Control microbiano

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CONTROL MICROBIANO

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NDICE

1. INTRODUCCIN... Pg. 3 2. CONCEPTOS. Pg. 5 3. MTODOS DE CONTROL: 3.1. MTODOS FSICOS.Pg. 4 3.2. MTODOS QUMICOS..Pg. 7 3.3. CONTROLES DE ESTERILIZACIN................Pg.9 4. CINTICA DE LA ESTERILIZACIN POR CALOR..Pg.9 5. BIBLIOGRAFA...Pg.11

1. INTRODUCCIN

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En el laboratorio de Microbiologa es imprescindible trabajar en ausencia total de microorganismos contaminantes, por ello, se recurre a la esterilizacin y desinfeccin, que son tcnicas destinadas a tal fin. Las tcnicas anteriormente citadas se utilizan para tratar el material de trabajo y, a travs de ellas, se puede conseguir el ambiente libre de microorganismos necesario para la realizacin de cualquier determinacin microbiolgica. Razones para controlar microorganismos:

Prevenir la transmisin de las infecciones y las enfermedades. Prevenir la contaminacin o proliferacin de microorganismos perjudiciales. Evitar el deterioro o destruccin de materiales por los microorganismos.

2. CONCEPTOS
Esterilizacin: La esterilizacin es un mtodo del control del crecimiento microbiano que involucra la eliminacin de todas las formas de vida, incluidos virus y esporas. Es un trmino absoluto que implica la prdida de la viabilidad mediante la destruccin de todos los microorganismos contenidos en un objeto, rea especfica o sustancia, acondicionando de tal modo la posterior propagacin o contaminacin a otros objetos o al medio ambiente. Desinfeccin: La desinfeccin es la destruccin de microorganismos patgenos presentes en la superficie de objetos, utilizando sustancias qumicas (desinfectantes). No implica esterilizacin; es decir, no siempre se eliminan todos los microorganismos. Puede distinguirse de desinfeccin de alto nivel, que supone la destruccin de todas las formas vegetativas (pero no necesariamente las esporas) y la de nivel medio, que alcanza a Mycobacterium tuberculosis, pero no a algunos virus y hongos, ni tampoco a las esporas. Por debajo de este criterio se habla de desinfeccin de bajo nivel. Antisepsia: La antisepsia es la desinfeccin aplicada a las superficies del cuerpo humano. Las sustancias empleadas (antispticos) deben ser bien toleradas por los tejidos, por lo que son menos enrgicas que los desinfectantes y, en consecuencia, menos eficaces. A veces se usan soluciones ms diluidas de los mismos desinfectantes. Las principales aplicaciones de los antispticos son el lavado quirrgico de manos, la desinfeccin de la piel del paciente antes de una intervencin quirrgica y la desinfeccin de heridas. Asepsia: Tcnicas empleadas para impedir el acceso de microorganismos al campo de trabajo.

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Antibiosis: Fenmeno biolgico en el que existe una detencin o destruccin del crecimiento microbiano debido a sustancias producidas por otro ser vivo. Antimicrobianos: Agente que mata o inhibe el crecimiento de los microorganismos (antibacterianos, antifngicos, etc.). Microbicida: Agente que mata las formas vegetativas, pero no necesariamente las esporas de un microorganismo (bactericida, fungicida, etc.). Microbioestticos: Agentes que inhiben el crecimiento de microorganismos (bacteriostticos, fungistticos, etc.). Antispticos: Sustancias qumicas que previenen el crecimiento o accin de los microorganismos ya sea destruyndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se refiere a sustancias que se aplican sobre el cuerpo (piel y mucosa). Desinfectantes: Sustancias qumicas que matan las formas vegetativas y no necesariamente las formas de resistencia de los microorganismos patgenos. Se refiere a sustancias empleadas sobre objetos inanimados. Agentes teraputicos: Antimicrobianos empleados en el tratamiento de infecciones. Agentes quimioteraputicos: Sustancias qumicas empleadas en el tratamiento de enfermedades infecciosas o enfermedades causadas por la proliferacin de clulas malignas. Antibiticos: Sustancias producidas por un ser vivo que se oponen a la vida de otro ser vivo.

3. MTODOS DE CONTROL 3.1. MTODOS FSICOS:

1. ALTAS TEMPERATURAS La alta temperatura combinada con un alto grado de humedad es uno de los mtodos ms efectivos para destruir microorganismos. Hay que distinguir entre calor hmedo y calor seco. El hmedo mata los microorganismos porque coagula sus protenas siendo ms rpido y efectivo que el calor seco que los destruye al oxidar sus constituyentes qumicos. La accin letal del calor es una relacin de temperatura y tiempo afectada por muchas condiciones. Por ejemplo, las esporas de Clostridium botulinum son destruidas en 4 a 20 minutos a 120 C en calor hmedo, mientras que se necesitan alrededor de 2 horas de exposicin al calor seco para obtener los mismos resultados.

