Laboratorios de Fisiologia Vegetal (Reparado)

UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
MINISTERIO DE EDUCACIN NACIONAL NIT:891.190.346-1
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE BIOLOGA PRACTICAS DE LABORATORIO FISIOLOGIA VEGETAL 1. FUNDAMENTOS
Las prcticas propuestas estn adaptadas para el estudio de especies promisorias amaznicas, aunque cumplen con los requerimientos de un curso general en fisiologa vegetal. Alguna informacin como la cantidad de semillas, el nmero de hojas o el nmero de plntulas a usar, pueden ser modificados para mejorar la calidad de los resultados; en nuestro caso, es bien conocido que la disponibilidad de material proveniente de especies promisorias amaznicas no siempre es ptima. La gua consta de 49 ensayos, de los cuales la mayora son aplicables a la especie problema que va a trabajar cada grupo y deben desarrollarse en forma obligatoria (sin asterisco) en las horas programadas de laboratorio o en horas de dedicacin adicionales del estudiante Existen otros ensayos sencillos, que surgen como opcionales (marcadas en el contenido con un asterisco) para que el estudiante tenga la oportunidad de experimentar en relacin a algn proceso fisiolgico vegetal, aunque carezca en el momento de material vegetal de su especie de trabajo.
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Para un ptimo rendimiento y apreciacin de la materia en su forma experimental, recomiendo al estudiante leer las prcticas con una semana de anticipacin y hacer el correspondiente ejercicio grupal previo para la organizacin, entendimiento y articulacin terica de cada prctica. Los ejercicios de anlisis y discusin para la realizacin de informes de laboratorio, debern ser apoyados con bibliografa universitaria especializada (revisar el programa de la asignatura). Los objetivos especficos en cada informe de laboratorio debern ser propuestos por los estudiantes, con el fin de reafirmar el para qu de un determinado experimento de fisiologa vegetal. Finalmente, se espera que el estudiante mantenga un conocimiento constante de las fechas de entrega de informes, ya sea por informacin publicada en el programa de la asignatura, o por confirmacin hablada del docente. 2. OBJETIVOS - Obtener la mayor informacin posible, sobre la fisiologa de diferentes especies vegetales amaznicas. - Conocer las metodologas ms comunes para el estudio de la fisiologa de plantas. - Ampliar el conocimiento existente sobre las especies problema, aunando informacin preliminar sobre las estrategias adaptativas - Promover la creacin de un grupo de investigacin en fisiologa vegetal.
3. PROCEDIMIENTO 3.1 SEMILLAS - Siembra de semillas en germinadores - Curva de Imbibicin - Prueba de Vigor - Prueba de viabilidad - Procesos de escarificacin - Efecto de la temperatura sobre la germinacin - Efecto de la luz sobre la germinacin - Porcentaje de germinacin - Caracterizacin general de la semilla 3.2 BALANCE HDRICO - Contenido de agua en la planta - Agua actual y agua de saturacin - Suculencia - Relacin entre la cantidad de agua en biomasa y el estado de - desarrollo - Agua de saturacin - Capacidad de campo - Punto de marchitez permanente - Mtodo de coloracin de Shardakov 3.3 NUTRICIN - Caracterizacin fsica del suelo www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
- Medicin de pH del suelo - Efecto del NaCl y el CaCl2 en las clulas - Efecto de la eficiencia de macro y micronutrientes en los indicadores - de salud de una planta 3.4 CRECIMIENTO Y DESARROLLO - Establecimiento, mantenimiento y muestreo de un cultivo - Determinacin del rea foliar - Cambios en las ratas de crecimiento - Efecto de la luz sobre el desarrollo de la plntula 3.5 TRANSPORTE Y TRANSPIRACIN - Observacin y cuantificacin de estomas - Determinacin de la transpiracin estomtica usando un papel - impregnado en CoCl2 - Capilaridad - Velocidad de transporte de fluidos a travs del xilema - Flujo de fluidos a travs del xilema - Marchitez y transpiracin 3.6 FOTOSNTESIS - Caracterizacin del tejido foliar - Cuantificacin de Clorofilas - Determinacin del espectro de absorcin de la planta problema - Determinacin del Punto de compensacin de luz
3.7 RESPIRACIN - Absorcin de oxgeno en semillas - Mtodo de Sach para medir fotosntesis y / o respiracin - Produccin de CO2 por las races - Influencia del oxgeno en la respiracin - Cuantificacin de la respiracin aerobia por el mtodo colorimtrico 3.8 REGULACIN HORMONAL Y EFECTO DE HERBICIDAS - Dominancia apical y abscisin de hojas - Papel de las Giberelinas en la germinacin - Hormonas y crecimiento en el cultivo - Hormonas y crecimiento en la especie problema - Efecto de 2,6 diclorofenolindol en el transporte de electrones - durante la fase luminosa de la fotosntesis 3.9 ESTRATEGIAS ADAPTATIVAS - Reconocimiento de la heterogeneidad ambiental - Informacin de las adaptaciones por ambiente - Medicin de algunas variables en campo - Trabajo en laboratorio
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE BIOLOGA PRACTICA DE LABORATORIO FISIOLOGIA VEGETAL 1. FUNDAMENTOS MORTANDAD La semilla es la estructura de la cual depende una planta superior para sobrevivir. Para cada especie, los requerimientos mnimos para que sus semillas germinen son distintos, y por la misma razn el conocimiento de los patrones de germinacin, las respuestas a diferentes factores y los recursos de los cuales dispone la semilla, es necesario para llegar a una caracterizacin fisiolgica de las especies. Al caracterizar la semilla de acuerdo a estos aspectos, es posible conocer los patrones regenerativos de las especies, y de cierto modo, la adaptabilidad que han tenido que desarrollar para germinar y sobrevivir bajo las condiciones en las que la planta normalmente crece. Para determinar a cual tipo pertenece la semilla de una determinada planta, se requiere de informacin comprobada, de viabilidad, de vigor, y las respuestas a procesos de escarificacin, entre otros. SOBRE SEMILLAS: GERMINACIN Y
2. OBJETIVO GENERAL Establecer, por diferentes mtodos, cunto potencial regenerativo presentan las semillas de diferentes especies de la Amazona, en condiciones estndar. 3. MATERIALES Y REACTIVOS Semillas especies** Hipoclorito decol** Cloruro de de de al diferentes Sodio o Vasos de plstico o icopor** Pipetas de 10 ml Vasos de precipitados de 100 o 20 ml Papel aluminio** Un royo de papel toalla** Papel celofn** Tierra de buena calidad Lija** Alfileres** Estuche de diseccin** Cajas de Petri, bandejas plstico o cubetas de plstico
trifenil 20%,
tetrazolium Acido sulfrico 10% y 5% Sudan III en gotas Lugol Reactivo de Biuret Agua destilada Termmetro Balanza Fuentes de luz Estereoscopios
de
microscopios **a cargo del estudiante
4. PROCEDIMIENTO Programacin para 2 sesiones de laboratorio 4.1 Mtodos de asepsia En todos los ensayos de semillas debern tomarse las medidas ms aspticas posibles; limpiar previamente los mesones, las cajas de Petri y bandejas para sembrar, con hipoclorito de sodio. Este mismo compuesto, en disoluciones bajas (1% y 2% durante 5 a 10 minutos), pueden emplearse para esterilizar las semillas. Permanentemente el estudiante deber usar toallas de papel limpias, y fsforos o encendedor para encender mecheros (en el caso de semillas altamente frgiles al ataque microbiano). Si se minimiza el error potencial por manejo de las muestras, se obtendrn mejores resultados. 4.2 Almacenamiento de semillas
Si las semillas deben conservarse durante un tiempo antes de la prctica, intentar mantenerlas lo mas secas posible; debern usarse sobres de papel limpio, seco y grueso (en condiciones de Florencia es posible secarlo un poco con calor antes de usar), no llenar los sobres con demasiadas semillas, y asegurarse que stas estn razonablemente secas antes de almacenarlas en un sitio oscuro y resguardado de cambios fuertes de temperatura (preferiblemente a bajas temperaturas, para evitar la proliferacin microbiana).
Tabla 1. Diferentes tipos de clasificacin de semilla

