Edicin N 51 de 2004

BIOTECNOLOGA Y PRODUCCIN DE ANTIBITICOS

Los antibiticos, un hito de la biotecnologa La mayora de las personas conoce acerca de la existencia de antibiticos, y su empleo es un hecho frecuente en el mundo entero hace varios aos. La biotecnologa, por su parte, se considera un desarrollo reciente. Sin embargo, la biotecnologa se encuentra presente en la vida cotidiana ms de lo que la gente se imagina, hace muchos aos. Por ejemplo, pocos conocen la relacin que existe entre los antibiticos y la biotecnologa. De hecho, la produccin de antibiticos que se inici a mediados del siglo XX, se considera la primera aplicacin de la biotecnologa a la vida cotidiana de las personas. Para comprender mejor esta afirmacin, se debe recordar a qu se llama biotecnologa y definir qu es un antibitico. La biotecnologa se define tradicionalmente como el empleo de organismos vivos para la obtencin de un bien o servicio til para el hombre. Actualmente, la biotecnologa moderna emplea tcnicas de ingeniera gentica, e incluye la produccin de protenas recombinantes, el mejoramiento de cultivos vegetales y del ganado, el empleo de organismos para limpiar el medio ambiente, y otras aplicaciones industriales. Los antibiticos pueden definirse como molculas con actividad antimicrobiana y, originalmente, eran el producto del metabolismo de hongos y bacterias. De lo anterior se desprende que los antibiticos para uso humano que se obtienen a partir de los microorganismos son productos biotecnolgicos, y se consideran la primera aplicacin de la biotecnologa a la industria farmacutica. Qu son los antibiticos? Como ya se adelant, los antibiticos en un principio involucraban productos del metabolismo de hongos y bacterias, capaces de inhibir en pequeas dosis los procesos vitales de ciertos microorganismos, destruyendo o impidiendo su desarrollo y reproduccin. Los antibiticos naturales son productos del metabolismo secundario de ciertos microorganismos provenientes del suelo, como los hongos del gnero Penicillium o las bacterias del gnero Streptomyces. El metabolismo secundario comienza cuando el microorganismo detiene su crecimiento por alguna razn (por ejemplo, por agotamiento de nutrientes), y los intermediarios metablicos o productos finales comienzan a acumularse dentro de la clula. Estos intermediarios y productos finales pueden resultar txicos, y por eso la clula los convierte en productos menos txicos, como los antibiticos.

"El Cuaderno de PorquBiotecnologa" es una herramienta didctica creada y desarrollada por el equipo pedaggico del Programa Educativo PorquBiotecnologa. Su reproduccin est autorizada bajo la condicin de que se aclare la autora y propiedad de este recurso pedaggico por parte del Programa Educativo PorquBiotecnologa.

