Revista Mdica del IMSS

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43

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2005

Artculo:

Factores que intervienen en la reaccin antgeno-anticuerpo y clasificacin antignica eritrocitaria

Derechos reservados, Copyright 2005: Instituto Mexicano del Seguro Social

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Primera versin: 9 de agosto de 2005 Versin definitiva: 11 de agosto de 2005 Aceptado: 11 de agosto de 2005

Javier Bautista-Jurez
Qumico farmacobilogo, Banco Central de Sangre, Centro Mdico Nacional Siglo XXI, Instituto Mexicano del Seguro Social

Factores que intervienen en la reaccin antgeno-anticuerpo y clasificacin antignica eritrocitaria

La reaccin antgeno-anticuerpo (Ag-Ac) es la piedra angular de la respuesta inmune y se pone de manifiesto in vitro por la formacin de un precipitado o aglutinacin de partculas (eritrocitos). El acoplamiento estructural entre las macromolculas est dado por varias fuerzas dbiles que disminuyen con la distancia, como los puentes de hidrgeno, las fuerzas de Van Der Waals, las interacciones electrostticas y las hidrofbicas. El reconocimiento Ag-Ac es una reaccin de complementariedad, por lo que se efecta a travs de mltiples enlaces no covalentes entre una parte del antgeno y los aminocidos del sitio de unin del anticuerpo. La reaccin se caracteriza por su especficidad, rpidez, espontaneidad y reversibilidad:1,2 Especficidad: capacidad de los anticuerpos para distinguir entre dos ligandos de estructura similar. La unin dada por la especificidad es muy precisa y permite distinguir entre grupos qumicos con diferencias mnimas. Rapidez: la velocidad con que ocurre la primera etapa de la reaccin Ag-Ac es del orden de milsimas de segundo, y est limitada nicamente por la difusin. La segunda etapa, que es ms larga, incluye todas las manifestaciones que se presentan como consecuencia de la interaccin, tales como precipitacin, aglutinacin, neutralizacin, etctera. Espontaneidad: la reaccin Ag-Ac no requiere energa adicional para efectuarse y es factible explicarla en trminos de la ley de accin de masas: K Ab+H AbH K-1 Keq = (AbH) (Ab)(H)
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Donde el valor de la constante de equilibrio es una medida de afinidad del anticuerpo por el antgeno, y desde un punto de vista termodinmico permite conocer la energa libre de Gibbs mediante la ecuacin siguiente: E Gibbs = -RT ln Keq Reversibilidad: dado que la reaccin se debe a fuerzas no covalentes, es reversible y, en consecuencia, se ve afectada por factores como la temperatura, la proporcin de Ag-Ac, el pH y la fuerza inica. En pruebas de laboratorio que usan la aglutinacin como punto final, la alteracin de las condiciones fsicas del sistema puede incrementar o reducir la sensibilidad de la prueba.1-5

Comunicacin con: Javier Bautista-Jurez. Tel.: 5639 3616. Direccin electrnica: javier_bautista_juarez@hotmail.com javier.bautista@ammtac.org

Figura 1. La zona de equivalencia es el estadio donde existe mayor grado de aglutinacin con las proporciones ideales de suero y eritrocitos. La prezona equivale a las condiciones cuando existe exceso de suero o baja concentracin de eritrocitos. La poszona equivale a las condiciones de exceso de eritrocitos o baja concentracin de suero

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Palabra clave antgenos eritrocitarios Key word red cell antigens

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La temperatura tiene efectos pro:rop inversamente odarobale FDP porcionales con la constante de equilibrio y la velocidad de reaccin si uno se aleja de los puntos VC ed AS, cidemihparG ideales de trabajo. En inmunohematologa los anticuerpos eritrocitarios reaccionan dentro de un arap margen restringido de temperatura. En general, los anticuerpos IgM reaccionan:cihpargideM a temperaturas entre acidmoiB arutaretiL 4 y 27 C, mientras que los anticuerpos IgG reaccionan mejor a 37 C, por eso los procedimientos sustradode-m.e.d.i.g.r.a.p.h.i.c para la deteccin de anticuerpos pueden efectuarse a diferentes temperaturas, de ah que se debe tener cuidado de diferenciar los anticuerpos clnicamente significativos, los que actan en un amplio margen trmico, los que fijan complemento, etctera. Si bien no existe un pH ptimo exacto, se dice que entre 6 y 7.3 se detecta a la mayora de los antgenos eritrocitarios clnicamente significativos, con excepcin del anti-M, el cual acta mejor a