CARCTERSTICA PROPIEDAD DE LA SEMILLA La semilla puede vivir muy poco tiempo, unas pocas semanas o 1. Tiempo de vida de una semilla incluso das. La semilla est dotada para mantenerse por un tiempo de varias semanas, meses, o incluso aos. Los cotiledones y el hipoctilo 2. Posicin del hipoctilo y los primordios cotiledonares durante la germinacin 3. Capacidad de las semillas de permanecer latentes durante perodos prolongados de tiempo La germinacin de la semilla responde a seales de cantidad de 4. Respuestas a la luz luz (fotones), o de tipos de luz (longitudes de onda) La semilla germina igual en diferentes condiciones de luz La semilla es incapaz de germinar, porque se ha degenerado durante el proceso evolutivo de la especie. FOTOSENSIBLES Semillas con alta capacidad DORMANTES permanecen por debajo de la superficie del suelo El hipoctilo sobresale del suelo o permanece a ras y los cotiledones dan lugar a las primeras hojas Semillas con poca capacidad PERSISTENTE TIPO EFMERA
DE GERMINACIN HIPGEA DE GERMINACIN EPGEA NO DORMANTES
NO FOTOSENSIBLES RUDIMENTO SEMINAL
5.Capacidad de regenerar la especie
La semilla tiene potencial para regenerar la especie
NORMAL O ACTIVA
4.3
Seguimiento cronolgico
Siempre llevar un registro escrupuloso de fechas, tratamientos, tiempos, y datos, mediciones u observaciones hechas. Siembra de semillas en germinadores Sembrar un lote de 50 a 150 semillas de la especie problema en una bandeja o cubeta de plstico, en tierra de buena calidad. La capa de suelo deber tener entre 3 y 7 cm de profundidad, dependiendo de la especie a sembrar. Regar peridicamente, con las mismas cantidades de agua, anotar cada 2 o tres das, tanto los tratamientos como los eventos de germinacin, salud de la plntula, mortandad de semillas, etc. Los individuos de esta siembra sern usados para las prcticas de crecimiento, porcentaje de germinacin, vigor de la semilla, y efecto hormonal, entre otras. Curva de Imbibicin Pesar 30 a 50 semillas, sembrar en cajas de Petri, previamente acondicionadas con papel filtro o toalla humedecido con 10 a 20 ml de agua destilada (dependiendo del tamao de la semilla). Pesar las semillas cada hora, hasta que la biomasa llegue a ser constante. Prueba de vigor Usar un grupo de 30 a 50 semillas (tambin pueden usarse las semillas del numeral anterior) para registrar el nmero de semillas www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
germinadas, haciendo observaciones cada 2 o 3 das, hasta el momento en que ya no se registren germinaciones. Retirar las semillas que muestren procesos de pudricin, y humedecer peridicamente con cantidades iguales de agua. Obtener as la velocidad de germinacin en # de semillas/da. Deber medirse con cuidado la biomasa de las semillas germinadas, y transplantadas en tierra. Los datos de vigor debern compararse con los registrados en las semillas del ensayo 1.1. Prueba de viabilidad Poner en imbibicin un lote de 20 semillas, escogidas al azar, 18 a 24 horas antes de la prctica. En laboratorio se debern hacer cortes longitudinales de las semillas, que dejen al embrin expuesto. Verter en una caja de Petri 10 20 ml de cloruro de trifenil tetrazolium 1%, y colocar en esta una de las mitades de cada semilla, teniendo en cuenta que los embriones estn en contacto continuo con el reactivo. Envolver la caja de Petri y guardar en un sitio oscuro durante 4 a 6 horas, al cabo de las cuales se observarn los embriones y contar el nmero de mitades con tincin roja total, con tincin parcial, y sin tincin. Obtener el porcentaje correspondiente. Procesos de escarificacin Someter un lote de 30 a 50 semillas a cada uno de los siguientes tratamientos durante dos minutos: H2SO4 20%, H2SO4 10%, y H2SO4 5%. Posteriormente se debe lavar las semillas con abundante agua, sembrar en suelo o en cajas de Petri, y registrar cada 2 o tres das la germinacin. www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Efecto de la temperatura sobre la germinacin Sembrar un lote de 30 a 50 semillas en las condiciones estndar en caja de Petri, y colocarlo en nevera a temperaturas alrededor de 5C. Realizar observaciones y seguimiento de germinacin, cada dos o tres das. Efecto de la luz sobre la germinacin Sembrar tres lotes de 30 a 50 semillas en vasos o recipientes de icopor, bajo alguno de estos tres tratamientos: - bajo luz constante - en fotoperodo con papel celofn rojo - en fotoperodo con papel celofn azul *
en condiciones de oscuridad o en fotoperodo con otro color de
papel. - *En luz continua. Porcentaje de germinacin El porcentaje de germinacin, corresponde a: proporcin definitiva de semillas germinadas X 100. Deber determinarse tanto para las semillas del germinador en suelo, como para las semillas usadas en otros ensayos. Cada semilla germinada deber ser transferida a tierra, (no sin antes hallar la biomasa de la plntula) en bandeja o en vasos anchos, rotulando siempre la historia o el origen de cada grupo de semillas. Comparar los diferentes resultados.
*
opcional
j Caracterizacin general de la semilla Cada grupo de trabajo deber usar las mitades de semilla restantes del ensayo 1.4, para hacer una caracterizacin fsica (medicin), morfolgica (forma de la semilla y del embrin, (diferenciacin de los de la especie tejidos Se anatmica (usando finos celulares) y bioqumica recomienda hacer
colorantes que evalen la presencia de almidones, lpidos o protenas) problema. cortes longitudinales y hacer montajes al microscopio con diferentes colorantes: a) La tincin de los tejidos con azul de lactofenol permite evidenciar diferencias endospermo. b) Al aplicar 2 o 3 gotas de sudan III, una coloracin roja del endospermo indica almacenamiento de lpidos. c) Una coloracin oscura del endospermo al aplicar 1 o dos gotas de lugol, indica presencia de almidn. d) Prueba de Biuret: Macerar el endospermo de 1 a 5 semillas (dependiendo del tamao) en solucin de NaCl 5%, agitar por 5 minutos y llevar a volumen de 10 ml. Centrifugar a 2500 rpm durante 5 minutos, guardar el sobrenadante y repetir el proceso www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet generales entre las clulas del embrin y el
una vez ms con el residuo. Mezclar las dos extracciones obtenidas y aplicar poco a poco reactivo de Biuret recin preparado; si se presenta un cambio de color a violeta o azul oscuro se comprueba la presencia de protenas como albminas y globulinas. El residuo final puede ser centrifugado de nuevo una o dos veces con NaOH al 0.25% y si el sobrenadante reacciona positivo al Biuret, se comprobar la presencia de glutelinas. 5. PREGUNTAS
- Qu otras clasificaciones de semilla se han propuesto? - Qu otros colorantes vegetales sirven para determinar la presencia de grasas, azcares simples, polisacridos y protenas en los tejidos de la semilla? - Identifique el tipo de embrin de la especie problema de su grupo de trabajo, de acuerdo a la clasificacin de Martin (1946; en Baskin y Baskin, 2001). - Proponga uno o dos ejemplos (ojal de la Amazona) de cada tipo de semilla planteado en la tabla 1.
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE BIOLOGA PRACTICA DE LABORATORIO FISIOLOGIA VEGETAL 1. FUNDAMENTOS SOBRE BALANCE HDRICO Los contenidos de agua en el suelo dependen del tipo de suelo y de sus estructura. Las molculas de agua que son retenidas en el suelo, permanecen adheridas a la superficie de las partculas que lo conforman, por lo tanto entre mayor superficie ofrezcan las fracciones del suelo, mayor retencin de agua. El agua en exceso, drena por los espacios intersticiales de la matriz coloidal formada por suelo y agua. Tabla 2. Caractersticas fsicas de diferentes suelos (Taiz y Zeiger, 1998): SUELO Arena gruesa Arena fina Limo Arcilla PARTCULA (m) 2000-200 200-20 20-2 <2 AREA SUPERFICIAL /gr (m2) <1-10
10-100 100-1000
El agua es la sustancia esencial para el funcionamiento de las plantas. Es usada durante el transporte de molculas desde la raz hacia las hojas, y posteriormente, desde las hojas a cualquier parte de la planta; de las cantidades en las que el agua est presente en el
suelo, dependen la turgencia de los tejidos, las tasas de transpiracin y fotosntesis, la disponibilidad de nutrientes, y por ltimo, el potencial de germinacin de las semillas. Sin embargo, esta sustancia resulta estar en cantidades fluctuantes en la naturaleza; la planta, por lo tanto, deber regular sus procesos fisiolgicos, dependiendo de los contenidos de humedad en el suelo o en el aire, y del buen uso que haga de ellos, depender su sobrevivencia.
Algunos conceptos importantes en el estudio del manejo hdrico son los siguientes: Humedad relativa: Porcentaje de vapor de agua en la atmsfera, el cual vara dependiendo del rgimen climtico, de la hora del da y de la altitud en un sitio determinado. Suculencia: Es la cantidad de agua que se puede almacenar en la unidad de rea (generalmente es de 1cm2) de tejido foliar. Punto de marchitez permanente: porcentaje de agua en el suelo por debajo de la cual ninguna planta marchita se recupera. Saturacin de agua: estado en el cual se ha sometido al suelo o a un tejido a mas cantidades de agua de las que puede retener. Capacidad de campo del suelo: es la mxima cantidad de agua (%) que puede retener el suelo. Potencial de agua ( H2O): es un estimador indirecto de la cantidad de agua libre para realizar un trabajo, es decir, para desplazarse.
2. OBJETIVO GENERAL
Conocer los mtodos ms comunes por los cuales es posible cuantificar el balance hdrico del sistema suelo-planta-ambiente. 3. MATERIALES

Cajas de Petri
5 plntulas de 20 40 cm de
altura** Vasos de precipitados (1000 ml) Ramas de adultos vegetativos y Soporte universal con aro Decol** Agua destilada Cilindros para suelo Papel filtro Balanza Bistur** Estufa Calculadora** Papel toalla** de adultos en

flor o en fruto** Cubetas de plstico Bandas de caucho** Malla plstica o tul
de
poro
ancho** Matera con tierra y malla de fondo** Tijeras** Papel aluminio** Papel peridico** Marcadores indelebles** Cinta de enmascarar** Metro**
Papel milimetrado** ** a cargo del estudiante
4. PROCEDIMIENTO Programacin para una sesin de laboratorio
Manejo del material vegetal En la realizacin de todos los ensayos, ser fundamental la correcta manipulacin del material vegetal. Se deber evitar al mximo someter a la planta a presin, doblamiento o movimiento drstico de las planta o de sus estructuras. Cualquiera de estas actividades podra afectar la estabilidad de los tejidos de la planta, ablandando los tejidos o induciendo a estrs fisiolgico. Manejo del suelo La acumulacin de agua en el suelo depende de su estructura. Propiedades como la porosidad pueden afectarse al comprimir las muestras de suelo en los cilindros, y como consecuencia los valores resultantes en cuanto a porcentajes de agua de saturacin y capacidad de campo, podran presentar un margen de error superior al 10%. Contenido de agua en los rganos de la planta Usar dos plntulas de la especie problema (menores a 40 cm), hacer mediciones del eje caulinar y de la raz, contar el nmero de hojas y hacer la correspondiente separacin de las diferentes partes. Hallar el rea foliar de 3 hojas en cada planta, elegidas al azar. Hallar la biomasa de los diferentes rganos (raz, tallo, hojas), envolverlos en papel peridico y ponerlos en estufa a 80C durante 24 horas. Hallar la biomasa seca y calcular el % de humedad por separado y en general para toda la planta.
Evaluar si existe alguna relacin entre la longitud e la planta y los contenidos de agua.
Agua en las hojas Agua actual y agua de saturacin Usar 5 hojas pecioladas de la planta problema, para hallar el rea foliar y la biomasa fresca. Llevarlas a una cmara hmeda, en un sito de baja iluminacin, y acomodarlas de tal modo que los pecolos permanezcan sumergidos durante dos o tres horas. Posteriormente, retirar las hojas y hallar de nuevo la biomasa. Empacar las hojas en papel peridico, secar en estufa a 80 C durante 24 horas y hallar la biomasa seca.
biomasa fresca inicial - biomasa seca
% agua actual = * 100

biomasa fresca inicial
biomasa fresca final - biomasa seca
% agua de saturacin = *100

biomasa fresca final
masa de agua actual
% agua relativa = *100 masa de agua de saturacin
1. Suculencia Usar varias hojas de la especie problema para extraer fracciones de hoja de 1 cm2 de superficie, manipulando el material con delicadeza, para evitar daos en los tejidos. Luego de hallar la biomasa de 15 a 20 de estas fracciones, colocarlas en una caja de Petri con agua destilada durante 1 a 2 horas. Secar las fracciones a 80C hasta peso constante, hallar la biomasa seca y calcular la suculencia como cantidad de agua de saturacin / cm2. 2. *Relacin entre la cantidad de agua en biomasa y el estado de desarrollo Repetir los procedimientos 2.2 y 2.3, para hojas del rbol adulto y para rboles en reproduccin. Comparar los resultados obtenidos. Agua en el suelo Elegir antes de la prctica un sitio en campo para tomar las muestras de suelo, preferiblemente en lugares en donde crece la especie problema. Usar cilindros metlicos con tapa, pesarlos previamente y tomar muestras de suelo superficial y a 20 cm de profundidad. La muestra deber ser lo menos manipulada posible, antes de hallar la masa total de la misma (m1).
3. Agua de Saturacin:
Cubrir la base de las muestras anteriormente descritas con papel filtro, y fijar en el fondo del cilindro un trozo de malla plstica, de tal modo que el suelo permanezca dentro del cilindro pero pueda absorber humedad. Posteriormente colocar el cilindro con suelo en una bandeja o recipiente ancho con agua en el fondo. Dejar el montaje durante dos horas, al cabo de las cuales se retirar el papel y la malla, para hallar la biomasa final con tapa (m2). 4. Capacidad de campo: Colocar posteriormente los cilindros con suelo sobre una malla de plstico apoyada en un soporte universal, de tal modo que se precipite el agua en exceso. Hallar el peso de la muestra una vez se haya detenido la cada de agua (m3). Finalmente, llevar los cilindros con suelo a un horno a 80 90 C hasta que las muestras presenten una masa constante; determinar entonces el peso seco (m4).
m2 m4
% agua de saturacin = *100 m2

