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Las enzimas son catalizadores en extremo eficientes; existen cuatro (04) factores principales mediante los cuales las enzimas aceleran las velocidades de las reacciones qumicas: 1. PROXIMIDAD y ORIENTACIN del sustrato en relacin al grupo o sitio cataltico. 2. TENSIN y DISTORSION del enlace susceptible, por acoplamiento inducido de la enzima. 3. CATLISIS ACIDO-BASE GENERAL, en donde las enzimas actan como potentes catalizadores para muchas reacciones orgnicas en sistemas acuosos. La catlisis cidobase es la aceleracin de una reaccin que se logra por la transferencia de un protn. 4. CATLISIS COVALENTE, en donde algunas enzimas reaccionan con sus sustratos para formar complejos Enzima-Sustrato (ES) unidos por covalencia y muy inestables. En sntesis, las enzimas promueven o catalizan las reacciones qumicas orientando al sustrato con la exactitud posible hacia el sitio cataltico, o bien proporcionando grupos catalticos que cedan o acepten protones , por formacin de intermediarios covalentes inestables con el sustrato o ejerciendo tensiones o distorsiones sobre el sustrato.
ENZIMAS REGULADORAS.Adems de la actividad cataltica, algunas enzimas poseen actividad reguladora y desempean el papel de determinantes de la velocidad del metabolismo. Estas enzimas colocadas de manera estratgica en las rutas metablicas, tienen una propiedad importante, adems de su eficiencia cataltica y su especificidad, su actividad puede ser regulada en forma reversible. Una enzima reguladora tiene un segundo sitio para la unin de ligandos fuera de su centro activo o cataltico; a este segundo sitio se le llama SITIO REGULADOR. Los sitios regulador y cataltico son regiones distintas de la protena. En la mayor parte de los sistemas multienzimticos, la primera enzima de la secuencia es la enzima reguladora; las dems enzimas de la secuencia, que se hallan habitualmente en cantidades que proporcionan un gran exceso de actividad cataltica, siguen a la enzima reguladora. Existen dos clases de enzimas reguladoras: 1. Enzimas alostricos o Regulados No Covalentemente. (Alostrico significa otro espacio, otro sitio) 2. Enzimas regulados covalentemente Un mecanismo diferente de regulacin enzimtica lo constituyen los precursores inactivos de algunas enzimas (zimgenos). Muchas proteasas del estmago (pepsina) y del pncreas (tripsina y quimotripsina) se sintetizan en forma de proenzimas inactivas (pepsingeno, tripsingeno, quimotripsingeno) que requieren la accin de una proteasa especfica que libera un residuo polipeptdico, con lo que se obtiene la enzima activa. El sistema de formacin de precursores inactivos se da no slo en las enzimas: la hormona insulina se sintetiza como proinsulina y la protena fibrosa colgeno se sintetiza como procolgeno; en ambos casos proteasas especficas liberan restos polipeptdicos innecesarios y producen la protena activa.
distorsionar la conformacin del sitio activo, lo suficiente para disminuir la actividad de la enzima.
INHIBICIN ENZIMTICA
La mayor parte de las enzimas pueden inhibirse por ciertos reactivos qumicos especficos. Los inhibidores de las enzimas son muy tiles para aclarar las rutas metablicas en las clulas. Las enzimas catalizan virtualmente todos los procesos celulares, por lo que no es sorprendente que los inhibidores enzimticos se encuentren entre los principales medicamentos. La aspirina inhibe el primer paso de la sntesis de las prostaglandinas al bloquear irreversiblemente la accin de la prostaglandina perxido sintasa (un tipo de prostaglandinas que eleva la temperatura corporal produciendo inflamacin y dolor). Existen dos tipos de inhibidores de las enzimas: Irreversibles y Reversibles.
INHIBIDORES IRREVERSIBLES.- Son aquellos que se combinan con un grupo
funcional o lo destruyen, situado sobre la molcula de enzima y que era necesario para la actividad cataltica. Por ejemplo: el Fluorofosfato de Diisopropilo (DFP) inhibe a la enzima ACETILCOLINESTERASA, que es importante en la transmisin de los impulsos nerviosos. Esta enzima cataliza la hidrlisis de la acetilcolina. El Inhibidor irreversible DFP es muy activo y se combina con el grupo hidroxilo de un residuo de serina situado en el sitio activo de la acetilcolinesterasa para formar un derivado catalticamente inactivo.
