(CEFARMA) MASSAS - Junho 2012 - IMPRESSAO PDF

Mtodos Fsicos de Anlise
- ESPECTROMETRIA DE MASSAS
Prof. Dr. Leonardo Lucchetti Mestre e Doutor em Cincias Qumica de Produtos Naturais NPPN/UFRJ
Depto. de Qumica de Produtos Naturais Farmanguinhos Fiocruz Docente do Programa de Ps-Graduao em Vigilncia Sanitria Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Sade Fiocruz Docente do Curso de Mestrado Profissional em Gesto, Pesquisa e Desenvolvimento na Indstria Farmacutica Farmanguinhos Fiocruz
Perito Criminal Polcia Federal junho/2012

Princpio da EM: elementos identificados por suas massas
diferentes podem ser

O que a espectrometria de massas?
Ferramenta analtica utilizada para medir o peso molecular de uma amostra e obter informao qualitativa estrutural e quantitativa So necessrias apenas concentraes picomolares Acurcia de 0.01% do peso total da amostra e 5ppm para molculas orgnicas pequenas Para um peso de 40 kDa, um erro de 4 Da til na determinao de fragmentos de amostras e no sequenciamento de biomolculas e na identificao de substncias especficas em misturas complexas
Mtodos AULA 3 Fsicos de Anlise

ESPECTROMETRIA DE MASSAS

Espectrometria de massas
Viso geral Espetrometria de massas a gerao, separao e caracterizao de ions em fase gasosa de acordo com suas massas relativas em funo da carga Previamente, o requerimento era que a amostra fosse passvel de vaporizao (limitao semelhante CG), porm tcnicas de ionizao modernas permitem o estudo de molculas no volteis (como protenas e nucleotdeos) A tcnica uma poderosa ferramenta qualitativa e quantitativa; as anlises de rotina so realizadas em escala de femtogramas (10-15 g) level, podendo chegar at zeptomoles (10-21 mol) para protenas Dentre todas as tcnicas de espectroscopia orgnica, usada para os mais diferentes fins: metalurgia, biologia molecular, semicondutores, geologia, arqueologia etc mais que nenhuma outra Encontrar um caminho para carregar um tomo ou molcula (ionizao) Colocar o tomo ou molcula em um campo magntico ou submeter a um campo eltrico e medir sua velocidade ou raio de curvatura relativamente sua razo massa-carga

Espectro de massas tpico
Caracterizado por sinais finos Eixo x indica a razo m/z para os ions (para aqueles com carga simples, corresponde massa do ion) Altura do sinal indica a abundncia relativa de do ion (no confivel para quantificao) Intensidade do sinal indica a capacidade do ion de ser dessorvido ou voar (alguns voam melhor que outros)

Espectro de massas

Usos da espectrometria de massas
Descoberta de istopos Determinao de pesos moleculares Caracterizao de novos elementos Anlises quantitativas (metablitos) Identificao de sequncias Marcao isotpica Identificao de elementos-trao, poluentes e drogas

Limitaes
As substncias no podem ser caracterizadas se as amostras no estiverem limpas A tcnica no tem grande condio de garantir anlise seletiva e sensvel de misturas complexas Para molculas grandes, os espectros so bastante complexos e de difcil interpretao

Princpios da EM: o espectrmetro
amostra
+ _
ionizador
analisador de massas
detector

Como funciona um espectrmetro?
3 partes fundamentais: a fonte de ionizao, o analisador e o detector Separao no analisador de acordo com a razo massa/carga (m/z) Deteco dos ions separados e suas abundncias relativas Sinais enviados ao sistema de dados e formatados num espectro m/z

O espectrmetro de massas (esquema geral)
Gerao de ions as molculas da amostra so submetidas fontes que convertem parte delas a ions Separao de ions medida em que so aceleradas em um campo eltrico, so separadas de acordo com suas razes massacarga (m/z) Deteco de ions medida em que cada populao separada de ions gerada, o instrumento precisa qualific-las e quantific-las As diferenas nos modelos de espectrmetros baseiam-se nas formas diferentes de realizar estas trs funes
Mtodos Fsicos de Anlise Esquema de um espectrmetro