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La produccin y secrecin de las sustancias antibiticas no afectan al microorganismo productor, y le ofrecen una ventaja desde el punto de vista de la supervivencia ya que le permiten colonizar ambientes con ms eficacia que sus competidores. Antibiticos sintticos y semi-sintticos En la actualidad no slo se fabrican antibiticos naturales, es decir, a partir del cultivo a gran escala de microorganismos, sino que tambin hay antibiticos sintticos y semi-sintticos. Los antibiticos sintticos se producen en el laboratorio a travs de procesos de sntesis qumica, como es el caso de las sulfamidas. Otros antibiticos se obtienen a partir de cultivos microbianos y luego se modifican qumicamente. stos ltimos son los antibiticos semi-sintticos, como por ejemplo, la ampicilina, derivada de la penicilina. Qu tipo de antibiticos existen? Los antibiticos pueden clasificarse tomando en cuenta diferentes criterios: Segn su mecanismo de accin, algunos antibiticos impiden la sntesis de la pared celular de los microorganismos, otros alteran la membrana plasmtica, y la mayor parte de ellos inhiben la sntesis de cidos nucleicos o protenas. Segn la estructura qumica se diferencian las penicilinas, cefalosporinas, aminoglucsidos, tetraciclinas, sulfamidas u otros. Segn su espectro de accin, es posible dividirlos en agentes de amplio espectro, que actan frente a multitud de bacterias, y agentes de espectro restringido que solo actan frente a algunos tipos de bacterias. Alexander Fleming y el descubrimiento de la penicilina La penicilina es el antibitico que revolucion el tratamiento de las infecciones bacterianas, como la neumona, sfilis, tuberculosis y gangrena, y dio origen a la industria farmacutica. El descubrimiento de la penicilina fue un hecho casual, que se debe al trabajo de Alexander Fleming, bacterilogo del Hospital St. Mary de Londres, quien estaba interesado en el desarrollo de mtodos de profilaxis y asepsia. Mientras se encontraba trabajando con bacterias del tipo estafilococos observ que una de las placas de cultivo haba sido contaminada por un hongo. Decepcionado, pero sorprendido, Fleming observ que alrededor del hongo se formaba un enorme halo sin bacterias. Era evidente que el hongo (que luego se supo era de la especie Penicillum notatum) produca algo capaz de matar a las bacterias. Fleming llam a este principio activo penicilina notatum. El 1929 public sus experimentos, aunque no despert el inters de la comunidad cientfica.
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En 1938 fueron los ingleses Howard Walter Florey y Ernst Boris Chain quienes retomaron las investigaciones de Fleming, aislaron la penicilina y realizaron los experimentos claves en ratones. Los ensayos clnicos se iniciaron en 1941, y en 1943 comenz la produccin comercial en Estados Unidos. Fleming comparti en 1945 el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina con Florey y Chain por sus contribuciones al desarrollo de la penicilina. Fabricacin industrial de la penicilina El hongo utilizado industrialmente para la produccin de penicilina es Penicillum chrysogenum. El primer sistema de produccin de penicilina fue el conocido como mtodo de superficie, donde el hongo creca en la superficie de una capa de medio de cultivo en bandejas. Pero despus de 1944, el desarrollo del mtodo de fermentacin sumergida permiti disminuir los requerimientos de espacio y, consecuentemente, los costos de produccin. Los fermentadores para la produccin de penicilina alcanzan los 20.000 a 115.000 litros de capacidad. El medio de cultivo para la fermentacin se compone bsicamente de un caldo de maz, con el agregado de lactosa y compuestos inorgnicos. Despus de ajustar el pH (4,5-5,0), el medio de cultivo se pasa al fermentador equipado con un agitador vertical y con un sistema de inyeccin de aire estril y serpentinas para mantener la temperatura entre 23 y 25 C. El hongo se introduce estrilmente y se inicia la fermentacin, durante la cual el aire estril permite el crecimiento del hongo y la agitacin facilita su distribucin en el fermentador. Despus de unas 50 a 90 horas la tasa de crecimiento del hongo disminuye, el fermentador se enfra a 5 C para prevenir la desestabilizacin del antibitico y el hongo se separa por filtracin. La penicilina se extrae posteriormente empleando solventes, se concentra, se esteriliza por filtracin y luego el producto se cristaliza y se envasa. En bsqueda de nuevos antibiticos La bsqueda de nuevos antibiticos es probablemente ms urgente en la actualidad que en los tiempos de Fleming, ya que muchos antibiticos que fueron alguna vez altamente efectivos han perdido utilidad frente a los organismos patgenos. Este hecho es el resultado de un proceso por el cual los microorganismos desarrollan resistencia frente a antibiticos que en el pasado les resultaban letales. Si bien los antibiticos son compuestos qumicos producidos naturalmente por los microorganismos, y la adquisicin de resistencia a los antibiticos tambin es un proceso natural en los seres vivos, se considera que el hombre ha influido en este acontecimiento evolutivo. Se cree que el uso indiscriminado de antibiticos por parte del hombre, ha acelerado el proceso de
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seleccin natural por el cual las bacterias ms resistentes se han visto beneficiadas frente a las ms sensibles. Estas cepas resistentes sobreviven a la presencia del antibitico y pueden propagarse exitosamente. Concientes del riesgo que significa que los antibiticos sean inocuos para los microorganismos patgenos, diferentes centros de investigacin o compaas farmacuticas en todo el mundo realizan extensas bsquedas de microorganismos o de nuevas molculas antibiticas con diferentes mecanismos de accin. Adems, la industria farmacutica est interesada en encontrar antibiticos ms baratos y ms seguros para la salud humana, ya que algunos de los existentes, aunque efectivos, presentan efectos colaterales indeseables. Los nuevos antibiticos generalmente se obtienen por modificacin qumica de los que ya se usan, para otorgarles nuevas propiedades. Sin embargo, el mayor desafo es encontrar antibiticos completamente nuevos. Para eso, se realiza un arduo y sistemtico trabajo de bsqueda o rastreo, llamado screening, que se podra resumir en los siguientes pasos: 1) Se obtiene la mezcla de microorganismos que hay en diferentes muestras de tierra o de agua. 2) Se analiza la capacidad que tiene cada muestra de producir algn tipo de antibitico a travs de antibiogramas u otros tipo de ensayos. 3) Si el resultado es positivo, se aslan los diferentes componentes de la muestra, se los cultiva por separado y se analiza su efecto antibacteriano, con el objetivo de individualizar al microorganismo productor de antibiticos. 4) Se estudia de qu tipo de antibitico se trata para comprobar que no sea uno ya conocido. 5) Se estudia de qu bacteria u hongo se trata para ver cmo puede crecer en cultivo. 6) Se ensaya la produccin del antibitico haciendo crecer al microorganismo en pequeos fermentadores, para pasar luego a ms grandes. 7) Se estudia detalladamente al antibitico, desde su estructura qumica y modo de accin hasta su eficacia, toxicidad y efectos colaterales en animales y humanos.