INHIBIDORES REVERSIBLES.- Estos inhibidores pueden ser de varias clases:
Competitivos, No Competitivos e Incompetitivos. a) INHIBICION COMPETITIVA.- Se llama as porque el inhibidor compite con el sustrato por la unin al sitio activo, pero una vez unido, no puede ser transformado por la enzima. La inhibicin competitiva se puede revertir incrementando la concentracin del sustrato. Cuando un inhibidor competitivo se fija a una molcula de enzima, evita la fijacin del sustrato a la molcula de esa enzima. Inversamente, la unin del sustrato evita la fijacin del inhibidor; es decir, sustrato e inhibidor compiten por la fijacin a la enzima. Los inhibidores competitivos se parecen habitualmente al sustrato normal, son los llamados ANLOGOS DE LOS SUSTRATOS; debido a esta semejanza el inhibidor competitivo engaa a la enzima al unirse a l. Por ejemplo: la inhibicin competitiva de la enzima Succinato deshidrogenasa (cuyo sustrato es el c. succnico) por el anin malonato o por el anin oxalacetato.
COOH | CH2 | CH2 | COOH Ac. SUCCINICO COO | CH2 | COO MALONATO
Enzima
COOH | CH ||
2H
OXALACETATO La inhibicin competitiva se utiliza en el tratamiento de envenenamiento con metanol, que se convierte en formaldehido por la enzima alcohol deshidrogenasa; el formaldehido lesiona muchos tejidos, en especial los ojos. El etanol compite con el metanol por la enzima, de modo que la terapia para el envenenamiento con metanol es la aplicacin endovenosa de etanol, lo cual hace que la formacin de formaldehido sea lo suficientemente lenta como para que el metanol se pueda eliminar inocuamente en la orina. b) INHIBICION NO COMPETITIVA.- En esta inhibicin el inhibidor se une a la enzima en un sitio diferente del que se une el sustrato, alterando la conformacin de la molcula de enzima, de modo que se produce la inactivacin reversible del sitio cataltico. Los inhibidores no competitivos se unen reversiblemente tanto a la enzima libre (E) como al complejo enzima-sustrato (ES) a fin de formar los complejos inactivos Enzima-Inhibidor (EI) y Enzima-Sustrato-Inhibidor (ESI). E + I EI ES + I ESI
Cuando los inhibidores no competitivos, que no se asemejan estructuralmente a los sustratos, se fijan a la enzima (E) y al complejo ES con igual afinidad, el resultado se denomina Inhibicin No Competitiva Pura. Cuando el inhibidor se fija a la E y a ES con afinidad diferente, se denomina Inhibicin No Competitiva Mixta.
Vmx.
Vmx.
Velocidad Inicial
Km
[ S]
Existe una relacin cuantitativa entre la concentracin de sustrato y la velocidad de una reaccin enzimtica, determinada por la ECUACIN DE VELOCIDAD (relacin de Km y Vmx). En el grfico se muestra la relacin entre la concentracin de sustrato y la velocidad de una reaccin enzimtica. Esta curva tiene la misma forma general para la mayora de enzimas, es una hiprbola rectangular. En 1913, Leonor Michaelis y Maud Menten definieron una constante, conocida en la actualidad como Km, para establecer la relacin entre la concentracin de sustrato y la velocidad de una reaccin catalizada por una enzima, explicando de esta manera el comportamiento cintico de las enzimas. La Km (KM) se define como la concentracin de sustrato especfico al que una enzima determinada produce la mitad de su velocidad mxima. La forma caracterstica de la curva puede expresarse matemticamente por la ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN, donde: Vmx [ S ] vo = Km + [ S ] En donde: vo = velocidad inicial [ S ] = concentracin de sustrato Vmx = velocidad mxima Km = constante de Michaelis-Menten de la enzima para un Sustrato particular.
Esta ecuacin es bsica para todos los aspectos de la cintica enzimtica. Si se conocen Km y Vmx se puede calcular la velocidad de reaccin de una enzima a cualquier concentracin de sustrato. La cintica de Michaelis-Menten no es aplicable a las enzimas alostricas, las curvas usuales de velocidad concentracin de sustrato no son hiprbolas rectangulares, sino ms bien sigmoideas o en forma de S.