ALTO VCUO ALTO VCUO
BOMBAS
ENTRADA Inlet DA AMOSTRA
Ion DE FONTE IONS Source
Mass FILTRO DE Filter MASSAS
Detector DETECTOR
SISTEMA Data DE System DADOS
Sample Inlet de Plate gs Target Probe de HPLC slidos GC CG probe Solids CLAE
MALDI ESI IonSpray FAB LSIMS EI/CI
TOF Quadrupolo Ion Trap Setor magntico FTMS
Placa de microcanais Multiplicador de eletrons
PC

Introduo da amostra
Inlet de gs Probe de slidos CG CLAE Cromatgrafo de lquido supercrtico Eletroforese capilar

GC-MS (CG-EM) Cromatografia com fase gasosa acoplada espectrometria de massas separa componentes volteis na coluna e identifica por massas LC-MS (CL-EM)- Cromatografia lquida acoplada espectrometria de massas separa compostos mais lbeis por CLAE e identifica por massas MS-MS (EM-EM) - Tandem Mass Spectrometry separa fragmentos de compostos por campo magntico e identifica por massas

Cromatografia com fase gasosa acoplada espectrometria de massas
Configurao mais comum: ionizao por impacto de eletrons e filtro de massas quadrupolo
Mtodos Fsicos de Anlise Ionizao

ALTO VCUO ALTO VCUO
BOMBAS
FONTE Ion DE IONS Source
Detector DETECTOR
PC

A fonte de ions depende da amostra
Amostra slida Amostra lquida Amostra gasosa
transforma em slido?
prepara soluo?
vaporiza?
Propriedades qumicas do analito na soluo?
Propriedades qumicas do analito no gs?
MALDI
ESI
CI
EI

Modos de ionizao
Impacto de eletrons (EI mtodo drstico) Molculas pequenas (1-1000 Daltons): estrutura Ionizao qumica (CI mtodo brando) Molculas pequenas (1-1000 Daltons): ion molecular, grandes fragmentos Fast Atom Bombardment (FAB semi-drstico) Peptdeos, acares (at 6000 Daltons) Eletrospray (ESI semi-drstico) Peptdeos, protenas (at 200.000 Daltons) Matrix Assisted Laser Desorption (MALDI - branda) Peptdeos, protenas, DNA (at 500kD)

Ionizao por eletrospray
A amostra dissolvida em tampo polar voltil (sem sais) e bombeado atravs de um capilar de ao inoxidvel (70-150mm) num fluxo de 10100 mL/min Alta voltagem (3-4kV) aplicada no fluxo de gs nebulizado, fazendo com que a amostra tambm se nebulize (ou se torne um aerossol) O aerossol direcionado atravs de regies de alto vcuo at que as gotculas evaporem at quase o tamanho atmico Pode ser modificada a nanospray com fluxo < 1mL/min Tcnica muito sensvel: requem menos que um picomol de material Bastante afetada por sais e detergentes Medio via modos positivo ou negativo [(M + H) por adio de cido frmico ao solvente; (M - H) por adio de amnia ao solvente]

Taylor Cone
Processo em trs etapas 1) Formao da gota 2) Encolhimento da gota 3) Formao de ions gasosos
O processo de eletrospray no ioniza as amostras!


Por que eletrospray?
Maioria das amostras so lquidas. CG requer aquecimento da amostra para gerar evaporao Ionizao ocorre por impacto de eletrons ou reaes qumicas Nem todos os analitos so termicamente estveis Eletrospray foi desenvolvido para garantir uma forma branda de gerao de ions gasosos Pode ser facilmente interfaceado com cromatgrafo a lquido Sinais absolutos do eletrospray so mais facilmente reproduzidos garantindo, assim, melhor quantificao Acurcia de massa considerada melhor Carregamento mltiplo mais comum que em MALDI

MALDI: Matriz Assisted Laser Desorption Ionization
Diferente da ESI, MALDI gera espectros que apresentam apenas um ion carregado simples Modo positivo gera ions de (M+H) e modo negativo gera ions de (M-H) Geralmente mais robusto que ESI (tolera sais e compostos no volteis) Maior facilidade de uso e manuteno, capaz de maior escala de trabalho Requer amostra de 10 mL de 1 pmol/mL A amostra ionizada pelo seu bombardeamento com luz laser A amostra misturada a uma matriz que absorve no UV (cido sinapnico para protenas, cido 4-hidroxicinmico para peptdeos, por exemplo) O comprimento de onda iguala ao de mxima absorbncia da matriz, fazendo com que ela transfira parte de sua energia ao analito (levando pulverizao dos ions)

