Degradacin biolgica de colorantes usando hongos de podredumbre blanca Maria Isabel Gaviria Arroyave, Universidad de Antioquia, Junio 2012

Degradacin biolgica de colorantes usando hongos de podredumbre blanca

Maria Isabel Gaviria Arroyave Ingeniera Biolgica, Estudiante MsC en Ingeniera. Universidad de Antioquia, Junio de 2012

Contenidos
1. Introduccin ..................................................................................................................... 2 1.1 Hongos de podredumbre blanca ......................................................................................... 4 1.2 Generalidades de los sistemas enzimticos ................................................................... 5 2. Tratamientos ..................................................................................................................... 6 2.1 Tratamientos fisicoqumicos ............................................................................................... 6 2.2 Degradacin bacteriana y fngica ................................................................................... 7 3. Sistema enzimticos ........................................................................................................ 10 3.1 Sistema ligninoltico extracelular ..................................................................................... 10 3.2 Sistema intracelular Citocromo p450............................................................................ 11 4. Biosorcin ....................................................................................................................... 12 5. Ensayos en bioreactor...................................................................................................... 13 6. Tendencias y conclusiones ............................................................................................... 15

Lista de tablas y figuras

Tabla 1. Colorantes comerciales comunes .............................................................................. 2 Tabla 2. Hongos de PB ms usados en degradacin de colorantes industriales ......................... 3 Figura 1. Ciclo cataltico enzima LiP......................................................................................... 5 Tabla 3. Principales enzimas ligninolticas ............................................................................... 6 Tabla 4. Ventajas y desventajas de procesos fisicoqumicos..................................................... 7 Tabla 5. Porcentajes de decoloracin obtenidos con diferentes cepas ..................................... 9 Tabla 6. Efecto de varios pretratamientos fsicos y qumicos en la capacidad adsorbente fngica................................................................................................................................. 13 Tabla 7. Soportes inorgnicos comnmente usados en inmovilizacin fngica ....................... 14 Tabla 8. Diferentes sistemas reactor usados en decoloracin fngica .................................... 15

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PALABRAS CLAVE Hongos de podredumbre blanca. Decoloracin. Enzimas Inmovilizacin. Colorantes sintticos. Biosorcin. Biodegradacin. Bioreactor.

RESUMEN La industria textil es la principal consumidora de colorantes sintticos en el mundo. Los efluentes coloreados pueden llegar a ser txicos y cancergenos; para la degradacin de los mismos se estudia desde hace tiempo el uso de los denominados hongos de pudricin blanca que por sus propiedades ligninolticas y enzimas no especificas, pueden descomponer compuestos de estructuras moleculares complejas. Se presenta una revisin de estudios recientes en el tema, tratando desde la accin enzimtica intra y extracelular hasta los sistema tipo bioreactor usados para el escalado del proceso y comparando los procesos biotecnolgicos con los fisicoqumicos para concluir en las tendencias y retos futuros para la implementacin de esta tecnologa. clasificacin es bastante relevante dado que influye directamente en la eleccin del tratamiento a aplicar; en la Tabla 1 se resaltan colorantes de uso comn tipo diazo, antraquinona, indigoide, ftalocianinas, entre otros (Kusvuran, et al. 2007). Estudios realizados a las aguas residuales de la industria textil, principal consumidor de colorantes, muestran que estos efluentes poseen adems otras caractersticas indeseadas como variabilidad del caudal, bajo contenido de materias coloidales, carga orgnica elevada, deficiencia en nutrientes como oxgeno y nitrgeno (Garzon, 2009). El impacto ambiental de los colorantes radica en su persistencia, lo cual hace que las plantas de tratamiento convencionales no puedan removerlos eficientemente (Alatorre y Moeller, 2006); estos efluentes coloreados interfieren en el paso de la luz a travs de los cuerpos de agua y por tanto afectan la actividad fotosinttica de los organismos presentes en dichos ecosistemas, disminuyendo el oxgeno disuelto en el agua (Amoozegar et al,2011; Zille, 2005.). En la salud humana, los colorantes impactan negativamente al ser metabolizados por el hgado y los microorganismos presentes en los

1. INTRODUCCIN

Actividades econmicas como la industria textil, litogrfica, cosmtica, farmacetica entre otras generan efluentes que contienen compuestos txicos y peligrosos, particularmente usan colorantes en muchos de sus procesos, los cuales terminan en las aguas residuales como desechos;para el ao 2007 el consumo nacional de colorantes, solo para la industria textil, era de casi 5000 toneladas al ao, de las cuales solo el 13% fue de origen extranjero y resaltando al departamento de Antioquia como productor de ms de 400 toneladas dado la relevancia del cluster textil y de confeccin en dicho departamento (DANE, 2007). Los colorantes poseen una compleja estructura molecular lo cual hace que pueden ser mutagnicos y txicos (Benigni et al. 2000), adems si se descargan directamente al ambiente persisten en l acumulndose a travs de la cadena alimenticia. Normalmente los colorantes poseen dos grupos: cromforos y auxcromos, los cuales se combinan en estructuras (casi siempre aromticas) modificando sus caractersticas generales (Toor et al, 2006). Los colorantes suelen clasificarse segn el tipo de teido y estructura qumica, esta ltima

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intestinos, especialmente en la degradacin reductiva del enlace diazo que puede generar aminas aromticas cancergenas (Alvez de Lima et al, 2006). pueden ser competitivos en costos y ambientalmente amigables (Pant, et al, 2007).