m1 m4
% agua actual en el suelo = *100 m1

m3 m4
% agua en capacidad de campo = *100 m3
Comparar los resultados entre suelo superficial y suelo profundo. Punto de marchitez permanente Usar una planta sembrada con anterioridad, en una matera (que presente salidas de agua en el fondo) con el suelo evaluado en el numeral 3 y regar con abundante agua. Dejar el sistema en reposo sobre malla en soporte universal, hasta que se detenga la precipitacin de agua (4-6 horas); hallar la masa del sistema en capacidad de campo. Posteriormente, deber taparse la superficie del suelo con papel aluminio, de tal modo que el agua que escape lo haga casi exclusivamente a travs de la planta (transpiracin); hallar la biomasa cada hora, durante 8 horas, al cabo de los cuales se proceder a quitar el papel y esperar hasta los primeros indicios de marchitez en la planta. A partir de ese momento, se deber transferir la matera a una cmara hmeda, para averiguar si la planta an puede recuperarse. Si la planta se recupera, podr ser llevada de nuevo a un semillero en ausencia de agua, hasta que se reinicien los sntomas de marchitez. La cantidad de agua en el suelo a la cual ya no es posible que la planta problema se recupere de la marchitez, es conocido como punto de marchitez permanente. Para conocer este valor, se necesitar conocer la masa seca final del sistema.
La
masa
inicial
de la
planta
podr
estimarse haciendo
una
extrapolacin de los datos obtenidos en el numeral 1. *Mtodo de Coloracin de Shardakov (Fernndez, 2004) Este mtodo consiste en sumergir muestras de tejido vegetal durante algn tiempo en un gradiente de concentracin, de soluciones de sacarosa, manitol o polietiln glicol. La soluciones ganarn o perdern agua, esto depende del potencial de agua (
H2O
) del tejido
(disminuye y aumenta su densidad respectivamente). Si la densidad de la solucin no cambia, esto indica que el tejido y la solucin tienen el mismo H2O. 5. MATERIALES: Hojas de la especie problema 10 tubos de ensayo Pipetas Pasteur Cuchilla o bistur Soluciones de sacarosa 0.1M, 0.2M, 0.3M, 0.4M y 0.5M Pinzas 6. PROCEDIMIENTO: Llenar dos tubos de ensayo con 15 ml de cada una de las 5 soluciones de sacarosa; a uno delos tubos de cada pareja se le deber agregar 1 a 2 gotas de azul de metileno. Cortar cuadrados de 1 cm de lado del tejido foliar y sumergir tres fragmentos en cada uno de los 5 tubos sin colorante, tapar con papel parafilm y esperar hora y media. www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Una vez cumplido el tiempo, sacar con pinzas las muestras de tejido foliar de cada uno de los tubos y desecharlas. Tomar una pipeta Pasteur y colocar una gota de la correspondiente solucin coloreada a unos 3 cm de profundidad en la solucin donde se sumergi el tejido. Observar si la gota liberada se sumerge (la solucin patrn es mas densa), flota (la solucin patrn es menos densa) o permanece suspendida y tiende a difundirse (los valores H2O iguales). Para la discusin de este ensayo, es necesario investigar el potencial de agua de las diferentes soluciones de sacarosa. tienden a ser
7. PREGUNTAS 1. El pH en el suelo influye en el potencial hdrico del mismo? cmo? 2. Cul es el papel de la edafofauna en la capacidad de almacenamiento de agua del suelo? 3. Qu es y como se origina el agua subterrnea? 4. El agua subterrnea es usada por las plantas?
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE BIOLOGA PRACTICA DE LABORATORIO FISIOLOGIA VEGETAL 1. FUNDAMENTOS DE NUTRICIN El suelo es un reservorio de elementos libres y compuestos con carga, denominados iones. Un vez se presenta la germinacin de una semilla, la primera funcin fisiolgica que debe cumplir la nueva plntula es la nutricin, proceso durante el cual la raz es capaz de incorporar en sus tejidos los aniones (carga negativa) y cationes (carga positiva) del suelo, transportarlos desde las clulas epidrmicas hasta el tejido conductor, y finalmente conducirlos a lo largo del eje caulinar hasta las hojas. Las cantidades de nutrimentos asimilados por la planta son decisivos para su desarrollo y funcionamiento; la participacin de los elementos qumicos de estos nutrimentos en el cuerpo fsico de una planta, incluye desde la formacin misma de los tejidos fundamentales, hasta la permanencia en su forma inica para mantener los gradientes de osmorregulacin de las clulas (tabla 3).
Tabla 3. Clasificacin bioqumica de los nutrientes vegetales (de acuerdo a Taiz y Zeiger, 1998).
Funcin bioqumica Nutrientes que forman los componentes biomoleculares de la planta GRUPO 2 Nutrientes que son de importantes o la para el P, B, Si Elementos N, S
GRUPO 1
almacenamiento GRUPO 3 GRUPO 4
energa
integridad K, Na, Mg, Ca, Mn, Cl de Fe, Cu, Zn, Mo, Ni
estructural Nutrientes que permanecen en forma inica Nutrientes involucrados en la transferencia electrones y actividad enzimtica.
Las formas inicas en las cuales estos elementos son absorbidos por los vegetales, estn resumidas en la tabla 4. No en todos los casos la forma en la cual los elementos esenciales estn presentes en el suelo, son compuestos qumicos que la planta pueda asimilar; siendo muy comn la accin de microorganismos como los hongos vesiculoarbusculares y las bacterias nitrificantes como facilitadores del proceso de toma de sustancias para la planta. esto se realiza gracias a relaciones simbiticas microorganismo planta, en las cuales generalmente los primeros reciben a cambio carbohidratos altamente energticos. Bajo condiciones experimentales, es posible reemplazar el reservorio de nutrientes del suelo o la tierra por una solucin acuosa de diferentes sales que contienen los elementos esenciales; esta tcnica de cultivo vegetal es conocida como hidropona. La cantidad de los www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
nutrientes presentes en la solucin debe estar en un rango acorde con los ptimos de asimilacin de la planta, ya que si el elemento est en concentraciones demasiado bajas, no suplir los requerimientos mnimos de nutricin; en contraposicin, si las
concentraciones del elemento son demasiado altas, los niveles de la sustancia pueden incluso alcanzar el grado de toxicidad para la planta. Tabla 4. Elementos esenciales para la mayora de las plantas superiores y concentraciones internas que se consideran adecuadas (Tomado de Salisbury, 1994). FORMA ELEMENTO Molibdeno Nquel Cobre Cinc Manganeso Boro Hierro Cloro Azufre Fsforo Magnesio Calcio Potasio Nitrgeno Oxgeno Carbono Hidrgeno SMBOLO Mo Ni Cu Zn Mn B Fe Cl S P Mg Ca K Ni O C H DISPONIBLE A LA PLANTA MoO4-2 Ni2+ Cu+ Cu+2 Zn+220 Mn+2 H3Bo3 Fe+2 Fe+3 ClSO4-2 H2PO4- H2PO4-2 Mg+2 Ca+2 K+ NO3- NH4+ O2 H2O CO2 H2O Mg/Kg 0.1 6 20 50 20 100 100 1000 2000 2000 5000 10000 15000 450000 450000 60000 CONCENTRACIN EN MASA SECA % 0.00001 0.0006 0.0020 0.0050 0.002 0.010 0.010 0.1 0.2 0.2 0.5 1.0 1.5 45 45 6
2. OBJETIVO 2.1 OBJETIVO GENERAL
Determinar el efecto de la concentracin y deficiencia de algunos elementos esenciales en las propiedades del suelo, la osmoregulacin celular, y en los indicadores de salud de una planta: biomasa seca, rea foliar, longitud del eje caulinar, produccin de hojas, marchitez y enfermedad 3.

MATERIALES pH-metro Vasos de precipitados de 250 ml Agitadores de vidrio Pipetas de 10 ml Cajas de Petri Papel aluminio**

Cuchillo de campo** Metro** Marcador** 7Frascos oscuros de 200
a 300
ml** 7 plntulas menores de 15 cm de longitud de la sp problema (lo mas homegneas posible)** 7 pitillos** garrafas de plstico de1 galn** Fsforos o encendedor** pala pequea de jardinera**
Tubos de ensayo Gradilla Vasos de precipitados de 1000 ml Papel normal o milimetrado** ** a cargo del estudiante

REACTIVOS Agua destilada www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Hipoclorito de Sodio** al 2% Soluciones de NaCl 0.75M (80 ml) CaCl2 0.75M (80 ml) Soluciones de KNO3 1M (150ml) Ca(NO3)24H2O 1M (100 ml) NH4H2PO4 1M (50 ml) MgSO47H2O 1M (50 ml) Na2SO4 1M (30 ml) Micronutrientes: Para 250 ml de solucin: 0,05 gr de KCl 0,16 gr de B(OH)3 0,10 gr de MnCl4H2O 0,02 gr de ZnSO4 0,02 gr de CuCO 45H2O (o de CuSO45H2O) 0.01 gr de H2MoO4 (o 0,08 mM) 0.6g de Fe (en EDTA o algn quelato de Fe) 0.02 de Al2SO4)3 0.12 de Co(NO3)26H2O 0.02 gr. de NiSO47H2O
4.
PROCEDIMIENTO
Programacin para una sesin de laboratorio 4.1 Caracterizacin y pH del suelo
En sitios donde se halla registrado precipitacin 24 horas antes, extraer cubos de 5 cm X 5 cm de superficie) de 4 tipos de suelo, de origen, coloracin y textura diferentes, incluyendo, si es posible, el suelo en el cual crecen las especies problema que se han caracterizado en las prcticas anteriores. Marcar los sitios donde se realiz el muestreo, para repetirlo en das de lluvia. Caracterizacin fsica del suelo: El suelo deber ser conducido en el menor tiempo posible al laboratorio para la evaluacin del pH. Inicialmente, deber tomarse un poco de suelo entre los dedos para hacer una caracterizacin de la textura del suelo, del siguiente modo: - Si al palpar la muestra no es posible distinguir ninguna partcula, el material se extiende y tiende suavemente a teir sobre los los dedos el (como es mantequilla) dedos, suelo
predominantemente arcilloso. - Si la prueba de tacto no es positiva o es muy dbil y el material al ser comprimido entre los dedos se vuelve pegajoso (como la greda), posiblemente hay presencia de limos es mas del 25%
- Si las partculas son notorias al tacto, de consistencia gruesa y hay desmoronamiento al comprimir la muestra, el suelo es predominantemente arenoso. - Es posible establecer textura de suelo intermedio de acuerdo a los criterios anteriores. Realizar anotaciones adicionales, como presencia de macroporos y microporos (a simple vista y en estereoscopio, respectivamente), color de las muestras y dureza o compactacin. Medicin del pH Colocar el cubo de suelo en un vaso de precipitados de 250ml y agregar agua destilada hasta donde se completen fracciones aproximadas de 1:1. Homogenizar la mezcla y medir el pH. Hacer el proceso en todas las muestras, y finalmente, medir el pH del agua destilada. Repetir la prueba con muestras de suelo con precipitacin reciente. Resumir en una tabla los resultados obtenidos, tanto en muestras secas como en muestras de lluvia. En estas ltimas no es necesario repetir la caracterizacin fsica. 4.2 Efecto del NaCl y el CaCl2 en las clulas* (3.3)
Cortar 4 trozos de remolacha de 2 cm de largo y lavar con agua destilada hasta eliminar el colorante, colocar cada trozo en un tubo de ensayo, y agregar soluciones as: www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Primer tubo: 8 ml de NaCl 0.75 M Segundo tubo: 8 ml de CaCl2 0.75 M Tercer tubo: 4 ml de NaCl 0.75 M y 4 ml de CaCl2 0.75 M Cuarto tubo: 8 ml de agua destilada Observar y anotar las coloraciones de la solucin y del tejido vegetal: al inicio del ensayo, 30 minutos despus, hora y media despus y 24 horas despus. 4.3 Efecto de la deficiencia de macro y micronutrientes en
los indicadores de salud de una planta (UNAL, 1997) Cada grupo de trabajo deber preparar 5 litros de alguna de las 7 soluciones propuestas en la tabla 5.
Tabla 5. Componentes y cantidades correspondientes (en ml) para preparar 1 Lt de solucin REACTIVO [ ] SOL 1 complet a KNO3 1M Ca(NO3)24H2 1M O NH4H2PO4 1M MgSO47H2O 1M Na2SO4 1M Micronut. Micronut sin Fe 6.0 4.2 1.5 1.5 0.2 2.0 SOL 2 Micronuts 6.0 4.2 1.5 1.5 0.2 SOL 3 SOL -P 6.0 4.2 1.5 0.2 2.0 SOL 5 - Mg 6.0 4.2 1.5 1.7 2.0 SOL 6 - Ca 6.0 1.5 1.5 0.2 2.0 SOL 7 - Fe 6.0 4.2 1.5 1.5 0.2 2.0
- K y - Na 4 4.2 1.5 1.7 2.0
Extraer las plantas sin daar la raz, lavarlas con agua destilada y con solucin de hipoclorito al 2%; los frascos y pitillos debern ser igualmente lavados y desinfectados preferiblemente antes de iniciar la prctica. Cada grupo deber someter sus plantas de trabajo a las soluciones; en el caso de tener menos de 7 plntulas, la escogencia de las soluciones se har dependiendo de la revisin bibliogrfica que se tenga previamente sobre la especie problema. Todos los grupos debern tener una planta bajo solucin control (solucin 1) y una bajo deficiencia de micronutrientes (solucin 2). La cantidad de nutriente
agregado deber oscilar entre 100 y 200 ml, dependiendo del tamao de las plntulas y en particular, de la raz. Sellar el frasco en la parte superior con papel aluminio, para que no escapen nutrientes ni se oxiden, dejando slo espacio para la plntula y el pitillo. Cada frasco deber ser marcado con su respectivo tratamiento, y cada tres das deber airearse la solucin (soplar a travs del pitillo durante unos minutos); cada semana debern ser registrados los siguientes datos: - rea foliar de una o dos hojas (las mismas en todas las revisiones): esta medicin debe hacerse con mucho cuidado para no daar las hojas, usando plantillas en papel de rea conocida. - Crecimiento en longitud del tallo: marcar desde el primer da un punto del tallo de la plntula, con marcador indeleble; esto permitir medir en cada observacin la longitud desde ese punto hasta el pice terminal de la plntula. - Nmero de hojas - Longitud de los entrenudos: Medir los dos ltimos entrenudos de la planta - Apariencia fsica de la planta. - Hacer un formato de apoyo (tabla 6) para el registro de datos generales que evalen el estado de salud de la planta. www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
El seguimiento de la salud de las plntulas podr prolongarse hasta 2 meses, dependiendo de la resistencia de las plantas a las condiciones de deficiencia de nutrientes.
5. PREGUNTAS
Cules son las deficiencias de elementos esenciales ms comunes de los suelos del piedemonte amaznico? Cules son los tratamientos ms comunes para nivelar el pH de un suelo cido? Cul es el efecto de la aplicacin desmedida de fertilizantes en el suelo?
Tabla 6. Ejemplo de un formato para los registros de apariencia fsica. SOLUCIN 1: COMPLETO CARACTERSTICAS Coloracin Hojas Venas de foliares Tallo Firmeza del Dbil Rgido tallo Manchado de Hojas Tallo Necrosis En las hojas margen de
Abril 10 Abril 25 Normal Normal Normal X
En una
Margen las hojas
las hojas hoja En el tallo de Normal X Enrollamient o Normal X Anormal General De las hojas
Yema foliar Marchitamie nto
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE BIOLOGA PRACTICA DE LABORATORIO FISIOLOGIA VEGETAL 1. FUNDAMENTOS SOBRE CRECIMIENTO Y DESARROLLO En el ciclo de vida de una planta, llegar a la adultez es un triunfo que pocos individuos de una misma cohorte de descendientes puede lograr. Los ritmos de crecimiento de un individuo son fundamentales durante la competencia para llegar a ocupar una cobertura de los espacios de luz que se ofrecen en un ecosistema determinado. El crecimiento est influenciado profundamente por 4 factores:
La cantidad de luz que llega al sitio donde la planta est El estatus nutricional del suelo Los efectos intra e Inter- especficos como la predacin y la La temperatura La herencia
establecida

