Aseguramiento de calidad EQUIPOS MANIPULACION DE MUESTRAS

Norma ISO 17025

Bqca. QM Alicia I. Cuesta, Consultora Internacional de la FAO

Objetivos de la clase:
EQUIPOS: Requisitos de la Norma 17025. Equipos habituales de un laboratorio microbiolgico. Calibracin y verificacin de equipos: Definicin y concepto. Programas para calibracin, verificacin, limpieza y mantenimiento. Registros del equipamiento. MANIPULACION DE MUESTRAS: Requisitos de la Norma 17025. Transporte de las muestras. Recepcin de las muestras. Manipulacin de las muestras. Almacenamiento de las muestras. Disposicin final de las muestras.

REQUISITOS: EQUIPOS

El laboratorio debe estar provisto de todos los equipos necesarios para la correcta ejecucin del ensayo.

Equipos habituales de un laboratorio microbiolgico :

Material de uso general: Material de vidrio o plstico (Ejemplo: tubos de ensayo, placas de Petri, etc.), instrumentos de muestreo, ansas de siembra, etc. Equipos volumtricos como pipetas, distribuidores automticos, sembradores en espiral, etc.
Instrumentos de medida: termmetros, cronmetros, balanzas, medidor de pH, contadores de colonias, etc. Estufas, autoclaves, baos termostticos, heladeras, congeladores, campanas de flujo laminar, equipos de filtracin, etc.

REQUISITOS: EQUIPOS (cont)

Los equipos y su soporte lgico usados en la realizacin del ensayo y muestreo deben permitir lograr la EXACTITUD REQUERIDA y cumplir con las especificaciones establecidas para los ensayos.

Hay equipos cuya exactitud es clave en el impacto sobre la incertidumbre de los resultados, por lo que es imprescindible que cumplan siempre con las especificaciones ms relevantes del mtodo.

Definicin: Calibracin.
Conjunto de operaciones que PERMITEN ESTABLECER, en condiciones especificadas, LA RELACIN EXISTENTE ENTRE :

los valores indicados por el instrumento de medida o un sistema de medida o un material de referencia y los correspondientes valores conocidos del mensurando.
(valores de una magnitud obtenidos mediante un patrn de referencia)

Calibracin:
Formas de establecer esta relacin es mediante: Tablas de correccin Rectas o curvas de calibracin otras
CALIBRACION Elimina el error CORRECCION Incertidumbre

Ejemplo: Calibracin de termmetro

Qu hago? 1. Mido n veces a una Temperatura y completo la TABLA 1.

TABLA 1 Termmetro a calibrar (Tx) Termmetro patrn (Tp) Termmetro patrn (C)

Termmetro a calibrar (C)

Tx

Tp

Bao de agua
El bao se pone a Ti

Ejemplo: Calibracin de termmetro

Qu hago? 2. Esto lo realizo para diferentes temperaturas (Ti) segn los requerimientos.
3. Calculo la correccin e incertidumbre para cada punto.

TABLA 1 Termmetro a calibrar (Tx) Termmetro patrn (Tp) Termmetro patrn (C)

Termmetro a calibrar (C)

Certificado de calibracin de un termmetro Ejemplo de resultados

Indicacin del termmetro ( C) 5.5 30.0 Correccin ( C) -0.4 0.2 Incertidumbre ( C) +0.1 +0.2

36.8
42.1

0.2
0.0

+0.2
+0.3

Certificado de calibracin de un termmetro

Debe figurar: Descripcin e identificacin del instrumento que se calibr. Fecha de calibracin. Fecha de emisin del certificado de calibracin nombre del cliente Metodologa empleada para calibrar. Rango de calibracin. Resultados: correccin e incertidumbre para cada temperatura.

Definicin: Incertidumbre de la medicin

Parmetro asociado al resultado de la medicin, que caracteriza la dispersin de los valores que podran ser razonablemente asignados al mensurando.
INDICA LA CALIDAD DE UNA MEDICIN.

Relacin de exactitud (RE):

RE = Especificacin Incertidumbre

ISO 100012 recomienda RE>3:1 Preferiblemente hasta 10:1

Definicin: VERIFICACIN. Confirmacin por examen y provisin de evidencia de que los requerimientos especificados han sido satisfechos.

Ejemplo: Verificar diariamente una balanza con una pesa calibrada.

