MICROBIOLOGA Practica #5 AISLAMIENTO Y CONTEO DE BACTERIAS MESOFLICAS AEROBIAS Alumno: Alberto Aguirre Ponce BT Mariana Delgado Domnguez BQC

Profesor: Dante Israel Len de la O Fecha de entrega: 19/03/13 Calificacin:_________________

OBJETIVOS General Determinar bacterias mesoflicas en alimentos, muestras ambientales y productos terminados aplicando el procedimiento de diluciones y dispersin. Particular Aplicar diluciones y dispersin con varilla acodada, perlas de vidrio estril y estra cruzada en la determinacin de bacterias mesoflicas aerobias INTRODUCCIN Los microorganismos estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, por lo que siempre se encuentran presentes en diversos productos, especialmente en aquellos que favorecen de algn modo su sobrevivencia o desarrollo. (J. Tortera, R. Funke, & L. Case, 2007). Los alimentos por su produccin primaria, generalmente tienen una importante microbiota normal, segn la regin y condiciones en que se producen; adems, su composicin tiende a conservar dicha flora y, por supuesto, le proporciona nutrientes de manera que, si las condiciones lo permiten, los microorganismos pueden multiplicarse en los alimentos. Como consecuencia de este desarrollo microbiano, los alimentos pueden deteriorarse y perder sus atributos. (J. Tortera, R. Funke, & L. Case, 2007). El recuento de mesfilos aerobios se estima la micro flora total sin especificar tipos de microorganismos. (J. Tortera, R. Funke, & L. Case, 2007). Refleja la calidad sanitaria de un alimento, las condiciones de manipulacin, las condiciones higinicas de la materia prima. (Gmez Martnez & al., 2002). Un recuento bajo de aerobios mesfilos no implica o no asegura la ausencia de patgenos o sus toxinas, de la misma manera un recuento elevado no significa presencia de flora patgena. Ahora bien, salvo en alimentos obtenidos por fermentacin, no son recomendables recuentos elevados. (Gmez Martnez & al., 2002).

Un recuento elevado puede significar:

Excesiva contaminacin de la materia prima Deficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin La posibilidad de que existan patgenos, pues estos son mesfilos inmediata alteracin del producto

La

El recuento de mesfilos nos indica las condiciones de salubridad de algunos alimentos. (Gmez Martnez & al., 2002). MATERIAL Y MTODO Aislamiento de bacterias mesoflicas aerobias (BMA) Por la tcnica de dispersin con varilla de vidrio estril Se etiquet el matraz Erlenmeyer y los tubos con los nmeros del 1 al 6, en condiciones aspticas, se pesaron 10 g del suelo de jardn y se coloc dentro del matraz Erlenmeyer, se agit durante 10 segundos cuidando de no mojar el tapn de algodn. Con una pipeta estril se tom una alcuota de 1 ml y se transfiri este volumen al tubo de ensaye marcado con el nmero 2, despus se agit suavemente el tubo durante cinco segundos, cuidando de no mojar el tapn de algodn. Con la misma pipeta se tom una alcuota de 1 ml del tubo 2 y se transfiri al tubo marcado con el nmero 3, se repitieron estos los pasos con los cinco tubos etiquetados restantes, despus se etiquet dos cajas con agar TSA con el nmero 4, dos con el 5 y dos con el 6. Con la segunda pipeta estril, se tom 0.2 ml del tubo marcado con el nmero 6 y colocar 0.1 ml en una caja Petri etiquetada con el mismo nmero. Repetir estos pasos con la otra caja restante. Se sumergi la varilla acodada en el etanol que estaba contenido en la caja Petri de vidrio, se pas por la flama del mechero y se esper a que se apagara y enfriara, despus se dispers la alcuota colocada en cada una de las cajas con agar nutritivo. Se repitieron estos pasos con los tubos 5 y 4, en ese orden, despus se invirtieron las cajas y se incubaron a 37C hasta la siguiente sesin. Aislamiento de bacterias mesoflicas aerobias (BMA) Por la tcnica de dispersin con perlas de vidrio estriles En condiciones aspticas, se tom una alcuota de 0.1 ml del tubo de dilucin marcado con el nmero 4, se coloc la alcuota sobre la superficie de una caja de Petri con agar TSA estril etiquetada con el nmero 4, despus con movimientos de izquierda a derecha y de adelante hacia atrs, se distribuy la alcuota sobre la superficie de la caja durante 30 segundos, donde se evitaron los movimientos circulares. Se tap la caja y se incub a 37 C durante 48 horas, esto se repiti con dos cajas de Petri con agar TSA, donde se utilizaron los tubos de dilucin 5 y 6. Aislamiento de bacterias mesoflicas aerobias (BMA) Por la tcnica de estra cruzada

