PHARMACOLOGIE GENERALE BLG 121

LES CIBLES DES MEDICAMENTS Cours du 07 Octobre 2010

O. Hennebert Dpartement CASER CNAM, PARIS olivier.hennebert@cnam.fr

Sance 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

Date 07/10/10 09/10/10 14/10/10 16/10/10 21/10/10 23/10/10 28/10/10 30/10/10 04/11/10 06/11/10 13/11/10 18/11/10 20/11/10 25/11/10 27/11/10 02/12/10 04/12/10

Programme Les cibles des mdicaments Rceptologie Pharmacocintique (1) Pharmacocintique (2) Pharmacocintique (3) Pharmacocintique (4) TD Rceptologie (1) TD Rceptologie (2) Dose-rponse/ agoniste antagoniste TD Dose-rponse/ agoniste antagoniste (1) TD Dose-rponse/ agoniste antagoniste (2) Interactions mdicamenteuses/ les effets placebo (1) Interactions mdicamenteuses/ les effets placebo (2) Pharmacologie des rcepteurs nuclaires (1) Pharmacologie des rcepteurs nuclaires (2) Pharmacologie des catcholamines (1) Pharmacologie des catcholamines (2)

enseignant O.Hennebert O.Hennebert P. Pochart P. Pochart P. Pochart P. Pochart S. Niro S. Niro O.Hennebert O. Hennebert O.Hennebert O.Hennebert O. Hennebert O.Hennebert O.Hennebert O.Hennebert O. Hennebert

18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 Examen

09/12/10 11/12/10 16/12/10 18/12/10 06/01/10 08/01/10 13/01/10 15/01/10 20/01/10 22/01/10 27/01/10 29/01/10

Pharmacologie de l'inflammation (1) Pharmacologie de l'inflammation (2) Examen partiel (contrle continu)

O.Hennebert O.Hennebert O.Hennebert O.Hennebert P. Pochart P. Pochart A. Zamborlini A. Zamborlini O.Hennebert O.Hennebert O. Hennebert O.Hennebert

Correction contrle continu Les anti-microbiens Sance de rvision PK Virus et cancer (1) Virus et cancer (2) + RESUME (contrle continu 2) Neuropharmacologie (1) Neuropharmacologie (1) Rvisions Rvisions EXAMEN

03/02/2011

Certificat de comptence en pharmacologie (36 crdits)

BLG 121 : Pharmacologie gnrale BLG 105 : Bio exprimentation STA 109 : Bio statistiques CHR 211 : Stratgies de dcouverte et modes d'actions des mdicaments GAN 110 : Mthodes spectromtriques et biotechnologies : Application la
Bioanalyse

1 projet tutor

Objectifs de lenseignement :
- Savoir dfinir un rcepteur et le caractriser - Savoir dfinir et caractriser un agoniste et un antagoniste - tre capable de dcrire et interprter une courbe dose-rponse - Connatre les mcanismes dabsorption, distribution et matriser les paramtres pharmacocintiques - Utiliser la quantification de leffet pharmacologique pour comparer entre elles, les diffrentes spcialits au sein dune mme famille thrapeutique. - Applications des systmes (pharmaco anticancreuse, de lischmie crbrale)

La diversit des cibles des mdicaments (483)

Canaux ioniques ADN Hormones et Facteurs de croissance

Rcepteurs nuclaires

Enzymes

Rcepteurs membranaires

Cibles non dtermines

Selon Drew 2000

Les cibles potentielles des mdicaments (6500)

Canaux ioniques 1000 Cibles dj exploites Rcepteurs nuclaires >150

Enzymes 3500
Rcepteurs heptahlicaux 2000

2.5%
canaux ioniques

4%
enzymes

10%
rcepteurs heptahlicaux

17%
rcepteurs nuclaires

Reprsentation schmatique de linteraction mdicament rcepteur

PHARMACOCINETIQUE

Etudes dabsorption, distribution et mtabolisme

rcepteur Ligand Mdicament

Effecteur

SYSTEME DE TRANSDUCTION Etudes de liaison (quantification interaction) Effet thrapeutique Effet pharmacologique (in vitro, ex vivo, in vivo) Etudes fonctionnelles (courbe dose-rponse) PHARMACODYNAMIE PRE CLINIQUE

PHARMACOMETRIE

ESSAIS CLINIQUES

Le mdicament : Synthse chimique DROGUE Semi-synthse Forme officinale lmentaire Poudre, solut Biotechnologie(s)

Principe actif Formes pharmaceutiques (Galnique)

Excipient(s)

MEDICAMENT OBJET

On appelle effet pharmacodynamique une modification mesurable et reproductible, fonctionnelle ou organique, provoque par un mdicament dans un systme biologique appel effecteur .

