UNIVERSIDAD DE ORIENTE NCLEO DE NUEVA ESPARTA UNIDAD DE CURSOS BSICOS DEPARTAMENTO DE CIENCIAS

INFORME DE LABORATORIO

CARACTERSTICAS GENERALES DE LAS ENZIMAS Y SU EFECTO ANTE VARIOS

FACTORES (CONCENTRACIN SUSTRATO, CONCENTRACIN DE ENZIMAS, TEMPERATURA Y pH)

Presentado por:

Samuel Rodrguez C.I.:24.438.036 Arexis Quintana C.I.:24.765.077

Al curso de Laboratorio de biologa II (0031721) Prof. Ivn Hernndez vila.

Guatamare, 21 de enero de 2013

INTRODUCCIN

Las enzimas son molculas de protenas que tienen la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones qumicas que tienen lugar en los tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la "energa de activacin" propia de la reaccin. Se entiende por "energa de activacin" al valor de la energa que es necesario aplicar (en forma de calor, electricidad o radiacin) para que dos molculas determinadas colisionen y se produzca una reaccin qumica entre ellas. Generalmente, las enzimas se nombran aadiendo la terminacin "asa" a la raz del nombre de la sustancia sobre la que actan. Las enzimas son protenas altamente especializadas que tienen como funcin la catlisis o regulacin de la velocidad de las reacciones qumicas que se llevan a cabo en los seres vivos (Purves, et al, 2009). Las enzimas no reaccionan qumicamente con las sustancias sobre las que actan (que se denominan sustrato), ni alteran el equilibrio de la reaccin. Solamente aumentan la velocidad con que estas se producen, actuando como catalizadores. La velocidad de las reacciones enzimticas dependen de la concentracin de la enzima, de la concentracin del sustrato (hasta un lmite), de la temperatura y el PH del medio (Acua, 1991). La sntesis y degradacin de las sustancias en el interior de las clulas vivas se realiza por medio de una serie de reacciones qumicas fijas, cada una de las cuales es catalizada por una enzima. Las enzimas son molculas de protenas que actan formando complejos intermedios con las sustancias con las que reaccionan (sustratos) para luego convertirlas en un producto determinado. En tales procesos la enzima no sufre cambios, por lo cual al formar el producto queda en condiciones de iniciar una nueva reaccin. Al igual que los catalizadores inorgnicos, las enzimas son catalizadores porque modifican a nivel biolgico, la velocidad de una reaccin qumica sin afectar el equilibrio final, y solo se requieren pequesimas cantidades para efectuar la transformacin de un gran nmero de molculas de sustrato. Sin embargo, a diferencia de los catalizadores inorgnicos,

las enzimas son altamente especificas ya que generalmente catalizan solo una reaccin de un grupo de reacciones comunes; de igual forma, funcionan solamente bajo condiciones muy definidas (Solomon, 1998). Las enzimas son protenas que funcionan en un determinado medio, bien sea intra o extracelular, donde las condiciones pueden variar, y por lo tanto el nivel de actividad de la molcula puede verse modificado a lo largo del tiempo. Dentro de los factores que afectan a la actividad enzimtica merecen destacarse: El pH: Todas las enzimas tienen en su estructura primaria aminocidos con grupos radicales ionizables. Dependiendo del pH del medio en el que se encuentren pueden no tener carga, o por el contrario estar cargados, bien positiva o negativamente. Estas cargas sirven para estabilizar la conformacin natural de la protena y cuando el pH las cambia, tambin se modifica la estructura, llevando en ltimo extremo a la desnaturalizacin de la protena, y en el caso de las enzimas a la prdida de actividad. Dependiendo del medio dnde deba ejercer su accin cataltica, cada enzima tendr su conformacin ms adecuada, y por lo tanto su mxima actividad, alrededor de un valor concreto de pH, que recibe el nombre de pH ptimo. El cambio, bien sea hacia valores ms altos o ms bajos provocar una disminucin de la actividad. En el caso de la pepsina gstrica, una enzima digestiva, su pH ptimo est alrededor de 2 ya que el medio estomacal es un medio de gran acidez; mientras que otra enzima digestiva como la tripsina, cuyo lugar de accin cataltica es el intestino delgado, presenta su pH ptimo aproximadamente a 8. La mayor parte de las enzimas son muy sensibles a las variaciones de pH, con algunas excepciones, como es el caso de la amilasa salival, capaces de mantener la actividad en un amplio rango de valores de pH. Esta adaptacin garantiza su funcionamiento independientemente del valor del pH del alimento ingerido. La temperatura: Este factor presenta dos efectos contrapuestos, por un lado el aumento de temperatura produce, de forma general, un aumento en la velocidad de cualquier reaccin qumica; pero por otro lado, las enzimas experimentan desnaturalizacin y prdida de actividad al superar una determinada temperatura. En este caso resulta ms difcil determinar como en el pH una temperatura ptima, y las curvas de actividad presentan un incremento