MALDI
O analito co-depositado com a matriz O laser excita a matriz que, por sua vez, transfere energia para o analito Produz espcies com apenas uma carga Tipicamente usada para biomacromolculas/polmeros MALDI comumente combinada com TOF Molculas da amostra (M) so ionizadas por transferncia de protons: XH+ + M MH+ + X

A matriz
No pode ser voltil (a maioria slida em temperatura ambiente) Precisa absorver o comprimento de onda em uso (337nm na maioria dos casos) Preferencialmente solvel no mesmo solvente da amostra As matrizes so, tipicamente, cidas: geralmente, um cido aromtico forte que absorve fortemente o laser de N2 em 335nm e cristaliza

Por que MALDI?
Menos sensvel a sais Menores limites de deteco (na prtica) Espectros de interpretao mais fcil (menor nmero de cargas mltiplas) Rpido e fcil Deteco de massas mais altas Maior rendimento (>1000 amostras por hora)

Impacto de eletrons
Amostra de interesse vaporizada no equipamento A energia suficiente para ionizao e fragmentao das molculas do analito adquirida pela interao com eletrons provenientes de filamento aquecido 70 eV so comumente usados A fonte de eletrons um fio fino de rnio aquecido eletricamente a uma temperatura na qual emite eletrons livres

Impacto de eletrons
Amostra introduzida no instrumento por aquecimento, at a evaporao A amostra em fase gasosa bombardeada com eletrons provenientes de filamentos de rnio ou tungstnio (70 eV) A molcula estilhaada em fragmentos (70 eV >> 5 eV ligaes) Os fragmentos so enviados ao analisador de massas

Impacto de eletrons
Uma partcula carregada passando por um campo magntico defletida atravs de uma trajetria circular, com um raio proporcional sua relao massa/carga. Num espectrmetro de impacto de eletrons, um feixe de eletrons de alta energia usado para deslocar um eletron da molcula orgnica para formar um cation radical, conhecido como ion molecular. Se ele for instvel, pode ser ento fragmentado em outros ions menores. A coleo de ions ento focalizada em um feixe e acelerada para o campo magntico e defletida nas trajetrias circulares de acordo com as massas dos ions. Ao ajustar o campo magntico, os ions podem ser focalizados no detector e registrados

Impacto de eletrons
e-
e-
e-
M
M(g) + eM+(g) + 2eM+(g) A+frag 1 (g) + Bfrag 2 (g)
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Impacto de eletrons
Exemplo: fragmentao por IE de CH3OH
CH3OH CH3OH CH3OH CH2O=H+
CH3OH+ CH2O=H+
+
+ H
CH3 + OH
CHO=H+ + H

Impacto de eletrons
EM/IE CH3OH Molecular ion
Quebra da molcula de maneiras previsveis

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Impacto de eletrons

Espectro de massas gerado por impacto de eltrons:
formao dos fragmentos
Exemplo: Formao do m/z = 57.
Exemplo: Formao do m/z = 43 (on base= 100%).


EXEMPLO: cocana por EI
Fragmentao extensa Ion molecular fraco em m/z 303
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Algumas consideraes...
Espectrmetros comerciais detectam ons com carga positiva (M+ ou M+.) Em rotina, os aparelhos no detectam grupos neutros e nem os carregados negativamente (exigem outras condies). Ao sofrer um impacto de 70eV, a substncia perde um eltron e fica instvel, o que ocasiona a perda de fragmentos at uma maior estabilidade. A anlise dos fragmentos gerados permite inferir sobre a estrutura. Grande parte das substncias gera ons moleculares estveis, o que permite o conhecimento do peso molecular. Quanto maior for a capacidade de uma molcula em estabilizar o produto formado a partir do impacto com 70eV, maior ser a chance deste chegar ao detector e ser identificado. Nem todas as substncias podem ser analisadas com a tcnica de impacto de eltrons, j que no se ionizam com esta energia ou no podem ser volatilizadas na cmara de ionizao ou geram produtos muito instveis para serem analisados. Assim, existem outras tcnicas para transferir energia para a substncia para que esta possa se ionizar, como a ionizao qumica.