Verificacin del instrumento de medicin

VERIFICACIN

TOMO DECISION Asignar a la tarea de medicin Reparar/ ajustar Usarlo para otro equipo Declararlo fuera de uso

REQUISITOS: EQUIPOS (cont)

Antes de poner en servicio un equipo (incluido el empleado para el muestreo) se lo debe calibrar o verificar con el fin de asegurar que responde a las exigencias especificadas del laboratorio y est conforme a las especificaciones normalizadas pertinentes.

El equipo debe ser verificado o calibrado antes de su uso.

REQUISITOS: EQUIPOS (cont) El laboratorio debe documentar e implementar Programas para calibracin y/o verificacin limpieza, mantenimiento y esterilidad de los equipos cuando sea necesario.
(Los que tengan una influencia directa en los resultados de los ensayos).

REQUISITOS: EQUIPOS (cont)

REQUISITOS PROVEEDORES DE CALIBRACION DE EQUIPOS: La calibracin de los equipos debe ser llevada a cabo por laboratorios de calibracin que demuestren su competencia y su capacidad de medicin y trazabilidad. (Laboratorio acreditado o aceptado por el organismo de acreditacin) Las mediciones hechas por el laboratorio de calibracin deben ser trazables al Sistema Internacional de Unidades (SI).

La naturaleza del equipo.

La frecuencia de la calibracin y/o verificacin de los equipos o patrn de referencia depende de:

Condiciones de uso. Gravedad de las consecuencias de una falta de calibracin y/o verificacin. Historia previa del equipo o patrn de referencia. Recomendaciones del fabricante.

Directrices para calibracin de equipos en el laboratorio de microbiologa.

Tipo de Equipamiento Termmetro de referencia Termocupla de referencia

Termmetro de trabajo

G-ENAC-04REV. 2 Marzo 97.Gua para la acreditacin de laboratorios que realizan anlisis microbiolgicos

Termocupla de trabajo

Balanza Pesas de calibracin

Requisitos Recalibrado y plenamente trazable Recalibrado y plenamente trazable Frente a un termmetro de referencia en punto de congelacin y/o rangos de temperatura de trabajo Frente a un termmetro de referencia en punto de congelacin y/o rangos de temperatura de trabajo Calibracin plenamente trazable Calibracin plenamente trazable

Frecuencia sugerida Cada 5 aos Anualmente.

Anualmente.

Anualmente.

Anualmente. Bianualmente/ Anualmente.

Pesas de control

Frente a pesa calibrada o verificar en la balanza Anualmente. inmediatamente despus de la calibracin trazable Calibracin trazable al micrmetro (cuando sea apropiado) Calibracin trazable o verificacin con un tacmetro independiente Frente a la hora oficial Inicialmente

Microscopios

Centrifuga Cronmetro

Anualmente. Anualmente.

Directrices para la puesta en servicio y verificacin de equipos en el laboratorio de microbiologa.

Tipo de Equipamiento Equipos con temperatura controlada (estufas de cultivo, baos , heladeras, congeladores)

Estufas de esterilizacin

Autoclave

G-ENAC-04REV. 2 Marzo 97.Gua para la acreditacin de laboratorios que realizan anlisis microbiolgicos

Cabinas de seguridad

Campana de flujo laminar

Peachmetros

Frecuencia sugerida a) Inicialmente, cada 2 a) Verificar la estabilidad aos y luego de una y uniformidad de la reparacin o modificacin temperatura b) Diariamente o con cada b) Verificar la temperatura uso. a) Inicialmente, cada 2 a) Verificar la estabilidad aos y luego de una y uniformidad de la reparacin o modificacin temperatura b) Diariamente o con cada b) Verificar la temperatura uso. a) Verificar la estabilidad a) Inicialmente, cada 2 y uniformidad de la aos y luego de una temperatura reparacin o modificacin b) Verificar la temperatura b) Con cada uso. c) Verificar el tiempo c) semestralmente a) Verificar las a) Inicialmente y luego de caractersticas tcnicas una reparacin o b) Verificar la velocidad modificacin del aire b) Anualmente. c) Monitoreo microbiolgico c) semanalmente a) Inicialmente y luego de a) Verificar las una reparacin o caractersticas tcnicas modificacin b) Verificar la esterilidad b) Mensualmente. Ajuste de la respuesta Diariamente o con cada usando como mnimo dos buffers de calidad uso aceptable. Ajuste a cero y verificacin con la pesa control a) Verificar la Conductividad b) Verificar la Diariamente o con cada uso a) Semanalmente b) Mensualmente.