inicial de actividad ms pronunciado para posteriormente al irse desnaturalizando, decrecer la velocidad de reaccin. De igual forma a mayor concentracin de sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima. Despus que alcanza esta velocidad, un incremento en la concentracin del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reaccin. Al conjunto de molculas que disminuyen la actividad enzimtica se les denomina inhibidores, y en las reacciones qumicas del organismo in vivo son utilizados para controlar el grado de actividad de una enzima concreta. Parte de esta utilidad puede estudiarse en muchas de las acciones de los frmacos, cuyos efectos se fundamentan en su accin como inhibidores de mayor o menor potencia de algunas enzimas, tal es el caso de un frmaco como la aspirina (cido acetilsaliclico) que inhibe la primera enzima de la sntesis de las prostaglandinas; Entre otros factores que tambin podran afectar dicha actividad (Battaner,1993). Con la ejecucin de la siguiente prctica se persigue el siguiente objetivo general: Experimentar mediante la aplicacin de tcnicas de laboratorio, las caractersticas generales de las enzimas y su efecto ante varios factores, tales como concentracin de enzimas, concentracin de sustrato, temperatura y pH.

MATERIALES Y MTODOS

1.-DISEO DE LA CURVA DE CALIBRACIN: Se tomarn seis tubos de ensayo y se rotularn del 1 al 6, luego se le agreg a cada uno 1.00 ml de yoduro de potasio, luego igualmente a cada uno se le coloc agua destilada pero las cantidades fueron distintas para cada tubo, al tubo N 1 4,90 ml, al N 2 4,80 ml, al N 3 4,60 ml, al N 4 4,50 ml, al N 5 4,20 ml, al N 6 4,00 ml y al tubo N 7 5,00 ml. Tambin se le agreg solucin de almidn al 0,05% en cantidades distintas a cada tubo, excepto al N 7 que no se le agreg porque fue usado para calibracin; al N 1 0,10 ml, al N 2 0,20 ml, al N 3 0,40 ml, al N 4 0,50 ml, al N 5 0,80 ml, al N 6 1,00 ml. Se observo y anot. 2.-EFECTO DEL TIEMPO DE INCUBACIN DE LA ENZIMA AMILASA SOBRE LA FORMACIN DEL PRODUCTO: Se tom 15 ml de (amilasa salival), a una compaera del curso; para ello se enjuago la boca con agua y luego la retuvo por unos minutos en la boca cerrada. Luego se tomarn 7 tubos de ensayo y se rotularon del 1 al 7, despus se les agreg 4ml de agua destilada y 1 ml de yoduro de potasio a los tubos del 1 al 6, y se mantuvieron a temperatura ambiente, al tubo N 7 no se le agreg agua destilada solo 2 ml de almidn y yoduro de potasio. Tambin se tomarn dos beakers y se rotularon como A y B, al A se le agreg 1 ml de saliva y al B 1 ml de agua destilada, se mantuvo listo un cronmetro. Despus se aadi 5 ml de solucin de almidn al 0,05% en ambos beakers, luego se coloc a funcionar el cronmetro y despus de 30 segundos con la ayuda de un jeringa plstica de 1 ml, se sac 1 ml del beakers B y se coloc en el tubo N 6, y 30 segundos ms tarde se sac 1 ml del beakers A y se agreg en el tubo N 1. Luego a intrvalos de 30 segundos se tomarn nuevas porciones de 1 ml del beakers A y se agregarn a los tubos N 3, 4 y 5. Y al final del experimento, se sac 1ml del beakers B y se agreg al tubo N 7, el cual se uso para calibrar. Se observo y anot.