pH ms bajo. Uno de los puntos ms importantes sustradode-m.e.d.i.g.r.a.p.h.i.c es el almacenamiento de reactivos, entre los que cihpargidemedodabor figura principalmente la solucin salina isotnica, la cual despus de un largo periodo de almacenamiento el pH baja a 5.0, por lo que algunos tcnicos prefieren la utilizacin de soluciones amortiguadas en las pruebas serolgicas.

Cuadro II Colecciones de antgenos

Nmero 205 207 208 209

Nombre Cost Ii Er

Smbolo Incidencia (%) Csa Csb I I Era Erb P Pk LKE Lec Led 95 34 +99 +99 -1 +99 98 1 6

Cuadro I Sistemas de grupos sanguneos

210

Nmero 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23

Nombre ABO MNS P Rh Lutheran Kell Lewis Duffy Kidd Diego Cartwrigth Xg Scianna Dombrock Colton Landstainer-Weiner Chido-Rodgers Hh Kx Gerbich Cromer Knops Indian

Producto gnico Glicosiltransferasa Glicoforinas AB Glicosiltransferasa Polipptidos CE y D Glicoprotena Glicoprotena Glicosiltransferasa Receptor Protena de transporte Banda 3 Acetilcolinesterasa Glicoprotena Glicoprotena Glicoprotena CHIP 28 Glicoprotena C4 Glicosiltrasferasa Glicoprotena Glicoforinas CD DAF (CD55) CR1 (CD35) H-CAM (CD44)

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La fuerza inica est directamente relacionada con el potencial Z. En la solucin salina isotnica normal, los iones de Na+ y Cl- se renen alrededor de los antgenos y los anticuerpos, neutralizando parcialmente las cargas opuestas, lo que impide la asociacin del anticuerpo con el antgeno, pero puede disminuirse de diferentes formas. La eliminacin, neutralizacin o disminucin de estas cargas ayuda a conseguir una constante de equilibrio mejor y a incrementar la velocidad de reaccin. Cuando se habla de tiempo de incubacin se hace alusin al tiempo necesario para alcanzar el equilibrio; vara para la mayora de los anticuerpos y su medio de reaccin. En algunos casos los agentes potenciadores pueden incrementar la cantidad de anticuerpos que se fija al antgeno en los primeros 15 minutos y, en consecuencia, disminuyen el tiempo de incubacin necesario para alcanzar el equilibrio. En medios como la solucin salina fisiolgica y la albmina, es necesario el suero de Coombs para demostrar la fijacin de los anticuerpos; se requieren 30 minutos a 37 C para detectar la mayora de los anticuerpos clnicamente significativos. No obstante, con algunos anticuerpos con constantes de equilibrio muy
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Cuadro III Antgenos de baja incidencia

Nmero 700002 700003 700004 700005 700006 700008 700010 700013 700014 700015 700017 700018 700019 700021 700022 700026 700027 700028 700029 700030 700034 700037 700039 700040 700041 700043 700044 700045 700046 700047 700049 700050 700051 700052 700053 700054 700055

Nombre Batty Christiansen Swan Biles Box Traversa Bishop Wulfsberg Nunhart Radin Torkildsen Peters Reid Jensen Moen Froese Redelberger Livesay Van Vugt Waldner Hughes New-Foundland Milne Rasmussen SW1 Oldeide JFV Katagiri Bowyer Jones HJK HOFM ELO SARA LOCR REIT Warrior

la zona de equivalencia en la curva, por lo que el nmero de anticuerpos en el sistema y el nmero de sitios antignicos por el eritrocito afectan la velocidad con que se lleva a cabo una reaccin de aglutinacin, vindose que una relacin de sueroclula aumentada puede detectar anticuerpos dbilmente reactivos.2,6-8

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Cuadro IV Antgenos de alta incidencia

Nmero 901001 901002 901003 901005 901006 901007 901008 901009 901011 901012 901013 901014