Mejoramiento de los antibiticos Los productos del metabolismo secundario, como los antibiticos, suelen generarse en concentraciones muy bajas. Es por eso que una vez elegidas las bacterias productoras, se busca la manera de mejorarlas en el laboratorio para transformarlas en superproductoras. Una de las tcnicas empleadas para lograrlo es la mutagnesis, que introduce cambios azarosos en el ADN que pueden favorecer o acelerar la sntesis del antibitico. Otra alternativa es, una vez conocidas las enzimas que participan en la sntesis del antibitico, dirigir la mutacin a los genes que codifican para estas enzimas para que trabajen ms y fabriquen ms producto.

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Otra tcnica que se puede emplear es la ingeniera gentica para aumentar el nmero de copias de los genes que codifican para las enzimas que intervienen en la produccin del antibitico. De esta forma se fabricar, a partir de una misma clula, ms cantidad del producto final. Finalmente, la ingeniera gentica permite tambin transferir los genes de las enzimas mencionadas a organismos ms fciles de crecer y manipular, como Escherichia coli, para que stos produzcan el antibitico deseado.

ACTIVIDADES
OBJETIVOS: Rever los conceptos introducidos en la seccin terica. Relacionar el texto con temas vinculados a la inmunologa, la prevencin y el tratamiento de enfermedades. Introducir conceptos vinculados con las actividades humanas y su influencia sobre la evolucin de las especies. Conocer la utilidad de la ingeniera gentica para el desarrollo de productos tiles para la salud de la especie humana.

DESTINATARIOS: El tema abordado en este cuaderno se aplica preferentemente a los alumnos de EGB 3 y de Polimodal y es posible incluirlo al estudiar temas vinculados con el sistema inmunolgico, la prevencin y el tratamiento de enfermedades, as como la relacin de los microorganismos con la salud. Otro aspecto que es posible relacionar con el tema de este Cuaderno, particularmente en el nivel Polimodal, es la relacin entre el uso de antibiticos y el proceso de seleccin natural y la evolucin de las especies. CONSIDERACIONES METODOLGICAS: El tema de la produccin de antibiticos permite plantear en el aula diversas cuestiones interesantes: - Tal como plantea el texto en su comienzo, es interesante resaltar que la produccin de antibiticos es un proceso biotecnolgico, por el hecho de involucrar la accin de microorganismos en la obtencin de un producto industrial para aplicacin humana.