3.-EFECTOS DE LA CONCENTRACIN DE LA ENZIMA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIN: Se tomarn seis tubos de ensayo y se rotularon del 1 al 6, luego se le agreg a cada tubo 5 ml de almidn al 0,05%, posteriormente se les agreg 5 ml de agua destilada, luego se le coloc a los tubos del 1 al 5 una solucin de saliva, las cantidades fuern distintas para cada tubo; para el tubo N 1 1,50 ml, al N 2 1,00 ml, al N 3 0,75 ml, al N 4 0,50 ml, al N 5 0,10 ml. Despus se incubo a temperatura ambiente cada tubo por 2 minutos, despus se le agreg 1 ml de yoduro de potasio a cada tubo, por ltimo se le realizaron las lecturas en el fotocolormetro. Se observo y anot. 4.-EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO SOBRE LA ACCIN DE LA ENZIMA: Se tomaron seis tubos de ensayo y se rotularon del 1 al 6, luego se le agreg 1,0 ml de solucin de saliva cada tubo, despus se le coloc a los tubos del 1 al 5 agua destilada pero las cantidades fueron distintas para cada tubo, al tubo N 1 4,0 ml, al N 2 2,0 ml, al N 3 2,5 ml, al N 4 3,0 ml, y al N 5 3,5 ml. Tambin se le agreg almidn al 005% a los tubos del 2 al 6, las cantidades fuern distintas a cada tubo, al N 2 2,0 ml, al N 3 2,5 ml, al N 4 3,0 ml, al N 5 3,5 ml, y al N 6 4,0 ml. Luego se incubo a temperatura ambiente cada tubo por 2 minutos, luego se aadi a cada uno 1 ml de solucin de yoduro de potasio y por ltimo se realizaron las lecturas en el fotocolormetro. Se observo y anot. 5.-EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA: Se tomaron 4 beakers y se rotularon como A,B,C, y D; luego se le aadi 5 ml de solucin de almidn al 0,05% a cada beakers, luego se le coloc 1 ml de la solucin buffer fosfato a los beakers A, B, C, a un ph distinto para cada beakers, para l A fue de pH 4, para l B fue 7, para l C fue de 9.Luego se le agreg 1 ml de solucin de saliva (amilasa salival) a cada uno de los beakers y se agit por un tiempo de 1 minuto. Cabe recordar que el beakers D no se le agreg solucin de buffer, pero si 1 ml de agua destilada. Luego se tomaron cuatro tubos de ensayo y se rotularon del 1 al 4, posteriormente se les agreg a cada uno 1ml de solucin

de saliva. Luego ya casi finalizando se sac 1 ml del beakers A y se coloc en el tubo N 1, luego 1 ml de B y se coloc en el tubo N 2, luego 1 ml de C se coloc en el tubo N 3, y 1 ml de D y se coloc en el tubo N4. Cabe decir que el tubo calibrador solo se le agreg 2 ml de almidn y 2 ml de yoduro de potasio. Y por ltimo se realizarn las lecturas en el fotocolormetro a los 4 tubos rotulados del 1 al 4. Se observo y anot. 6.-EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA: Se prepararon dos beaker A y B que contenan 5 ml de almidn pero a diferentes temperaturas, el beaker B a 37C y el beaker A a 4C. En otro beaker se colocaron 2,5 ml de solucin de amilasa. Luego se rotularon 12 tubos de ensayos 6 tubos para la muestra a 37C y los otros 6 tubos para la muestra a 4C. A cada tubo de ensayo se le agregaro 1 ml de lugol y 4 ml de agua destilada. Despus se Obtuvo 1 ml de amilasa y se le agreg al beaker B (37C), luego a intervalos de tiempo de 30 segundos se agregaban 1 ml de solucin a cada tubo . Este mismo procedimiento se realizo con el beaker A (prueba a 4C).

