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LICEO POLITCNICO HROES DE LA CONCEPCIN L A J A D P T O.

D E B I O L O G I A

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Asignatura: Profesor: Alumnos:

Biologia Victor H. Seguel P. Pedro Max Alejandro Catricura Muoz Rodrigo Ignacio Contreras Prez Consuelo Beln Mendoza Maureira Esteban Alonso Toledo Quinteros Jorge Alejandro Vilches Montecinos Jueves 28 de Marzo del ao 2013

Fecha:

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Introduccin

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El cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado ADN constituye el principal componente del material gentico de la inmensa mayora de los organismos, junto con el ARN (cido Ribonucleico), siendo el componente qumico primario de los cromosomas y el material en que los genes estn codificados. En las bacterias, el ADN se encuentra en el citoplasma mientras que en organismos ms complejos, tales como las plantas, animales y otros organismos multicelulares, la mayora del ADN reside en el ncleo celular. Se conoce desde hace ms de 100 aos. El ADN fue identificado inicialmente en1868 por Friedrich Miescher, bilogo suizo, en los ncleos de las clulas del pus obtenidas de los vendajes quirrgicos desechados y en el esperma del salmn. l llam a la sustancia nucleica, aunque no fue reconocida hasta 1943 gracia al experimento realizado por Oswald Avery. Su funcin principal es codificar las instrucciones esenciales para fabricar un ser vivo idntico a aquel del que proviene. El ADN es la molcula de la herencia en todos los organismos vivos (procariontes y eucariontes). ste controla la vida de la clula y del organismo. Se encuentra principalmente en el ncleo celular; y para ser extrado de la clula, se debe seguir una serie de procedimientos, especificados en el este informe. Por lo tanto, con el fin de conocer y analizar la morfologa del ADN se propone realizar la extraccin de sta estructura mediante la utilizacin de un vegetal, en este caso el pltano.

Descripcin General de la Actividad.

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El laboratorio ya realizado est relacionado con la imagen Empaquetamiento de ADN, la cual muestra las caractersticas del ADN. La actividad consiste en extraer fibras de ADN de un vegetal.

Materiales: 1 Pltano 1 Colador 1 pipeta de Pasteur 1 Tenedor 1 Tubo de Ensayo Alcohol de 96 1 Probeta 1 Varilla de Vidrio 1 Embudo Agua Destilada 2 Vasos de Precipitado de 500ml. Sal de Mesa Lavalozas (Liquido) Microscopio Portaobjeto Azul de Metileno

Desarrollo de la Actividad En un tubo de ensayo vierte aproximadamente la mitad con alcohol desnaturalizado de 96, preferentemente lo ms frio posible. En un vidrio reloj vierte pltano y agua destilada y molerlo con el tenedor hasta formar una especie de papilla. En un vaso de precipitado mezclar una cuchara de lavalozas con una pizca de sal de mesa y luego agregar 100ml de agua destilada. Ahora agregar 3 cucharaditas de la papilla de pltano a la mezcla del vaso de precipitado. Revolver la mezcla por aproximadamente 10 minutos (sin formar espuma). Filtrar la mezcla con ayuda de un colador. Extraer parte del filtrado y guardarlo en el tubo de ensayo que contiene el alcohol frio. Dejar reposar unos minutos. Extraer un poco de la mezcla y depositarla en el porta objeto con un poco de azul de metileno. Lleva el portaobjeto con la mezcla teida y observa en el microscopio.

Resultados 1. Cul es el papel del lavalozas en esta actividad?

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R: El papel que juega el lavalozas en esta actividad es desestabilizar la membrana celular, ya que es un solvente orgnico apolar, rompe los lpidos presentes en la estructura de la membrana de la clula, permitiendo as entrar al ncleo, y extraer su ADN.

2. Por qu crees t que despus se lleg solo a obtener el ADN y no la combinacin de otros polmeros? R: Porque el alcohol hace que el ADN precipite y se desenrolle, separndose de la mezcla.