competencia

Existen numerosos evaluadores de las tasas de crecimiento de una planta. A continuacin se enumeran las variables mas usadas en fisiologa vegetal (Fernndez, 2004). www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
AFE Area foliar especfica Relacin entre el rea foliar y la biomasa foliar de la planta
CAF Cociente de rea foliar Relacin entre el rea foliar y el peso total de la planta, expresando as cunta es la proporcin de rea foliar cuya fotosntesis mantiene a todo el individuo
CPF Cociente de peso foliar Es una relacin entre el peso seco de la fitomasa y el peso total de la planta
DAF Duracin del rea foliar ndice que se refiere a la duracin del funcionamiento de la fitomasa, y es necesario para entender el costo energtico de la formacin de
la unidad de superficie foliar de la planta y su produccin de asimilados. IAF Indice de rea foliar
rendimiento en
Relaciona la extensin de la superficie asimilatoria con la superficie del suelo sobre la cual se proyecta. Es un estimador de la magnitud del rea fotosintetizante expuesta por el cultivo a la radiacin solar incidente.
TAN Tasa de asimilacin neta Parmetro que representa el incremento del peso en gramos por rea foliar (en m2), por perodo de tiempo. La tasa de asimilacin neta es una medida directa de la eficiencia productiva de la planta. www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
TFU Tasa foliar unitaria Relaciona el incremento de material vegetal por unidad de material asimilatorio por unidad de tiempo. Este estimador, al igual que la TAN son usados con frecuencia para medir el aumento neto en el peso seco de la planta por rea foliar unitaria.
TC Tasa de crecimiento y TRC Tasa neta de crecimiento Parmetros que representan el incremento en peso del individuo en funcin del peso alcanzado en un momento dado.
v/r Relacin vstago / raz Parmetro que expresa la proporcin de asimilados que entran en la formacin de los rganos areos y subterrneos.
2. OBJETIVO GENERAL Conocer y aplicar los mtodos que permiten estimar el crecimiento de una especie vegetal.
3. MATERIALES Parcela experimental Horno de secado Tijeras podadoras Bolsas de papel
Balanza Papel peridico Cartulina Papel milimetrado Metro o regla
4.
PROCEDIMIENTO
Programacin para una salida de campo Efecto de un tratamiento en el crecimiento de un cultivo Establecimiento, mantenimiento y muestreo del cultivo El curso deber obtener como mnimo 400 semillas de una especie en cosecha. Estas se sembrarn en una parcela (en finca experimental de UNIAMAZONA) de 20X20 m, a distancia de 1m entre semilla y semilla; cada una de ellas deber numerarse o nombrarse con un cdigo para facilitar el registro de informacin. Debern tomarse datos como la fecha de siembra, la calidad del suelo, el rgimen climtico. Una parte de la parcela deber reservarse para la aplicacin de algn tratamiento, como efecto de herbicidas o efecto de hormonas (prcticas del numeral 8) en el crecimiento.
Cada 8 das los grupos se turnarn para atender la parcela, revisar la humedad y registrar el comienzo de la germinacin. A partir del momento en que las plntulas tengan 3 a 4 hojas, comenzar la colecta de los siguientes datos, para 6 individuos escogidos al azar:
Longitud total (desde el pice de la raz principal hasta la yema rea foliar de 3 a 5 hojas, dependiendo del tamao de la planta,
terminal)
elegidas al azar (debe haber representacin de hojas nuevas y hojas antiguas).
Peso seco total y peso seco de cada parte de la planta: hojas,
tallo y raz. Para reducir el rango de error, nunca incluir en el muestreo la plntula mas pequea ni la mas alta. Al final se deber obtener un nico valor de incremento en biomasa, en rea foliar o longitud. Comentarios importantes del desarrollo, como en la
formacin de renuevos, ramificaciones, cambios en la morfologa de las hojas, floracin, etc., al igual que anotaciones sobre alguna planta en particular, tambin deben ser registrados. La ficha en la tabla 7 deber ser llenada a lo largo del seguimiento. Determinacin del rea foliar El curso deber buscar previamente plntulas, juveniles y adultos de la especie que se sembr en la parcela, y cada grupo colectar 10 tamaos de hoja diferentes. Calcarn la hojas sobre papel www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
milimetrado y determinarn el rea foliar en cm 2; posteriormente se recortar la silueta de la hoja en cartulina, escribiendo en ella el rea foliar. Todos los grupos aportarn sus plantillas en cartulina, las cuales servirn para la estimacin del rea foliar en las plantas del cultivo. Resultados Cada grupo de trabajo deber mostrar la tabla de resultados final y realizar los clculos de AFE, CPF, TRC, v/r y ln del incremento en longitud total, y realizar grficas de esas variables en relacin al tiempo de seguimiento. La documentacin fotogrfica del proceso de crecimiento y desarrollo tambin ser de mucha utilidad. Anlisis Este deber enfocarse en el estudio del desarrollo de la especie problema, en la comparacin de las grficas con los patrones tericos de crecimiento vegetal, y en la comparacin con reportes publicados para especies de alta domesticacin (maz, trigo, etc.) Cambios en las ratas de crecimiento 5. OBJETIVO Obtener un patrn logartmico de crecimiento usando germinados de la especie problema www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Tabla 7. Ficha que todo grupo de trabajo debe llenar para el seguimiento de crecimiento y desarrollo
Fecha
14-10-04 21-10-
28-10-
Grupo de trabajo Grupo 2 Plantas muestreada s A2, D5, D8, E1, G9, rea foliar Longitud total Biomasa seca hojas Biomasa seca raz Biomasa seca tallo Biomasa seca total Comentarios J4 36.7 cm2 49.3 cm 39.6 gr 21.1 gr 15.8 gr 76.5 gr Aparici n de ye mas axil are s en G9
04 04 Grupo Grupo 4 3
6. MATERIALES