Posteriormente, despus de realizadas las pruebas, las mismas fueron llevadas al fotocolormetro para realizar las lecturas correspondientes. 7.-EFECTO DE LA TEMPERATURA Y EL PH SOBRE LA ACCIN DE LA ENZIMA: Se tomaron seis tubos de ensayo y se rotularon del 1 al 6, en cada uno se coloc 4 ml de agua destilada y 1 ml de yoduro de potasio. Tambin se tomaron tres beakers y se rotularon como A, B y C; a cada uno se le coloc 3 gotas de HCL2M. Despus se coloc 1,5 ml de solucin de saliva, en un tubo adicional a los seis que se tenan, luego este se incubo por 2 minutos en un bao de agua hirviendo, luego se dej enfriar; una vez que se enfriado este se coloc en el beakers C. En el beakers A y B se coloc 1,5 ml de solucin de saliva fresca. Posteriormente se agit cada beakers, luego se sac 1 ml de los beakers A, B y C y se coloc, en 1 ml del beakers A, en el tubo N1, el B en el N2, y el C en el N3. Despus de un lapso de 3 minutos se sac una segunda porcin de 1 ml de cada uno de los beakers A, B y C, y se vertieron sobre los tubos 4, 5 y 6. Luego se realiz la lectura de todos los tubos en el fotocolormetro. Se observo y anot.

RESULTADOS
1.-

DISEO DE LA CURVA DE CALIBRACIN:

Tabla 1.1 Datos para diseo de la curva de calibracin. N de tubo 1 2 3 4 5 6 7 Agua (ml) 4,9 4,8 4,6 4,5 4,2 4 5 Almidn (ml 0,05%) 0,1 0,2 0,4 0,5 0,8 1 0 Concentracin almidn (l/l) 50 100 200 250 400 500 0 Absorbancia 0,01 0,02 0,08 0,17 0,29 0,36 0

0.4 0.35 0.3 y = 0.0007x R = 0.9465

Absorbancia

0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0 100 200 300 400 500 600

Concentracin Almidn (l/l)

En la siguiente grafica se observa claramente, que a medida que aumenta la concentracin de almidn, aumenta notablemente la absorvancia; lo que quiere decir, que el color obtenido es directamente proporcional a la cantidad de almidn presente.

2.-EFECTO DEL TIEMPO DE INCUBACIN DE LA ENZIMA AMILASA SOBRE LA FORMACIN DEL PRODUCTO: Tabla 2.2 datos para grafico de efecto del tiempo incubacin de la enzima amilasa sobre la formacin de producto. Tiempo(seg) Beacker Beacker CS CS CP CP A (con B (sin Beacker Beacker Beacker Beacker enzima) enzima) A (con B (sin A (con B (sin enzima) enzima) enzima) enzima) 0 357,14 0,00 30 0,18 257,14 0,00 100,00 60 0,16 228,14 128,57 90 0,15 214,29 142,86 120 0,1 142,86 214,29 150 0,1 142,86 214,29 0 0,25 357,14

400.00 350.00 300.00

Sustrato

Concentracin

250.00 200.00 150.00 100.00 50.00 0.00 0 20 40 60 80 100 120 140 160

Producto

Tiempo (seg)

En la presente grafica se observo que ha medida que diminuye la concentracon del complejo (producto enzima) aumenta el complejo (sustrato enzima), quedando la enzima libre para catalizar otra reaccion.

3.-EFECTOS DE LA CONCENTRACIN DE LA ENZIMA SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIN: Tabla: 3.3. Datos para grafica de efecto de la concentracin de enzima sobre la velocidad de la reaccin. N de Tubo Enzima (ml) Absorvancia Almidn (l/l) Velocidad de reaccin (l/min) 628,57 428,57 250,00 214,29 71,43 0,00

1 2 3 4 5 6
700.00 600.00 500.00 400.00 300.00 200.00 100.00 0.00 0 -100.00

1,5 1 0,75 0,5 0,1 0

0,42 0,7 0,95 1 1,2 1,3

600,00 1000,00 1357,14 1428,57 1714,29 1857,14

Velocidad de Reaccin ( l/min)

0.2

0.4

0.6

0.8

1.2

1.4

1.6

Enzima (ml)

En la siguiente grafica se observa, que a medida que aumenta la concentracin de la enzima, a una concentracin fija de sustrato (almidn), aumenta significativamente la velocidad de la reaccin.