Ionizao qumica Usada para confirmar o peso molecular Reconhecida como uma tcnica de ionizao branda Difere do impacto pois, alternativamente, as molculas so ionizadas por interao ou coliso com ions do gs reagente mais do que com eletrons Os gases reagentes mais comumente usados so metano, isobutano e amnia O gs reagente bombeado diretamente na cmara de ionizao e os eletrons do filamento o ionizam

Ionizao qumica
1 - ionizao eletrnica do CH4:

CH4 + e- CH4+ + 2e Formas fragmentadas: CH3+, CH2+, CH+
2 - reaes ion-molcula criam ions reagentes estveis:

CH4+ + CH4 CH3 + CH5+ CH3+ + CH4 H2 + C2H5+
CH5+ e C2H5+ so os ions reagentes dominantes do metano
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Ionizao qumica
Forma ions pseudomoleculares (M+1) CH5+ + M CH4 + MH+ Ions M+1 podem gerar fragmentaes posteriores para produzir um espectro complexo Forma adutos C2H5+ + M [M + C2H5]+ (aduto M+29) C3H5+ + M [M + C3H5]+ (aduto M+41) Ion molecular por transferncia de carga CH4+ + M M+ + CH4 Abstrao de hidreto (M-1) C3H5+ + M C3H6 + [M-H]+

EXEMPLO: cocana por CI
Fragmentao limitada Ion molecular fraco em m/z 303

Ionizao em fase gasosa
EI e CI so tcnicas de ionizao em fase gasosa Amostra aquecida para volatilizar A molcula deve ter peso molecular baixo e polaridade suficientes para que:
Tvap< Ttermodecomp
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Ions reagentes do metano (CI)
Ions em m/z 17, 29 e 41 so originrios do metano; H3O+ tambm se forma pelo vapor dgua no sistema de vcuo

Cocana (CI metano)
Ions pseudomolecular e fragmentos

Cocana (CI isobutano)
Menor fragmentao
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Mtodos de ionizao (resumo)

Quando usar EI e CI?
EI Quando necessrio o fingerprint para identificao por comparao em bases de dados Anlise de traos Forense Ambiental Desconhecidos totais (ex. produtos naturais) Homologia de fragmentao em uma srie (ex. produtos naturais) CI Quando necessria a identificao confivel do ion molecular LC-MS Acompanhamento de uma rota sinttica, identificao de impurezas Amostras biolgicas ou outras frgeis ou sensveis decomposio (ex. drogas e metablitos) Minimizar a fragmentao, ganhando maior intensidade no ion molecular
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Filtros de massa/analisadores/separadores de ions
ALTO VCUO ALTO VCUO
BOMBAS
Detector DETECTOR
PC

Modo positivo ou negativo?
Se a amostra contm grupos funcionais que sejam bons aceptores H+ (como amida e grupos amino presentes em peptdeos e protenas) ento a deteco positiva usada Se a amostra apresenta grupos funcionais que percam protons facilmente (como cidos carboxlicos e hidroxilas, como as encontradas em cidos nucleicos ou acares), ento a deteco negativa usada
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Analisadores de massas
Setor magntico (MSA) Alta resoluo, massa exata ( o analisador original) Quadrupolo (Q) Baixa resoluo (1 u.m.a.), rpido, barato Tempo-de-voo (Time-of-Flight - TOF) Sem limite de m/z, alto rendimento Ion Trap Boa resoluo, analisador all-in-one Ion Cyclotron Resonance (FT-ICR) Mais alta resoluo, massa exata, caro

Tempo-de-voo (TOF, TOF-MALDI) Mede o tempo requerido para os ions voarem pela extenso da cmara Comumente combinado com MALDI Tandem MS - MS/MS - MSn Separao e identificao de componentes em misturas complexas Induz fragmentao e analisa os fragmentos Usa dois ou mais analisadores/filtros separados por uma clula de coliso Diferentes configuraes de MS-MS Quadrupolo - quadrupolo (baixa energia) Setor magntico - quadrupolo (alta energia) Quadrupolo - tempo-de-voo (baixa energia) Tempo-de-voo tempo-de-voo (baixa energia)

