LABORATORIO DE BIOLOGA: PRCTICA 1

Instrumentacin para la investigacin en biologa, el microscopio compuesto

NATALIA RODRGUEZ CORTS 1035100 JULIN ARMANDO RODRGUEZ 1035549 PAULA ROMERO GONZLEZ 1035823 HARWIN FERNANDO RUIZ 1037422 SAMUEL ANDRS SAAVEDRA 1037720

ESTUDIANTES DE BIOLOGA

Santiago de Cali, septiembre 9 de 2010

RESUMEN

La naturaleza nos muestra gran cantidad de eventos que se presentan de diferentes tamaos, la mayora de ellos escapa a nuestra observacin porque su escala es demasiado grande o demasiado pequea. He aqu la importancia del microscopio, el cual ayuda a superar la barrera a la que nos enfrentamos con nuestros ojos permitiendo, por medio de lentes, aumentar el tamao de la imagen de un objeto que necesitemos apreciar. El presente informe busca explicar, mediante diferentes objetos, la diferenciacin de cada objetivo (lente de aumento), el campo de visin y la resolucin que estos nos permiten contemplar.

Introduccin Saber utilizar cada una de las partes del microscopio es de suma importancia para la correcta observacin de los objetos, por lo tanto cada parte debe estar en correctas condiciones y aseo empezando por los objetos, los objetivos y los oculares ya que estos son la parte fundamental del microscopio. A continuacin se presentaran ciertos procedimientos que ayudaran a conocer la forma correcta de utilizar el microscopio y la importancia de saber calcular dimetros mediante la utilizacin de cada uno de los aumentos de los objetivos, la verdadera direccin de la imagen que produce el microscopio y la correcta adecuacin de este para que la imagen sea ntida y los resultados de la observacin sean correctos.

Objetivos

Identificar y reconocer las partes del microscopio. Usar adecuadamente el microscopio. Adecuar el equipo para hacer observaciones. Aprender la tcnica de observar objetos en el microscopio. Diferenciar el aumento y la relacin que hay entre objetivos y oculares. Preparar placas para prcticas.

Marco Terico

Un microscopio es un instrumento que amplifica una imagen y permite una observacin ms detallada. El microscopio ms simple es una lente de aumento o un par de anteojos. El poder de resolucin del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos separados estos deben estar como mnimo a esa distancia. El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la informacin. La resolucin depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del espcimen, la calidad de la fijacin y la intensidad de la coloracin. La unidad de medida ms comnmente usada es el micrmetro (la milsima parte de un milmetro).
Las partes de un microscopio varan segn su clase, an as, ciertas partes son generales para todos. Estas son: Oculares: Estn colocados en la parte superior del tubo. Se denominan as, porque estn muy cercanos al ojo. Su funcin es la de captar y ampliar la imagen formada en los objetivos. En los modernos microscopios hay dos oculares (microscopios binoculares) que estn unidos mediante un mecanismo que permite ajustar la distancia interpupilar. En general los ms utilizados son

los de 10X (producen un aumento de 10 veces). Tubo: Es una cmara oscura unida al brazo mediante una cremallera. Tiene el revlver con los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior. Brazo: Es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al pie con el tubo. Pie o Base: Sirve como base del microscopio y tiene un peso suficiente para dar estabilidad al aparato. En los microscopios antiguos tena forma de herradura o de trpode pero en la actualidad suele ser una plataforma rectangular. En l se integra la fuente luminosa. Objetivos: Estn colocados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza metlica, denominada revolver, que permite cambiarlos fcilmente. Generan una imagen real, invertida y aumentada. Los ms frecuentes son los de 4, 10, 40, y 100 aumentos. Este ltimo se llama de inmersin ya que para su utilizacin se necesita utilizar aceite de cedro sobre la preparacin. En la superficie de cada objetivo se indican sus caractersticas principales, aumento, apertura numrica, y llevan dibujado un anillo coloreado que indica el nmero de aumentos (rojo 4X, amarillo 10X, azul 40X y blanco 100X). Hay dos tipos de objetivos: Los de observacin en seco y los de inmersin. En el primer caso, el aumento vara de 4x a 45x y alcanza con el ndice de refraccin del aire (de ah el nombre de en seco) para que la imagen se forme ntidamente, pero en el segundo caso, al incrementar el aumente (las lentes de inmersin tiene aumentos de 90x o 100x) es necesario aumentar el ndice de refraccin entre el preparado y la lente para lograr la imagen, para esto se utilizan aceites de cedro o sinttico y la lente se "sumerge" en ellos (de ah el nombre "de inmersin"). El poder resolutivo es la capacidad que tiene un microscopio (o el ojo humano, etc.) de percibir por separado dos puntos pequeos, adyacentes y cercanos. Vale decir, es la