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- Se sugiere aprovechar este tema para trabajar con los alumnos la concepcin generalizada y equivocada que existe acerca de la funcin de los microorganismos. Habitualmente, se asocia a los microorganismos con las enfermedades. Sin embargo, es importante resaltar las funciones beneficiosas que desempean los microorganismos, y el aprovechamiento que el hombre hace de ellas. Por ejemplo, como descomponedores en el ecosistema, como productores de sustancias bactericidas, y su utilizacin en la industria alimenticia y farmacutica, entre otras. - Otro aspecto para trabajar se relaciona con el empleo de los antibiticos y el proceso de evolucin. La adquisicin de resistencia a los antibiticos es un ejemplo muy til para interpretar el proceso de seleccin natural y diferenciarlo de la seleccin artificial. En el caso particular de los antibiticos se sugiere interpretar, a partir de las actividades, la influencia que el hombre ejerce como factor externo y que lleva a la seleccin natural de las cepas de bacterias resistentes a los antibiticos. - Es posible plantear con los alumnos la discusin acerca de la influencia del hombre en el proceso natural de evolucin de las especies como un argumento que en ocasiones se incluye en la controversia acerca de los productos biotecnolgicos y, en particular, de los transgnicos. Este argumento se basa en considerar que el hombre, a partir de la obtencin de organismos con nuevos caracteres, ejerce una influencia a favor de unas especies sobre otras, alterando el curso natural de la evolucin. Se sugiere plantear el debate en clase para reunir las ideas que existen entre los alumnos, cules son los argumentos a favor y en contra de los cambios que se introducen a travs de la biotecnologa.

ACTIVIDADES ACTIVIDAD 1. Comprensin de los conceptos Nota para el docente: las siguientes preguntas pueden guiar una discusin o evaluacin de la comprensin del tema. 1. Explicar por qu la produccin de antibiticos se considera un proceso biotecnolgico. 2. Qu son los antibiticos? 3. Qu diferencia se puede establecer entre los antibiticos naturales, los semi-sintticos y los sintticos? 4. Por qu la produccin de antibiticos le pueden ofrecer al microorganismo productor una ventaja adaptativa frente a sus competidores? Cules seran esos competidores? 5. Relatar cul fue el hecho que llev al descubrimiento del primer antibitico, y cul fue la importancia de este hecho cientfico. 6. Realizar un esquema (con cuadros y flechas) que resuma el mtodo de produccin industrial de la penicilina. 7. Por qu es importante en la actualidad encontrar nuevos antibiticos?
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8. Cul sera la influencia del hombre en el proceso de adquisicin de resistencia a los antibiticos? 9. Por qu la adquisicin de resistencia a los antibiticos por las bacterias representa un riesgo para la salud humana? 10. Realizar un esquema (con cuadros y flechas) que resuma el proceso por el cual se buscan nuevos antibiticos en la naturaleza. 11. Cules son las tcnicas que se pueden emplear para mejorar los antibiticos que se producen naturalmente? Por qu es recomendable el mejoramiento? ACTIVIDAD 2. Experiencia: Cultivo de bacterias y el efecto de antibiticos Las bacterias no pueden verse a simple vista. Sin embargo, es posible observar sus colonias, que son agrupaciones de bacterias que se originan a partir de la multiplicacin de una bacteria original. Objetivo: El objetivo de esta experiencia es comprobar la presencia de bacterias en el ambiente, procedentes de diferentes fuentes. Nota para el docente: esta actividad puede adaptarse a alumnos de EGB 2 y 3, y de Polimodal. Para su realizacin e interpretacin se requiere que los alumnos tengan algunos conocimientos previos acerca de qu son los microorganismos, y que adquieran cierta prctica en el manejo del material de laboratorio. Debido a que esta experiencia incluye el trabajo con cultivo de microorganismos, y depende de las condiciones de trabajo (del laboratorio y ambientales) puede ocurrir que en algunos casos los resultados no sean ptimos. Por esto, se sugiere a los docentes realizar previamente la experiencia para ajustar algunas variables de manera que los resultados sean claros y visibles. Materiales: - 6 placas de Petri u otros recipientes poco profundos con tapa; - agar o gelatina sin sabor; - leche o yogur, - una varilla metlica o hisopos esterilizados; - un trozo de papa u otro vegetal cocido (dejar varios das en un recipiente con agua). Procedimiento: 1. preparar la gelatina con agua hirviendo como indica el envase (se le puede agregar caldo en polvo). 2. Cuando est an caliente volcar una capa delgada sobre cada recipiente y cerrarlo inmediatamente. 3. Colocar los recipientes boca abajo (para evitar que las gotas condensadas caigan sobre el medio de cultivo) y dejar enfriar.
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4. Una vez que el medio de cultivo se enfri proceder de la siguiente forma: Placa 1: no abrir; dejarla cerrada durante toda la experiencia. Placa 2: dejarla abierta durante toda la experiencia. Placa 3: toser dentro y cerrar inmediatamente. Placa 4: distribuir suavemente sobre el agar una pequea gota de leche o yogur con un hisopo o la varilla metlica (esterilizada en alcohol o fuego). Cerrar inmediatamente. Placa 5: tomar una pequea gota de agua en la que se dej pudrir la papa y pasarla suavemente sobre el agar (como en el frasco 4). Cerrar inmediatamente. Placa 6: hacer lo mismo que en la placa 5. 5. Dejar las placas a temperatura ambiente, durante 7 das. 6. A los 4 das, abrir la placa 6, con mucho cuidado, y colocar sobre el agar discos embebidos en diferentes antibiticos (que proveer el docente). Anotar diariamente los cambios que se observan.