Se esteriliz el asa bacteriolgica en la flama del mechero y se dej enfriar. En condiciones aspticas se introdujo en el matraz Erlenmeyer y se sumergi en el lquido para as tomar una pequea alcuota. En una caja Petri con agar TSA se coloc la alcuota en uno de los bordes y se desliz suavemente sobre la superficie con movimientos rectos (Figura 1-a). A estos movimientos se les conoce como estras. Se esteriliz el asa en la flama del mechero y se dej enfriar sobre la superficie del agar, despus donde finaliz la primera serie de estras, se coloc el asa sobre la superficie del agar y se desliz para obtener una segunda serie de estras (Figura 1-b), se repitieron estos pasos (Figura 1-c), se esteriliz el asa y con una estra abierta terminando as el aislamiento ( Figura 1-d). De la misma manera descrita, se prepararon tres cajas de Petri con agar TSA por alumno, donde se Incubaron a 37 C hasta la siguiente sesin de laboratorio.

Figura 1. Tcnica de estra para aislar bacterias mesoflicas aerobias RESULTADOS Se encontraron en los resultados de la tcnica de estra cruzada en cada caja por 10 gramos de tierra y/o pulque: # de Caja Colonias contadas Colonias presentes antes de las diluciones 1 42 42 x 107 2 25 25 x 107 3 67 67 x 107 *NOTA: Los resultados se desprecian en la tcnica de la estra cruzada por lo que slo se usaron los datos por la tcnica de la varilla acodada (se presentan los datos para ver si hay similitud o no de las tcnicas).

Se encontraron en los resultados de la tcnica de la varilla acodada en cada caja por 10 gramos de tierra y/o pulque: # de Caja Colonias contadas Colonias presentes antes de las diluciones 1 17 17 x 107 2 1 1 x 107 3 Incontables Incontables Promedio de colonias presentes por cada 10 gramos de tierra y/o pulque:

Figura 2. Imagen donde se muestra una caja de Petri con bacterias mesoflicas aerobias en una cmara de conteo de colonias. ANLISIS DE RESULTADOS Los resultados fueron variados porque se realizaron por personas diferentes y no siempre son tan lgicos los resultados para hacer el conteo, se sac un promedio y se eliminaron los incontables. En los resultados se aprecian la obtencin de colonias hechas por la tcnica de la varilla acodada, donde se obtuvieron valores confiables en donde se aprecia que por cada 10 gramos de tierra diluida en una solucin de 10 -6 en 3 cajas de petri, se obtiene un promedio de colonias obtenidas de 9x10 7, sin embargo, se obtuvo en una caja de Petri un resultado no fiable ya que estaban las colonias amontonadas y por ese resultado no se poda obtener un nmero de colonias de bacterias obtenidas, este resultado en la caja de Petri se despreci y solo se obtuvo un promedio de colonias obtenidas con las 2 cajas de Petri restantes. Tambin se vio que en la estra cruzada no sirve para cuantificar solo para el aislamiento por eso no se agreg en resultados. Para que el nmero de colonias sea representativo de la muestra debe encontrarse entre 30 y 300. Si es menor de 30 el error debido a la posible contaminacin por microorganismos ajenos aumenta, y es muy complicado distinguir entre estos y los presentes en la muestra. Si el nmero de colonias es mayor a 300 no se distingue con claridad el nmero exacto, ya que se encuentran muy prximas entre s.

