AULA PRTICA: MICROSCOPIA PTICA Microscpio ptico (MO) pode ser conceituado como um instrumento que produz imagens

ampliadas de objetos que no podem ser vistos a olho nu. Ao se estudar os seres vivos, ao nvel celular, deve-se empregar vrias tcnicas visando superar trs principais limitaes destes estudos: as pequenas dimenses celulares, a grande espessura da maioria dos tecidos e a transparncia (falta de contraste). Em conseqncia, o estudo da organizao celular depende do uso de microscpios e o emprego de tcnicas bsicas de preparao do material a ser analisado. OBJETIVOS: Identificar as partes mecnicas e pticas do microscpio ptico Manusear corretamente o microscpio MATERIAL: Microscpio ptico de luz comum Lmina permanente 1. DESCRIO DO MICROSCPIO 1.1 Parte mecnica P ou BASE: o suporte do microscpio, pea que sustenta todas as outras. BRAO ou COLUNA: pea que liga o p parte superior do microscpio. Sustenta o tubo do microscpio, onde se encontram as lentes. PLATINA: pea de apoio da lmina contendo o material para estudo (preparao). O centro possui um orifcio para a passagem da luz. PARAFUSO MACROMTRICO: localiza-se em ambos lados da coluna e serve para ajustar o foco. Permitem grandes avanos ou recuos da platina em relao objetiva. PARAFUSO MICROMTRICO: localiza-se em ambos os lados da coluna encaixados sobre o parafuso macromtrico. Ajusta o foco finamente, atravs de pequenos avanos ou recuos da platina. CANHO: parte superior do microscpio constituda por uma pea semi-esfrica ligada a um tubo oco. Internamente, abriga um prisma e sustenta as lentes objetivas e oculares. REVLVER: pea em que se encaixam as lentes objetivas. Nela existe um disco com ranhuras por onde se faz o giro do revlver para a mudana das objetivas. CHARRIOT: pea ligada platina para movimentar a lmina no plano horizontal. Possui uma presilha que prende a lmina sobre a platina. O charriot permite o deslizamento da lmina da esquerda para a direita e vice-versa e de trs para frente e vice-versa. 1.2 Parte ptica 1.2.1 SISTEMA DE ILUMINAO: todos os seus elementos esto abaixo da platina FONTE DE LUZ: acoplada ao p do microscpio (embutida). Opcionalmente pode receber filtros. CONDENSADOR: conjunto de lentes. Concentra a luz e fornece iluminao uniforme ao material. O condensador permite maior ou menor incidncia de raios luminosos no material a ser observado. Fornece tambm possibilidades de contraste da imagem principalmente no caso de observao de preparao a fresco. O parafuso localizado lateralmente permite a movimentao do condensador.

DIAFRAGMA: dispositivo que regula a intensidade de luz que atinge a preparao, comandado atravs de uma alavanca de abertura e fechamento da pea, localizada no condensador. A sua regulagem adequada evita os raios luminosos marginais, obtendo-se imagem mais ntida. Alguns microscpios so dotados ainda de um outro tipo de diafragma, chamado diafragma de campo, constitudo de um anel giratrio sobre a fonte de luz, no p do microscpio. FILTROS: em geral so de vidro, os quais absorvem parte das radiaes luminosas permitindo usar faixas estreitas de luz, de comprimento de onda selecionados de acordo com a colorao destes filtros. 1.2.2 SISTEMA PTICO DE OBSERVAO LENTE OCULAR: formado por um sistema de lentes cuja posio est sempre prxima ao olho do observador. Sua funo recolher a imagem aumentada, vertical e direta. Como a imagem que a objetiva oferece invertida, a imagem final do microscpio ser tambm invertida. As oculares so formadas por duas lentes convergentes que ampliam e corrigem defeitos da imagem dada pela objetiva. Traz gravado o aumento que proporciona. Pode ter 1 (mono-ocular) ou 2 (binoculares) LENTE OBJETIVA: cada objetiva um conjunto de 4 ou mais lentes superpostas. O microscpio possui geralmente 4 objetivas, proporcionando aumentos diferentes. O valor do aumento est gravado na prpria objetiva. O segundo nmero gravado corresponde abertura numrica da lente. Na objetiva de imerso utiliza-se um leo transparente entre a lmina e o material a ser examinado. O leo utilizado o leo de cedro (ou sinttico) com a finalidade de tornar mais claro o campo do microscpio, o que acontece quando o leo homogeniza o meio ptico entre esses dois elementos. As objetivas trazem inscries que especificam suas caractersticas: Exemplo: 10/0,22 10 = aumento de 10x 0,22 = valor da abertura numrica O AUMENTO DA IMAGEM no diz respeito riqueza de detalhes da imagem obtida. O aumento refere-se ao tamanho aparente da imagem em relao ao objeto e conseguido pelo produto: Aumento final = aumento da objetiva x aumento da ocular