La fotografa muestra un antibiograma en el cual se colocan discos embebidos con diferentes antibiticos. El halo alrededor del antibitico indica que las bacterias presentes en esas reas fueron eliminadas por accin del antibitico. Cuanto mayor sea el halo alrededor del disco se supone que mayor es el efecto del antibitico sobre el tipo de bacterias del cultivo.

Preguntas para analizar la experiencia: Cul es el objetivo del frasco 1? (Nota para el docente: esta placa es el testigo o control con el cual comparar el resto de las placas. Se supone que si se trabaja en las condiciones adecuadas, en esta placa no deberan desarrollarse colonias de microorganismos). a. De dnde provienen los microbios que crecen sobre la placa 2? b. De dnde provienen los microbios que aparecen sobre la placa 3? c. Se notan diferencias entre las colonias provenientes de diferentes orgenes? Cules son esas diferencias? (Nota para el docente: es posible encontrar diferencias en el color, tamao, y forma de las colonias.) d. Podran ser patgenas las bacterias que crecen en la placa 4? Por qu? e. Cul ser el origen de los diferentes antibiticos empleados? f. Por qu se prueban diferentes tipos de antibiticos?
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g. Cmo se podra determinar cul de los antibiticos examinados es el ms efectivo? h. Cmo se podra mejorar la produccin del antibitico que resulta ms efectivo? i. Suponiendo que se encuentra en el cultivo un tipo de bacteria resistente a los diferentes antibiticos conocidos. Qu se debera hacer para lograr eliminar a este tipo de bacterias? ACTIVIDAD 3. La evolucin de las bacterias Existen organismos, como las bacterias y muchos tipos de insectos que tienen un ciclo de vida corto, y su tiempo de reproduccin es veloz. Esto determina que la transmisin de las nuevas caractersticas de una generacin a la siguiente se realice a corto plazo. Este tipo de organismos constituyen un buen modelo para el estudio del proceso de evolucin, debido a que los cambios de una generacin a la siguiente se ponen de manifiesto en poco tiempo. En la siguiente actividad se presenta un caso de evolucin a corto plazo en una poblacin de bacterias como consecuencia de su exposicin a los efectos de los antibiticos, destinados a eliminarlos y proteger la salud humana. El grfico 1 representa la curva de crecimiento normal para una poblacin de bacterias cultivada en el laboratorio en condiciones ptimas de temperatura, con una provisin abundante de nutrientes y suficiente espacio para el crecimiento de la poblacin. El grfico 2 representa las variaciones en el crecimiento de una poblacin similar de bacterias, en las mismas condiciones de crecimiento que la poblacin representada en el grfico 1, pero con una variante: a diferentes tiempos se le agregan al cultivo de bacterias antibiticos destinados a eliminarlas. En el Tiempo 1 (T1) se agrega al cultivo el antibitico X. En T2 se le suministra otra dosis del mismo antibitico. En T3 se le agrega el antibitico Y.
1
n de individuos n de individuos antibitico X