Un mdicament possde : - un effet principal, utilis en thrapeutique - des effets secondaires (latraux), qui sont utiles ou indiffrents ou gnants ou nuisibles.

Un mme effet pharmacodynamique peut tre provoqu par plusieurs mdicaments ; l'ensemble de ces mdicaments constitue une famille pharmacologique

Pharmacologie: des centres dintrts divers, mais complmentaires Recherche et dveloppement de mdicaments: pharmacologie pr-clinique, pharmacologie clinique

dmontrer efficacit du candidat-mdicament, sur des modles exprimentaux (molculaires, cellulaires, tissus/organes, animal entier) et chez lHomme. finalit: mise sur le march du mdicament

dmontrer efficacit du candidat-mdicament sur des modles exprimentaux (molculaires, cellulaires, tissus/organes, animal entier) et chez lHomme. finalit: mise sur le march du mdicament

Evolution de la pharmacologie, science du mdicament (1)

Ne en Europe au dbut du XIXe sicle. Btie sur lexprience accumule pendant des millnaires Plaquettes dargile sumriennes (Msopotamie) : 2200 av J.C. - prescription de nombreuses prparations base dorganes animaux et vgtaux

Papyrus de lEgypte ancienne (papyrus dEberts) : 1550 av J.C. - 800 prescriptions (exemple dune prparation base de foie animal propose pour les difficults de vision nocturne : proprits de la vitamine A)

Evolution de la pharmacologie, science du mdicament (2)

Hippocrate : 460-377 av J.C. - encyclopdie (72 volumes). Les crits hippocratiques devinrent la base de lenseignement dogmatique de Platon, Aristote et Thophraste. - serment mdical dHippocrate

Thophraste : IVe sicle av J.C. - Grand historien des plantes (Historia Plantarum)

Evolution de la pharmacologie, science du mdicament (3)

Claudius Galienus, Galien : 129-200 - mdecin Rome - auteur de 400 640 ouvrages recouvrant tous les domaines mdicaux - cite de nombreux remdes (473 vgtaux) - affirme limportance de la thorie issue de lobservation clinique et limportance de lexprimentation

Ibn Sina, Avicenne : 980-1037 - reprsentant de lcole byzantine - crit canon de la mdecine o sont cits des remdes inconnus: - ail et oignon comme vasodilatateurs

Evolution de la pharmacologie, science du mdicament (4)

Philip Theophrastus Bombast von Hohenheim, Paracelse : 1493-1541 - Etudes de Mdecine en Italie - vue originale de la mdecine emprunte de mysticisme - tenta de rationaliser les prescriptions moyengeuses et affirma limportance des doses utilises - sels de mercure dans le traitement de la syphilis

Stagnations des connaissances entre lpoque grcoromaine et la renaissance

Evolution de la pharmacologie, science du mdicament (5)

Et pendant ce temps l, en Asie

Pharmacope chinoise au XVIIe sicle: 1871 substances dont 1074 vgtales, 443 animales et 354 minrales dcrites par Li Che-Tchen (1518-1593) dans son Pen Tsao Kong Mu.

Le plus ancien texte mdicale de lInde, la Caraka Samhit, numre 500 plantes. Le livre de Susbruta en cite 760 groups en 68 classes thrapeutiques.