PROCEDIMENTO: Indique no esquema abaixo os nomes das partes que compem o microscpio ptico.

A qualidade de um microscpio est ligada ao seu PODER DE RESOLUO, que pode ser inferido indiretamente atravs do LIMITE DE RESOLUO do sistema ptico. PODER DE RESOLUO: capacidade de um sistema ptico de revelar detalhes de estrutura. LIMITE DE RESOLUO: refere-se menor distncia que pode existir entre dois pontos para que apaream individualizados na imagem formada pelo sistema ptico utilizado. Manuseio correto para observao ao MO 1. Gire o revlver, encaixando a objetiva de menor aumento (objetiva panormica) 2. Abra a presilha do charriot e coloque a lmina sobre a platina, sempre com o material voltado para cima. 3. Levante a platina movimentando o parafuso macromtrico, VAGAROSAMENTE, com as duas mos, at o final.

4. Coloque o condensador em sua posio mais elevada. 5. Acenda a luz do microscpio. 6. Certifique-se de que o diafragma est aberto, olhando se h passagem de luz atravs da lmina. 7. Centralize o material no orifcio da platina, utilizando os parafusos do charriot. 8. Olhando atravs das oculares, com os DOIS OLHOS ABERTOS, abaixe lentamente a platina, utilizando o parafuso macromtrico, at que o material possa ser visto. 9. Observando o material, corrija a distncia entre as duas oculares, de tal forma que passe a enxergar um s campo de imagem. Essa distncia varia entre as pessoas, pois depende da distncia inter-pupilar de cada um. 10. Neste momento, refine o ajuste de foco utilizando o parafuso micromtrico. 11. Explore o material da lmina utilizando os parafusos do charriot. 12. A preparao pode ser observada com as demais objetivas, RESPEITANDO SEMPRE A ORDEM CRESCENTE DE SEUS AUMENTOS, e ajustando o foco somente com o parafuso micromtrico. Antes de passar para a objetiva de aumento superior, coloque sempre a parte do material a ser observada no centro do campo de observao. OBS: A postura correta, alm dos dois olhos abertos, inclui o fato de a mo direita ficar nos parafusos do charriot e a mo esquerda no micromtrico. Uso da objetiva de 100x 1. Aps focalizar com a objetiva de 40x, coloque o revlver em posio inicial intermediria, entre as objetivas de 40x e 100x. 2. Coloque uma gota de leo de imerso sobre a estrutura a ser observada. 3. Abaixe a objetiva de 100x (esta lente deve mergulhar na gota de leo) e focalize o material mexendo SOMENTE O MICROMTRICO. 4. Para retirar a lmina do microscpio proceda como no item 15 acima. Em adio, limpe a objetiva de imerso com um leno de papel macio. Pode-se fazer o uso de uma soluo de ter/clorofrmio (1:1), para melhor limpeza. NUNCA USE PAPEL GROSSO, POIS PODE DANIFICAR AS OBJETIVAS Ao terminar o uso do microscpio 1. No esquea a lmina na platina. 2. Para retirar a lmina do microscpio, gire o revlver at a objetiva panormica (menor tamanho). Abaixe a platina, girando o parafuso macromtrico. 3. Desligue a luz, retire o fio da tomada enrolando-o no p do microscpio e cubra-o com a capa. 4. Caso tenha molhado a platina, enxugue-a muito bem! No utilize substncias qumicas corrosivas para no danificar o aparelho.