Tincin tricrmica de Masson

La tincin tricrmica de Masson, al igual que otras tinciones tricrmicas, es una tcnica de coloracin especial que permite visualizar claramente las fibras de colgeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseados para dar resistencia; tambin evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares. Se emplean tres colorantes para diferenciar el ncleo celular, el citoplasma y las fibras de colgeno.

Fundamento
Primeramente, se tien las secciones con un tinte cido tal como escarlata de Biebrich. Todos los elementos acidfilos del tejido tales como el citoplasma, el msculo y el colgeno se unirn a los tintes cidos. Las secciones entonces se tratan con cido fosfotngstico y/o fosfomolbdico. Ya que el citoplasma es mucho menos permeable que el colgeno, los cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos permiten que la escarlata de Biebrich difunda del colgeno pero no del citoplasma. Los cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos tienen numerosos grupos cidos que probablemente acten como medio de unin entre el colgeno y el azul de la anilina, que es el tinte del colgeno. Probablemente, el pH de la solucin fosfotngstico/fosfomolbdico tambin aumente la coloracin y ayude al colgeno en la difusin o el retiro de los colorantes.

Tejido control y diana

Cualquier tejido con componente conjuntivo, en especial con contenido en fibras colgenas, puede servir como control o ser un tejido diana. Cualquier fijador es vlido, si bien es de eleccin la solucin de Bouin. El grosor de corte ptimo de las muestras es de entre 4 y 6 micras.

Reactivos
1. Solucin de hematoxilina frrica de Weigert. 2. Solucin de escarlata de Biebrich fucsina cida: 90 cc de escarlata de Biebrich al 1% en agua destilada. 9 cc de fucsina cida al 1% en solucin acuosa. 1 cc de cido actico glacial. 3. Solucin acuosa de cido fosfomolbdico (utilizar cido fosfotngstico en la misma proporcin, si se va a teir con verde luz): 5g de cido fosfomolbdico. 200 cc de agua destilada. 4. Solucin de azul de anilina: 2,5 g de azul de anilina. 2 cc de cido actico glacial. 98 cc de agua destilada. 5. Solucin de verde luz al 2% (alternativa al azul): 2 g de verde luz SF amarillento. 99 cc de agua destilada. 1 cc de cido actico glacial. Solucin diferenciadora: solucin acuosa de cido actico glacial al 1%.

Procedimiento

Desparafinar e hidratar hasta el agua destilada de manera habitual. En material fijado en soluciones de formaldehdo o alcohlicas se recomienda hacer un mordentaje previo con lquido de Bouin durante 1 hora a 56-60 C o toda la noche a temperatura ambiente. Enfriar y lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo. Teir con hematoxilina frrica durante 10 minutos. Lavar en agua corriente durante 10 minutos. Lavar en agua destilada. Teir con la solucin de escarlata-fucsina cida durante 2-5 minutos. Lavar en agua destilada. Tratar con la solucin de cido fosfomolbdico-fosfotngstico durante 10-15 minutos si se va a colorear con la solucin de azul de anilina, o en la solucin acuosa de cido fosfotngstico al 5% durante 15 minutos si se desea teir con verde luz. Teir con solucin de azul de anilina 15 minutos o con solucin de verde luz 5 minutos. Lavar en agua destilada. Diferenciar en la solucin de cido actico al 1% durante 3-5 minutos. Deshidratar, aclarar y montar.

Anlisis de resultados
Fibras de colgeno = Azul. Por tanto, el tejido conjuntivo se teir de dicho color. Estructuras oxidadas + Citoplasma = Rojo. Se teirn de rojo la queratina, los glbulos rojos y el tejido muscular. Ncleo celular = Lila, marrn.

Variantes
La tcnica presenta multitud de variantes, pero las principales modificaciones hacen referencia al uso de un diferenciador despus de la hematoxilina (por ejemplo, cido pcrico), el tiempo de las soluciones, la temperatura, etc.

Tricromico de Masson
Los ncleos aparecen en marrn o negro Keratina y msculo en rojo Los citoplasmas en tonos de rosa El colgeno y hueso en azul o verde 1-Desparafinado.
Estufa durante 30 min. a 60. Sumergimos en xilol durante 10 o 15 min.

7- cido fosfomolbdico 5 min. 8- cido fosfomolbdico 5 min. 9- Verde luz 5-7 min. 10-Deshidratar.
Alcohol de 70 Alcohol de 96. Xilol.

2- Hidratacin.
Alcohol absoluto-5min. Alcohol 96-5min. Alcohol 70-5min.

3- Lavar en H2O destilada. 4- Hematoxilina de Weigert 5 min. 5- Lavar con agua corriente 10 min. 6- Fucsina de Ponceau 5 min.

11- Montaje.