3. Con que tcnicas moleculares podra marcar solo el material gentico? R: Los Polimorfismos para la amplificacin de regiones blanco, ms conocidos por su acrnimo ingls TRAP ("Target Region Amplification Polymorphism"), son un tipo de marcador molecular que est basado en la amplificacin del ADN genmico mediante la reaccin en cadena de la polimerasa. El ensayo TRAP utiliza dos cebadores de 18 nucletidos de longitud para generar los marcadores. Uno de los cebadores, denominado cebador fijo, se disea sobre una secuencia de ADN blanco o diana. El otro cebador, denominado cebador arbitrario, es una secuencia arbitraria de ADN con un ncleo rico en AT o GC que se unen preferencialmente a exones o intrones, respectivamente. La amplificacin por PCR se realiza a travs de cinco ciclos con una temperatura de hibridacin de 35C, seguidos por 35 ciclos con una temperatura de hibridacin de 50C. Para diferentes especies de plantas, cada reaccin de PCR puede generar hasta 50 fragmentos fcilmente observables con un tamao que va desde 50 hasta 900 pares de bases

Polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restriccin que en biologa molecular, el trmino RFLP (del ingls Restriction Fragment Length Polymorphism) se refiere a secuencias especficas de nucletidos en el ADN que son reconocidas y cortadas por las enzimas de restriccin (tambin llamadas endonucleasas de

restriccin) y que varan entre individuos. En un cromosoma humano, una enzima de restriccin puede producir un gran nmero de cortes en los lugares donde LAB 1/6 2 VHS reconozca la secuencia especfica para hacerlo. Las secuencias de restriccin presentan usualmente patrones de distancia, longitud y disposicin diferentes en el ADN de diferentes individuos de una poblacin, por lo que se dice que la poblacin es polimrfica para estos fragmentos de restriccin. Los RFLP son marcadores genticos del ADN y se pueden encontrar en regiones que codifican protenas o exones, en los intrones o en el ADN que separa un gen de otro. Lo nico que se necesita para que puedan ser marcadores genticos es que sean polimrficos teniendo ms de un alelo. La tcnica RFLP se usa como marcador para identificar grupos particulares de personas con riesgo a contraer ciertas enfermedades genticas, en ciencia forense, en pruebas de paternidad y en otros campos, ya que puede mostrar la relacin gentica entre individuos.

Los polimorfismos en la longitud de fragmentos amplificados, ms conocidos por su acrnimo ingls AFLP ("Amplified fragment length polymorphism"), son un tipo de marcador molecular que est basado en la restriccin del ADN genmico mediante enzimas de restriccin y en la subsecuente amplificacin de algunos de esos fragmentos mediante la reaccin en cadena de la polimerasa. Son una herramienta poderosa de anlisis del genoma dado que poseen un alto poder de deteccin de la variabilidad gentica. El ensayo de AFLP combina la especificidad, resolucin y poder de muestreo de la digestin con enzimas de restriccin con la velocidad y practicidad de la deteccin de polimorfismos mediante PCR, sin necesidad de disponer de informacin previa del genoma a estudiar. La tcnica de AFLP es propiedad de la empresa de biotecnologa holandesa KeyGene

La amplificacin aleatoria de ADN polimrfico, ms conocida por el acrnimo ingls RAPDs (Random Amplification of Polymorphic DNA), es un tipo de marcador molecular basado en la reaccin en cadena de la polimerasa. Los fragmentos de ADN obtenidos por medio de esta tcnica se amplifican en regiones aleatorias del genoma ya que los iniciadores o cebadores de la reaccin son secuencias arbitrarias de ADN sinttico. Es una de las tcnicas ms verstiles desde que se desarroll en el ao 1990. 1 Es muy cmoda, rpida, requiere poco ADN que adems no necesita estar muy puro, no presupone conocimientos previos sobre la secuencia, y se pueden distinguir rpida y simultneamente muchos organismos. Sus inconvenientes son que los fragmentos amplificados no suelen corresponder a ADN ligado a algn carcter, sino redundante, y que no da informacin sobre el nmero de copias que el ADN genmico contiene de la

secuencia amplificada. Esta tecnologa ha sido utilizada para anlisis de diversidad gentica,2 mejoramiento gentico,3 y diferenciacin de lneas clonales. LAB 1/7 2 VHS

La deteccin de los VNTR se puede realizar por hibridacin del ADN o por tcnicas de PCR. En el primer caso, el ADN genmico es digerido con enzimas de restriccin que reconocen sitios adyacentes a la regin repetida. Los fragmentos se separan por electroforesis, se inmovilizan en una membrana y se detectan mediante sondas al igual que los marcadores RFLPs.

En gentica, los microsatlites (SSR o STR por sus acrnimos en ingls para simple sequence repeat y short tandem repeat) son secuencias de ADN en las que un fragmento (cuyo tamao va desde dos hasta seis pares de bases) se repite de manera consecutiva. La variacin en el nmero de repeticiones crea diferentes alelos. Generalmente se encuentran en zonas no codificantes del ADN. Son neutros, codominantes y poseen una alta tasa de mutacin, lo que los hace muy polimrficos. A pesar de esto, la variabilidad que presentan til para su uso como marcadores moleculares, es respecto al nmero de repeticiones, no de la secuencia repetida. Son utilizados como marcadores moleculares en una gran variedad de aplicaciones en el campo de la gentica como parentescos y estudios de poblaciones.