4.-EFECTO DE LA CONCENTRACIN DEL SUSTRATO SOBRE LA ACCIN DE LA ENZIMA: Tabla: 4.4. Datos para grafica de efecto de la concentracin del sustrato sobre la accin de la enzima. N deTubos 1 2 3 4 5 6 Almidn inicial (l/l) 0 1000 1250 1500 1750 2000 Absorvancia Almidn final(l/l) 0 281,25 381,25 393,75 625 625 Almidn consumido (l) 0,00 718,75 868,75 1106,25 1125,00 1375,00 Velocidad de reaccin (l/min) 0,00 359,38 434,38 553,13 562,50 687,50

0 0,45 0,61 0,63 1 1

800.00

Velocidad de Reaccin (l/min)

700.00 600.00 500.00 400.00 300.00 200.00 100.00 0.00 0 500 1000 1500 2000 2500

Concentracin Almidn (l/l)

En la siguiente grafica se observa muy claramente, que a medida que aumenta la concentracin de almidn (sustrato), a una concentracin fija de enzimas aumenta crecientemente la velocidad de la reaccin.

5.-EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA:

Tabla: 5.5. Datos para grafica de efecto de pH sobre la actividad de la amilasa. pH 4 7 9 Absorvancia 0,13 0,15 0,11 Almidn (l/l) 185,7142857 214,2857143 157,1428571 Velocidad de reaccin (l/min) 0 175 200

250

200

Velocidad de la Reaccin (l/min)

150

100

50

0 0 2 4 6 8 10 12 14

pH

En la siguiente grfica se observa claramente que la enzima amilasa salival utilizada en el experimento, tiene un pH ptimo de 9, es decir la misma trabaja ptimamente en un pH bsico.

6.-EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD DE LA AMILASA:

Tabla: 6.6: datos para grafica de efecto de la temperatura sobre la actividad de la amilasa. 37C Absorbancia 22C Absorbancia2 Almidn (l/l) 3 0,18 0,16 0,15 0,10 0,10 357,14 257,14 228,57 214,29 142,86 142,86 5C Absorbancia Almidn (l/l) 0,27 0,23 0,22 0,21 0,19 0,10 357,14 385,71 328,57 314,29 300,00 271,43 142,86 Producto 22C 0,00 100,00 128,57 142,86 214,29 214,29

Tiempo (seg) 0 30 60 90 120 150 180

Almidn (l/l) 357,14 314,29 285,71 228,57 200,00 185,71 171,43

37C 0,00 42,86 71,43 128,57 157,14 171,43 185,71

5C 0,00 28,57 42,86 57,14 85,71 214,29

0,22 0,20 0,16 0,14 0,13 0,12

250.00

200.00

150.00

100.00

37C 22C

50.00

5C

0.00 1 2 3 4 5 6 7

En esta grafica se observa notoriamente que la enzima amilasa salival trabaja ptimamente a una temperatura de 22C, es decir, que la misma tiene un aumento en la velocidad de la reaccin a una temperatura ambiente, mientras que a 37C, la velocidad de la reaccin es un poco ms lenta; entre tanto la enzima a 5C, la velocidad de la reaccin es mucho ms lenta que en los casos anteriores.

7.-EFECTO DE LA TEMPERATURA Y EL PH SOBRE LA ACCIN DE LA ENZIMA: Tabla: 7.7. Datos para grafica de efecto de la temperatura y pH sobre la accin de la enzima. Tubo Tratamiento 1 normal 2HCL 3calor 4 N. 3min 5 HCL 3 min 6 calor 3 min Abs 0,25 0,26 0,25 1 Concentracin de almidn 357,1428571 371,4285714 357,1428571 1428,571429 Consumo de sustrato

1.2

Consumo de sustrato(l/l)

0.8

0.6

0.4

0.2

0 Normal HCL Calor N. 3min HCL 3min Calor 3min

Tratamiento

El ejercicio no dio los resultados adecuados, por ello no fue graficado.