V e l o c d a d [S]
B) Velocidad de Reaccin en Funcin del Tiempo.- Para el estudio de este factor es necesario definir el orden de las reacciones qumicas: Reaccin de Orden Cero: se llama as a una reaccin en la cual la cantidad de sustrato transformado por unidad de tiempo permanece constante independientemente de su concentracin; es decir, que si se realiza una reaccin enzimtica con un sustrato y que cada minuto se realiza una extraccin, se ve que en cada una de las extracciones ha
desaparecido la misma cantidad de sustrato. Aqu la cantidad de S transformado se mantiene constante en funcin del tiempo
[S]
Reaccin de Orden I: es aquella en la cual la cantidad de S transformado por unidad de tiempo es proporcional a la cantidad de S presente. La curva de la concentracin de S en funcin del tiempo es exponencial decreciente; en el caso de crecimiento bacteriano, es exponencial creciente. [S]
C) Velocidad de Reaccin en Funcin del pH.- Las enzimas poseen un pH ptimo en el que su actividad es mxima; el cual no es necesariamente idntico al pH de su entorno normal, que puede hallarse por encima o por debajo del pH ptimo; de esta manera, la actividad cataltica de las enzimas en las clulas puede ser regulada en parte por variaciones del pH del medio que le rodea. Valores extremos de pH pueden ocasionar una desnaturalizacin de la enzima. Sin embargo, bajo condiciones de pH que no desnaturalizan la enzima, cuando se traza una grfica de la velocidad inicial de la reaccin contra el pH, se obtiene una curva en forma de campana. El pH en el punto de actividad mxima se denomina pH ptimo de la enzima.
V e l o c i d a d
1 2
9 10 11 12 13 14
pH
En el grfico se muestra el perfil de pH velocidad, de la papana, que es una proteasa que se encuentra en el fruto de la papaya y se emplea como ablandador de carnes; presenta catlisis cido-base y covalente. En algunos casos se obtiene una curva sigmoidea. pH ptimo de algunas enzimas Pepsina 1,5 Ureasa 6,4 6,9 Catalasa 7,6 Fumarasa 7,8 Fosf. Alcal. hueso 8,5 (Lehninger) 9,5 (Orten) Arginasa 9,7 Fosfatasa cida 5,0 Acetilcolinesterasa 7,5 Tripsina 7,7 Ribonucleasa 7,8 Fosf. Alcal. Heptica alr. 9,0
El efecto del pH en la velocidad de una reaccin enzimtica puede sugerir las identidades de los componentes del sitio activo. En conclusin, las reacciones enzimticas son muy sensibles al pH del medio; esto se debe a 3 factores:
Los
pH
extremos
modifican
irreversiblemente
la
estructura
de
la
enzima,
desnaturalizndola. En muchos casos el pH modifica la ionizacin del sustrato. El pH tiene una accin sobre la reaccin E S y sobre la catlisis.
D) Velocidad de Reaccin en Funcin de la Temperatura.- Por el hecho de ser protenas, las enzimas son sensibles a la accin de la temperatura. El incremento de la temperatura aumenta el movimiento de las molculas y en consecuencia aumenta la velocidad de las reacciones qumicas; esto es aplicables para las reacciones catalizadas por enzimas. Pero, como las enzimas son protenas, se desnaturalizan con temperaturas relativamente elevadas. Es difcil dar un valor exacto de la temperatura ptima de una reaccin enzimtica; la velocidad de desnaturalizacin de la enzima est en funcin del pH y de la duracin de la reaccin. Las reacciones catalizadas por enzimas se aceleran aumentando la temperatura hasta alcanzar un valor ptimo; luego de ello, la velocidad de reaccin declina. La temperatura ptima es usualmente de 40 a 50C para enzimas animales, en tanto que para enzimas vegetales es mayor, generalmente de 50 a 60C, la mayora de enzimas se desnaturalizan por encima de los 60C. A menudo se utiliza la INACTIVACION TERMICA para caracterizar una enzima. La inactivacin trmica es la desnaturalizacin de la enzima por accin del calor, lo cual se traduce en un descenso de la actividad enzimtica. Esta inactivacin slo se presenta por encima de una determinada temperatura. E) Velocidad de Reaccin en Funcin de la Concentracin de Enzima.- La velocidad inicial de una reaccin enzimtica es directamente proporcional a la concentracin de enzima, siempre que el sustrato est presente en exceso; en estos casos la reaccin exhibe una cintica de orden cero.
V e l o c i d a d
[E]
F) Productos de la Reaccin.- Algunos de estos productos pueden ejercer un efecto desnaturalizante de la enzima. En los sistemas biolgicos, el producto generalmente es removido, por ejemplo, se transforma en sustrato de otra enzima en una va metablica.