capacidad para percibir detalles. El poder resolutivo aumenta a medida que disminuye la distancia que separa dichos puntos. Es decir, si dos puntos distan 1cm uno del otro y yo los veo como un solo punto borroso tendr menor poder resolutivo que alguien que los distingue por separado o que distingue perfectamente puntos que distan de 0,5cm entre s. Si definimos ahora lmite de resolucin como la distancia mnima que debe existir entre dos puntos para que sean distinguidos por separado, comprenderemos fcilmente la relacin inversa que se establece entre poder resolutivo y lmite de resolucin: cuanto menor sea la distancia que debe separar a dos puntos para que se distingan por separado, mayor ser el poder resolutivo necesario para observarlos. El poder resolutivo del microscopio no guarda relacin alguna con el aumento del mismo. Depende principalmente de la apertura numrica de la lente y de la longitud de onda de la luz utilizada. Fuente de iluminacin: Dependiendo del tipo de microscopio se puede tratar de: Una lmpara halgena de intensidad graduable. Est situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor y en su superficie externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan la visualizacin. El espejo: necesario si la fuente de iluminacin no est construida dentro del microscopio y ya alineada con el sistema ptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para natural (luz solar). Los modelos ms modernos no poseen espejos sino una lmpara que cumple la misma funcin que el espejo.

Tornillos: Son tornillos de enfoque, mueven la platina hacia arriba y hacia abajo. El macromtrico lo hace de forma rpida y el micromtrico de forma lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura. Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparacin, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminacin situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la preparacin de delante hacia atrs o de izquierda a derecha y viceversa. En la parte posterior de uno de los laterales se encuentra un nonius que permite fijar las coordenadas de cualquier campo ptico; de esta forma se puede acudir a l cuando interesa. A medida que la tecnologa avanza y las necesidades investigativas aumentan, se han ido modificando los microscopios, mejorando cada da la capacidad de aumento de la imagen hasta el punto que su primera versin en el ao 1600 es una idea obsoleta y rstica de los nuevos microscopios. stos pueden ser de varios tipos: Microscopio ptico:

Se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. Por lo general se usan del tipo compuesto, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Consisten en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las otras lentes se encuentran en un foco que queda al otro extremo del tubo, cerca del ojo. Cuando se mira a travs del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes. Los especmenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se observan con una luz que los atraviesa, suelen colocarse sobre un rectngulo fino de vidrio. El soporte tiene un orificio por el que pasa la luz, la cual puede ser de fuente o reflejo del espejo. Microscopios pticos especiales: Microscopio estereoscpico: No es un microscopio sino un par de baja potencia colocados de forma que convergen en el espcimen. Estos instrumentos producen una imagen tridimensional. Microscopio de luz ultravioleta: utiliza el rango ultravioleta del espectro luminoso en lugar del rango visible, bien para aumentar la resolucin con una longitud de onda menor o para mejorar el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la banda ultravioleta. Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda ms cortas de la luz ultravioleta, los elementos pticos de estos microscopios estn hechos con cuarzo, fluorita o sistemas de espejos aluminizados. Adems, dado que la radiacin ultravioleta es invisible, la imagen se muestra con fosforescencia, en fotografa o con un escner electrnico. Microscopio petrogrfico o de polarizacin: se utiliza para identificar y estimar cuantitativamente los componentes minerales de las rocas gneas y las rocas metamrficas. Microscopio en campo oscuro: utiliza una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El campo de visin del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz y slo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras del espcimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minsculos que se estn analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo.