Tabla 1. Colorantes comerciales comunes, modificado de Kusvurn et al, 2005.

Para la degradacin de los colorantes se han propuesto y usado varias estrategias centradas en tratamientos fsicos y qumicos entre los cuales se encuentran la adsorcin, neutralizacin, degradacin qumica, ozonacin, filtracin por membranas, etc. A pesar de que estas tcnicas generan efluentes de buena calidad, en muchos casos pueden dar lugar a compuestos intermediarios ms txicos y su costo es elevado (Christie, 2007). Como alternativa a los tratamientos convencionales, los tratamientos biolgicos han sido reconocidos como mtodos efectivos para el tratamiento y degradacin de colorantes en aguas residuales industriales altamente contaminadas; adems de ser efectivos,

Actualmente son utilizados sistemas de tratamiento areobios y anaerobios con hongos y bacterias, buscando la decoloracin y mineralizacin de los colorantes presentes. Se ha encontrado que algunos de los microorganismos ms eficientes son los hongos de pudricin blanca que por sus propiedades ligninolticas y enzimas no especficas, pueden descomponer compuestos de estructuras moleculares complejas, logrando la particin de las estructuras en otras ms simples, fcilmente degradas en sistemas PTAR convencionales y en algunas ocasiones se han reportado mineralizaciones completas a Dixido de carbono y Agua (Davila, et al, 2006; Senthilkumar et al, 2011).

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Tabla 2. Hongos de PB ms usados en degradacin de colorantes industriales, modificado de Prachi et al, 2008

1.1 HONGOS DE PODREDUMBRE BLANCA Los hongos de la podredumbre blanca (PB) son basidiomicetos, comunes en bosques de pino y encino (Christian et al.,2005), la nominacin de hongos de la PB, deriva de su capacidad de mineralizacin de la lignina y sus derivados que le da a la madera un aspecto blanquecino (Pointing, 2001). Estos organismos han sido usados en tratamientos de degradacin de colorantes probablemente por la resistencia del micelio fngico a variaciones de pH, temperatura, nutrientes y aireacin. La clave de la accin de estos organismos sobre diversos contaminantes se basa en la

actividad de enzimas extracelulares que dependen de la generacin de radicales libres para asegurar la accin oxidativa sobre distintos sustratos. Algunos de los gneros comnmente usados en biotecnologa ambiental son: Phanaerochaete chrysosporium, Trametes versicolor, Bjerkandera sp, Pleurotus ostreatus, Hirschioporus larincinus, Ionotus hispidus, Phlebia tremellosa, Coliorus versicolor, Aspergillus sp entre otros. La Tabla 2 resume los hongos ms usados para degradacin de colorantes industriales. 1.2 SISTEMA ENZIMATICO HONGOS PB La biodegradacin se define como el mtodo biolgico para degradacin de sustancias; si la biodegradacin es

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completa se denomina mineralizacin y se obtienen como productos CO2 y agua (Kaushik & Malik, 2009). La degradacin biolgica de compuestos tipo colorantes puede darse por dos vas: aerbica o anaerbica. La degradacin anaerbica es llevada a cabo por bacterias que usan compuestos tipo quinonas, NADH, H2S o Fe2+ como intermediarios redox para la reduccin inespecfica de los enlaces en la molcula; estos compuestos redox son sintetizados por dichos organismos como resultado de sus procesos metablicos (Forgacs, Cserhti, & Oros, 2004). La degradacin anaerbica tiene el riesgo de producir compuestos intermediarios cancergenos (aminas). Los hongos de podredumbre blanca al ser organismos aerobios, llevan a cabo la degradacin en presencia de oxgeno; en cuanto a la degradacin aerbica, existen diversas enzimas extracelulares capaces de realizar la ruptura oxidativa de anillos aromticos en presencia de perxido de hidrgeno; dos de las ms estudiadas se denominan Manganeso y Lignina peroxidasa (MnP y LiP) (Garzn, 2009). Se sabe que estas enzimas son extracelulares y adems para su accin requieren tambin compuestos de bajo peso molecular que actan como cofactores, entre estos se encuentra el oxalato, manganeso, el alcohol veratrlico y dimetoxibenceno (Davila y Vasquez, 2006). Por otro lado, las enzimas mencionadas dependen de la generacin de radicales libres para asegurar la accin oxidativa sobre distintos sustratos; a pesar de que son usadas normalmente para degradar la lignina, la no especificidad de las mismas permite que puedan actuar tambin sobre distintos tipos de colorantes y compuestos xenobiticos como pesticidas, plaguicidas y PCBs en general mediante su accin oxidativa. La accin cataltica de las peroxidasas se divide en tres etapas: primero la unin del H2O2 con el sitio activo de la enzima para generar H2O, dos electrones y el compuesto intermediario I; luego el compuesto I es reducido por el sustrato donador para formar el compuesto intermediario II y un radical sustrato; al final se vuelve al estado nativo de la enzima mediante una nueva reduccin del compuesto II con otra molcula de sustrato. La principal caracterstica de las peroxidasas fngicas (especialmente la LiP) es la inespecificidad de los sustratos donadores, lo que ofrece una amplia gama de aplicaciones sobre compuestos de alto peso molecular (Osorio, 2010). Es relevante anotar que la accin de la MnP es ms especfica y depende de la presencia de Mn2+. En la figura 1 se muestra el ciclo cataltico tpico de la LiP. Por otro lado las enzimas tipo lacasas que tambin son producidas por algunos hongos PB, actan sobre compuestos intermediarios en la degradacin de la lignina o similares (fenoles, aminas aromticas o alifticas) los cuales a su vez pueden actuar como mediadores redox de bajo peso molecular; estos mediadores tienen un papel preponderante en procesos de importancia industrial como la degradacin de colorantes, blanqueo de pulpa de papel, etc (Osorio, 2010; Garzn 2009).Una ltima enzima identificada en algunos gneros como Pleurotus y Bjerkandera es la verstil peroxidasa (VP) que combina los ciclos catalticos de la LiP y MnP y posee alta afinidad hacia Mn2+, colorantes e hidroquinonas (Garzn, 2009). La tabla 3 resume las enzimas ligninolticas conocidas y sus principales reacciones.