2
antibitico Y

antibitico X

Tiempo

T1

T2

T3 Tiempo

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Preguntas para el anlisis de la actividad: a. Analizar el grfico 1 y explicar cul fue la variacin en el tamao de la poblacin de bacterias de esta experiencia. Cul es el dato del grfico que permite interpretar este comportamiento de la poblacin? b. Analizar el grfico 2 responder: i. Cul fue el efecto que provoc el antibitico X sobre la poblacin de bacterias en el tiempo T1? Cmo es posible determinarlo a partir del grfico? ii. Qu indicara el hecho de que el mnimo de la curva no llegue a 0 despus de haber aplicado el antibitico respecto de la poblacin de bacterias? (Nota para el docente: se supone que algunas bacterias de la poblacin inicial tienen una caracterstica que les permite sobrevivir al antibitico, es decir que son resistentes a l y, por lo tanto, no mueren como consecuencia de la aplicacin de este antibitico) iii. La respuesta de la poblacin de bacterias al antibitico X aplicado en el tiempo 2 es igual a la ocurrida en el tiempo 1? Explicar la respuesta. (Nota para el docente: debido a que la poblacin de bacterias proviene de otras resistentes al antibitico, y teniendo en cuenta que las bacterias se reproducen asexualmente, las nuevas bacteria que se originan de ellas tambin sern resistentes, y por eso la poblacin sigue creciendo luego de la aplicacin del antibitico.) c. A partir de la observacin del grfico 2 explicar cmo vari la poblacin de bacterias en respuesta a la aplicacin del antibitico Y. d. Cmo se explicara el hecho de que en este caso la curva haya llegado a 0 despus de la aplicacin del antibitico Y? e. Consideran que la respuesta de las bacterias al antibitico X representa un caso de seleccin natural o de seleccin artificial ? Justificar la respuesta. (Nota para el docente: este caso es un ejemplo de seleccin natural. Resulta interesante trabajarlo con los alumnos ya que habitualmente suele confundirse con un caso de seleccin artificial por el hecho de que el hombre es el que coloca el antibitico. Sin embargo, la supervivencia de las bacterias depende de sus propias caractersticas, y no es el hombre el que decide qu bacterias van a sobrevivir y cules no). f. El siguiente esquema aporta una interpretacin al fenmeno ocurrido en la poblacin de bacterias como respuesta a la aplicacin del antibitico X. Analizar el esquema y responder a las consignas que siguen:
i.

Cmo se explicara la presencia de una bacteria diferente

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ii. iii.

(representada con otro color) en la colonia de bacterias del esquema? Cul es el mecanismo por el cual se puede generar diversidad en una especie de bacterias? (Nota para el docente: esta pregunta se refiere al fenmeno de las mutaciones, que genera variabilidad en organismos que se reproducen asexualmente). Qu le sucedi a la bacteria que era diferente del resto en presencia del antibitico X? Qu le sucedi al resto de las bacterias en las mismas condiciones?

Material de consulta http://fai.unne.edu.ar/biologia/evolucion/index.htm. Hipertextos en el rea de la biologa perteneciente a la Universidad Nacional del Nordeste argentino. Esta pgina aborda el desarrollo de la teora de la evolucin, la visin moderna de la evolucin con la teora de Darwin y la evolucin humana.

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/medlineplus.html. Este portal pertenece a la

Biblioteca Nacional de Medicina y los Institutos Nacionales de salud de Estados Unidos. Incluye informacin para el pblico sobre salud, programas interactivos de educacin para la salud, y una enciclopedia de salud con informacin e imgenes.
New Antibiotics. Nature Biotechnology 17, 1165 1169 (01 Dec 1999)

The

http://biotech.nature.com

Biosynthesis of Complex Polyketides in a Metabolically Engineered Strain of E. coli. Science.

Marzo 2 2001: 1790-1792. Blaine A. Pfeifer, Suzanne J. Admiraal, Hugo Gramajo, David E. Cane, and Chaitan Khosla.

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