Microscopio electrnico: Dado a que la amplificacin de un microscopio ptico se encuentra limitada por la longitud de onda de la luz visible. El microscopio electrnico utiliza electrones para iluminar un objetivo. Dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar estructuras mucho ms pequeas. La longitud de onda ms corta de la luz visible es de alrededor de 4.000 ngstroms (1 ngstrom es 0,0000000001 metros). La longitud de onda de los electrones que se utilizan en los microscopios electrnicos es de alrededor de 0,5 ngstroms.

Disponen de un can de electrones que emite los electrones que chocan contra el espcimen, creando una imagen aumentada. Se utilizan lentes magnticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios pticos no funcionan con los electrones. El sistema de vaco es una parte relevante del microscopio electrnico. Los electrones pueden ser desviados por las molculas del aire, de forma que tiene que hacerse un vaco casi total en el interior de un microscopio de estas caractersticas. Por ltimo, todos los microscopios electrnicos cuentan con un sistema que registra o muestra la imagen que producen los electrones. Microscopio electrnico de trasmisin: Dirige el haz de electrones hacia el objetivo que se desea aumentar, una parte de electrones rebota o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del espcimen. Es necesario cortar la muestra en capas finas. Microscopio electrnico de barrido: Crea una imagen ampliada de la superficie del objeto. No es necesario cortar el objeto en capas, explora la superficie de la imagen punto por punto, recorre la muestra con un haz de electrones muy concentrado.

Mantenimientos del microscopio: Debe estar protegido de polvo, humedad y otros agentes que pudieran daarlo. Mientras no est en uso debe mantenerse en su estuche o bien, cubrirlo con una bolsa plstica o campana de vidrio. Las partes mecnicas deben limpiarse con un pao suave, la limpieza de las partes pticas requiere papel limpia lente, no debe tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los dedos dado a que las huellas que dejemos dificultarn la visibilidad. El aceite de inmersin debe limpiarse inmediatamente finalizada la observacin, para ello puede utilizar el papel limpia lente impregnado con una gota de xilol. Para guardarlo es mejor dejar el objetivo de menor aumento ya que este es de menor tamao y as se evitar que haya algn enredo y accidente. El condensador debe estar en su posicin ms baja para evitar que tropiece con alguno de los objetivos.

Metodologa

1. Preliminares: Recibimos los materiales dados por el laboratorio, agarramos el microscopio con el cuidado debido, tomndolo como es indicado en la gua: sostener con una mano el Brazo y con la otra por debajo de la Base. Con ayuda de la informacin de la gua distinguimos las partes que conforman el microscopio. Organizamos el microscopio de tal forma que logrramos ver el campo visual iluminado de forma homognea, para esto graduamos la intensidad de la luz, colocamos el objetivo en menor aumento (4X) y ajustamos el diafragma. Revisamos si el ocular o el objetivo estaban empolvados, de ser as procedimos a limpiarlos con el Papel de Lente. Procedimos a limpiar las laminillas Cubre-objetos y Porta-objetos con agua, secndolos con papel absorbente para colocar nuestros objetos en ellos. Nuestro primer objeto fue un cuadro de papel peridico de 7 mm de lado que contena una letra e, para poner esta letra en el microscopio primero pusimos una gota de agua sobre el papel y esperamos a que sta lo remojara por completo, luego colocamos el cubre-objetos y montamos en el microscopio para la observacin para esto, primero, movimos la platina en todas sus direcciones y analizamos de qu forma se desplazaba la imagen. La observacin se comenz con el objetivo de menor aumento (4X). Enfocamos la letra e con la ayuda de los tornillos Macro y Micromtricos. Describimos la posicin de la imagen y movimos la platina en todas las direcciones, luego giramos el revlver y observamos nuestro objeto con un diferente objetivo (40X). 2. Calculo de dimetro del campo de observacin. 2.1 Punto 1: Para medir el dimetro emprico del campo correspondiente a cada objetivo (Trabajamos con objetivos 4X, 10X, 40X y 100X) colocamos un trozo de papel milimetrado sobre la platina de tal manera que la cantidad de milmetros que pudiramos observar al enfocar fuera su dimetro, luego convertimos de milmetros a micras. 2.2 Punto 2: Con los datos obtenidos en el punto anterior determinamos el dimetro del campo de cada objetivo, para esto se hace lo siguiente:

Nota: La ecuacin anterior es dada para hallar el dimetro del campo de los objetivos diferentes a 4X ya que, por su aumento se nos dificulta encontrarlo empricamente.