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Figura 1. Ciclo cataltico enzima LiP, (Fernandez et al, 2007).

El propsito del presente trabajo es realizar una revisin sistemtica que le permita inferir al lector las principales ventajas y desventajas del tratamiento fngico de colorantes, ubicndolo tambin en el contexto actual de otro tipo de tratamientos y explorando algunas configuraciones de bioreactores usadas en el trabajo con hongos ligninolticos. 2. TRATAMIENTOS 2.1 TRATAMIENTOS FISICOQUMICOS. En varios estudios se ha demostrado la habilidad de ciertos adsorbentes para eliminar compuestos tipo colorantes de aguas residuales; la eficiencia de remocin depende fuertemente del tipo de adsorbente. Ensayos con carbn activado en aguas residuales conteniendo rojo bsico 22 y azul cido 25 muestran una remocin del 90% (Forgacs et al., 2004). Adems el carbn activado granular ha mostrado fuerte afinidad por colorantes cidos (Walker y Wheterlier, 1997). Adems de adsorbentes basados en carbn, se ha probado la eficacia de materiales como la slica en la remocin de colorantes como el azul bsico 3 y la rodamina B (Saleem et al, 1993).

Otro material probado es un tipo de xido de aluminio (Al2O3), el cual adsorbe el rojo congo en un tiempo de equilibrio de 90 minutos (Forgacs et al., 2004). Extractos de vermiculita se han usado como coagulantes y adsorbentes mostrando mejores resultados que las sales de aluminio usadas tradicionalmente (Choi y cho, 1996). Debido a que los colorantes textiles son creados para resistir condiciones de alta exposicin solar, mtodos qumicos para eliminarlos deben contemplar procesos de oxidacin fuertes. El mtodo de fotocatlisis con perxido de hidrgeno en presencia de Sulfato ferroso puede decolorar amplia gama de compuestos hasta en un 90% (Kiwi et al, 1993). Se ha evaluado tambin la capacidad decolorante de los radicales generados a partir de H2O2 en presencia de TiO2 sobre colorantes tipo antraquinonas y sulfonados obteniendo buenas eficiencias (Ge Y et al, 2004). A pesar de las buenas eficiencias que se obtienen con la fotocatlisis en presencia de H2O2, se ha demostrado que las condiciones del proceso varan bastante para cada colorante, por lo que desarrollar un mtodo de oxidacin para un agua residual textil real es difcil (Al degs et al, 2007);

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entendidos; por lo general la degradacin bacteriana se d en condiciones anaerbicas mientras que la fngica en
Tabla 3. Principales enzimas ligninolticas, modificado de Hattaka, 2001.

a modo general el proceso es efectivo en colorantes cidos, directos y bsicos pero inadecuado para los dispersos. Una tcnica avanzada de oxidacin es la Ozonacin, la cual ha sido efectiva en diversos tipos de colorantes dando como resultado oxalato, formato y sulfonato de benzeno (Forgacs et al., 2004). En los procesos de ozonacin se ven mejores resultados al aumentar el pH y la temperatura, aunque la radiacin UV no tiene ninguna influencia. La tabla 4 resume las principales ventajas y desventajas de los procesos fisicoqumicos. Principalmente se encuentra la generacin de intermediarios txicos o lo costoso del proceso, por lo cual los mtodos biolgicos de degradacin se han vuelo atractivos. 2.2 DEGRADACIN FNGICA. BACTERIANA Y