DISCUSIN DE LOS RESULTADOS

En base a los resultados obtenidos es importante destacar que antes de realizar las reacciones enzimticas fue necesario, disear una curva de calibracin, ya que la actividad enzimtica de la enzima sobre el almidn puede medirse por el test de yoduro de potasio (solucin de lugol) que da una coloracin azul obscura a morada en presencia del polmero, y usando tambin la prueba de benedict que da un color rojizo en presencia de azucares reductores (glucosa) formados como un resultado de la accin enzimtica. La intensidad del color azulmorado del yoduro de potasio en presencia de almidn va a depender de la concentracin de almidn presente en el ensayo. Ates de iniciar cualquier ensayo enzimtico, es necesario por tanto, cerciorarse de que la reaccin almidn-yoduro de potasio le va a permitir calcular la intensidad del color producido por la reaccin al mezclar distintas cantidades de solucin de almidn con una concentracin fija de yoduro de potasio (Bronk, 1980). Con relacin a lo observado en el resultado de la prueba del efecto del tiempo de incubacin de la enzima (amilasa salival) sobre la formacin del producto; se determino que la enzima amilasa salival queda libre nuevamente para catalizar otra reaccin. Reiterando que la saliva es una enzima y como tal no sufre cambios, Por lo que el resultado es acorde. (Gerard, 2007). Basado en los resultados obtenidos con el ejercicio n 3 efecto de la

concentracin de la enzima sobre la velocidad de la reaccin, podemos decir, que a medida que aumenta la concentracin de la enzima a una concentracin fija de sustrato aumenta notablemente la velocidad de la reaccin. En toda reaccin enzimtica si se incrementa la concentracin de enzima, se forma mayor cantidad de producto por unidad de tiempo; el incremento en la velocidad de la reaccin es directamente proporcional al incremento en la concentracin de enzima, siempre y cuando la cantidad de sustrato no sea limitante, es decir, que el sustrato no llegue a agotarse ( Quesada, 2007).

En la experiencia realizada en base a el efecto de la concentracin de sustrato en la velocidad de la reaccin, se observo claramente que a medida que aumentaba la concentracin de sustrato (almidn), a una concentracin fija de enzimas, la velocidad de la reaccin aumentaba crecientemente, aunque no se logro saturar las enzimas, es decir no se logro llevarlas a su velocidad mxima ya que no se sigui incrementando la cantidad de sustrato. A mayor concentracin de sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima; despus que alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reaccin (Morrinson, et al, 1998). En base a los resultados obtenidos en la experiencia efecto de pH sobre la actividad de la amilasa, se obtuvo que el pH optimo para la actividad de esta enzima era de 9, en decir que trabajaba a un pH bsico cosa que discrepa totalmente de las fuentes bibliogrficas y es posible decir que el resultado tubo fuentes de error. La saliva, principalmente aquella producida por la partida, contiene una enzima, la amilasa salival, llamada tambin ptialina. Esta es capaz de actuar sobre los almidones y sobre glucgeno, rompiendo los enlaces alfa-1,4 de tal forma que se separan de dos en dos los fragmentos de la molcula polimrica. Las molculas que resultan entonces, son del disacrido maltosa. Pero la accin de la amilasa salival es de corta duracin; el bolo alimenticio permanece en la boca durante el tiempo de la masticacin y luego es deglutido. En el estomago el HCl del jugo gstrico le confiere un carcter acido, con un pH cercano a 2. El pH optimo de la amilasa es cercano a 7, por lo cual una vez llegado el bolo alimenticio al estomago se suspende la accin de la enzima (Pea, et al, 1998). En la experiencia realizada en base a el efecto de la temperatura sobre la actividad de la amilasa, se identifico claramente que segn los resultados obtenidos esta enzima trabaja u/o tiende a aumentar notablemente la velocidad de la reaccin a 22C, mientras que a 37C esta trabaja un poco ms lenta, cosa que discrepa grandemente con lo reportado en las fuentes bibliogrficas, esto puede deberse a alguna fuente de error durante la realizacin de la prctica, ya que es ilgico que esta enzima que forma parte de nuestro cuerpo el cual

naturalmente se encuentra a una temperatura optima de 37C, se haya obtenido este resultado. Adems es bien conocido el hecho de que al aumentar la temperatura aumenta la energa cintica de las molculas reaccionantes, y por consiguiente es mayor la probabilidad de que ocurran colisiones efectivas para que la reaccin se lleve a cabo como las reacciones enzimticas no son una excepcin a esta regla se velocidad aumenta con la temperatura. Pero cuando la temperatura llega a cierto valor, variable segn la enzima de que se trate, esta empieza a desnaturalizarse y la velocidad de la reaccin comienza a disminuir (Pea, et al, 1998). En el ejercicio n 7 efecto de la temperatura y el pH sobre la accin de la enzima, no se logro graficar, ya que los resultados no fueron los adecuados, entonces el mismo no se pudo estudiar a profundidad.