3 a 5 semillas recin germinadas Marcador indeleble Metro o regla PROCEDIMIENTO
7.
Marcar un punto por detrs del gancho del hipoctilo en crecimiento, y medir la distancia desde ese punto hasta el suelo. Graficar las distancias a las cuales el punto se desplaza en cada intervalo de tiempo de 3 das, durante 3 semanas. Efecto de la luz sobre el desarrollo de la plntula (Fernndez, 2004) 8. OBJETIVO Comprobar que la luz incide notablemente en la morfognesis de las plntulas 9. MATERIALES
Plntulas de maz o de frjol germinadas en : Luz normal Luz deficiente Oscuridad.
Regla
10. METODOLOGA
Examine las plntulas de maz y frjol que han sido germinadas en luz normal, especie. Tabla 8. Formato para la coleccin de datos Especi Parte de la plantula e Grosor del tallo (mm) Largo promedio de hojas (cm) Ancho promedio hojas (cm) Largo del Maz de Luz normal Luz deficiente Oscuridad luz deficiente y oscuridad. Observe su coloracin y haga mediciones del tallo, hojas, etc. segn el cuadro siguiente para cada
mesocotilo
(cm) Color de las hojas Consistencia General Grosor del tallo (mm) Largo promedio de hojas (cm) Ancho promedio hojas (cm) Largo del de
mesocotilo
Frijol
(cm) Color de las hojas Consistencia General Rompimiento del "gancho" cotiledonar
Largo
del
Hipocotilo
(cm) Largo del epictilo (cm) Color Haga una discusin de cmo afecta la luz la morfognesis de plntula. la
11. PREGUNTAS Cules son las especies que menor ritmo de crecimiento tienen y cules las de mayor? Qu importancia tiene la distancia de siembra en el desarrollo de la planta en relacin al uso de la luz? Qu diferencia (ventajas y desventajas) existe entre el crecimiento de una planta domstica, que es subsidiada por el hombre, y una que est sometida a competencia en su ambiente natura?
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1. FUNDAMENTOS SOBRE TRANSPORTE Y TRANSPIRACIN VEGETAL Actualmente, se considera que por cada gramo de carbono fijado durante la fotosntesis, una sola planta pierde entre 250 y 400 gramos de agua. Este fenmeno se produce por la necesidad de la planta de abrir los estomas para tomar el CO2 atmosfrico. La planta resulta ser una fbrica altamente eficiente en la
construccin de sustancias carbonadas, pero su funcionamiento est limitado por las cantidades de agua de las que dispone: durante la sequa, la cantidad de sales disueltas en el suelo disminuye, la diferencia de presin de vapor de agua entre el aire y el suelo aumenta y la planta est presionada a fotosintetizar a costa de la transpiracin. Bajo esas condiciones de estrs hdrico, cada especie vegetal deber desarrollar una estrategia de balance mximo, o escoger entre morir de hambre (reducir la fotosntesis y cerrar estomas) y morir de sed (sintetizar carbohidratos y perder agua). www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Los tejidos vegetales, a diferencia de los tejidos animales, no realizan un reciclaje del agua interna. El ascenso de agua es un proceso constante, donde el agua evacuada asciende en forma de vapor a la atmsfera; en ecosistemas donde la biomasa total es elevada, como el bosque tropical lluvioso, las cantidades de agua que se mueven en el ciclo hdrico suelo - planta -atmsfera se miden en toneladas / ao, y estas masas son decisivas en el rgimen climtico de grandes extensiones continentales. El agua es transportada en sentido vertical y en contra de la gravedad a travs de los tejidos conductores, mediante el fenmeno conocido como capilaridad, gracias al cual las molculas de agua se adhieren a las paredes del capilar, movindose a una velocidad que depende del radio del capilar, del material del capilar, y de la presencia de solutos en el agua. Sin embargo, la capilaridad no es el nico mecanismo que favorece el transporte de sustancias a travs del tallo de la planta. Se podran mencionar otros 4 factores igual de importantes: El gradiente de potencial de agua ( H2O): La presin del agua es mayor en el suelo que en la planta, y mayor en la planta que en el aire. Este gradiente impulsa las molculas libres de agua en sentido suelo planta- aire.
La presencia de macroporos y microporos en el suelo : Estos espacios son un reservorio de gases, que al expandirse empujan las molculas de agua hacia las plantas. El calentamiento diurno estimula un proceso continuo de
evaporacin de agua en la superficie foliar, haciendo a su vez que la planta transfiera agua hacia sus hojas para mantenerlas a una temperatura mas baja y ptima para los ritmos metablicos. El gradiente de solutos: la concentracin de solutos es mayor dentro de los tejidos de la planta, por lo tanto el agua del suelo tiende a entrar para diluirlos. 2. OBJETIVO GENERAL Caracterizar las estructuras directamente relacionadas con la
transpiracin y el transporte de sustancias a travs de una planta problema, y cuantificar en cuanto sea posible estos procesos, para llegar a un diagnstico final del manejo hdrico de la planta. 3. MATERIALES Y REACTIVOS Dos plntulas de la especie problema (una en matera)** Hojas frescas de un adulto de la especie problema**
Hojas frescas de un competidor de la especie problema A ** Esmalte transparente** Cinta adhesiva transparente** Cuchillas ** Tijeras** Clips** Pinzas de diseccin y bistur** Cinta de enmascarar** Papel aluminio ** Vidrio de reloj Incubadora Vaso de precipitados de 250 ml Vaso de precipitados de 50 ml Solucin de CoCl2 al 5%; Solucin de NaCl al 10% Azul de lactofenol Capilares Papel filtro Balanza
** a cargo del estudiante
En caso de que la planta problema se encuentre en sitio abierto, las especies vecinas, que generalmente deben usar los mismos recursos, resultan ser sus competidores.
4.
PROCEDIMIENTO
Programacin para 2 sesiones de laboratorio Observacin y cuantificacin de estomas Extraer muestras de la epidermis de tres tipos de hoja: de la especie problema en estado adulto, de una plntula de la misma especie y de un competidor natural de la especie problema. La extraccin puede realizarse de tres formas distintas: - Una impresin en esmalte transparente - Una impresin en cinta adhesiva transparente - Un corte fino superficial de la hoja En todos los casos, deber hacerse una cuantificacin del nmero de estomas en el rea del campo visual del microscopio, para hacer posteriormente una estimacin del nmero de estomas / cm2 en el haz y en el envs. Tambin deber hacerse una caracterizacin del estoma de la planta problema y el dibujo correspondiente a 40X.
Determinacin de la transpiracin estomtica usando papel impregnado en CoCl2 Usando pinzas, sumergir tiras de papel filtro (el tamao
depender del tamao de las hojas) en una solucin de CoCl 2 al www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
5%; las tiras se pondrn a secar sobre un vidrio de reloj a 80C. Una vez secas, ponerlas en contacto directo con el haz y el envs de por lo menos dos hojas de una planta (especie problema) en matera. Medir el tiempo que gasta el papel en tornar de color. Comparar y analizar los resultados. 1. Capilaridad Colocar en un vaso de precipitados 10 ml de agua destilada. Poner en contacto superficial un extremo de un capilar de dimetro conocido, registrar la altura a la que sube la columna de agua, y si es posible, el tiempo en el cual se da este ascenso. Repetir el mismo procedimiento para una solucin de NaCl al 10%. Tomar un vstago de la planta problema, cortar en un punto medio del tallo, esperar que suba la savia de la planta a la superficie, y repetir el contacto con el capilar. Realice una tabla de los resultados, comparndolos con la frmula
1.49 x 10-6 m2 C= r
Donde C: altura de la columna r: radio del capilar
2. Velocidad de transporte de fluidos a travs del xilema www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
En una plntula sembrada o en agua, deber realizar un corte diagonal o en forma de cua (puede ser la misma a la cual realiz el ensayo de capilaridad en el numeral anterior); separar las partes. A la parte inferior se le debe poner una o dos gotas de cristal violeta, tiendo la savia; posteriormente se deber acoplar de nuevo las partes de la planta, ajustndolas con cinta, y se esperar 1 minuto, al cabo del cual deben hacerse diferentes cortes, a diferentes niveles de la plntula, para identificar la altura hasta la cual ascendi el colorante por los vasos conductores. Determinar la velocidad a la cual ascendi la sustancia, en cm / seg. 3. Flujo de fluidos a travs del xilema Hacer diferentes cortes transversales finos del tallo de la plntula del ensayo anterior, para cuantificar los vasos del xilema y estimar el dimetro promedio de estos vasos haciendo la correspondiente medicin a por lo menos tres de ellos. Con estos datos y los del numeral anterior, es posible conocer el flujo de la savia a travs de la planta problema, el cual se puede medir en cm3 / seg. 4. Marchitez y transpiracin
Usar un planta sembrada con anterioridad, en una matera que presente salidas de agua en el fondo; regar hasta capacidad de campo y hallar el peso del sistema. Posteriormente, deber taparse la superficie del suelo con papel aluminio, de tal modo que el agua que escape lo haga casi exclusivamente a travs de la planta; dejar el sistema en reposo, bajo la influencia de una fuente de luz constante y hallar la biomasa cada hora, durante 8 24 horas, registrando sometida la planta. Comparar los resultados con la informacin obtenida para la misma especie, en el ensayo 4 de la prctica de balance hdrico. 5. PREGUNTAS Investigue alguna forma de clasificacin de los estomas adems la temperatura a la cual est
(morfolgica o fisiolgica), y ubiquen su planta problema en el tipo indicado. - Porqu la fotorrespiracin est relacionada con la apertura estomtica?
1. FUNDAMENTOS SOBRE FOTOSNTESIS Los organismos fotosintticos resultan ser los nicos con la
capacidad de fabricar compuestos carbonados a partir de fuentes inorgnicas. Este proceso debe cumplir con diferentes reacciones bioqumicas, desde la obtencin gratuita de energa qumica usando agua y fotones de la luz solar, hasta la fijacin de molculas de CO 2 en compuestos tricarbonados. Para la realizacin de esta ruta anablica son necesarios varios componentes, presentes en el cloroplasto (aunque algunos otros son transportados desde el citoplasma, por ej: el ortofosfato) como la presencia de pigmentos, el complejo transportador de electrones o complejo citocromo, las protenas de membrana interna, un gradiente electroqumico y las enzimas del ciclo de Calvin (figura 1). En el caso particular de los pigmentos fotosintticos, es posible identificar las cantidades en las cuales estn presentes y su espectro de absorcin, determinando los valores de absorbancia o
transmitancia, usando un espectrofotmetro. La relacin entre las dos variables, puede observarse en la Tabla 7 2. OBJETIVO GENERAL Realizar la cuantificacin de diferentes variables relacionadas con la cantidad de luz absorbida, y el rendimiento fotosinttico de la planta problema, mediante la aplicacin de mtodos de espectrofotometra y fisiologa vegetal
Tabla 9. Relacin entre transmitancia (%T) y absorbancia o Densidad ptica (D) en fotocolorimetra (tomado de Wawk, et al., en: Meja, 2002) T(% ) 100 99 98 97 96 95 94 93 92 91 90 89 D T(% D T(% D T(% D 0.60 2 0.62 0 0.63 8 0.65 8 0.67 8 0.69 9 0.72 1 0.74 5 0.77 0 0.79 6 0.82 4 0.85
) 0.00 75 0 0.00 74 4 0.00 73 9 0.01 72 3 0.01 71 8 0.02 70 2 0.02 69 7 0.03 68 2 0.03 67 6 0.04 66 1 0.04 65 6 0.05 64 1
) 0.12 50 5 0.13 49 1 0.13 48 7 0.14 47 3 0.14 46 9 0.15 45 5 0.16 44 1 0.16 43 8 0.17 42 4 0.18 41 1 0.18 40 7 0.19 39
) 0.30 25 1 0.31 24 0 0.31 23 9 0.32 22 8 0.33 21 7 0.34 20 7 0.35 19 7 0.36 18 7 0.37 17 7 0.38 16 7 0.39 15 8 0.40 14
4 9 4 www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
88 87 86 85 84 83 82 81 80 79 78 77 76
0.05 63 6 0.06 62 1 0.06 61 6 0.07 60 1 0.07 59 6 0.08 58 1 0.08 57 6 0.09 56 2 0.09 55 7 0.10 54 2 0.10 53 8 0.11 52 4 0.11 51 9
0.20 38 1 0.20 37 8 0.21 36 5 0.22 35 2 0.22 34 9 0.23 33 7 0.24 32 4 0.25 31 2 0.26 30 0 0.26 29 8 0.27 28 6 0.28 27 4 0.29 26 2
0.42 13 0 0.43 12 2 0.44 11 4 0.45 10 6 0.46 9 9 0.48 8 2 0.49 7 5 0.50 6 9 0.52 5 3 0.53 4 8 0.55 3 2 0.56 2 9 0.58 1 5
0.88 6 0.92 1 0.95 9 1.00 0 1.04 6 1.09 7 1.15 5 1.22 2 1.30 1 1.39 8 1.52 3 1.69 9 2.00 0
Nota: En fotmetros equipados con escala lineal de 0 a 100, D corresponde a los valores de 2-log G, siendo G la lectura galvanomtrica a la marca de 100 como posicin inicial.
Figura 1. Resumen de las molculas
que participan en el
proceso fotosinttico. Entre parntesis, los picos de absorcin ( en longitudes de onda) de diferentes pigmentos. Al lado derecho, las etapas del proceso fotosinttico en el cual participan dichas molculas y la regla de iluminacin mostrando la fase lumnica y la fase oscura.
NADPH+ H ABSORCIN DE LUZ FIJACIN DE CO2 CONVERSIN DE NADP
clorofilas 1. PIGMENTOS Pigmentos accesorios
clorofila a (440 y 690 nm) clorofila b (470 y 670 nm) bacterioclorofila (350 y 780 nm) carotenoides
(400 a 500 nm)
carotenos Xantinas ficoeritrina ficocianina
anteraxantina violaxantina zeaxantina
ficobilinas
(500 a 580 nm)
plastoquinonas plastocianinas feofitina protenas hierro-azufre citocromos flavoprotenas (ferredoxina) H+ estroma
Lmen
2. CADENA TRANSPORTADORA Subunidad F0: entrada de protones a favor del gradiente DE ELECTRONES (FS 1 y 2) Subunidad F1: salida de protones y reaccin ADP + Pi ATP www.uniamazonia.edu.co concentraciones de CO2 Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 luz Plantas C3 - Caquet Florencia Activaci n la ferredoxina reducida Plantas C4 por Plantas CAM presencia de Mg++ pH
3. GRADIENTE ELECTROQUMICO
4. ATP SINTETASA
5. ENZIMAS DEL CICLO DE CALVIN
3. MATERIALES 8 Hojas frescas de un adulto de la especie problema**