LC/LC-MS/MS-Tandem LC, Tandem MS
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Tandem Mass Spectrometry (MS/MS)
A ideia fragmentar ions a partir de ions-pai para obter informao estrutural sobre uma molcula Permite ainda separao de massa e identificao em misturas complexas Usa dois ou mais analisadores/filtros separados por uma clula de coliso preenchida com argnio ou xennio A clula de coluso onde os ions selecionados so direcionados para posterior fragmentao

Tandem Mass Spectrometry (MS/MS)
O primeiro (MS1) usado para SELECIONAR, nos ions primrios, aquele(s) com um valor de m/z para passar na regio de fragmentao. O ion selecionado o ion-pai e pode ser o ion molecular resultante da fragmentao primria. A DISSOCIAO ocorre na regio de fragmentao. Os ions filhos so analisados num segundo espectrmetro (MS2). Na verdade, o MS1 pode ser visto como fonte de ions para MS2.
MS1
MS2

Por que Tandem Mass Spectrometry (MS/MS)?
Identificao de desconhecidos Potencialmente dois compostos de interesse tm a mesma massa (e o mesmo tempo de reteno) Melhorias quantitativas (reduo do rudo)
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Setor magntico

Setor magntico

Setor magntico
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Quadrupolo

Quadrupolo
Consiste de quatro hastes metlicas paralelas com diferentes cargas Duas hastes opostas apresentam potencial positivo e as outras duas apresentam potencial negativo As voltagens aplicadas afetam a trajetria dos ions que migram ao longo do trajeto de voo Para determinadas voltagens de correntes alternada ou contnua, somente ions com razes massa-carga especficas passam pelo quadrupolo e todos os demais ions so ejetados de sua trajetria original

Quadrupolo
Quatro magnetos hiperblicos em seo cruzada, so arranjados; em um par aplicada corrente alternada; no outro, aplica-se corrente contnua Somente um ion em particular consegue ressonar adequadamente e atingir o detector
A vantagem o tamanho compacto do instrumento cada haste tem o tamanho aproximada de uma caneta esferogrfica
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Quadrupolo
Quadrupolos
22

Quadrupolo
O tamanho compacto e a velocidade destes instrumentos propiciam que eles sejam eficientes e poderosos como detectores para CG: uma vez que os compostos j se encontram vaporizados, somente o gs carreador precisa ser eliminar para que o processo ocorra Pequeno: as molculas so facilmente defletidas de suas trajetrias e so ejetadas pelo vcuo; os ions mais pesados, como maiores momenta, tendem a permanecer no centro do jato e so enviados ao detector
interface GC-MS: uma bomba usada para evacuar a interface

Quadrupolo

Tempo-de-voo (TOF)
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Tempo-de-voo (TOF)

Tempo-de-voo (TOF)

Tempo-de-voo (TOF)
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TOF

Ion Trap
So dispositivos que fazem uso de campos de quadrupolos tridimensionais para capturar e analisar as massas dos ions com bom poder de resoluo

Ion Trap
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Ion traps

ION TRAPS x QUADRUPOLOS
Separao de massa no espao Baixa sensibilidade varredura total No h estgios mltiplos Perda da varredura de espcies neutras
Separao de massa no tempo Alta sensibilidade varredura total Estgios mltiplos de deteco de massas (MSn) Alta resoluo
FT-Ion Cyclotron
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Ion cyclotron resonance - FT
Usa um magneto poderoso (5-10 Tesla) para criar um ciclotron em miniatura Abordagem por FT permite a determinao simultne de muitas massas de ions - EFICINCIA Apresenta resoluo mais alta que qualquer outro analisador de massas disponvel
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Espectrmetro de massas

Espectrmetro de massas

Deteco
ALTO VCUO
ALTO VCUO
BOMBAS
DETECTOR Detector
PC
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Detectores
Os primeiros usavam filmes fotogrficos Hoje, produzem sinais eletrnicos quando atingidos por ions Mecanismos de tempo integram estes sinais com voltagens em varredura que permitem ao instrumento registrar a m/z que atinge o detector Necessitam de calibragem constante e regular Monitoram a corrente de ions, amplificam e transmitem o sinal para o sistema de dados Mais comuns: Fotomultiplicador Multiplicador eletrnico Placa de microcanais

O espectro de massas
Apresentao: abundncia relativa x razo m/z (massa) o ion mais abundante formado durante a ionizao gera o sinal mais alto no espectro = pico-base
pico-base, m/z 43

