1 ENCONTRO DOS INTERLOCUTORES REGIONAIS DE HEPATITES VIRAIS

DIAGNSTICO LABORATORIAL DAS HEPATITES B e C

Dra Regina Clia Moreira Pesquisadora Cientfica Instituto Adolfo Lutz rmoreira@ial.sp.gov.br i @i

1 ENCONTRO DOS INTERLOCUTORES REGIONAIS DE HEPATITES VIRAIS

INTRODUO
infecciosa

Transmisso entrica

Hepatites virais
soro soro-homloga homloga

NANB B D C
Transmisso parenteral

G TTV, G, TTV SEN-V SEN V

HEPATITE B

HEPATITE B

AgHBs AgHBc DNA

AgHBe

Hepatite B Marcadores Sorolgicos

AgHBs anti-HBs AgHBc anti-HBc (IgM/IgG) AgHBe anti-HBe

Hepatite B Marcadores Sorolgicos

Mtodos: ELISA / MEIA /Quimioluminescncia

Testes de Triagem : Diagnstico e Banco de Sangue AgHBs + anti-HBc

Porque iniciar a triagem com o HBsAg e o anti anti-HBc?

HBsAg
1 Marcador M d sorolgico l i no curso da d infeco i f Presente na fase aguda g e crnica (6 ( meses) )

AntiAnti -HBc
Detectvel na fase aguda e crnica Presente na fase de janela imunolgica do HBsAg Marcador de infeco prvia

E os outros marcadores???
AntiAnti -HBc HBc-IgM
Diferenciar infeco aguda da infeco crnica

HBeAg/ HBeAg /Anti Anti-HBe

Acompanhamento do portador crnico Acompanhar a evoluo da hepatite aguda

AntiAnti -HBs
Marcador de Cura Avaliao de resposta vacinal

Fluxograma de Diagnstico
Paciente HBsAg + anti-HBc total acompanhamento p HBsAg + anti-HBc total + anti-HBc IgM g HBsAg anti-HBc total + anti-HBs HBsAg anti-HBc total indivduo suscetvel
positivo

negativo

positivo

negativo

infeco crnica ? acompanhamento

.

infeco aguda
negativo
.

anti-HBc IgM
positivo

contato prvio

HBeAg/anti-HBe

acompanhamento

infeco aguda ( janela j imunolgica) g )

HEPATITE B BIOLOGIA MOLECULAR

Anti-HBc Isolado Mutantes virais com modificaes antignicas g ou baixa produo p de HBsAg g Mutaes Pr-core Mutantes virais que no produzem HBeAg (HBsAg (+) HBeAg (-) anti-HBe (+) )

Acompanhamento do tratamento Resistncia aos Anti-virais Lamivudina (YMDD)

HEPATITE B BIOLOGIA MOLECULAR

Kits disponveis e registrados na ANVISA para o diagnstico
COBAS AMPLICOR MONITOR LINEARIDADE 60UI/mL a 38.000UI/mL COBAS TAQMAN HBV - LINEARIDADE 29UI/mL a 108 UI/mL

HEPATITE C

REPRESENTAO ESQUEMTICA DO GENOMA DO HCV

GENOMA DO HCV
5NCR 5 5
Protenas estruturais Protenas no estruturais

3NCR NS5B S5 3 3

E1

E2

NS2 S

NS3 S3
a b

NS4 S
A B

NS5A S5

5-1-1 c33c c22-3 c100

Peptdeos imunognicos

NS5 c200

GENTIPOS

Variabilidade gentica 6 gentipos distintos (1,2,3...); subtipos (a,b,c...).

DIAGNSTICO LABORATORIAL
Mtodos indiretos - Pesquisa de anticorpos
9 ELISA - 3 gerao / 4 gerao 9 MEIA/Quimioluminesccia MEIA/Q i i l i i 9 Immunoblot

Mtodos diretos - Pesquisa q componentes p virais

9 RNA viral i l 9 Antgeno do core viral

HEPATITE C

Diagnstico Laboratorial e Triagem em Bancos

g de Sangue

Anti - HCV

Hepatite p C Diagnstico g Sorolgico

anti-HCV
9 pode levar 4 a 6 semanas para ser detectado 9 falso-negativo em imunossuprimidos 9 falso-positivo em populaes de baixo risco 9 no dif diferencia i infeco i f recente t e passada d

BIOLOGIA MOLECULAR HEPATITE C

1. HCV-RNA Qualitativo 2. HCV HCV-RNA Quantitativo 3 Genotipagem 3. G ti

BIOLOGIA MOLECULAR HEPATITE C

HCV-RNA Qualitativo
9diagnstico de viremia 9monitoramento de resposta ao tratamento 9avaliao de resposta sustentada 9diagnstico di ti precoce de d infeco i f 9transmisso materno-fetal 9diagnstico de infeco em imunossuprimidos

Biologia Molecular
HCVHCV -RNA Qualitativo - Mtodos
9PCR reao em cadeia da polimerase polimerase p chain reaction sensibilidade 50 UI /mL 9TMA amplificao mediada por transcrio transcription t a sc pt o mediated ed ated a amplification p cat o sensibilidade 6 UI /mL

BIOLOGIA MOLECULAR HEPATITE C

HCV-RNA Quantitativo
9Definir continuidade ou interrupo de tratamento Gentipo 1

Genotipagem
9Definir droga g para p tratamento

Biologia Molecular
HCVHCV -RNA Quantitativo - Mtodos
9PCR reao da polimerase em cadeia polimerase chain reaction linearidade 600 UI/mL a 850.000UI /mL 9bDNA ensaio i do d DNA ramificado ifi d branched DNA linearidade 615 UI /mL a 7 7.700.000UI 700 000UI /mL

GENOTIPAGEM
Indireto Hibridizao (INNOLIPA)
Cromgeno (NBT/BCIP) Precipitado roxo Fosfatase alcalina Avidina Biotina 5 Sonda de DNA 3

Fragmento amplificado

Membrana de Nitrocelulose

Biologia g Molecular

Biologia Molecular
Anti-HCV +
Teste qualitativo ALT / Bipsia PR-TRATAMENTO Genotipagem Teste q quantitativo (gentipo (g p 1) ) TRATAMENTO 12a semana (gen 1)
Teste quantitativo

DIAGNSTICO

Final de tratamento
Teste qualitativo

Resposta Sustentada
Teste qualitativo

O objetivo principal de um laboratrio de diagnstico produzir resultados rpidos, rpidos utilizando mtodos sensveis e especficos e, obviamente, padronizados