A
Hojas de sombra y hojas de luz de la especie problema**
5 hojas frescas de un competidor de la especie problema** 2 hojas de sol y 2 hojas de sombra de una especie arbrea** Hojas de pasto** 4 a 6 frascos de vidrio con tapn (debe caber una hoja de las especies de trabajo)** Aguja fina de coser e hilo delgado.** Mortero Embudo Buchner de decantacin Discos de papel filtro, watman 1 Cuarzo o arena fina Matraz aforado de 100 ml 2 celdas de espectrofotmetro Probeta de 100 ml. 1 tubo de ensayo 1 caja de Petri 1 vaso de precipitados de 50 ml Acetona comercial 80% 1 pipeta de 5ml Microscopio
A
Opcional
Espectrofotmetro Lminas y laminillas Lmpara fluorescente 1 termmetro Solucin indicadora de CO2 Tionina ** A cargo del estudiante
4. PROCEDIMIENTO Programacin para 2 sesiones de laboratorio
Caracterizacin del tejido foliar Corte una franja longitudinal en la hoja de la especie problema, que incluya la nervadura central. Realice posteriormente diferentes cortes finos transversales, adicione 1 o 2 gotas de tionina y complete el micropreparado. Observar a menor y mayor aumento. Deber hacerse un reconocimiento de los diferentes tejidos, haciendo especial caracterizacin de las clulas del mesfilo y de la vaina del haz. Para esto pueden usarse fotografas o bibliografa de histologa consultada previamente. Realice los esquemas correspondientes. Repetir el mismo proceso con las hojas de pasto y las hojas de sol y de sombra de la especie arbrea, o diferenciando hojas de sol y de sombra de la especie problema. 1. Cuantificacin de clorofilas (UNAL, 1997)
Macere 1 gr de hojas frescas sin venas de la especie problema, cortadas en trozos. Agregar cuarzo y 5 ml de acetona. Moler el tejido hasta obtener una pasta fina, acetona. Filtrar la mezcla en un embudo buchner con papel filtro. Agregar 25 ml. mas de acetona a la pulpa y realizar un segundo filtrado, incorporando este extracto al primero. La pulpa debe quedar prcticamente de apariencia transparente, por lo tanto es posible realizar un tercer macerado y filtrado hasta completar 100 ml de filtrado de clorofila. Llenar la celda de espectrofotmetro con el filtrado, y leer la densidad ptica (D) a valores de 645, 652 y 663 nm. Como blanco puede usarse agua destilada o acetona pura. Si es posible, realizar este proceso para hojas de sol y de sombra. 2. Determinacin del espectro de absorcin de la planta problema (UNAL, 1997) Colocar 0.1 gr de hojas frescas (sin venas) de la especie incorporar 30 ml mas de
problema, cortadas en trozos. Agregar cuarzo y macerar el tejido vegetal, adicionando 4 ml de acetona. Una vez se obtenga una pasta fina, adicionar 10 ml mas de acetona. Transferir cuidadosamente la mezcla a un embudo buchner con papel filtro. Agregar 4 ml mas de acetona a la pulpa, macerar de www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
nuevo e incorporar el segundo filtrado al primero. De igual modo que en el ensayo anterior, la pulpa deber retener la mnima coloracin posible; para relavar los remanentes de pigmento en embudo y mortero, usar 2 ml de acetona adicionales. En todo el procedimiento no deber usarse mas de 20 ml de acetona. Llenar la celda del espectrofotmetro con el extracto y leer la densidad ptica (D) a intervalos de 10 nm desde 400 nm hasta 720 nm. Como blanco puede usarse acetona pura o agua destilada. Repetir todo el proceso para la especie competidora. 3. *Determinacin del Punto de compensacin de luz De acuerdo al tamao de los frascos a usar, adicionar de 3 a 6 ml de la solucin indicadora de CO 2 en cada uno. Atravesar finamente la parte apical de una hoja de la especie problema con hilo, e introducirla en el frasco de tal modo que no toque la solucin y quede suspendida dentro del frasco; tapar el frasco, sosteniendo el extremo del hilo. Reservar uno de los frascos para el montaje blanco, agregando la solucin pero dejando el frasco vaco. Rotular los frascos con hojas 1, 2, 3 y 4, sometindolos a los siguientes tratamientos durante tres horas (ubicar los frascos en el ambiente correspondiente, en el menor tiempo posible):
Tabla 10. Tratamientos para determinar el punto de compensacin de luz de la especie problema FRASCO 1 2 3 4 BLANCO TRATAMIENTO Oscuridad total Semisombra constante A 40 cm de una lmpara o fuente de luz de nen A 10 cm de una lmpara o fuente de luz de nen A40 cm de una lmpara o fuente de luz de nen
Antes de desmontar el sistema, registrar la temperatura externa a la cual estaba sometida cada frasco durante el tratamiento.
5.
RESULTADOS Y ANALISIS
Ensayo 6.1. Comparar los patrones de la forma y caractersticas de los tejidos foliares entre las especies, para detectar la posible adaptacin anatmica de las plantas CAM, y evaluar si se dan caractersticas importantes que diferencien las hojas de sombra y las hojas de luz de nuestra especie problema o de una especie distinta. Ensayo 6.2. Calcular la cantidad de clorofila presente en el extracto, expresndola como mg de clorofila por g de tejido foliar, de acuerdo con las siguientes frmulas: mg de clorofila a/g de tejido = [12.7(D663) - 2.69(D645)] (1000x mf) mg de clorofila b/g de tejido = [22.8(D645) -4.48(D663)] (1000x mf) mg de clorofila total /g de tejido (1000x mf) Donde D: densidad ptica del filtrado leda a la longitud denotada por el subndice V: volumen final del extracto de clorofila en acetona al 80% mf: masa fresca en gramos del tejido foliar = [1000(D552)]/34.5 x V/ x V/ x V/
Realice un anlisis de los resultados obtenidos, incluyendo las razones por las cuales una planta puede variar su radio clorofila a / clorofila b, e integrar estos resultados de cuantificacin de clorofilas con el estudio anatmico de los tejidos foliares. Comparar los resultados obtenidos para hojas de sol y hojas de sombra, determinando las posibles estrategias de la planta en relacin al uso de la clorofila. Ensayo 6.3. Construir el espectro de absorcin de la planta problema (absorbancia en Y, longitud de onda en nm, en X), incorporando los picos de absorcin obtenidos en el anlisis de su potencial fotosinttico. Si los picos son anchos, este potencial es muy alto, pero si son muy angostos, la planta se restringe. Relacionar esto con la variedad de pigmentos que la planta puede tener. Comparar los resultados con los de la planta competidora. Ensayo 6.4. Comparar las coloraciones finales de las soluciones, primero con el blanco y luego entre frascos con hoja, y determinar a partir de qu tratamiento el viraje de color tiende a permanecer constante.
6. PREGUNTAS Investigue si existe un factor de conversin, que permita cambiar los valores de cantidad de luz, dados en Vatios de una lmpara (conociendo la distancia a la fuente de luz) a lux o DFF (densidad de flujo de fotones). Estas conversiones permitiran un mejor anlisis de los datos en el ensayo 3.4 de esta prctica. Busque listados o datos publicados de los puntos de compensacin de especies conocidas, indique cual es la medida mas comn para medir esta variable y compare estos datos con los de la especie problema.
1. FUNDAMENTOS SOBRE RESPIRACIN Al igual que cualquier organismo hetertrofo, una planta requiere de procesos internos de oxidacin que permitan elaborar ATP a partir de molculas energticas como los carbohidratos. Este proceso, conocido como respiracin, es requerido tanto durante el da como en la noche y degrada gran parte de las molculas de azcar que la planta fabric durante la fotosntesis. La respiracin celular es la base para un gran nmero de rutas metablicas alternas, a partir de las cuales la planta es capaz de fabricar precursores hormonales y vitamnicos, metabolitos secundarios o sustancias alelopticas, protenas, lpidos y molculas transportadoras de electrones.
2. MATERIALES Y REACTIVOS
10 a 20 semillas pre- imbibidas**
6 plntulas etioladasA
de la sp. problema, con un mnimo de 4
hojas.**

2 plntulas con 4 hojas** Sacabocados o bistur** Corcho y algodn** Papel aluminio** Lpiz de cera o marcador** Cinta de enmascarar** Bombillo de 100 watts Balanza analtica Horno para 105C 1 vaso de precipitados de 100 ml 5 vasos de precipitados de 50 ml 5 tubos de ensayo iguales o frascos angostos** 2 cajas de Petri Varilla de agitacin agua destilada Bureta con soporte Gotero Gradilla Solucin de K2CO3 al 2% Solucin de fenolftalena Solucin de NaOH 0.01N solucin de NaOH al 20%
deben haber estado un da en oscuridad absoluta www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
3. OBJETIVO GENERAL Comprobar la respiracin celular en diferentes partes vegetales y evaluar cmo se relaciona con el pH en el medio y con la biomasa de los tejidos. 4. PROCEDIMIENTO Programacin para una sesin de laboratorio. PRACTICA 1. 1997) En 2 tubos de ensayo colocar semillas previamente imbibidas (por lo menos 24 horas antes). Insertar luego una mota de algodn hmedo. Agregar 20 ml de NaOH al 20% en 2 vasos de precipitados de 50 ml, agregando al tercero agua en igual cantidad. Invertir uno de los tubos en uno de los vasos que contenga NaOH y el otro en el vaso con agua; el tubo sin semillas deber colocarse en el vaso restante, que contiene NaOH. Marcar el nivel de lquido en el vaso de precipitados con un lpiz de cera. Los tubos deben quedar en posicin vertical, y el nivel del lquido ser registrado de nuevo en 24 horas. PRACTICA 2. METODO DE SACH PARA MEDIR FOTOSNTESIS Y / O RESPIRACIN (RVALO, 1993) www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet ABSORCIN DE OXGENO EN SEMILLAS (UNAL,
Extraer con mucho cuidado 5 discos de una hoja en cada una de las plantas etioladas, de un sitio sin nervaduras notorias. Etiquetar el material de cada plntula y poner a secar durante 1 hora a 105C. Obtener la biomasa seca. Durante el secado del proceso anterior, iluminar la mitad de las plntulas por 90 minutos (evitando el sobrecalentamiento), y simultneamente mantener la otra mitad en oscuridad durante el mismo tiempo. Al final de ese tiempo, extraer otros 5 crculos de cada planta y repetir el proceso de secado. Hallar la biomasa.
Figura 2. Respiracin celular y rutas alternas en plantas. (Tomado de Taiz y Zeiger, 1998)
PRACTICA 3. PRODUCCIN DE CO 2 POR LAS RACES (UNAL, 1 997) Agregar dos gotas de fenolftalena a un vaso con 100 ml de agua de grifo. Aadir enseguida gota a gota una solucin de K 2CO3 hasta que aparezca una leve coloracin rosada. Evitar excesos. Con esta agua llenar dos tubos de ensayo, tapar uno de ellos con un corcho y colocar en el otro una plntula sostenindola en el borde con papel aluminio o con algodn. Finalmente cubrir ambos tubos con papel aluminio, para oscurecer la zona de las races, y dejarlos en un sitio iluminado durante una semana. Transcurrido ese tiempo, tomar 15 ml de solucin de cada tubo por separado, agregando primero unas gotas de fenolftalena como indicador del cambio de color; titular con NaOH 0.01N para valorar el CO2 que contiene. Registrar el NaOH gastado para cada tubo.
RESULTADOS Y DISCUSIN Ensayo 1. Explicar las diferencias que se obtengan en el nivel de solucin de los vasos de precipitados. Ensayo 2. Los datos obtenidos se pueden organizar en el siguiente cuadro: www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Tabla 11. Ficha para la ganancia o prdida de biomasa bajo los tratamientos. MUESTRA TIEMPO inicial: 0 final: 90 0 90 PLANTA 2 0 90 PLANTA 3 0 90 PROMEDIO BIOMASA BIOMASA: Peso seco de las plntulas sin haberlas sometido a ningn tratamiento (tiempo 0) y luego del tratamiento (tiempo 90) BIOMASA: Biomasa seca final biomasa seca inicial Comparar los resultados de los tratamientos y analizar. Ensayo 7.3. Investigar la ecuacin de la reaccin realizada durante la titulacin, para determinar la cantidad de CO2 en cada muestra. PRACTICA 4. (MEJA, 2002) OBJETIVO www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet *INFLUENCIA DEL OXGENO EN LA RESPIRACIN PLANTA 1 ILUMINACIN BIOMASA BIOMAS A OSCURIDAD BIOMASA BIOMASA
Comprobar la importancia del oxgeno en la germinacin MATERIALES Semillas de rbano Tres Frascos de boca ancha Crisoles de porcelana o beakers de 50 ml Papel filtro Solucin de KOH al 15% Solucin de cido proglico al 7% Agua destilada Bandas de caucho Papel de aluminio Pinzas de laboratorio Algodn PROCEDIMIENTO Utilizando los crisoles y el papel de filtro haga tres germinadores y coloque en cada uno 10 semillas de rbano. Tomo tres frascos de boca ancha y proceda en la forma siguiente: Frasco 1: Vierta 15 ml de KOH al 25% y 8 ml de cido piroglico al 7%, luego coloque dentro un crisol (germinador) teniendo el cuidado que no le
entre solucin y tpelo hermticamente con papel de aluminio doble, ajustando con unas bandas de caucho. Frasco 2: Vierta 15 ml de agua destilada, coloque dentro de otro crisol y tpelo hermticamente con papel aluminio. Frasco 3: Vierta 15 ml de agua destilada, coloque dentro un crisol y tape el frasco con algodn Deje dos frascos en el ambiente del laboratorio.
RESULTADOS Luego de 3 das observe la germinacin de las semillas en cada frasco Explique la razn de los resultados. PREGUNTAS Porqu es importante el oxgeno en la fisiologa vegetal de las planas? Porqu razn una plntula que crece en un suelo con poco oxgeno (encharcado o endurecido) no crece bien?. PRACTICA 5. CUANTIFICACIN DE LA RESPIRACIN AEROBIA
POR EL MTODO COLORIMTRICO (RVALO, 1993)
MATERIALES 4 frascos de 500 cc con tapn de caucho 4 vasos de precipitados de 50 ml 1 probeta de 25 ml 1 bureta de 25 ml. 2 pipetas de 10 ml. Refrigerador Estufa Termmetro Gasa o tul Cordn de camo o hilo 30 gr. De semillas de la sp. problema BaCl2 1 M NaOH 0.2N HCL 0.2N Fenolftalena 1% en etanol al 60% PROCEDIMIENTO Poner 50 ml de NaOH en cada uno de los frascos de 500 ml, tapar provisionalmente mientras se empacan 15 gr. de semillas en un envoltorio sencillo de gasa o de tul, firmemente cerrado con cuerda. Destapar dos de los frascos e introducir la bolsa de semillas en cada uno, dejndola suspendida del cordel, el cual debe ir fijo al tapn; los
otros dos frascos no deben contener semillas. En ningn caso las semillas pueden estar en contacto con el NaOH. Dejar un frasco con semillas y otro sin semillas en un ambiente a temperaturas menores de 25 C, y la otra pareja de frascos en un lugar con mas de 35 C, durante 36 horas, al final de las cuales se debe extraer 10 ml del NaOH de cada frasco, pasarlos a un vaso de precipitados de 50 ml, aadir 5ml de solucin de BaCl 2 para precipitar el CO2, aadir luego 3 gotas de fenolftalena (deber dar un color rosa-violceo), y finalmente titular con HCl hasta que desapareza el color (pH 8.5), anotando la cantidad de cido que se emple. RESULTADOS La cantidad de CO2 que queda atrapado en los frascos es medida con la titulacin de los tratamientos sin semillas, por lo tanto para conocer cunto CO2 proviene de la respiracin, debe restarse ese valor (el volumen titulado de HCl) del de los frascos con semillas, en sus respectivas temperaturas. Al multiplicar por 5 el volumen final obtenido de HCl, se habr conocido la produccin respiratoria de CO2. 5. PREGUNTAS Qu consecuencias tiene la liberacin de CO 2 edfico? Justificar el uso del NaOH en varios de estos ensayos. www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet en el ambiente
Porqu el test de viabilidad de semillas con tetrazolium podra ser tambin un ensayo experimental para respiracin celular?
1. FUNDAMENTOS SOBRE REGULACIN HORMONAL Y EFECTO DE HERBICIDAS Las hormonas son sustancias orgnicas importantes para el
crecimiento, desarrollo, reproduccin y otras funciones de las plantas, que pueden estimular o inhibir procesos en relacin a diferentes aspectos de su desarrollo (Meja, 2002). Se caracterizan por: Algunas son producidas en un tejido y transportados a otros y all Se sintetizan y usan en cantidades mnimas. No tienen funciones especificadas como las hormonas de
actan o se utilizan en sitio en que son producidos.
animales. Sus efectos pueden variar dependiendo de las concentraciones en Existen cinco grupos: Auxinas, Giberelinas Citocininas, Etileno, y las que estn presentes. Acido abscsico. Sus funciones se resumen en la Tabla 8. www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Tabla 12. Principales actividades en las cuales participan los 5 grandes grupos hormonales. (Basado en Salisbury , 1996; Taiz & Zeiger, 1998; Meja, 2002). HORMON A Diferenciacin celular Regeneracin de tejidos heridos Elongacin de Auxinas las clulas Formacin de Crecimiento de races adventicias (estacas) Inhibicin del crecimiento de la raz Control de la www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet frutos partenocrpicos Evitan la cada de hojas Demoran el marchitamiento del pednculo Regeneracin de tejidos heridos RAZ -TALLO HOJAS FLORES Y FRUTOS Promueven la sntesis del etileno Control de malezas (efecto herbicida) OTROS
dominancia apical Estimula la divisin elongacin celular GIberelina s Inhiben la sntesis de etileno, Estimula el crecimiento generalizado de la planta, aumentando la plasticidad de la pared celular. Renovacin del cambium en plantas leosas retardando la senescencia de ptalos y pecolos Incrementan el tamao de los botones Elongacin del hipoctilo Induce el almacenamien to de protenas en semillas Formacin de frutos Rompe la dormancia de Aumento del rea foliar Promueve la floracin Acelera la germinacin
partenocrpicos semillas
HORMON A
RAZ -TALLO
HOJAS
FLORES Y FRUTOS
OTROS
Produce desarrollo de yemas laterales
Retardan la senescencia Implicadas en
Inhiben la sntesis de etileno, retardando la senescencia de
Expansin de los cotiledones durante la germinacin Incremento general de las tasas de respiracin y del potencial enzimtico A nivel
Produce Citocinina s formacin de yemas en tejidos callosos.
el de clorofilas Expansin de
mantenimiento frutos
Reduce las tasas hojas de las de crecimiento radicular Acortamiento de los entrenudos yemas terminales
general, regulan el ciclo celular y la movilizacin de nutrientes
Interviene en procesos de crecimiento Etileno Puede romper la dormancia de yemas y otras estructuras como bulbos o tubrculos
Senescencia Absicin
Induce la floracin Senescencia Maduracin de frutos Abscisin
En general Promueve la expansin celular lateral. Puede romper la dormancia de semillas
En altas cantidades, es capaz de generar races y pelos radicales a partir de tejido de races, tallo u hojas. Dormancia de yemas Acido abscico Promueve la senescencia de hojas Promueve la dormancia de semillas Estimula el cierre de estomas Control de la embriognesis Tolerancia a la desecacin del embrin.
Es responsable de todas las regulaciones fisiolgicas para enfrentar el estrs hdrico: Acelerar el crecimiento de raz e inhibir el del tallo, incrementar la conductividad hidrulica y el flujo de iones en la raz. Herbicidas Durante la fase lumnica de la fotosntesis, se obtienen electrones a partir de la fotlisis de las molculas de agua; posteriormente se realiza el transporte de los electrones desde donadores de tipo quinonas y ciitocromos, hasta un aceptor final conocido como nicotn adenn dinucletido fosfato (NADP). Esta molcula se reduce a la forma NADPH +H+, la cual es responsable de reducir a su vez diferentes compuestos intermedios durante el ciclo de Calvin. Por otra parte, el ATP generado en forma paralela durante el proceso, proveer la energa necesaria para la realizacin de dicho ciclo (Fernndez, 2004). Dentro de las sustancias conocidas como herbicidas, es posible encontrar aquellas que al asperjarse sobre la planta interrumpen el flujo de electrones en cualquiera de las siguientes formas (Fernndez, 2004): 1.) Inhibidores del transporte de electrones, como el Diurn.
2.) Agentes que impiden la formacin de ATP. Como ejemplos estn el perfluidone, dinoseb, v-fenilcarbamatos, acylanilidas, imidazoles y bensymidoles sustituidos, entre otros. 3.) Aceptores de electrones, como Diquay y Paraquat 4.) Molculas que roban los electrones, como el diclorofenolindolfenol (DCPIP)
2. OBJETIVO PRINCIPAL Determinar el efecto de sustancias hormonales como las Giberelinas, el cido indol-butrico y de herbicidas como el DCPIP (2,6 diclorofenolindolfenol) en el desarrollo de la especie problema.
3. MATERIALES Y REACTIVOS
7 plntulas de la especie sembradas en matera**
Balanza analtica Lmpara Centrfuga Tubos de centrfuga Tubos de ensayo Buffer fosfato Hielo Pipetas de 5ml pH 6.5 (fro) Sacarosa 0.5M (fro) Mortero y pistilo
problema
15 semillas imbibidas de la Materas de icopor** o cajas Embudo y gasa** Papel aluminio** Envase aspersor**
sp. problema**
de petri