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A - Esterilizacin por calor hmedo: (se utiliza para soluciones acuosas)

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Autoclave: El calor en la forma de vapor a saturacin y a presin es el agente ms prctico para esterilizar ya que el vapor a presin proporciona temperaturas superiores a las que se obtienen por ebullicin. El aparato utilizado se llama autoclave (una olla que regula la presin interna y el tiempo). Los autoclaves de laboratorio se emplean generalmente a una presin de vapor de una atmsfera por encima de la presin atmosfrica lo cual corresponde a una temperatura de 120 C. El tiempo de exposicin depende del volumen del lquido, de tal manera que para volmenes pequeos (hasta unos 3 litros) se utilizan 20 minutos a 120 C; si los volmenes son mayores debe alargarse el tiempo de tratamiento. Algunos materiales no se deben esterilizar en el autoclave. Sustancias que no se mezclan con el agua no pueden ser alcanzadas por el vapor sobreviviendo los microorganismos que contengan. Otras sustancias se alteran o son destruidas por tratamientos prolongados de calor emplendose en estos casos otros mtodos de esterilizacin. Tindalizacin: Se utiliza cuando las sustancias qumicas no pueden calentarse por encima de 100 C sin que resulten daadas. Consiste en el calentamiento del material de 80 a 100 C hasta 1 hora durante 3 das con sucesivos perodos de incubacin. Las esporas resistentes germinarn durante los perodos de incubacin y en la siguiente exposicin al calor las clulas vegetativas son destruidas. Pasteurizacin: La leche, nata y ciertas bebidas alcohlicas (cerveza y vino) se someten a tratamientos de calor controlado que slo matan a ciertos tipos de microorganismos pero no a todos. La leche pasteurizada no es estril. La temperatura seleccionada para la pasteurizacin se basa en el tiempo trmico mortal de microorganismos patgenos (es el tiempo ms corto necesario para matar una suspensin de bacterias a una temperatura determinada). Mycobacterium tuberculosis es de los microorganismos patgenos ms resistentes al calor que puede transmitirse por la leche cruda y se destruye en 15 minutos a 60 C. Posteriormente se descubri que Coxiella burnetti, agente causal de la fiebre Q, se encuentra a veces en la leche y es ms resistente al calor que Mycobacterium tuberculosis por lo que la pasteurizacin de la leche se realiza a 62,8 C durante 30 minutos o a una temperatura ligeramente superior, 71,7 C durante 15 segundos (Flash-Pasteurizacin).

B - Esterilizacin por calor seco: (se utiliza para materiales slidos estables al calor) Horno Pasteur: El calor seco se utiliza principalmente para esterilizar material de vidrio y otros materiales slidos estables al calor. El aparato que se emplea es el horno Pasteur. Para el material de vidrio de laboratorio se consideran suficientes dos horas de exposicin a 160 C.

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Incineracin: La destruccin de los microorganismos por incineracin es una prctica rutinaria en los laboratorios. Las asas de siembra se calientan a la llama de mecheros Bunsen. La incineracin tambin se utiliza en la eliminacin de residuos hospitalarios.

2. BAJAS TEMPERATURAS En general, el metabolismo de las bacterias est inhibido a temperaturas por debajo de 0 C. Sin embargo estas temperaturas no matan a los microorganismos sino que pueden conservarlos durante largos perodos de tiempo. Esta circunstancia es aprovechada por los microbilogos para conservar los microorganismos indefinidamente. Los cultivos de microorganismos se conservan congelados a -70 C o incluso mejor en tanques de nitrgeno lquido a -196 C.

3. RADIACIONES A - Radiaciones ionizantes Rayos gamma: Las radiaciones gamma tienen mucha energa y son emitidas por ciertos istopos radiactivos como es el Co60 pero son difciles de controlar ya que este istopo emite constantemente los rayos gamma en todas direcciones. Estos rayos gamma pueden penetrar los materiales por lo que un producto se puede empaquetar primero y despus esterilizar. Rayos catdicos (Radiacin con haz de electrones): Se usan para esterilizar material quirrgico, medicamentos y otros materiales. Una ventaja es que el material se puede esterilizar despus de empacado (ya que stas radiaciones penetran las envolturas) y a la temperatura ambiente.