presencia de oxgeno. Experimentos llevados a cabo usando cultivos anaerbicos sobre colorantes amarillo cido 17, azul bsico 3 y rojobsico 2 mostraron eficiencias del 20%, 72% y 78% respectivamente (Forgacs et al., 2004). En sistemas bacterianos se observa tambin el fenmeno de adsorcin del colorante en el biofilm. A pesar de obtener eficiencias aceptables en la decoloracin de ciertos colorantes mediante procesos anaerbicos, algunos intermediarios producidos especialmente al degradar colorantes azo son altamente txicos y pueden llegar a ser carcinognicos (Chun y Cerniglia, 1992; Van der Zee, 2005;Novotn et al., 2011). Otro de los problemas encontrados al trabajar con sistemas anaerbicos es la posible reaparicin del color cuando el efluente entre en contacto con oxgeno y se inhiban las bacterias metanognicas (Lee et al, 2006).

A pesar de lo atractivo de los sistemas biolgicos para la degradacin de colorantes, sus mecanismos de accin son complejos y algunas veces poco

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Tabla 4. Ventajas y desventajas de procesos fisicoqumicos modificado de (Rodrguez Couto, 2009)

En otros trabajos se reportan tambin inhibiciones del crecimiento bacteriano ante concentraciones de sales de aproximadamente 3 g/L presentes en los baos de teido industrial; sin embargo algunos estudios realizados por Sala Uddin y colaboradores muestran algunas cepas como Gracilibacilus sp con buena actividad de decoloracin ante concentraciones de sales de 150 g/L.

Asad et al (2007) report el aislamiento de tres cepas de Halomonas a partir de efluentes textiles, capaces de usar los colorantes tipo azo como fuente de carbono y decolorarlos en un amplio rango de pH (5 a 11) y concentraciones de sal (ms de 200 g/L); adems la temperatura ptima de decoloracin fue de 30C.

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Trabajos realizados con Shewanella putrefaciens mostraron que tiene habilidad para degradar colorantes tipo azo a una concentracin de 100 mg/L en cultivos estticos (Khalid et al, 2008). En este mismo estudio se vi un efecto adverso en la tasa de decoloracin al agregar fuentes de carbono o nitrgeno adicionales. Algunos autores (Amoozegar, Hajighasemi, Hamedi, Asad, & Ventosa, 2010) reportan tambin ventajas de trabajar con sistemas bacterianos anaerobios estrictos y/o facultativos; entre estas se encuentran: Los cultivos estticos permiten simular el ambiente necesario. Las reacciones se llevan a cabo en pH natural y se vuelven bastante inespecficas al involucrar compuestos redox de bajo peso molecular. En presencia de otras fuentes de carbono se aumenta la tasa de reduccin y los compuestos generados sirven al final para el rompimiento de enlaces como el azo. Y FADH los cuales son costosos (Pocedic et al, 2008). Adems, debido a que las enzimas ligninolticas producidas por hongos son extracelulares, en los tratamientos fngicos no se observan las limitaciones de llevar los contaminantes al interior de la clula debido a su gran tamao como sucede en los procesos bacterianos (Kaushik & Malik, 2009).

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Entrando en materia de tratamientos fngicos, varios estudios han demostrado la resistencia de los hongos a los contaminantes y a las condiciones de privacin de nutrientes que se encuentran en las aguas residuales coloreadas, por lo que no se hace necesario aclimatarlos previamente (Ge et al, 2004). Estudios realizados con Trametes versicolor mostraron produccin de lacasa y MnP, as como decoloracin de colorantes tipo azo mas no decoloracin de tipo Antraquinonas (Champagne & Ramsay, 2005). Por otro lado, en ensayos con Phanerochete crysosporium se logr una decoloracin del 98% en tres das de tratamiento (Senthilkumar, Perumalsamy y Janardhana Prabhu, 2011). Trabajos realizados con esta misma cepa sobre colorantes tipo azo (rojo directo 80 y azul mordiente 9) mostraron eficiencias de ms del 92% en ensayos tipo batch en erlenmeyers (Singh & Pakshirajan, 2010). Zhou (2007) y colaboradores estudiaron la relacin entre la concentracin de glucosa en la alimentacin y la decoloracin, encontrando que una concentracin de 2 g/L en las primeras 24 horas de cultivo estimula tanto la produccin de biomasa como la produccin de enzimas ligninolticas. A nivel local, estudios realizados por el grupo de Bioprocesos de la facultad de Ingeniera-Universidad de Antioquia, encontraron que el hongo anamorfo R1 de Bjerkandera aumenta la produccin de LiP de 5 a 20 U/L en presencia de sales como NaCl y Na2CO3, manteniendo la misma actividad de la MnP; adems se alcanz