Requisitos

Balanzas

Destilador, desionizador y unidad de smosis inversa

Directrices para la puesta en servicio y verificacin de equipos en el laboratorio de microbiologa.

Tipo de Equipamiento Diluidores gravimtricos

Requisitos a) Verificar peso y volumen (peso) dispensado. b) Verificar coeficiente de dilucin Verificar el volumen distribuido.

Frecuencia sugerida a) Diariamente b) Mensualmente. Inicialmente y peridicamente dependiendo de la frecuencia y naturaleza de su uso. a) Inicialmente y peridicamente dependiendo de la frecuencia y naturaleza de su uso. a) Inicialmente y anualmente. b) Diariamente o con cada uso. c) Mensualmente

Distribuidores de medios

Pipetas automticas

Verificar la precisin y exactitud del volumen distribuido a) Verificar las caractersticas tcnicas frente al mtodo convencional b) Verificar el estado del punzn y puntos de inicio y fin. c) Verificar volumen distribuido. Verificar frente al recuento manual Indicador de anaerobiosis Verificar la aceleracin contra un tacmetro calibrado y independiente

G-ENAC-04REV. 2 Marzo 97.Gua para la acreditacin de laboratorios que realizan anlisis microbiolgicos

Sembradores en espiral

Contadores automticos de colonias Jarra de anaerobiosis Centrifugas

Anualmente. Con cada uso Anualmente.

REQUISITOS: EQUIPOS (cont) Es de primordial importancia que el laboratorio cuente con un programa formal, documentado e implementado de mantenimiento de equipos. El mantenimiento de los equipos esenciales debe realizarse a intervalos especificados. (por el departamento de mantenimiento, por el proveedor, fabricante, etc). En el documento ISO 7218: 1996 (E), se facilitan directrices sobre el mantenimiento de los equipos.

Directrices para el mantenimiento de equipos en el laboratorio de microbiologa.

Tipo de Equipamiento Estufas de cultivo, heladeras, congeladores Estufas de esterilizacin Baos de agua Centrifugas Autoclaves Cabinas de seguridad y de flujo laminar Microscopios

Requisitos Limpiar las superficies internas y desinfectar si es necesario Vaciar, limpiar, desinfectar y rellenar Limpiar y desinfectar Verificar visualmente la junta, limpiar/drenar la cmara Revisin /cambio de filtros Limpieza de objetivos a)Limpiar los electrodos b)Revisar/rellenar electrolito a)Limpiar b)Revisar Limpiar y desincrustar sustituir cartucho y membrana Limpiar y desinfectar Limpiar y desinfectar segn sea apropiado a) Descontaminar, limpiar y esterilizar.

Frecuencia sugerida Semestralmente

Mensualmente Trimestralmente Mensualmente Anualmente Anualmente a)Con cada uso b)Cuando sea necesario a) Con cada uso b) Anualmente Segn sea necesario Segn recomendacin del fabricante Despus de cada uso con cada uso a) Con cada uso

G-ENAC-04REV. 2 Marzo 97.Gua para la acreditacin de laboratorios que realizan anlisis microbiolgicos

Peachmetros Balanzas/ Diluidores gravimtricos Destilador Desionizador y unidad de smosis inversa Jarra de anaerobiosis Distribuidores de medios, Pipetas automticas, equipos volumtricos, etc. Sembradores en espiral

REQUISITOS: EQUIPOS (cont)

PARA CADA EQUIPO UTILIZADO EN LOS ENSAYOS EL LABORATORIO DEBE TENER: Identificacin inequvoca y registro del equipo (con su soporte lgico o software). Los resultados de las calibraciones y verificaciones. Las instrucciones actualizadas de uso y mantenimiento del equipo disponibles (incluido el manual suministrado por el fabricante) para el uso del personal del laboratorio. EN EL IDIOMA DEL PAIS

REQUISITOS: EQUIPOS (cont)

Los registros del equipamiento deben incluir como mnimo:
Nombre del fabricante, modelo, nmero de serie u otros datos que lo identifique. Datos de comprobacin de cumplimiento de las especificaciones a su ingreso. Ubicacin del equipo dentro del laboratorio, cuando corresponda (ver Plano del laboratorio) Fecha de adquisicin y puesta en servicio. Instrucciones del fabricante o la referencia a su ubicacin. Informes de todas las calibraciones (debe contener fecha de calibracin y resultados), fecha prevista de la prxima calibracin, los ajustes, los criterios de aceptacin. Plan de mantenimiento (cuando corresponda ) y mantenimiento llevado a cabo hasta la fecha Todo dao, mal funcionamiento, modificacin o reparacin del equipo. Esto debe mantenerse durante toda la vida til del equipo y hasta dos aos despus de sacarlo de servicio.