DISCUSIN
Segn las normas oficiales mexicanas de alimentos obligan que los resultados obtenidos en los alimentos deben de ser menores a 100 UFC/mL para que pueda ser aceptadas por las normas mexicanas oficiales que se deben de tener en aguas o alimentos, que en este caso de la prctica, se hizo con pulque y con tierra lo que significa que hubo un buen resultado por el nmero de colonias obtenidas, aunque cabe destacar que no todas fueron con muestra de pulque, sino que tambin se us tierra lo que significa que varan los resultados y por esto dicho se pudo haber visto el resultado de una caja de petri que se obtuvo un resultado con unas colonias incontables, esto se pudo haber debido al uso incorrecto de la tcnica de la varilla acodada, porque la tierra tena mucha carga microbiana o que el pulque haya tenido varios das que pudo ocasionar su descomposicin (Calzada, 2007).

CUESTIONARIO 1. Qu es una bacteria mesoflica aerobia? Las bacterias mesfilas aerobias son microorganismos que presentan unas caractersticas trmicas intermedias, que junto con los hongos filamentosos y levaduras, constituyen la flora total de aerobios mesfilos. 2. En qu unidades se expresan las bacterias mesoflicas aerobias de muestras slidas? Estas colonias se presentan como puntos y su cuenta es el nmero de colonias en un mililitro de muestra. 3. Existieron diferencias en el nmero de UFC/g determinadas por las tcnicas de dispersin con varilla de vidrio y perlas estriles? Explicar las causas que provocan estos resultados Si hay diferencias ya que la varilla de vidrio es una tcnica ms utilizada y prctica que logra que toda la alcuota puedan obtener todos los nutrientes del agar, mientras que la tcnicas de perlas es una tcnica ms complicada que requiere de material adicional y no da resultados no tan confiables por lo que esta tcnica ya no es muy usada en la actualidad y no fue utilizada en la prctica. 4. Por qu es importante conocer la dilucin y alcuota en una determinacin de bacterias mesoflicas aerobias? Para conocer el nmero de colonias que haban en un principio antes de hacer diluciones segn la frmula: UFC/ml = (1/dilucin) x (1/alcuota) x nmero de colonias 5. En caso de que una caja de Petri con medio slido presente ms de 300 colonias de BMA, cmo se expresa en resultado del nmero de bacterias presentes? Esta se presenta como nmero de colonias incontables, ya que es un valor muy alto y es poco probable conocer el nmero de colonias presentes en un principio antes de las diluciones.

CONCLUSIN
Las bacterias obtenidas en el medio de cultivo fueron el promedio de un valor estimado para conocer cuantas colonias de bacterias se obtenan por cada 10 gramos de tierra, as mismo se hacen diluciones para que sea mucho ms fcil contar las colonias que se obtuvieron de las diluciones para obtener as un nmero de colonias originales antes de las diluciones.

Bibliografa Calzada, M. J. (2007). En Estudio Microbiolgico del agua purificada que se expende en los establecimientos (llenadoras) de la ciudad de Puebla (pg. 50). Puebla, Mxico: Fac. CQ-BUAP. Gmez Martnez, D., & al., e. (2002). Deteccin de microorganismos patgenos en aguas de consumo y recreo. En Auxiliares Sanitarios de la Comunidad de las Illes Balears (pg. 546). Sevilla, Espaa: Mad, S.L. J. Tortera, G., R. Funke, B., & L. Case, C. (2007). Caratersticas de los Hongos. En Introduccin a la Microbiologa (pg. 346). Buenos Aires, Argentina: Mdica Panamericana, S.A.