En el tema enzimtico, se ha encontrado que las lacasas y peroxidasas producidas por algunos hongos poseen la ventaja de solo necesitar oxgeno molecular como cosubstrato y las peroxidasas dependen de la presencia de perxido de hidrgeno; ambos compuestos se encuentran presentes en los sistemas fngicos y en el caso del trabajo con enzimas aisladas, al tener que agregarlos al medio de cultivo son compuestos econmicos y fcilmente adquiribles. En la tabla 5 se muestran diversos ensayos realizados con hongos sobre colorantes y sus eficiencias. De otro lado, las enzimas bacterianas clasificadas como reductasas y oxidasas requieren cofactores como NADH, NADPH

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una decoloracin de aguas residuales textiles estriles del 68% con una reduccin de toxicidad del 58% (Osorio et al, 2010). Las tendencias actuales se basan en combinar diversos tratamientos segn las Irpex lacteus; al aplicar sistemticamente estos dos procesos sobre una mezcla compleja de colorantes se obtuvieron decoloraciones del 90% y reducciones de toxicidad del 95%. 3. SISTEMAS ENZIMATICOS

Tabla 5. Porcentajes de decoloracin obtenidos con diferentes cepas. Modificado de (Kaushik & Malik, 2009)
Cepa Colorante Tipo de colorante ftlacianina Condiciones operacionales 30C,150rpm % decolorizacin 100% Tiempo Referencia

10

Aspergillus ochraceus Ganoderma australe, Pleurotus ostreatus,pol yporus sp Trametes versicolor

Azul reactivo 25 Naranja disperso

7 das

Parshetti et al, 2007 Rigas y Dritsa, 2006

Colorantes azo dispersos

25C, 100 rpm

93.4%

18 dias

Negro remazol

Colorantes azo reactivos antraquino na Colorante azo Antraquin ona

30C, 100 rpm

88.4%

12 das

Aksu et al, 2007

Hongos mesoflicos Ganoderma sp Pycnoporus sanguineus

Azul remazol brillante amaranto

30C, 120 rpm

>50%

7 das

Lopez et al, 2006 Revankar y Lele, 2007. Vanhulle et al, 2007

28C, 150 rpm

96%

8 horas

Azul acido y reactivo

25C, 125 rpm

99%

12 dias

necesidades de los efluentes; se han realizado diversos ensayos que combinan tratamientos fisicoqumicos con biolgicos, incluyendo dentro de estos ltimos pasos iniciales aerbicos con hongos de PB seguidos por la degradacin de compuestos ms simples llevada a cabo por sistemas bacterianos normalmente anaerbicos (Singh, 2006). Un estudio realizado por Novotny y su equipo (2011) combin un modelo de biofiltro bacteriano con un reactor de lecho fijo empacado con espuma de poliuretano y en la cual se inmoviliz una cepa conocida del hongo

3.1 SISTEMA LIGNINOLTICO EXTRACELULAR Es conocido que la tasa de degradacin de los colorantes depende del potencial de xido-reduccin del mismo, adems la estructura qumica juega un importante papel; autores como Xu y colaboradores han encontrado que grupos sustituyentes como metil y metoxi aumentan la accin de la enzima lacasa, mientras que grupos cloro, fluoro y nitro inhiben la oxidacin de fenoles normalmente atacados por la misma enzima.

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como el cristal violeta y el violeta de genciana (Azmi et al, 1998); este ltimo tiene un efecto txico y de inhibicin en la mayora de bacterias aerbicas, presentes en las plantas de tratamiento de aguas residuales y tambin sobre hongos por lo cual se usa para el control de dichos organismos. Algunos estudios muestran eficiencias de decoloracin del cristal violeta del 20% usando lacasa y un 74% usando enzimas tipo peroxidasas (Kaushik et al, 2009). En la degradacin de colorantes tipo ftalocianinas, algunos estudios con el hongo Bjerkandera adjusta sobre azul reactivo 15 y 38 muestran a las sulfotaliamidas como los principales productos de degradacin enzimticas (Heinfling et al, 2001). Para los colorantes tipo antraquinonas se ha observado la accin principal de enzimas tipo mono y dioxigenasas, algunos como el verde cido 27 son sustrato para la accin de la lacasa (Zille et al, 2005) 3.2 SISTEMA INTRACELULAR CITOCROMO P450 Es sabido que adems de la degradacin extracelular de compuestos polimricos y complejos, los hongos poseen mecanismos intracelulares con funciones similares y/o complementarias. Entre estas molculas intracelulares se encuentra el grupo enzimtico citocromo p450, el cual es un grupo de protenas hemo-tioladas que se encuentran en todas las formas de vida desde procariotas pasando por eucariotas inferiores (hongos) hasta los superiores (Plantas y animales);normalmente estas enzimas catalizan la conversin estereoespecfica de sustratos lipoflicos en otros compuestos mas hidroflicos mediante el uso de un tomo de oxgeno proveniente del oxgeno molecular (monoxigenasas) (Crenar & Petri, 2011). Se ha encontrado que este grupo enzimtico participa en el metabolismo de compuestos aromticos, alicclicosy alifticos mediante reacciones de