Evolution de la pharmacologie, science du mdicament (6)

XVIIe sicle : Avnement de la pharmacologie grce lanatomie, la physiologie et llectricit

-Chimie dextraction -Chimie de synthse -Techniques de biologie molculaires

Aujourdhui

Experimental pharmacology had its beginning in France early in the 19th century. Some decades later it continued in other countrie in Europe, especially in Germany and Great Britain
B. Holmstedt et G. Liljestrand Reading in Pharmacology The Macmillan Company, New York, 1963 pp 62-63

Evolution de la pharmacologie, science du mdicament (7)

La France est le berceau de la pharmacologie exprimentale avec les travaux de Franois Magendie et de son lve Claude Bernard

Franois Magendie : 1783-1855 - mdecin la Piti salptrire et lHtel Dieu - 1809 : tude de leffet dun poison de flche de Java et Borno prpar partir de la plante du genre Strychnos, Upas tient. Description des symptmes de lintoxication la strychnine. - uvre majeure: formulaire pour la prparation et lemploi de plusieurs mdicaments, tels que la morphine, la strychnine, la vratrine, liode. - dcrit galement limportance dans les essais chez lhomme de contrle avec de leau colore et des pilules de pain PLACEBO

Evolution de la pharmacologie, science du mdicament (8)

Claude Bernard: 1813-1878 - lve de Magendie - travaux de pharmacologie sur les substances toxiques quil considrait
comme des espces dinstruments physiologiques plus dlicats que nos moyens mcaniques et destins dissquer, pour ainsi dire, une une, les proprits anatomiques de lorganisme vivant

- ses travaux sur le curare et la nicotine sur le systme nerveux et le systme musculaire suggrrent une discontinuit nerf-muscle et furent lorigine de la notion de synapse - auteur de Introduction ltude de la mdecine exprimentale et leons sur les effets des substances toxiques et mdicamenteuses

 Corpora non agunt nisi fixata

Les substances nagissent pas si elles ne sont pas fixes Paul Ehrlich (1854-1915) Prix Nobel 1908

Pharmacologie: des centres dintrts divers, mais complmentaires

Recherche fondamentale :

Approche pharmacologique pour lucider le rle de certains gnes, pour analyser des mcanismes physiologiques / physiopathologiques disposer dagents pharmacologiques (agonistes, antagonistes; activateurs, inhibiteurs) pour valuer la fonction dune cible donne, et les consquences dune modification du fonctionnement de cette cible

critre indispensable: slectivit de lagent pour la cible ces agents = candidat-mdicaments finalit: physiologie, physiopathologie (approche pharmacologique = outil)

Stratgies et dmarches de pharmacologie Dmarche classique de la rponse la cible 1 substance Effet sur cellules, organes/tissu Pharmacologie inverse de la cible la rponse Gne gnomique Protine (rcepteur) protomique Ligand endogne Outil pharmacologique Effet sur cellules, organes/tissu

Existence d1 ou pls rcepteurs Identification du rcepteur Clonage du rcepteur Identification de nouveaux rcepteur

Fonction de la protine (gne)

Exemple des rcepteurs et effets de la morphine

Utilisation dextrait dopium, de morphine (isole en 1805), codine (isole en 1832) 1973: identification de rcepteurs la morphine Rcepteur ? recherche de ligands endognes

Exemple des rcepteurs et effets de la morphine

1975-1977: isolement partir de cerveaux, de peptides (met-enkphaline, leu-enkphaline, -endorphine) entrant en comptition avec la morphine. Proprits analgsiques de ces peptides, similaires la morphine agonistes, antagonistes, agonistes partiels: caractrisation pharmacologique des rcepteurs aux opiodes multiplicit, classification , , 1992-1993: clonage des rcepteurs , , 1994: clonage dune protine prsentant forte homologie avec rcepteurs , ,

Exemple des rcepteurs et effets de la morphine

Exemple des rcepteurs et effets de la morphine

OP1 Nom commun couplage ligands Agonistes de synthse Antagonistes slectifs Antagonistes non slectifs Gi/0 Leu-enkphaline (7,9) Met-enkphaline (7,9) DPDPE (8,4) Natrindole (9,2) Naloxone (7,5)

OP2 Gi/0 Dynorphine (8,5) U69593 (7,2) Nor-BNI (10) Naloxone (8)

OP3 Gi/0 -endorphine (7,5) Endomorphine (8,4) DAMGO (8,4) CTOP (8) Naloxone (8,8)

Exemple des rcepteurs et effets de la morphine

Exemple des rcepteurs et effets de la morphine

- 1994 identification et clonage dun rcepteur orphelin (ORL1) faible affinit pour agonistes / antagonistes m, d, k fonction inconnue recherche dun ligand endogne (hypothse: nature peptidique)

1995: isolement de la nociceptine (orphanine FQ) caractrisation des proprits pharmacologiques de la nociceptine liaison spcifique au rcepteur ORL 1 effet pro-analgsique in vivo (modle animal de douleur)

NOP receptor agonists might be beneficial in the treatment of pain, anxiety, stressinduced anorexia, cough, neurogenic bladder, edema, drug dependence, and, less promising, in cerebral ischemia and epilepsy, while antagonists might be of help in the management of pain, depression, dementia and Parkinsonism. N/OFQ is also involved in cardiovascular, gastrointestinal and immune regulation.