Todos os demais picos so relativos ao pico-base e expressos como porcentagem Se a molcula perde somente um eletron no processo de ionizao, o ion molecular observado e fornece seu peso molecular designado como M+ no espectro
M+, m/e 114
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Na maioria dos casos, quando a molcula perde um eletron de valncia, as ligaes so quebradas ou o ion formado rapidamente se fragmenta gerando ions de mais baixa energia As massas dos ions carregados so registrados como fragmentos inicos fragmentos neutros no so registrados!
fragmentos

Quando um pico M+ observado, ele fornece a massa molecuar considerando que cada tomo se encontra em sua forma isotpica mais abundante Lembrar que o carbono uma mistura de 98,9% de 12C, 1,1% de 13C e menos que 0,1% de 14C na tabela peridica, a massa de 12,011 a mdia Por sua natureza, o espectrmetro de massas v um sinal de massa 12 como carbono e um pico M+1 em 13, que apresentar 1,1% da altura do primeiro Determinao da massa molecular Algumas molculas so altamente frgeis e os picos M+ no so observados um mtodo usado para confirmar a presena de um pico M+ reduzir a voltagem de ionizao ions de energia mais baixa no fragmentam facilmente Trs fatos so aplicveis ao pico do ion molecular: O pico deve corresponder ao ion de massa mais alta no espectro, excluindo os picos de istopos O ion deve ter nmero mpar de eletrons geralmente, um cation radical O ion deve ser capaz de gerar outros fragmentos no espectro pela perda lgica de fragmentos neutros

Determinando padres isotpicos no espectro de massas
Espectrmetros de massas so capazes de separar e detectar ions individuais, mesmo que suas diferenas sejam de apenas uma unidade de massa Como resultado, molculas que contenham istopos diferentes podem ser distinguidos Isto mais claro quando tomos tais como bromo ou cloro esto presentes (79Br:81Br, intensidade 1:1; 35Cl:37Cl, intensidade 3:1) quando picos em "M" e "M+2" puderem ser obtidos A razo das intensidades nos padres dos istopos so devidas s abundncias naturais dos istopos Picos de "M+1 so vistos devido presena de 13C na amostra
30

Espectro de Massas gerado por impacto de eltrons:
substncias contendo cloro (M+2 1/3 do M+) e bromo (M+2 = M+) presena de M+2 em

EM/IE CH3Br
Istopos podem ajudar na identificao de compostos


EM x RMN
Picos em EM so mais finos que em RMN EM muito mais sensvel (104 x) que RMN (est entre as ferramentas analticas mais sensveis) Com EM possvel analisar molculas muito maiores (>50 kD) Amostras para EM so mais difceis de serem preparadas EM no propriamente quantitativa Espectrmetros de massas custam um pouco menos que os de RMN
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A regra do nitrognio
Molculas contendo tomos limitados a C, H, O, N, S, X e P de massa molecular par contm nmero par ou no contm nitrognio (tambm se aplica a radicais) serve para confirmar a presena de um ion molecular No se aplica a cations radicais No caso da ionizao qumica, onde se observa [M+H]+, subtrair de 1 e ento aplicar a regra Exemplo: se uma substncia no contm nitrognio e gera um ion em m/z 201, ento este pico no pode ser o do ion molecular Se a molcula contm nmero par de nitrognios ou no contm este elemento, o ion molecular apresentar relao massa/carga par; por outro lado, se a molcula contm nmero mpar de nitrognios, o ion molecular ter massa mpar Se a molcula contm cloro ou bromo, cada qual com dois istopos comuns, a determinao do M+ pode ser simplificada ou dificultada!...