B - Radiaciones no ionizantes Luz ultravioleta: La porcin ultravioleta del espectro incluye todas las radiaciones desde 15 a 390 nm. Las longitudes de onda alrededor de 265 nm son las que tienen mayor eficacia como bactericidas (200 - 295 nm). Se usan para reducir la poblacin microbiana en quirfanos, cuartos de llenado aspticos en la industria farmacutica y para tratar superficies contaminadas en la industria de alimentos y leche. La luz UV tiene poca capacidad para penetrar la materia por lo que slo los microorganismos que se encuentran en la superficie de los objetos que se exponen directamente a la accin de la luz UV son susceptibles de ser destrudos.

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4. FILTRACIN

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Algunos materiales como los lquidos biolgicos (suero de animales, soluciones de enzimas, algunas vitaminas y antibiticos) son termolbiles. Otros agentes fsicos como las radiaciones son perjudiciales para estos materiales e imprcticos para esterilizarlos, por lo que se recurre a la filtracin a travs de filtros capaces de retener los microorganismos. Los microorganismos quedan retenidos en parte por el pequeo tamao de los poros del filtro y en parte por adsorcin a las paredes del poro durante su paso a travs del filtro debido a la carga elctrica del filtro y de los microorganismos. Debido al pequeo tamao de los virus, nunca es posible tener certeza de que, por los mtodos de filtracin que dejan libre de bacterias una solucin, se van a eliminar tambin los virus. Filtros de membrana: Los filtros de membranas son discos de steres de celulosa con poros tan pequeos que previenen el paso de los microorganismos. Existen distintos tipos de filtro dependiendo del tamao de poro. Estos filtros son desechables. Adems de utilizarse en la esterilizacin de lquidos se usan en el anlisis microbiolgico de aguas ya que concentran los microorganismos existentes en grandes volmenes de agua. Filtros HEPA: Un filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) est compuesto por pliegues de acetato de celulosa que retienen las partculas (includos los microorganismos) del aire que sale de una campana de flujo laminar.

3.2.

MTODOS QUMICOS:

Condiciones ideales para un agente antimicrobiano qumico: - No txico para el ser humano, animales ni medio ambiente - Actividad antimicrobiana - No debe de reaccionar con la materia orgnica o corroer - Estable y homogneo

Agentes antimicrobianos qumicos: Fenoles: Los fenoles y sus derivados (cresol, xilenol) son utilizados como desinfectantes en laboratorios y hospitales. Elimina micobacterias, eficaz an en presencia de materia orgnica y permanece activo en la superficie despus de mucho tiempo de su aplicacin. Desnaturaliza protenas y altera la membrana. Tiene olor desagradable y puede producir irritaciones cutneas.

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Alcoholes: No elimina esporas pero son bactericidas y fungicidas y algunas veces viricida (virus que contienen lpidos), son comnmente utilizados principalmente el etanol y el isopropanol en concentraciones de 70-80%. Tienen el mismo modo de accin de los fenoles. Metales pesados: Mercurio, arsnico, plata, zinc y cobre. Son bacteriostticos ya que el metal se combina con los grupos sulfihidrilos de las protenas inactivndolas o precipitndolas. Son txicos. Ejemplos: sulfato de cobre (alguicida) y nitrato de plata (gonorrea oftlmica en nios) Halgenos:

Yodo: Antisptico cutneo. Oxida componentes celulares y forma complejos con las protenas. En altas concentraciones puede destruir algunas esporas. Puede lesionar la piel, dejar manchas y desarrollar alergias. Cloro: Oxida componentes celulares, requiere un tiempo de exposicin de unos 30 minutos. El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el hipoclorito de sodio, que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas, y adems es efectivo en un amplio rango de temperaturas. La actividad bactericida del hipoclorito de sodio se debe al cido hipocloroso (HClO) y al Cl2 que se forman cuando el hipoclorito es diluido en agua. La actividad germicida del in hipocloroso es muy reducida debido a que por su carga no puede penetrar fcilmente en la clula a travs de la membrana citoplasmtica. En cambio, el cido hipocloroso es neutro y penetra fcilmente en la clula, mientras que el Cl2 ingresa como gas.

