Controle da expresso gnica em procariontes OPERON LAC

No metabolismo da lactose por E. coli so necessrias duas enzimas que fazem parte de um operon chamado lac. A primeira enzima a BETAGALACTOSIDASE. Ela capaz de clivar a lactose em glicose e galactose que assim serviro como fonte de carbono para a clula (ver figura abaixo). A beta-galactosidase dita uma enzima indutvel, ou seja, sua expresso varia com as necessidades celulares:

Caso a bactria esteja crescendo em meio rico em lactose, sua expresso ser alta; Caso a fonte de carbono seja outro carboidrato, sua expresso ser reduzida.

A outra enzima do operon a PERMEASE, que, como seu prprio nome indica, a enzima responsvel pelo transporte de lactose do meio extracelular para o meio intracelular atravs da membrana bacteriana (a lactose, como a maioria dos carboidratos, no capaz de atravessar a bicamada lipidica sem uma protena carreadora). Existe ainda no operon lac uma outra enzima: Tiogalactosdeo Transacetilase. Seu papel in vivo ainda incerto, mas in vitro capaz de transferir uma acetila do acetil CoA para a hidroxila do carbono 6 de um tiogalactosdeo. Um importante indcio de que a induo ocorreria no metabolismo da lactose foi o aumento observado de beta-galactosidase quando se tinha um aumento de permease e tranacetilase. Isto foi facilmente compreendido com modelos mutantes que mostravam que as 3 enzimas so codificadas por 3 genes contguos (ver figura abaixo), onde:

z - beta-galactosidase; y - permease; a - transacetilase

O RNAm do operon lac dito policistrnico ou polignico pois possui informao para codificar as 3 protenas: beta-galactosidase, permease e transacetilase (rever figura acima). Depois da descoberta destes 3 genes, descobriu-se um mutante que possuia os genes para expressar as 3 protenas, mas no o fazia. Jacob e Monod deduziram que "a taxa de sntese destas protenas normalmente governada por um elemento comum diferente dos genes que especificam sua estrutura". A este gene deu-se o nome de regulador (gene i), sendo que os mutantes constitutivos possuem gentipo i-z+y+a+ e os selvagens i+z+y+a+. O gene i capaz de codificar um repressor que est faltando ou est inativado nos organismos com o gene i-. Atravs de estudos usando bactrias parcialmente diplides, atravs do fator sexual (F'), observou-se que uma bactria que possui o genoma i+z- e o fator F'i-z+ no capaz de metabolizar a lactose, ou seja, o repressor (produto do gene i) difundvel.

Existe no opreron lac uma regio promotora (p), que o local onde a RNA polimerase se liga para comear a transcrio. Juntamente com o operador (o) formam os locais de controle do operon. Na presena do produto do gene i o operon incapaz de ser codificado pois o repressor est ligado ao operador.

O isopropil-b-D-galactosdeo (IPTG) um indutor artificial do operon lac. Foi atravs de estudos com esta substncia que se descobriu o repressor lac, que na ausncia do indutor liga-se ao operador e bloqueia a transcrio (veja as figuras abaixo).

O repressor uma protena tetrmera com subunidades idnticas (de 37Kd), cada uma com um ponto de ligao ao indutor. Atravs de cristalografia (ver fguras abaixo) descobriu-se que esta protena possui eixos bilaterais, como seria esperado de uma protena que se liga ao DNA. "O repressor encontra o operador se difundindo ao longo da molcula de DNA (uma procura unidimensional) e no o encontrando a partir do meio aquoso (uma procura tridimensional".

J sabido que se a glicose estiver no meio de cultura da E coli, ela ser preferencialmente usada como fonte de energia, isto , enzimas utilizadas no metabolismo dos outros carboidratos sero pouco ou nada expressas. Este efeito chamado represso por catablito. Mas como se d essa represso?

Um fato importante que a glicose abaixa a concentrao do AMP cclico em E coli. Atravs de estudos com AMPc exogeno, concluiu-se que "AMPc estimula o incio da transcrio de muitos operons indutveis" sendo, portanto, um sinalizador tanto em bactrias quanto em mamferos. Mas como se d essa modulao da transcrio via AMPc? Em bactrias, o AMPc liga-se ao CAP (catabolite gene activator protein - protena ativadora de genes por catablitos), uma protena dimrica com 2 subunidades idnticas de 22Kd. Cada subunidade possui um domnio de ligao ao DNA e ao AMPc (ver figura abaixo). Somente o complexo CAP-AMPc capaz de estimular a transcrio e se ligar a determinados promotores (Saiba mais sobre motivos proteicos de ligao ao DNA clicando AQUI!). No operon lac, CAP se liga prximo a a regio que se liga a RNA polimerase.

CAP exibe simetria bilateral que se ajusta seu ponto de ligao do DNA. O repressor se liga em um regio "a frente" da RNA polimerase, portanto no bloqueia a sua ligao mas impede sua progresso. CAP tambm estimula a transcrio do operon lac por possuir uma regio de ligao a RNA polimerase quando est ligado ao DNA. Ele tambm capaz de girar o DNA em 94 graus.

Especificamente, 2 temas hlice-ala-hlice do dmero se inserem em sulcos maiores sucessivos da dupla hlice de DNA. Dois giros de 43 graus correspodem pela maior parte do giro para a direita do eixo do DNA. As ligaes do CAP e da RNA polimerase se reforam mutualmente porque inclinam o DNA no mesmo sentido (uma viso geral pode ser vista no modelo cristalogrfico abaixo).

Os operons catablitos indutveis foram colocados sobre controle duplo, pois possuem promotores de ligao acima da regio do operon (provavelmente enfraquecido durante a evoluo) para tornar operons dependentes de uma protena auxiliar que inicia eficientemente a transcrio. O indutor especfico atua em um s operon enquanto que o complexo CAP-AMPc capaz de afetar muitos.

Operons controlados em conjunto pelo AMPc so membros de um circuito regulador global, dentre eles: genes heat-shock (que so ativados por uma subunidade sigma diferente da RNA polimerase

quando h altas temperaturas) e genes SOS (que codificam enzimas de reparo aps dano no DNA).