3. Calculo de la dimensin de la letra e: Para este paso se coloc el porta-objetos en el cul ya habamos montado el objeto (letra de peridico e). Se observ la letra con el objetivo 4X y se dio un dato aproximado a su dimetro teniendo en cuenta dos valores: Cunto ocupaba del campo y de qu tamao es este (obtenido en los pasos anteriores). Por ltimo se hizo la conversin de milmetros a micras teniendo en cuenta el siguiente mtodo de conversin:

1 milmetro = 1000 micras 4. Calculo de Poder de Resolucin en una revista: 4.1 : Montamos un pedazo de revista en el microscopio y pasamos por los objetivos contando los puntos de colores observados en la muestra cuando nuestro aumento era de 10X. 4.2 : Medimos la distancia de los puntos haciendo la relacin de cuntos puntos haba en nuestra muestra y cunto meda el dimetro del Campo.

Resultados

1. Preliminares: Al revisar el estado del ocular y el objetivo, con el fin de limpiarlos nos encontramos con que stos ya se encontraban limpios as que no hubo necesidad de hacerles nada para comenzar nuestra prctica. Al colocar la letra e en el microscopio observamos que sta se encuentra al revs, como es mostrado en la Figura 1.

Figura 1 Transicin de imagen: posicin de objeto a imagen observada

La platina consta de dos tornillos, estos le dan una movilidad vertical y otra horizontal. Cuando giramos el tornillo de movilidad vertical hacia adelante (sentido contrario donde nos encontramos nosotros) el porta objetos es dirigi tambin hacia delante y nuestro campo visual se mueve hacia arriba de la imagen que estamos viendo, como es mostrado en la Figura 2.

Si el tornillo vertical es girado hacia delante, el campo visual se dirigir hacia arriba de la imagen observada.
Figura2

Cuando giramos el tornillo de movilidad horizontal hacia delante nuestro porta-objeto e imagen se movieron hacia la derecha, cuando lo giramos hacia atrs (en direccin hacia nosotros) se movieron hacia la izquierda, como es mostrado en la Figura 3.

Si el tornillo de desplazamiento horizontal se mueve hacia delante, el campo visual se dirigir hacia la derecha.

Figura 3

Cuando se gir el revlver y cambiamos el objetivo a 40X nuestra imagen se distorsion un poco, fue necesario enfocar de nuevo con el tornillo micromtrico. Fue posible notar que el campo de observacin disminuy, es decir, ya que el aumento es mayor, es menor la porcin de letra que podemos ver. Observe la diferencia entre Figura 4 y Figura 5.

Figura 4. Simulacin de aumento 4X

Figura 5. Simulacin de aumento 40X

Cuando cambiamos de objetivo la iluminacin fue menos brillante comparada con el objetivo de menor aumento. 2. Calculo de dimetro del campo de observacin. 2.1 Punto 1 No fue posible encontrar todos los dimetros por este mtodo ya que, como se ha dicho anteriormente, el aumento dificulta la visibilidad de los milmetros en el papel. En la

siguiente tabla (Tabla 1) se presenta los resultados obtenidos empricamente de aquellos objetivos con los que se puedo realizar el proceso.

Objetivos
4X 10X 40X

Dimetros en milmetros
4,3 1,4 0,7

Dimetros en Micras
4300 1400 700
Tabla 1. Dimetro de objetivos emprico.

2.2. Punto 2. La mayora de resultados que se obtuvieron al medir el dimetro con el papel milimetrado son poco precisos, exceptuando aquellos dados por el objetivo de 4X. Para hallar el resto de dimetros se utiliz la siguiente frmula, que relaciona los resultados del objetivo de 4X con el respectivo aumento de cada objetivo.