Vaso de precipitados de 25 2,6 diclorofenolindolfenol H2O)
Pasta de lanolina** Esptula Vaso de precipitados de 1 lt. Agitador Agua destilada Bistur o cuchilla Etanol
ml.
(0.004 g/100 ml de
Solucin de cido giberlico Solucin de cido indol-
1000 p.p.m.
actico 50 p.p.m.
4.
PROCEDIMIENTO
Programacin para una sesin de laboratorio Cuidados previos Durante el seguimiento de los tratamiento hormonales, es esencial que las plantas usadas permanezcan en ptimas condiciones de luz, humedad y temperatura, de tal modo que se garantice que cualquier cambio importante en la morfologa y desarrollo tenga relacin con el tratamiento. Es necesario mantener hbitos de asepsia durante los procesos de corte y aplicacin de la hormona. www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Dominancia apical y abscisin de hojas De la poblacin en crecimiento, usar 4 plntulas de la especie problema; a todas se les deber hacer una marca 3 a 5 cm por debajo del pice terminal: la primera (planta 1) funcionar como testigo; la segunda (planta 2) se cortar de 0.3 a 1 cm debajo del pice caulinar (debajo de la yema de crecimiento, antes de llegar a las hojas mas jvenes) la tercera (planta 3) se cortar al mismo nivel del anterior y a la ltima (planta 4) se har corte del tallo a nivel de los pecolos de las hojas jvenes. Mezclar 5 ml de la solucin de cido indol-actico con pasta de lanolina y aplicar a las plantas 3 y 4 en el sitio donde se hizo el corte. segunda aplicacin en la semana siguiente. Se deber hacer observaciones dos veces por semana durante dos a 4 semanas, y el anlisis debe incluir la morfologa de la parte terminal de la planta, la medida desde la marca hasta el pice y la apariencia general del tejido. Calcular adems la concentracin hormonal final usada en el experimento. Papel de las Giberelinas en la germinacin. Usar 30 semillas imbibidas previamente, de los germinadores que permanezcan en buenas condiciones; debern ser esterilizadas, www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet Hacer una
divididas en dos grupos y puestas sobre cajas de Petri o materas de icopor con papel toalla. El primer grupo de semillas se humedecer con 20 ml de agua destilada, mientras al segundo grupo se le aplicar 5 ml de solucin con cido giberlico y 15 de agua destilada. Si se dispone de suficientes semillas para realizar uno o dos tratamientos mas, adicionar respectivamente 10 y 15 ml de solucin de hormona, completando a volumen de 20 ml. Evaluar las semillas dos veces por semana durante mnimo 3 semanas, y resumir los resultados obtenidos en una tabla. Calcular adems la disolucin final aplicada de hormona Hormonas y crecimiento *En el cultivo (en base a Romero et. al., 1996) Usar la parte de la parcela destinada para la aplicacin de tratamiento. Asperjar una dosis de 1000 p.p.m. de cigo giberlico AG3- en forma homognea para todas las plntulas y evaluar resultados del mismo modo que se registra el crecimiento. Hacer un mximo de dos aplicaciones en 10 semanas. Si hay disponibilidad de plantas, puede hacerse un tercer ensayo con cido Indol- actico en solucin de 50 p.p.m Con la especie problema www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Limpiar cuidadosamente y en corto tiempo 4 plntulas mayores de 8 cm y hallar la masa fresca antes de sembrar en germinadores con tierra negra; posteriormente medir la longitud desde las hojas mas jvenes hasta el pice caulinar y tomar una plantilla de las hojas jvenes. Aplicar los tratamientos respectivos as: la planta 1 funcionar como control; la planta 2 deber ser asperjada con la solucin de cido giberlico cada 2 das durante una semana; la planta 3 ser asperjada 4 veces en la semana y la planta 4 ser asperjada cada 2 das durante 2 semanas. Al final del tiempo de seguimiento (3 a 4 semanas desde el primer da de aplicacin de la hormona), hacer las mediciones finales y secar las plantas hasta peso constante para hallar la biomasa seca. Hacer una comparacin de los resultados, evaluando el efecto de la hormona. Estimar las cantidades aproximadas de hormona total que se adicion en cada tratamiento. *El efecto de 2,6 diclorofenolindolfenol en el transporte de electrones durante la fase luminosa de la fotosntesis. Moler en el mortero los 5 g de hojas con 30 ml de sacarosa 0.5M y filtrar con la gasa. Centrifugar el filtrado a 2000 rpm durante 10 minutos, desechar el sobrenadante; y suspender el residuo con 10 ml de buffer fro. Reunir todo el residuo obtenido en un solo tubo y colocarlo en un vaso de precipitados con hielo, mientras se rotulan tres tubos y se organizan los siguientes tratamientos: www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
TUB O 1 2 3
SOLUCIN DE CLOROPLASTO S 2 ml (tapado) 2 ml 2 ml
DCPI DIURON P 3 ml 3 ml 3 ml 0 0 3 ml
BUFFER DE FOSFATOS 5 ml 5 ml 2 ml
VOLUMEN FINAL 10 ml 10 ml 10 ml
El tubo 1 deber cubrirse con papel aluminio, mientras los tubos 2 y 3 permanecern a la luz. Colocar los tres tubos en un vaso de precipitado con agua suficiente para cubrirlos (sin que penetre) y acerque todo a una lmpara encendida durante 8 horas, haciendo observaciones a intervalos de 2 horas. Haga una revisin de los estados de color desde el tiempo 0 hasta la ltima observacin. Se espera un viraje de color verde a azulado.
5. PREGUNTAS En cuanto al efecto hormonal, cules son las hormonas que muestran efectos en el menor tiempo? Cmo son los cambios fisiolgicos de una planta, desde que se aplica un herbicida hasta la fase de mortandad?
Cules son los efectos de aplicar exageradas cantidades de hormona a una planta en crecimiento?
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE BIOLOGA PRACTICA DE LABORATORIO FISIOLOGIA VEGETAL 1. FUNDAMENTOS SOBRE ESTRATEGIAS ADAPTATIVAS Las plantas necesitan desarrollar de forma diferencial sus clulas, rganos y estructuras especializadas. Este fenmeno es evidente ante la necesidad de ocupar el hbitat especfico al cual la especie se ha adaptado a lo largo de su historia evolutiva, cumplindose as las leyes ecolgicas que indican que bajo sus propias condiciones ptimas de vida, dicha especie ser mas exitosa que las dems; pero si la planta germina bajo un ambiente diferente, otras plantas sern mas competitivas que ella, y entonces su sobrevivencia ser mas reducida. Dentro de los factores que influyen u obligan a las especies a desarrollar estrategias adaptativas, pueden contarse las siguientes: Predacin: el desarrollo de sustancias como toxinas, aromticos, entre otras, permite una defensa efectiva de los herbvoros invertebrados, como orugas y gasterpodos. Otras sustancias de mal
sabor tambin pueden ayudar a controlar los herbvoros de mayor tamao. Luz: Mientras las especies que reciben suficiente cantidades de luz crecen a ritmos ptimos, las plantas que reciben menos luz se ven obligadas incluso a suprimir el crecimiento por ciertos perodos. Humedad: las deficiencias de agua en el suelo, o en contraposicin, el exceso de ellas, inducen a modificaciones en la estrategia metablica y en la estructura radicular. Espacio: todas las especies vegetales compiten por espacio, ya que existe un rea mnima de recursos que debe defender para su subsistencia; los mas importantes son los nutrientes del suelo, y el agua. Intervencin: mientras algunas plantas soportan y se adecuan a la intervencin fsica, sea de tipo natural (viento, lluvia directa, paso de animales) o antropognica (ganadera, cultivos, construccin, etc.) otras son menos tolerantes, o suelen mostrar algunas modificaciones en relacin con otros individuos de la misma especie en ecosistemas conservados. Existen formas muy variadas en las plantas de adaptarse a los macro y microambientes en los cuales viven:
Tipo de enraizamiento; dispersin de races en forma vertical y horizontal Tamao, coloracin y forma de las hojas Hbitos de crecimiento: normal, rastrero, en clonacin, parasitismo, epifitismo. Estructura del cuerpo de planta: arrosetado, envolvente, con almacenamiento de necromasa, sencillo. Desarrollo de estructuras especializadas: Pelos, glndulas, agallas, bolsas de aire, zarcillos, lenticelas, espinas, etc. Tipo fundamental: Hierba, arbusto, rbol Tipo de ramificacin o arquitectura de la planta: forma y distribucin de la cobertura foliar Respuesta a seales fsicas: cierre y apertura de hojas, y flores, giro de las hojas, movimiento del tallo en relacin a la luz, gravedad u otros.
Formacin Distribucin
de de
estructuras recursos:
de
almacenamiento: diferenciales
Bulbos, en la
tubrculos, rganos suculentos, entre otras.
Patrones
produccin de flores, frutos y semillas.
2. OBJETIVO GENERAL Realizar el anlisis de los patrones de adaptacin anatmicos, morfolgicos y ecolgicos de diferentes especies vegetales en un ecosistema natural o seminatural, explicndolos y en otros casos complementndolos con herramientas de la fisiologa vegetal. www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
3.
MATERIALES EN LABORATORIO: Microscopio Cuchillas Lminas y laminillas Agua destilada Papel filtro Papel peridico Estufa o incubadora Balanza Tionina
EN CAMPO: Cilindros de suelo Cuchillo de campo Recipiente trmico con hielo Metro Pala de jardinera Bolsas plsticas Papel peridico PH-metro Termo-higrmetro Frascos o vasos de precipitados Agua destilada Cortarramas Lupa de 20X Calculadora Papel seco de CoCl2 5. PROCEDIMIENTO
Programacin para una salida de campo y una sesin de laboratorio Reconocimiento de la heterogeneidad ambiental.
Se har un recorrido en la zona de estudio de por lo menos 1 Km, para diferenciar algunos de los ecotipos mas evidentes: Se espera diferenciar por lo menos 4 ambientes o ecotipos, con ayuda de los siguientes criterios:
Color, estructura y humedad del suelo. Suelos duros o Acumulacin de agua superficial. Zonas inundables, secas o Estratos predominantes de la vegetacin. Herbceo, arbustivo Presencia de hojarasca. Alta o baja Cantidad de luz directa sobre el suelo. Total, intermedia o Grado de intervencin. Alto, bajo o nulo Pendiente. de 0 -20, de 20 - 45 o mayor de 45
blandos, texturas arcillosas, arenosas o balanceadas
fluctuantes
o Boscoso