Nombre Vel Langereis August Jr Ok JMH Emm Antn Raph Sid Duclos PEL

Incidencia (%) +99 +99 +99 +99 +99 +99 +99 +99 92 91 +99 +99

Clasificacin de antgenos eritrocitarios

Despus de 105 aos del descubrimiento de los antgenos A, B y H del sistema ABO por el doctor Landstainer, existen actualmente ms de 750 grupos eritrocitarios humanos.1 De stos, han sido aceptados y clasificados 254 antgenos (definidos serolgicamente y con herencia demostrada). Muchos de estos antgenos son productos de un gen o de una familia de genes que se heredan independientemente unos de otros, constituyendo los sistemas de grupo sanguneo (cuadro I). Las colecciones son antgenos definidos serolgica, bioqumica y genticamente, si bien no ha podido demostrarse que se hereden independientemente de otros antgenos (cuadro II). Existen otros antgenos que no pueden ser incluidos en ningn sistema o coleccin.3 Han sido definidos 23 sistemas que agrupan a 194 antgenos; 11 antgenos estn agrupados en cinco

bajas, la asociacin no alcanza el equilibrio a los 30 minutos, por lo que la extensin del tiempo de incubacin incrementa la sensibilidad de la prueba. En general para todos los anticuerpos, el aumento en el tiempo de incubacin en estos medios tiene mayores ventajas. Concentracin de antgeno-anticuerpo: aunque est muy relacionada, un exceso de anticuerpos puede inhibir la aglutinacin, como en la precipitacin en el efecto prezona de la curva de equivalencia (figura 1). Una relacin comn es la de dos gotas de suero con una gota de eritrocitos resuspendidos a 2 o 3 % en solucin fisiolgica, que sera
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Cuadro V Clasificacin de antgenos segn su produccin de anticuerpos

Regulares: anticuerpos presentes casi durante toda nuestra vida, son clase IgM y son de amplio espectro trmico; su produccin est relacionada con bacterias (sistema ABO).
Naturales

Anticuerpos

Irregulares: pueden producirse en cualquier etapa de nuestra vida, su periodo serolgico es variable y estn relacionados con alimentos y antgenos bacterianos; son anticuerpos IgM que actan entre 4 y 22 C (H, I, i, M, N, P, Le, A1, E nat)
Son los producidos por transfusiones o embarazos, su duracin serolgica es variable, y el anticuerpo que lo caracteriza es de clase IgG que acta normalmente a 37 C y el cual puede o no activar la cascada del complemento (Sistema Rh, Diego, Dffy, Kell, Kidd, y otros)

Inmunes

colecciones y 49 antgenos no pertenecen a ninguna de las categoras mencionadas (cuadros III y IV).9 De otra forma es indispensable tener una clasificacin que ayude en el laboratorio de inmunohematologa a ubicar a los anticuerpos de importancia clnica (cuadro V).2,7,9

Referencias
1. Glyan LE, Steward MW. Inmnochemistry: an advanced textbook. Chichester, Brisbane, Londres, Toronto: J Wiley and Son; 1977. 2. Bautista JJ. Factores que intervienen en la reaccin antgeno-anticuerpo. Gac Med Mex 2004;140 (Supl 3):S28-S30.

3. Heidelberger M. Lectures in immunochemistry. Londres, Nueva York: Academic Press; 1956. 4. Klotz LM. Number of receptor sites from Scatchard graphs: facts and fantasies. Science 1982;217:1247. 5. Roitt LJ, Brostoff D. Male. Immunology. Londres, Nueva York: Gower Medical Publishing Ltd; 1985. 6. Watson JD. Molecular biology of the gene. Third edition. Menlo Park: WA Benjamin; 1976. 7. Mollison PL, Engelfriet FP, Contreras M. Blood transfusion in clinical medicine. Ninth edition. Oxford: Blackwell Scientific; 1993. 8. Coombs RRA, Mourant AE, Race RR. A new test for the detection of weak and incomplete Rh agglutinins. Br J Exp Pathol 1945;26:255-266. 9. Rivera A. Sistemas de grupo sanguneos eritrociarios humanos. Seminario de Inmunohematologa. Resolucin de problemas serolgicos complejos. Barcelona, Espaa: Menarini Diagnostics; 1995. p. 5-16.

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