REQUISITOS: EQUIPOS (cont)

Los equipos bajo el control del laboratorio que requieren una calibracin deben ser rotulados y identificados Ejemplo: Se deben colocar las Etiqueta A: N de inventario. etiquetas en el equipo :

Identificacin del equipo.

Indicando si el equipo est en funcionamiento o fuera de servicio.

Su estado de calibracin.

Etiqueta B: color verde: equipo/patrn en funcionamiento o color rojo: equipo/patrn fuera de perodo de calibracin/verificacin. Etiqueta C: Fecha de calibracin/verificacin Fecha de la prxima calibracin/verificacin.

Autoclave
Adems de controlar directamente la temperatura, tiempo y presin del autoclave, se comprueba la eficacia de su funcionamiento en cada ciclo de esterilizacin o descontaminacin. mediante: Indicadores Qumicos. La cinta de autoclave o las tiras indicadoras (controles qumicos) permiten distinguir que una carga ha sido procesada. Indicadores Biolgicos.

Autoclave
Los controles biolgicos:

Evalan la efectividad de la totalidad del proceso de esterilizacin.

Contienen esporas de gnero Bacillus. En todos los casos los resultados obtenidos de controles qumicos y biolgicos se deben registrar.

Verificacin de la temperatura de trabajo: Se realiza un monitoreo continuo de las temperaturas de las estufas, heladeras, congeladores usados para la realizacin del ensayo. La temperatura del bao termosttico se registra antes de su uso.

Registro de control de temperatura: -Equipo. -N de inventario. -Instrumento: Correccin e incertidumbre del termmetro. -Rango de aceptacin. -Tolerancia.

Ejemplo Clculo del rango de aceptacin REGISTRO DE CONTROL DE TEMPERATURA: Equipo: estufa de cultivo de 30 C. N de inventario_ _ _ Instrumento: termmetro N de inventario_ _ _ CORRECCIN DEL TERMMETRO ( C ): + 0.3 INCERTIDUMBRE DEL TERMMETRO ( C ): + 0.2 TOLERANCIA segn metodologa usada + 1 C

Ejemplo Clculo del rango de aceptacin (cont) Rango aceptado por la tcnica es 29 y 31 C

Cuando leo en el instrumento 29 C en realidad tengo que leer (es 28.7+0.2) o sea 28.9. Cuando leo en el instrumento 31 C en realidad tengo que leer (es 30.7-0.2) o sea 30.5.
Rango de aceptacin es 28.9 a 30.5 C RANGO DE LECTURA aceptada de las temperaturas ledas con ese termmetro con esa calibracin.

Sntesis parcial Requisitos equipos: Los equipos y su soporte lgico usados en la realizacin del ensayo y muestreo deben permitir lograr la exactitud requerida y cumplir con las especificaciones establecidas para los ensayos. El laboratorio debe documentar e implementar programas para la limpieza, mantenimiento, calibracin y/o verificacin y esterilidad de los equipos cuando sea necesario.

MANIPULACIN DE LAS MUESTRAS

El laboratorio debe tener procedimientos para : El transporte La recepcin

La proteccin, el almacenamiento.
La manipulacin La conservacin o la disposicin final de las muestras a ensayar.

Requisitos: MANIPULACIN DE LAS MUESTRAS MUY IMPORTANTE: El laboratorio debe tener un sistema para la identificacin unvoca de las muestras a ensayar. La identificacin debe ser conservada a lo largo de la vida de la muestra en el laboratorio. El sistema debe ser diseado y operado de modo tal que asegure que las muestras no puedan ser confundidas fsicamente o cuando se haga referencia a ellas en registros u otros documentos.

Requisitos: MANIPULACIN DE LAS MUESTRAS

El laboratorio debe tener: procedimientos e instalaciones apropiadas para evitar el deterioro, la prdida o dao de las muestras durante su: manipulacin, preparacin y almacenamiento.

Diagrama de flujo de manipulacin de las muestras

REQUISITOS: Transporte de las muestras.

Se debe evitar durante el transporte al laboratorio cualquier alteracin de las muestras.

Las muestras deben ser enviadas con la mayor brevedad posible al laboratorio. Se documenta quin es el responsable del transporte . El transporte debe realizarse: Acondicionados adecuadamente depender del estado fsico del producto (lquido, slido o semislido). En recipientes adecuados A temperaturas adecuadas de conservacin del alimento.