Un polimorfismo de un solo nucletido o SNP (Single Nucleotide Polymorphism, pronunciado snip) es una variacin en la secuencia de ADN que afecta a una sola base (adenina (A), timina (T), citosina (C) o guanina (G)) de una secuencia del genoma. Sin embargo, algunos autores consideran que cambios de unos pocos nucleotidos, como tambin pequeas inserciones y deleciones ( indels) pueden ser consideradas como SNP, donde el trmino Polimorfismo de nucletido simple es ms adecuado. Una de estas variaciones debe darse al menos en un 1% de la poblacin para ser considerada como un SNP. Si no se llega al 1% no se considera SNP y s una mutacin puntual.

LAB 1/8 2 VHS 4. Cmo crees que es posible saber quines son los padres de alguna persona que reclama paternidad? R: Los mtodos para determinar la paternidad de una persona existen variadas formas como lo son la comparacin de rasgos, Tipo de sangre ABO, anlisis de protenas y antgenos HLA. Actualmente la prueba idnea es la prueba gentica basndose en polimorfismo en regiones STR. La prueba de paternidad gentica se basa en comparar el ADN nuclear de ambos. El ser humano al tener reproduccin sexual hereda un alelo de la madre y otro del padre. Un hijo debe tener para cada locus un alelo que provenga del padre. Esta comparacin se realiza comparando entre 13-19 locus del genoma del hijo, del presunto padre y opcionalmente de la madre, en regiones que son muy variables para cada individuo llamadas STR (Short Tandem Repeat). Para determinar estadsticamente la exactitud de la prueba, se calcula el ndice de paternidad, el cual determina la probabilidad que no exista una persona con el mismo perfil de alelos entre su raza. La cantidad de locus es determinada por la cantidad de marcadores genticos (que limitan los locus) utilizados, a mayor cantidad de marcadores mayor exactitud. Con el uso de 15 marcadores se puede tener exactitudes de alrededor de 99,999%. Sin embargo esta exactitud puede aumentar segn la ocurrencia de alelos extraos en cada individuo. Cuando no se cuenta con muestras del presunto padre, se puede obtener un indice de paternidad utilizando muestras de los padres paternos. Tambin es posible obtener muestras de prenatales mediante procedimiento de amniocentesis y Vellosidades corinicas.

Conclusiones

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Posteriormente a la extraccin de ADN en clulas vegetales, se llega a concluir que el material gentico es un componente completamente esencial dentro de los seres vivos, puesto que en su ausencia no se llega a concretar el control de las clulas y de los organismos en s. Adems, mediante el experimento, se pueden observar que el lavalozas, al ser un solvente orgnico apolar rompe los lpidos presentes en la estructura de la membrana de la clula, permitiendo as entrar al ncleo, y extraer su ADN. Tambin, al filtrar la mezcla lo que queda sobre la gaza hidrfila son los restos de clula que fueron lisados. Es decir, membrana plasmtica, membrana nuclear, protenas de gran tamao y restos de organelos que no puedan por el filtro. Adems, se ha observado la compleja morfologa del ADN, y se ha comprobado que cada uno de sus componentes es de vital importancia dentro de su funcionamiento, y que cada una de sus estructuras es imprescindible e irreemplazable, las cuales, se espera investigar en futuras investigaciones

Bibliografa

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Larouse Diccionario Educativo Esencial estudiantil ilustrado, Primera Edicin, de Agosto de 2002, LAROUSSE. Larouse Enciclopedia Educativa Esencial estudiantil ilustrado, Primera Edicin 9 reimpresin, de Febrero de 2002, LAROUSSE. Enciclopedia Autodidactica Quillet, 1960 Editorial Arstides Quillet S.A. Mxico, Tomo III, ARISTIDES QUILLET.

Linkografa http://es.wikipedia.org/wiki/Marcador_gen%C3%A9tico http://es.wikipedia.org/wiki/Polimorfismos_para_la_amplificaci%C3%B3n_de_reg iones_blanco http://es.wikipedia.org/wiki/TRAPs http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Polimorfismos_de_Caracter%C3%ADsti ca_%C3%9Anica)&action=edit&redlink=1 http://es.wikipedia.org/wiki/Polimorfismo_de_nucle%C3%B3tido_simple http://es.wikipedia.org/wiki/Microsat%C3%A9lites http://es.wikipedia.org/wiki/RAPD http://es.wikipedia.org/wiki/AFLP http://es.wikipedia.org/wiki/RFLP