Atlas. 3 ed. Madrid: Mdica Panamericana, 2010. Sabater Tobella J; Sabater Sales G. Medicina Personalizada Posgenmica. Conceptos Prcticos para Clnicos. 1 ed. Barcelona: Elsevier Masson, 2010.
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Genetica Molecular

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NUCLETIDOS Y CIDOS NUCLEICOS

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ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL DNA

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FUERZAS QUE ESTABILIZAN LAS ESTRUCTURAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS

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REPLICACIN DEL DNA

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Procesamiento del RNA

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REPARACIN DEL DNA

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La unin de extremos repara las roturas de la doble hebra

Tipos de mutaciones segn un criterio morfolgico

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Tipos de mutaciones segn un criterio funcional

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Expresividad variable de un gen

Regulacin de la expresin gentica

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La organizacin del cromosoma

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El genoma mitocondrial del hombre

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Cooperacin entre el genoma mitocondrial y el nuclear

Acontecimientos principales en las mitocondrias

OXPHOS en las mitocondrias

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Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Secuenciacin del DNA

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CONCEPTOS DE POLIMORFISMOS DE UN SOLO NUCLETIDO

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BASE GENTICA DE LAS ENFERMEDADES MULTIFACTORIALES

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