Les divers types de rcepteurs des mdiateurs (1)

Mdiateurs lipophiles: hormones strodiennes, thyrodiennes et les rtinodes Rcepteurs localiss dans le noyau de la cellule ou migrent du cytosol vers le noyau

Rle de facteurs de transcription activs par liaison dun mdiateur

Mdiateurs non lipophiles: les rcepteurs sont intgrs la membrane plasmique avec une disposition transmembranaire 3 principaux groupes

Les divers types de rcepteurs des mdiateurs (2)

Les rcepteurs activit de canal ionique (rcepteurs ionotropiques) ou canaux ioniques activs par un mdiateur: permet le passage slectif dions

Les rcepteurs enzymes : les rcepteurs activit guanynyl-cyclase: production de GMPc. Ils peuvent tre membranaires ou cytosoliques: activation de protines kinases de classe G les rcepteurs activit protine kinase ou associs une protine kinase cytosolique

Les rcepteurs heptahlicaux coupls des protines G trimriques. Ils comportent 7 domaines transmembranaires et sont monomriques: lactivation mne la production de second messagers (AMPc, ions, )

Les divers types de rcepteurs des mdiateurs (3)

Rcepteur protine kinase Rcepteur nuclaire

RCPG

Rcepteur ionotropique

Les autres cibles des mdicaments (1)

Les diverses protines impliques dans les transports membranaires :

Canaux calciques (liaison des dihydropyridines effets cardiovasculaires) Canaux potassiques sensibles lATP (sulfamides antidiabtiques) Canaux sodiques (anesthsiques locaux, antiarythmiques) Na+/K+ ATPase ou pompe sodium (digitaliques cardiotoniques) H+ APTase ou pompe proton (inhibiteurs antiulcreux, omprazole) Co-transporteurs ioniques (diurtiques) Transporteurs des neuromdiateurs (antidpresseurs, imipramine, etc)

Les enzymes des grandes voies mtaboliques et protines microtubulaires : HMG CoA rductase (statines hypocholestrolmiantes) Xanthine oxydase Aromatase Dihydrofolate rductase (anticancreux, mthotrexate) Topoismrase II (anticancreux toposide) Protines microtubulaires (colchicine et anticancreux vinblastine)

Les autres cibles des mdicaments (2)

Les enzymes impliqus dans le mtabolisme des mdiateurs : Actylcholinestrase Monoamine oxydase Enzyme de conversion de langiotensine Cyclo-oxygnases

Les enzymes des voies de signalisation cellulaires : Phosphodiestrases des nuclotides cycliques (vasodilatateurs) Phospholipases, protines kinases et tyrosine kinase, protines phosphatases

Les rcepteurs activit de canal ionique (rcepteurs ionotropiques) (1)

Ces rcepteurs canaux sont des protines polymriques de la membrane plasmique Ils sont de structure gnralement pentamrique.

Rcepteur cholinergique nicotinique

Les rcepteurs activit de canal ionique (rcepteurs ionotropiques) (2)

Chaque monomre prsente 4 hlices transmembranaires Les extrmits N- et C-terminales sont extracellulaires Chaque monomre peut tre cod par plusieurs gnes plusieurs isoformes

LES MEDIATEURS DE CES RECEPTEURS SE LIENT PARALLELEMENT AUX RECEPTEURS DE LA SUPERFAMILLE DES RCPG

Permabilit ionique: - anionique - cationique

Les rcepteurs activit de canal ionique (rcepteurs ionotropiques) (3) rcepteurs cationiques = rcepteurs excitateurs
Dnomination Rcepteur nicotinique Rcepteur 5HT3 Rcepteurs NMDA, AMPA, kanate Ligand endogne Ach 5HT srotonine Glu, Asp localisation gg SNP, jonction neuromusculaire Neurone: contrle centre de vomissement Neurone: rle dans dveloppement crbral, processus dapprentissage et mmorisation