En diversos estudios se ha encontrado que algunos colorantes pueden actuar en si mismos como fuentes de carbono para el crecimiento de los hongos de PB pero el rompimiento de la molcula no siempre afecta al grupo cromforo y en algunas ocasiones el rompimiento del propio enlace cromforo no asegura la degradacin de la molcula hacia otras menos txicas (Nigam et al, 1995). Se ha encontrado tambin que la enzima lacasa puede oxidar colorantes tipo azo mediante un mecanismo no especfico para generar radicales libres y producir compuestos fenlicos (Pocedic et al, 2008); por otro lado la LiP ha mostrado capacidad de oxidacin ante colorantes azosulfonados produciendo benzoquinonas y sulfofenil hidroxiperoxidasas (Chivukula et al, 1995). Otros autores afirman que la enzima lacasa puede polimerizar o despolimerizar los productos intermediarios de degradacin, lo cual hace que la coloracin persista; dicen sin embargo, que este inconveniente puede remediarse con la presencia de la MnP dependiente de manganeso, como lo reportan estudios usando el hongo Dichomitus squalens para decolorar el Naranja reactivo 16 (Susla et al, 2008). Se ha demostrado que colorantes de uso extendido en la industria del jean como los indigoides son degradados por la enzima lacasa dando como resultado isatines y luego de una descarboxilacin, cido antranlico que es compuesto estable al final de la oxidacin (Aretxaga et al, 2001). Este mecanismo segn los mismos autores sugiere que la funcin principal de la enzima es la de incrementar la susceptibilidad del colorante al ataque hidroltico del agua. Un grupo especialmente difcil de degradar son los colorantes tipo trifenilmetano, ya que son bastante recalcitrantes y se cuenta dentro de ellos algunos de uso comn

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hidroxilacin, epoxidacin, desulfuracin, entre otras (Sono et al, 1996). A diferencia del sistema ligninoltico extracelular, las monoxigenasas p450 son bastante especficas en los sustratos atacados. Adems, al tratarse de una enzima intracelular normalmente ubicada en el retculo endoplasmtico, los estudios llevados a cabo para esclarecer su ruta de accin y su dependencia de otros cofactores como NADPH han sido difciles; el caso mejor elucidado es la degradacin del hidrocarburo poliaromtico Benzo-apireno y la biotransformacin de algunos estreoides de inters farmacetico como el lanosterol y la progesterona (Brink, Gorcom, Hondel, & Punt, 1998). Se presume que una de las funciones de las monooxigenasas p450 involucradas en la degradacin de compuestos txicos en hongos patgenos, es la de defender al microorganismo de las sustancias fungicidas producidas por los huspedes (Crenar & Petri, 2011). En los hongos de podredumbre blanca el sistema inducible citocromo p450 se cree est involucrado en la degradacin de compuestos tipo colorantes pues la relacin entre alta cantidad de enzimas extracelulares y decoloracin an no es muy clara. Ensayos realizados por Baccar y equipo (2011) estudiaron la capacidad de decoloracin de Trametes versicolor sobre el colorante textil cido Black Dicem con miras hacia el escalado del proceso; para dilucidar cual mecanismo era el principal involucrado en el proceso de decoloracin, realizaron una prueba de inhibicin del sistema p450 usando el inhibidor 1aminobenzotriazola (ABT) adicionado al medio de cultivo con inculo del microorganismo; dado que se sigui obteniendo decoloracin se evidencia que este no es el mecanismo principal en el proceso. Otros estudios reportan enzimas tipo p450 (CYP504A1) aisladas de A.nidulans y su accin sobre compuesto aromticos exgenos usando el fenilacetato como fuente de carbono; este mecanismo podra ser usado tambin en la degradacin de compuestos tipo colorantes (Ferrer-Sevillano et al, 2007) A pesar de estos resultados, an no est claro el papel de este sistema enzimtico en la degradacin de colorantes textiles y se presume la necesidad del uso de tcnica "micas" (genmica, protemica). 4. BIOSORCIN Como se mencion anteriormente, el uso de materiales no biolgicos para remover contaminantes ha sido investigado; sin embargo, los sistemas biolgicos aparecen como opciones econmicas para remover contaminantes de diversas matrices por el mismo mtodo (Chua et al, 2005). Dentro de la alternativas biolgicas, la biomasa fngica presenta gran inters debido a que es un subproducto de las fermentaciones para producir compuestos de inters industrial y adems los grupos amino, carboxilo, tioles y fostafo presentes en la pared celular ayudan en el atrapamiento de diversas sustancias txicas; este proceso adems de ser econmico se d en una pocas horas (Kaushik & Malik, 2009). La adsorcin de una sustancia en la pared celular se describe a travs de parmetros incluidos en lo que se conoce como isotermas de adsorcin; estos modelos son tiles para cuantificar la capacidad de la biomasa para atrapar diversos contaminantes, entre los ms usados estn el modelo de Langmuir y el modelo de Freundlich. Colorantes como el azul de metileno y la rodamina B se adsorben bien en Phellinis igniarus (Maurya et al, 2006); otros como el azul de bromotimol son adsorbidos por Rhizopus stolonifer (Zeroual et al, 2006). Algunos parmetros que afectan la adsorcin son el pH, la temperatura, el esfuerzo inico y los pretratamientos que se hagan sobre el contaminante. El efecto segn el tipo de pretratamiento se relaciona en la tabla 6.