Su actividad est influida por la presencia de materia orgnica, pues puede haber en l medio sustancias capaces de reaccionar con los compuestos clorados que disminuyan la concentracin efectiva de stos. Compuestos cuaternarios de amonio (detergentes): Molculas orgnicas emulsificantes porque contienen extremos polares y no polares, solubilizan residuos insolubles y son agentes limpiadores eficaces. Solo los catinicos son desinfectantes, alteran membrana y pueden desnaturalizar protenas. No destruyen micobacterias ni esporas. Se inactivan con el agua dura y el jabn. Aldehdos: Formaldehdo y glutaraldehdo, se combinan con las protenas y las inactivan. Eliminan esporas (tras 12 horas de exposicin) y pueden usarse como agentes esterilizantes. Gases esterilizantes: Esterilizacin de objetos termosensibles.

Oxido de etileno: microbicida y esporicida, se combina con las protenas celulares. Alto poder penetrante. En concentraciones de 10-20% mezclado con CO2 o diclorodifluorometano. Se debe de airear ampliamente los materiales esterilizados para eliminar el gas residual porque es muy txico.

Control microbiano 3.3. CONTROLES DE ESTERILIZACIN:

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Son los controles que se efectan para comprobar si se cumplieron las condiciones del mtodo empleado. Existen distintos tipos de controles de esterilizacin: Biolgicos: Utilizan suspensiones de esporas bacterianas, de resistencia conocida al tratamiento, que se secan sobre un soporte como tiras de papel de filtro, por ejemplo. Segn el proceso que se desea controlar deben usarse los siguientes indicadores biolgicos: para calor hmedo Bacillus stearotermophilus, calor seco Bacillus subtilis var. niger o Clostridium tetani, xido de etileno Bacillus subtilis var. niger, radiaciones ionizantes Bacillus pumilus o Streptococcus faecium. Qumicos: Son sustancias qumicas de punto de fusin conocido y bien definido. Los esterilmetros son tiras de papel marcadas con xidos minerales que cambian decolor al alcanzarse una determinada temperatura. Algunos indican temperatura y tiempo. Fsicos: Consisten en registros de temperaturas que se realizan durante todo el ciclo de esterilizacin por calor. Un dispositivo capaz de efectuar este tipo de registro es la termocupla. Las termocuplas son alambres conductores y funcionan por un flujo de corriente elctrica creado en un circuito continuo constituido por dos metales cuyas juntas se encuentran a dos temperaturas diferentes. Puede representarse mediante el siguiente diagrama

4. CINTICA DE LA ESTERILIZACIN POR CALOR

Todos los microorganismos tienen una temperatura mxima de crecimiento y cuando se sobrepasa esta temperatura se produce la desnaturalizacin (proceso irreversible) de las protenas haciendo que estas se deformen y pierdan su estructura, entonces los microorganismos mueren. La desnaturalizacin es una funcin exponencial, es decir que mientras ms aumenta la temperatura hay un descenso exponencial del nmero de microorganismos. Tiempo de Reduccin Decimal (D). Es un parmetro utilizado para la caracterizacin de la esterilizacin por calor y se define como: Es el tiempo necesario a una temperatura dada para disminuir en un 10% la densidad de una poblacin de microorganismos.

Cuando el logaritmo de D se representa grficamente frente a la temperatura se obtendr una lnea recta, cuya pendiente de la recta ser un indicativo de la sensibilidad que presenta el microorganismo a diferentes temperaturas.

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Cintica de muerte microbiana: La poblacin bacteriana no se destruye instantneamente cuando se ha expuesto a un agente letal (esterilizacin), su muerte al igual que su crecimiento es exponencial, a medida que la poblacin se reduce lo hace en niveles iguales e intervalos constantes. Se considera que una bacteria est muerta cuando no crece, ni se multiplica en un medio de cultivo adecuado.

Tiempo trmico letal: es el tiempo ms corto que lleva destruir los microorganismos a una temperatura determinada. Punto trmico letal: es la temperatura ms baja que se necesita para matar a los organismos en 10 minutos. Tiempo de reduccin decimal o valor D, tiempo en minutos, a una temperatura determinada que se requiere para reducir la poblacin viable al 10% de su valor previo. Valor-Z es el cambio de temperatura que se requiere para modificar el valor D por un factor de 10.

Control microbiano 5. BIBLIOGRAFA

Pginas web:

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http://webcd.usal.es/Web/educativo/micro2/tema08.html#anchor138619 http://clasedecontroldemicrorganismos.blogspot.com.es/ http://www.slideshare.net/Blanca2102/esterilizacion#btnNext http://esterilizacionmf.wikispaces.com/Cin%C3%A9tica+de+esterilizaci%C3%B3n http://www.microbiologia.com.ar/bacteriologia/esterilizacion.php?Mostrar=gen eralidades http://es.scribd.com/doc/17780838/Metodos-de-Estudio-y-Control-de-LosMicroorg