Les rcepteurs activit de canal ionique (rcepteurs ionotropiques) (4)

Rcepteurs inhibiteurs = rcepteurs anioniques

Dnomination Rcepteur GABAA Rcepteur glycine Ligand endogne Acide amino butyrique glycine localisation Neurone Neurone

Les rcepteurs activit de canal ionique (rcepteurs ionotropiques) (5)

Structure du rcepteur GABA

Les rcepteurs sont htro- ou homo-multimriques 5 sous units: (6), (3), (1), (3), (1), (3) et (1) Pour certaines de ces sous units, existence dun pissage alternatif

Les rcepteurs enzymes (activit guanynyl-cyclase) (1)

A lheure actuelle, 7 isoformes de guanynyl-cyclase membranaire ont t clones: - GC-A, GC-B et GC-C ont des ligands et des fonctions caractrises - GC-D G: rcepteurs orphelins (prsents sur les neurones olfactifs et dans la rtine Principaux ligands: peptides natriurtiques (ANF, BNF, CNF)

Les rcepteurs enzymes (activit guanynyl-cyclase) (2)

Ces rcepteurs sont des homodimres membranaires. Chaque monomre comporte 6 ou 7 domaines:

lextrmit N-terminale: - site de liaison des mdiateurs, plusieurs rsidus cystyls (dimrisation) lhlice -transmembranaire: permet linsertion dans la bicouche lipidique le domaine cytoplasmique juxtamembranaire (correspond lextrmit C-terminale) un domaine rgulateur comportant des sites de phosphorylation Sites allostriques fixant ADT et ATP (stimulent lactivit des GC-A C) une rgion charnire: intervient dans la dimrisation le domaine catalytique: transforme le GTP en GMPc

ATP

P
ATP
GTP GMPc Etat activ

P
ATP
GTP GMPc

Etat dsensibilis

Etat basal

P
ATP

P
ATP ATP

Les rcepteurs enzymes (activit guanynyl-cyclase) (3)

Les guanylyl-cyclases cytosoliques et leurs ligands Ce sont des htrodimres constitus de sous units et . Co-expression ncessaire lactivit enzymatique Chaque sous unit comprend trois domaines: lextrmit N-terminale qui fixe une molcule dhme/ htrodimre La prsence de lhme est ncessaire la fixation du NO le domaine intermdiaire de dimrisation le domaine catalytique C-terminal. La co-expression des deux sous units est ncessaire lactivit catalytique Chaque dimre nhydrolyse quun seul GTP Mg2+ cofacteur indispensable

Les rcepteurs enzymes (activit guanynyl-cyclase) (4)

Les guanylyl-cyclases cytosoliques et leurs ligands Cas du NO et de la NO-synthase

NH2 NADPH

CaM

COOH

Arginine +02

eFAD

eFMN

e-

NADP+ H+

rductase BH4 oxygnase

Citrulline +NO

Les rcepteurs enzymes (activit guanynyl-cyclase) (5)

Quelques exemples deffets cellulaires du GMPc

Les rcepteurs enzymes (activit tyrosyl-kinase) (1)

Superfamille comprenant des rcepteurs liant des hormones, des facteurs de croissance et des ephrines (protines des surfaces cellulaires)
Les rcepteurs sont classs en famille selon lanalogie de structure de lextrmit Nterminale: la famille des rcepteurs de lEGF (erbB, erbB-2, Neu, erbB-3 et 4) la famille des rcepteurs de linsuline de lIGF la famille des rcepteurs du PDGF (PDGFR- et , rcepteur du Stem cell factor) la famille des rcepteurs du VEGF (Flt-1 et 2) la famille des rcepteurs du FGF (FGFR-1 et 2) la famille des rcepteurs du NGF (TrkA, B et C) la famille des rcepteurs des ephrines (EphA1 A8, EphB1 B6)

Les rcepteurs enzymes (activit tyrosyl-kinase) (2)

Les rcepteurs enzymes (activit tyrosyl-kinase) (3)

Rcepteur de lEGF Rcepteur de linsuline

Signalisation intracellulaire

Les rcepteurs enzymes et rcepteurs coupls des kinases cytosoliques