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El pH inicial afecta la carga superficial de la biomasa y por ende la capacidad de atrapar molculas de colorantes; se ha encontrado que para colorantes cidos se favorece la adsorcin a pH bajo mientras que para colorantes bsicos es lo contrario (OMahony et al, 2002). Como ejemplo se tiene la gran capacidad de adsorcin de Rhizopus arrhesius sobre el colorante cido azul remazol a pH 2 (95mg/g) mientras que al incrementar el pH a 10 la capacidad adsorbente decay ms del 60% (Kaushik & Malik, 2009). En cuanto a la temperatura, varios estudios indican el aumento en la capacidad adsorbente al aumentar este parmetro; esto se debe probablemente al aumento de la actividad superficial del microorganismo y de la energa cintica de la molcula del colorante (Bayramoglue y Arica, 2007). Ensayos con Trametes versicolor mostraron un gran aumento en la adsorcin al aumentar la temperatura de 5 a 35C usando el colorante rojo directo 128; otros estudios con Rhizopus stolonifer muestran un aumento de 710mg/g a 718mg/g al aumentar la temperatura ms de 35C, sin embargo se estabiliza al superar los 55C, debido probablemente al dao celular provocado (Zeroual et al, 2006). microorganismo pueda naturalmente crecer y colonizar, como ejemplos muy usados estn las espumas de poliuretano. El desarrollo de sistemas de inmovilizacin exitosos ha posibilitado el uso de sistemas tipo bioreactor adecuados para el proceso de degradacin de contaminantes xenobiticos como los colorantes; los sistemas de bioreactores empleados en la biorremediacin de colorantes textiles por lo general difieren del tradicional modelo de Reactor continuo de tanque agitado (CSTR por sus siglas en ingls), dado que la produccin de enzimas extracelulares tipo lacasas en reactores de tanque agitado ha demostrado ser menos eficiente por el dao celular que provoca; se han escogido otro tipo de sistemas como columnas de burbujeo y reactores de lecho fluidizado y empacado, operando estos ltimos con pulsos de aire que proporcionan oxgeno para mantenimiento de la biomasa fngica, mezcla de los componentes del medio e incrementa la actividad de enzimas tipo lacasas puesto que disminuye la produccin de proteasas (Zhou et al 2007). La combinacin de factores mediambientales como composicin del medio de cultivo, flujo de alimentacin, aireacin y agitacin junto con un apropiado diseo del bioreactor pueden dar lugar a una alta produccin de enzimas ligninolticas (Couto et al, 2003), sin embargo y como se mencion anteriormente an no est clara la relacin entre produccin enzimtica y degradacin puesto que algunos autores reportan decoloracin con baja actividad enzimtica (Blanquz et al, 2007). Antes de profundizar en los sistemas bioreactores usados, es conveniente hablar un poco acerca de los diversos soportes de inmovilizacin usados en dichos sistemas. Centrados en la tcnica de colonizacin, el material sinttico ms usado es la espuma de poliuretano aunque recientemente se ha explorado la esponja de acero inoxidable como un soporte accesible y de bajo costo (Rodrguez Couto, 2009).

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5. ENSAYOS EN BIOREACTOR Los sistemas con biomasa inmovilizada son adecuados para el trabajo con efluentes coloreados txicos o que no promueven el crecimiento celular, ya que la existencia de un soporte fsico protege al microorganismo de daos externos (Prigione et al, 2008). La inmovilizacin puede ser de dos tipos: atrapamiento o colonizacin. El atrapamiento hace referencia al uso de sustancias que por medios qumicos o fsicos logran rodear la biomasa y retenerla, como ejemplo se tienen las esferas de alginato. Por otro lado, la colonizacin se basa en usar soportes porosos en los cuales el

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Tabla 6. Efecto de varios pretratamientos fsicos y qumicos en la capacidad adsorbente fngica. Modificado de (Kaushik & Malik, 2009)
Microorganismo Aspergillus niger Colorante Rojo congo Parmetros pH 6.5; 23C Tratamiento NaHCO3 (0.1M) Capacidad de biosorcin 14.72 mg/g Referencia Fu y Viraraghavan, 2002. Patel y Suresh, 2008. Zeroual et al, 2006. Arica y Bayramoglu, 2007. Arica y Bayramoglu, 2007. Binupriya et al, 2008.