Objetivo 4X:

= 4,3 x 103 m
Objetivo 10X:

= 1,72 x 103 m

Objetivo 40X:

= 4,3 x 102 m
Objetivo 100X:

= 1,72 x 102 m

Tabla 2: El ejercicio del laboratorio. Dimetro Emprico Mm 10X 10X 10X 10X 4X 10X 40X 100X 40 100 400 1000 4,3 1,4 0,7 -m 4,3 x 103 1,4 x 103 0,7 x 103 -Diametro Calculado mm 4,3 1,72 4,3 1,72 m 4,3 x 103 1,72 x 103 4,3 x 102 1,72 x 102 4/4 = 1 10/4 = 2,5 40/4 = 10 100/4 = 25

Ocular

Objetivo

Aumento

Relacin

Tabla 2 Datos de ejercicio

3. Calculo de la dimencin de la letra e: Al observar la letra e con el objetivo 4X observamos que ocupa la mitad del campo visual, como es mostrado en la siguiente ilustracin, Figura 6:
Figura 6

Si sabemos que el dimetro de campo con el objetivo 4X es 4,3 mm y que la letra e ocupa la mitad de su dimetro, entonces: Ancho de la letra e Altura de la letra e

= 2,15 x 103 m

4,3 mm = 4,3 x 103 m

4. Calculo de Poder de Resolucin en una revista: 4.1. Se observan puntos o manchas de varios colores (Amarillo, azul, blanco, rojo y negro), estos se encuentran en diferentes proporciones, vistas en la Tabla 3. Color Cantidad de Puntos

Amarillo 57 Azul Blanco Rojo Negro 53 23 60 53

Tabla 3 Cantidad de puntos por color.

4.2. Los puntos no se encuentran bien definidos, se aprecia una especie de cuadrcula donde el color ms definido es el fucsia y el resto se disuelven o combinan con l. Dado a que con el objetivo de 10X se obtiene un dimetro de 1,72 mm = L y en l es posible apreciar una cuadrcula de puntos (se toman los rojos porque se encuentran mejor definidos), el dimetro en puntos es de 10 puntos = n. As que la distancia entre los puntos es de:

Discusin 1. Preliminares: El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice que la imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la imagen. La imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que acta sencillamente como una lupa. El ocular est situado de modo que no forma una segunda imagen real, sino que hace divergir los rayos luminosos, que al entrar en el ojo del observador parecen proceder de una gran imagen invertida situada ms all del objetivo. Como los rayos luminosos no pasan realmente por ese lugar, se dice que la imagen es virtual.

2. Calculo de dimetro del campo de observacin. La hoja milimetrada no fue de mucha utilidad ya que al cambiar a los objetivos de mayor aumento, el campo de visin fue menor y era difcil calcular la medida. Por lo tanto la formula fue ms til y exacta para calcular el dimetro.

3. Calculo de la dimencin de la letra e: En el clculo de la dimensin de la letra e el resultado fue aproximado ya que fue en base a lo observado con el papel milimetrado y dependiendo de la ubicacin el tamao de la letra puede variar levemente.

4. Calculo de Poder de Resolucin en una revista: El papel de revista est formado por imgenes en formato RGB La descripcin RGB (del ingls Red, Green, Blue; "rojo, verde, azul") de un color hace referencia a la composicin del color en trminos de la intensidad de los colores primarios con que se forma: el rojo, el verde y el azul. Es un modelo de color basado en la sntesis aditiva, con el que es posible representar un color mediante la mezcla por adicin de los tres colores luz primarios. El modelo de color RGB no define por s mismo lo que significa exactamente rojo, verde o azul, por lo que los mismos valores RGB pueden mostrar colores notablemente diferentes en diferentes dispositivos que usen este modelo de color. Aunque utilicen un mismo modelo de color, sus espacios de color pueden variar considerablemente.

Conclusiones Cada una de las partes de un microscopio cumple una funcin importante por lo tanto saber identificar e utilizar cada una de ellas ayud a que la observacin fuera mas precisa y sencilla. El microscopio requiere una preparacin previa a la observacin ya que los oculares deben estar bien enfocados y los objetivos deben estar limpios. Adems cada pieza debe estar correctamente ajustada El aumento es inversamente proporcional al campo de visin, es decir, a mayor aumento menor campo de visin. Cuando el aumento es mayor es necesario aumentar la luminosidad. Las placas u objetos deben estar libres de suciedad y los cortes que se observan deben ser delgados para que la luz pueda atravesarlos ms fcilmente y la imagen sea ms ntida.

Bibliografa
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