A regra dos 13 e a predio da frmula
1. Tome o peso do ion e divida por 13 2. Esta resposta o n, para (CH)N e qualquer sobra adicionada como H Ex. 92 92/13 = 7 com sobra de 1; C7H8 pesa 92. Este a frmula candidata Pode-se avaliar outras alternativas que possuam heterotomos. Para cada membro da lista abaixo, substitua o nmero indicado de CHs na resposta abaixo Hetero substituio O N O+N F Si CH substituio CH4 CH2 C 2H 6 CH7 C 2H 4 Hetero substituio P S O+S I Cl,Br CH substituio C 2H 7 C 2H 8 C4 C10H7 (usar istopos)

Rearranjo de McLafferty
Cations radicais localizados no oxignio da forma ceto podem ser -clivados O mecanismo se limita fragmentao por impacto de eletrons necessrio um H em um carbono de hibridao sp3 Cetonas, steres, cidos carboxlicos geram produtos por este rearranjo
H R1 R2 +
H O
+
R1
R2
O H
32

Clivagem de C=O
:O .
:O +
+
neutro
:O
+ :
CH3C=O+ m/z=43

Clivagem em heterotomos (O, N)
neutro
:O.
:O .:
+ +
Clivagem heteroltica

Rearranjos e fragmentaes que geram bons carbocations
C H 2+
Cation benzlico (estabilizado como troplio) m/z=91
C+ H + H C
CH 2
CH 2 CH+
33

Aminas
+
-R
Aminas cclicas perdero H adjacentes formando ion imnio

A clivagem retro Diels-Alder
Cicloexenos com estado de transio de 6 membros favorvel; pode incluir heterotomos (N,O)
QUESTES DE CONCURSOS
34

O espectrmetro de massas um equipamento que fornece dados para a identificao de compostos. Ele pode ser acoplado a um cromatgrafo de modo a permitir a identificao de vrios compostos presentes em uma mesma amostra. O espectro de massas produzido quando: a) a molcula do analito fragmentada por ao de foras magnticas; b) a molcula do analito excitada por um feixe de luz e a luz emitida pela molcula captada pelo detector; c) a molcula do analito absorve energia proveniente de radiao eletromagntica sofrendo vrios tipos de excitao; d) dois protons adjacentes quimicamente diferentes, alinham-se em relao a um campo magntico externo; e) a molcula do analito bombardeada em fase gasosa por um feixe de eltrons. (PERITO LEGISTA TOXICOLOGIA PF)

Ao selecionar o monitoramento seletivo de ons na anlise por espectrometria de massas, devemos utilizar algum critrio para garantir que estamos identificando corretamente o composto. O critrio considerado de maior segurana quando a identificao pode ser concluda se o analito possuir: a) o on de maior intensidade do composto padro de comparao; b) pelo menos 3 ons caractersticos do composto padro de comparao; c) o mesmo tempo de reteno no cromatograma, ainda que os ons sejam diferentes do composto padro de comparao; d) pelo menos 2 ons caractersticos do composto padro de comparao; e) pelo menos alguns ons caractersticos, ainda que ainda que o tempo de reteno no cromatograma seja diferente do composto padro de comparao. (PERITO LEGISTA TOXICOLOGIA PF)

45 Julgue as afirmaes abaixo, sobre a espectrometria de massas: I Um espectro de massa o registro do que acontece com as molculas quantos estas so bombardeadas em fase gasosa por um feixe de eltrons, em um instrumento chamado espectrmetro de massas. II As molculas so destrudas em pedaos. Usualmente possvel deduzir do estudo dos fragmentos a estrutura da molcula original. III Os espectros de massa podem ser tambm usados para determinar a extenso e localizao da incorporao de istopos. IV Durante a interao entre a molcula e o eltron de alta energia h transferncia de energia para a molcula. Uma das maneiras pelas quais as molculas excitada pode dissipar a energia em excesso pela ejeo de um eltron, ficando positivamente carregada. V Geralmente a presso da amostra de espectrmetro e massa no ultrapassa 10-5 mm Hg. Nesta baixa presso podem ocorrer os fragmentos e rearranjos intramoleculares, mas a probabilidade de rao intermoleculares entre ions ou molculas neutras baixa. So verdadeiras: a) I,II,IV e V b) I,II e III c) II,III e V d) Todas as afirmaes (PERITO PF 1993 ENG.QUMICA/FARMCIA/QUMICA/C.BIOLGICAS/BIOQUMICA)
35

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Mtodos Fsicos de Anlise Esquema de um espectrmetro

ENTRADA Inlet DA AMOSTRA

Ion DE FONTE IONS Source

Mass FILTRO DE Filter MASSAS

SISTEMA Data DE System DADOS

MALDI ESI IonSpray FAB LSIMS EI/CI

TOF Quadrupolo Ion Trap Setor magntico FTMS

Placa de microcanais Multiplicador de eletrons

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