escasa

Informacin de las adaptaciones por ambientes Escoger 5 especies de plantas de cada ambiente (las mas frecuentes), y caracterizarlas llenando un formato, que puede ser similar al siguiente cuadro: Medicin de algunas variables en campo Se podr medir algunas variables directamente en el sitio de muestreo de cada ecotipo, como las siguientes: www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
Caracterizacin textural y estructural de una muestra de suelo pH de una muestra representativa. Medicin de los entrenudos de plntulas. Temperatura y humedad promedio. Copias de rea foliar de especies arbreas Comparacin de la transpiracin
representativa.

Tabla 13.
Registro
de los hbitos adaptativos de las
especies en su ambiente. AMBIENTE 1: PASTIZALES O PRADERAS CON ALTO GRADO DE INTERVENCIN PATRON TIPO Tipo de Vertical Horizontal enraizamien Disperso to Otro Color de las Verde oscuro Verde claro hojas Otro Hbito de Normal Rastrero crecimiento En clonacin Otro Estrato Hiebas Arbustos vegetal Arboles predominan Todos te Floracin Homognea Heterognea Fructificaci Homognea Heterognea n Diseminaci Grandes n semillas de pocas Pequeas muchas Barocoria Zoocoria Anemocoria Otro SP 1 X X X X X X X X X X X SP 2 X X X manchas X SP 3 SP 4 X X SP 5 X X
X X X X y y X X
X X
X X
Dispersin
Estructuras
Pelos Espinas especializad Agallas as De almacenamient o Otros
X X
bulbos
ninguna
ningun a
Trabajo en laboratorio En laboratorio se deber complementar la informacin de las diferentes estrategias adaptativas de las plantas, realizando ensayos ya conocidos por el estudiante como los siguientes: Corte transversal de hoja de 1 especie representativa de cada ambiente, para diferenciar los tejidos del mesfilo y de la vaina del haz. Cuantificacin y tipificacin de estomas Valoracin de la capacidad de campo de una muestra de suelo para cada ambiente. Abundancia, tipificacin y fisiotipos de semillas en los bancos de suelo.
Determinacin de la masa foliar de hojas de tamao similar pero ambientes distintos.
4.
BIBLIOGRAFA
AZCON, J y BIETO. Fisiologa y bioqumica vegetal. Mc Graw Hill, Interamericana, Bogot. 581p. BASKIN, C. y BASKIN, J. M. 2001 Seeds: Ecology, Biogeography, and Evolution of Dormance and Germination. DEVLIN, R. 1982. Fisiologa Vegetal. Omega S.A, 517p. Barcelona. FERNNDEZ, C. 2004. Fisiologa Vegetal: Prcticas de Laboratorio. Universidad de San Carlos de Guatemala, Facultad de Agronoma. http://www.iespana.es/cete/index.htm HILL, T. 1984. Hormonas reguladoras del crecimiento vegetal. Ed. Omega S.A, Barcelona. 74p. MEJA, M. 2002. Gua de practicas de fisiologa vegetal.
Universidad de la Amazona, Florencia, Col.
MITCHEL, J. W. y LIVINGSTON, G. 1990. Mtodo para el estudio de Hormonas vegetales y sustancias reguladoras del crecimiento Ed. Trillas, Colombia. 166p. OROZCO, F. H. 1999. Biologa del Nitrgeno: Conceptos bsicos sobre sus transformaciones biolgicas. Universidad Nacional de Colombia. Col. OROZCO, M. y GARCS, E. Fisiologa de la Senescencia y el envejecimiento en flores de corte: El caso de Alstroemeria sp. Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias, Departamento de Biologa. 2000. ROMERO, H. M., NORATO, J. A. y ROJAS, M. M. 1996. Activacin del crecimiento de plntulas de sietecueros (Triouchina lepidota) por fitohormonas. En: Acta Biolgica Colombiana (UNAL), Vol. 3, No. 2: 73-78. ROVALO, M. 1993. Fisiologa vegetal experimental, prcticas de
laboratorio. Ed Limusa.; 269 pp. SALISBURY, F. 1994. Fisiologa Vegetal. Grupo Editorial
Iberoamrica S.A., 759p. TAIZ, L. y ZEIGER, E. 1998. Plant Physiology. Sinauer Associates Inc, Publishers. USA. www.uniamazonia.edu.co Avenida Circunvalacin, Barrio Porvenir, Conmutador (57)-84358786 4340850 Florencia - Caquet
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA (UNAL). 1997. Prcticas de laboratorio para el curso de Fisiologa Vegetal.

Laboratorios de Fisiologia Vegetal (Reparado)

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UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA

MINISTERIO DE EDUCACIN NACIONAL NIT:891.190.346-1

microscopios **a cargo del estudiante

Tabla 1. Diferentes tipos de clasificacin de semilla

DE GERMINACIN HIPGEA DE GERMINACIN EPGEA NO DORMANTES

NO FOTOSENSIBLES RUDIMENTO SEMINAL

5.Capacidad de regenerar la especie

La semilla tiene potencial para regenerar la especie

en condiciones de oscuridad o en fotoperodo con otro color de

flor o en fruto** Cubetas de plstico Bandas de caucho** Malla plstica o tul

Papel milimetrado** ** a cargo del estudiante

4. PROCEDIMIENTO Programacin para una sesin de laboratorio

% agua actual = * 100

biomasa fresca final - biomasa seca

% agua de saturacin = *100

masa de agua actual

% agua relativa = *100 masa de agua de saturacin

% agua de saturacin = *100 m2

% agua actual en el suelo = *100 m1

% agua en capacidad de campo = *100 m3

almacenamiento GRUPO 3 GRUPO 4

integridad K, Na, Mg, Ca, Mn, Cl de Fe, Cu, Zn, Mo, Ni

2. OBJETIVO 2.1 OBJETIVO GENERAL

Cuchillo de campo** Metro** Marcador** 7Frascos oscuros de 200

Programacin para una sesin de laboratorio 4.1 Caracterizacin y pH del suelo

- K y - Na 4 4.2 1.5 1.7 2.0

Abril 10 Abril 25 Normal Normal Normal X

Margen las hojas

Yema foliar Marchitamie nto

3. MATERIALES Parcela experimental Horno de secado Tijeras podadoras Bolsas de papel

Balanza Papel peridico Cartulina Papel milimetrado Metro o regla

elegidas al azar (debe haber representacin de hojas nuevas y hojas antiguas).

Peso seco total y peso seco de cada parte de la planta: hojas,

3 a 5 semillas recin germinadas Marcador indeleble Metro o regla PROCEDIMIENTO

Plntulas de maz o de frjol germinadas en : Luz normal Luz deficiente Oscuridad.

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE BIOLOGA PRACTICA DE LABORATORIO FISIOLOGIA VEGETAL

** a cargo del estudiante

Donde C: altura de la columna r: radio del capilar

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE BIOLOGA PRACTICA DE LABORATORIO FISIOLOGIA VEGETAL

Figura 1. Resumen de las molculas

clorofilas 1. PIGMENTOS Pigmentos accesorios

carotenos Xantinas ficoeritrina ficocianina

anteraxantina violaxantina zeaxantina

plastoquinonas plastocianinas feofitina protenas hierro-azufre citocromos flavoprotenas (ferredoxina) H+ estroma

5. ENZIMAS DEL CICLO DE CALVIN

3. MATERIALES 8 Hojas frescas de un adulto de la especie problema**

Hojas de sombra y hojas de luz de la especie problema**

4. PROCEDIMIENTO Programacin para 2 sesiones de laboratorio

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE BIOLOGA PRACTICA DE LABORATORIO FISIOLOGIA VEGETAL

10 a 20 semillas pre- imbibidas**

de la sp. problema, con un mnimo de 4

POR EL MTODO COLORIMTRICO (RVALO, 1993)

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE BIOLOGA PRACTICA DE LABORATORIO FISIOLOGIA VEGETAL

actan o se utilizan en sitio en que son producidos.

Produce desarrollo de yemas laterales

Retardan la senescencia Implicadas en

Inhiben la sntesis de etileno, retardando la senescencia de

Produce Citocinina s formacin de yemas en tejidos callosos.

general, regulan el ciclo celular y la movilizacin de nutrientes

Induce la floracin Senescencia Maduracin de frutos Abscisin

En general Promueve la expansin celular lateral. Puede romper la dormancia de semillas

7 plntulas de la especie sembradas en matera**

Vaso de precipitados de 25 2,6 diclorofenolindolfenol H2O)

flor o en fruto Cubetas de plstico Bandas de caucho Malla plstica o tul

Papel milimetrado a cargo del estudiante

Cuchillo de campo Metro Marcador** 7Frascos oscuros de 200