Aspergillus foetidus Rhizopus stolonifer Lentinus sajur

Negro reactivo 5 Azul de bromofenol Rojo reactivo

pH 2-3;30C pH 2; 25C pH3; 25C

NaOH (0.1M) NaOH HCl (0.1M)

92mg/g 385 mg/g 138 mg/g

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Trametes versicolor Trametes versicolor

Azul directo

pH 6

Tratamiento con calor Autoclave

152mg/g

Rojo congo

pH 7:30C

46 mg/g

Una de las ventajas de la esponja de acero inoxidable se debe a que el colorante no se adsorbe en ella. Por otro lado, se han explorado soportes orgnicos, principalmente residuos agroindustriales, como soportes; estos tienen la ventaja de ser amigables con el medio ambiente e imitar las condiciones naturales de crecimiento del hongo. Sin embargo, al usarlos en bioreactores pueden interferir en la adecuada operacin de este dado que el hongo puede degradar el soporte, crecer descontroladamente y por ende taponar el sistema dando lugar a cadas de presin elevadas (Bohmer et al, 2007). Debido a esto, se prefieren los soportes inorgnicos cuando se va a trabajar en biorreactor, exceptuando aquellos de fermentacin sumergida. En la tabla 7 se relacionan los soportes inorgnicos ms usados en el trabajo con hongos para degradacin de colorantes. Entrando en materia de bioreactores, Schliephake y Lonergan (1996) probaron la decoloracin con el hongo de pudricin blanca Pycnoporus cinabarinus sobre el colorante azul remazol; este se inmoviliz en malla de nylon y se oper en un reactor de lecho empacado de 200ml. Se encontr

una alta produccin de lacasas y consiguiente decoloracin. En otros estudios, se encapsul Trametes versicolor en esferas de polivinil alcohol para porteger al microorganismo de efectos adversos de agitacin y contaminacin bacteriana. Gracias a esta inmovilizacin se logr operar el microorganismo en un reactor de tanque agitado decolorando en un 89% el poly-R 478 (Leidig et al, 1999). Algunos autores se han ocupado de comparar la eficiencia en decoloracin de sistemas libres versus los inmovilizados. En el caso de decoloracin del naranja II, se compar con inmovilizacin en esferas de alginato varias cepas de hongos de PB probando varios sistemas de bioreactores como lecho fijo, lecho fluidizado, sistema fed-batch. Se encontr una eficiencia del 97% y una actividad de ms de 2 meses para los sistemas inmovilizados (Zhang et al, 1999). Rodriguez Cuoto et al (2000) reporta que al usar Phanaerochete crysosporium inmovilizado en espuma de poliuretano se degrad el poly-R 478 en 6 das.

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1. TENDENCIAS Y CONCLUSIONES La revisin realizada indica que a pesar de la gran cantidad de investigaciones a nivel de laboratorio usando colorantes individuales, es necesario mayor informacin de procesos y eficiencias usando aguas residuales crudas. Se aclara tambin que la biosorcin es deseable solo cuando los efluentes contienen txicos que inhiben el crecimiento fngico. Se recomienda tambin la realizacin de estudios con aguas residuales crudas que relacionen el efecto de diversos parmetros como temperatura, pH, estrs inico, entre otros. Las cepas fngicas que se usen en procesos de decoloracin a nivel de laboratorio e industrial deben ser resistentes a pH cidos y altos contenidos de sales normalmente presentes en las aguas residuales textiles; sin embargo queda claro que la ruta metablica completa para la degradacin de colorantes tanto por sistemas enzimticos intracelulares como extracelulares an no est clara y es un campo importante de estudio para definir los intermediarios presentes y asegurar una baja toxicidad del efluente tratado. Las tendencias actuales promueven investigacin en temas como mejoramiento gentico de cepas fngicas y bacterianas para aumentar decoloracin y resistencia a condiciones extremas, as como escalado de sistemas tipo bioreactor para poder aplicar los desarrollo a volumen industrial; en este ltimo aspecto existe un gran vaco de conocimiento dado las dificultades encontradas al trabajar con sistemas de biomasa inmovilizada (lecho fijo, fermentacin sumergida, reactores de contacto) en comparacin con los sistemas tradicionales de tanque agitado.

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Tabla 7. Soportes inorgnicos comnmente usados en inmovilizacin fngica. Modificado de (Rodrguez Couto, 2009)

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En cuanto a la inmovilizacin se han realizado estudios usando soportes orgnicos e inorgnicos mostrando estos ltimos como los ms adecuados para la mayora de los bioreactores. Se puede concluir de esta revisin que los hongos son organismos adecuados para la degradacin de colorantes sintticos de la industria textil, especialmente en unidades de teido especficas e industrias pequeas, para las cuales el montaje del sistema tendra un bajo costo y permitira incluso el reuso de cierta cantidad de agua para otros procesos. REFERENCIAS Alatorre, F.A. Moeller, G. 2006. influencia de las caractersticas hidralicas y geomtricas de biofiltros empacados sobre la eliminacin de un colorante Azo. XV Congreso nacional de ingeniera sanitaria y ciencias ambientales. Alves de Lima, R.O. Bazo, A.P. Favero Salvadoria, D.M. Rech, C.M. Oliveira, D. Umbuzeiro, G. 2007. Mutagenic and carcinogenic potential of a textile azo dye processingplant efuent that impacts a drinking water source. Mutation Research 626: 5360.

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Tabla 8. Diferentes sistemas reactor usados en decoloracin fngica. Modificado de (Kaushik & Malik, 2009)

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