BIBLIOGRAFA

.-Purves; Sadava; Heller; Orians;Hillis, (2009), Vida la ciencia de la biologa; Octava edicin, Editorial: Panamericana, Pg: 129-132, Buenos Aires: Argentina. .-SOLOMON, E., BERG, L., MARTIN, D. & C. VILLE. 1998. Biologa de Ville. Cuarta Edicin. McGraw-Hill Interamericana. Acua, M. L. 1991. Gua de trabajos prcticos Biologa II (Introduccin a la biologa celular). Universidad de Oriente. 77 pg. .-Bataner A., Enrique, (1993); Biomlculas, Ediciones: Universidad de Salamanca; Pg. 276-280. Espaa. .- Bronk R., J. (1980); Biologa qumica: una introduccin a la bioqumica. Compaa continental S.A. .-Quesada M., Silvia (2007); Manual de experimentos de laboratorio para Bioqumica. Editorial: Universidad Estadal a Distancia. San Jos, Costa Rica. .-Morrison, R. T.; Boyd, R. N. (1998); Qumica Orgnica 5 ed. Pearson Educacin, Mxico. .-Pea; Arrollo; Gmez; Tapia; Gmez; (1998); Bioqumica. Segunda Edicin. Limusa Noriega Editores. Mxico D.F. .-Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case, (2007). Introduccin a la Microbiologa. Editorial Mdica Panamericana.

CONCLUSIONES

.- Es necesario disear una curva de calibracin, ya que la actividad enzimtica de la enzima sobre el almidn puede medirse por el test de yoduro de potasio (solucin de lugol) que da una coloracin azul obscura a morada en presencia del polmero, y usando tambin la prueba de benedict que da un color rojizo en presencia de azucares reductores (glucosa) formados como un resultado de la accin enzimtica. La intensidad del color azul-morado del yoduro de potasio en presencia de almidn va a depender de la concentracin de almidn presente en el ensayo. Ates de iniciar cualquier ensayo enzimtico, es necesario por tanto, cerciorarse de que la reaccin almidn-yoduro de potasio le va a permitir calcular la intensidad del color producido por la reaccin al mezclar distintas cantidades de solucin de almidn con una concentracin fija de yoduro de potasio. .- La saliva es una enzima y como tal no sufre cambios. .- En toda reaccin enzimtica si se incrementa la concentracin de enzima, se forma mayor cantidad de producto por unidad de tiempo; el incremento en la velocidad de la reaccin es directamente proporcional al incremento en la concentracin de enzima, siempre y cuando la cantidad de sustrato no sea limitante, es decir, que el sustrato no llegue a agotarse. .- En toda reaccin enzimtica si se incrementa la concentracin de enzima, se forma mayor cantidad de producto por unidad de tiempo; el incremento en la velocidad de la reaccin es directamente proporcional al incremento en la concentracin de enzima, siempre y cuando la cantidad de sustrato no sea limitante, es decir, que el sustrato no llegue a agotarse .- A mayor concentracin de sustrato, a una concentracin fija de la enzima se obtiene la velocidad mxima; despus que alcanza esta velocidad, un aumento en la concentracin del sustrato no tiene efecto en la velocidad de la reaccin. .- El pH optimo de la amilasa es cercano a 7, por lo cual una vez llegado el bolo alimenticio al estomago se suspende la accin de la enzima.

.-Un aumento de 10C duplica la velocidad de la reaccin, hasta ciertos lmites. El calor es un factor que desnaturaliza las protenas por lo tanto si la temperatura se eleva demasiado, la enzima pierde su actividad, la temperatura ptima para la enzima amilasa salival es de 37C ya que esta forma parte de nuestro cuerpo. .-El error de algunos estudiantes no permiti el estudio adecuado en cuanto al ejercicio n 7, efecto de la temperatura y el pH sobre la accin de la enzima, por lo que es recomendable prepararse bien antes de realizar cualquier estudio en el laboratorio, para de esta forma aplicar de manera adecuada las tcnicas de laboratorio necesarias.