Transporte de las muestras: Dependiendo del tipo de alimento que se trate, se prestar particular atencin en mantener las temperaturas de almacenamiento durante el transporte en los rangos aceptables segn figura en el cuadro. Referencia: Norma ISO 7218:1996 (E)

Tipos de Productos Estables Fresco o refrigerados Congelados Pasteurizados y productos similares Unidades estables daadas

Temperaturas de almacenamiento durante el transporte( C) Temperatura ambiente Entre 0 a + 4 Debajo de -18 Entre 0 a + 4 Entre 0 a + 4

REQUISITOS: RECEPCIN DE LAS MUESTRAS. Las condiciones de llegada al laboratorio de las muestras deben ser verificadas por el personal perteneciente al mismo. Si la muestra es: Insuficiente o se encuentra en mal estado por deterioro fsico, temperatura inapropiada, envase roto o etiquetado defectuoso: El laboratorio debe consultar con el cliente antes de decidir si analiza o rechaza la muestra. Debe indicar su estado en el informe del ensayo. Una vez recibidas las muestras se analizarn lo antes posible.

Recepcin de las muestras. El personal tcnico debe etiquetar y almacenar cada muestra: N PE: N muestra: Fecha de ingreso al laboratorio: Descripcin de la muestra: Fecha vencimiento de la muestra

Manipulacin de las muestras:

La preparacin de las muestras y porciones de ensayo realizado por el laboratorio inmediatamente antes del ensayo debe efectuarse conforme a procedimientos documentados basados en normas nacionales o internacionales, si es que existen, o a mtodos internos validados. Los procedimientos de preparacin de las muestras y porciones de ensayo deben disearse teniendo en cuenta las directrices generales contenidas en los documentos en ISO 6887 e ISO 7218. Se debe llevar los registros del desarrollo del trabajo.

REQUISITOS Almacenamiento de las muestras:

Las muestras que se encuentren a la espera de ser analizadas deben almacenarse en condiciones adecuadas para reducir al mnimo cualquier modificacin en la poblacin microbiana presente. El laboratorio debe definir y registrar dichas condiciones de conservacin.

Los tiempos lmites de almacenamiento dependern del tipo de producto

Referencia: Norma ISO 7218:1996 (E)

(1) Si no se puede procesar en ese tiempo, las muestras se pueden congelar por debajo -18 C. Esto debe ser mencionado en el informe de ensayo. Precaucin: En algunos productos el congelamiento produce un cambio de la composicin de la flora.

Tipos de Productos

Estables

Fresco o refrigerados Pasteurizados y productos similares Unidades estables daadas

Tiempos lmites de almacenamiento (horas) Tan rpido como sea posible y antes de su fecha de vencimiento dentro de 24 horas de la recepcin la muestra (1) Tan rpido como sea posible y antes de su fecha de vencimiento Tan rpido como sea posible y dentro de 48 horas

REQUISITOS Disposicin final de las muestras: Debe existir un procedimiento documentado para la conservacin y eliminacin de muestras. Las muestras deben conservarse hasta que se hayan obtenido los resultados del ensayo, o ms tiempo segn sea necesario. Cuando se sepa que algunas porciones de muestras de ensayo del laboratorio estn altamente contaminadas, deben descontaminarse antes de su eliminacin.

REQUISITOS Disposicin final de las muestras:

La correcta eliminacin de materiales contaminados puede no afectar directamente a la calidad de los anlisis de las muestras, aunque los procedimientos deben disearse para reducir al mnimo la posibilidad de contaminacin del lugar donde se realiza el ensayo o los materiales utilizados en el mismo. No obstante, es un aspecto de la correcta gestin de un laboratorio y debe respetarse la legislacin nacional e internacionales sobre medio ambiente, salud y seguridad (vase tambin ISO 7218).

Sntesis final
El laboratorio debe tener procedimientos para : el transporte, recepcin, la proteccin, el almacenamiento, la manipulacin y disposicin final de las muestras. El laboratorio debe tener un sistema para la identificacin unvoca de las muestras a ensayar, conservada a lo largo de la vida de la muestra en el laboratorio. Se deben registrar los apartamientos de las condiciones especificadas para las muestras en el momento de su recepcin en el laboratorio. El laboratorio debe tener instalaciones apropiadas para evitar el deterioro, la prdida o dao de las muestras durante manipulacin, preparacin y almacenamiento