TTULO: A TRAVS DEL MICROSCOPIO...

UNA PROPUESTA DE PRCTICAS SENCILLAS DE MICROSCOPA PARA EL BACHILLERATO PRIMER PREMIO DE EDUCACIN SECUNDARIA
AUTOR: ANTONIO GUILLN OTERINO CENTRO: I.E.S. VALLE DEL OJA

INTRODUCCIN.El trabajo que ahora presentamos como una propuesta prctica, ha sido desarrollado durante los cursos 2000-2001 y 2001-2002 en el IES Valle del Oja, con los alumnos que cursan la asignatura Biologa y Geologa en 1 de Bachillerato y en menor medida con los de 3 de ESO en la asignatura de Ciencias Naturales. El hecho de que los destinatarios de estos pequeos trabajos de investigacin hayan sido casi siempre alumnos de 1 de Bachillerato no significa que sus contenidos no puedan adecuarse a otros niveles, de hecho, un buen nmero de actividades podran ser realizadas, y de hecho tambin se han realizado, con alumnos de 3 o 4 de ESO e incluso con los de 2 de Bachillerato; los requisitos para la realizacin de las actividades son elementales: contar con un laboratorio mnimamente equipado, un aula de informtica y un nmero de alumnos en el grupo no excesivamente elevado, que nos permita trabajar en el laboratorio y con los equipos informticos de una manera razonable. En nuestro caso se ha dado durante el curso 2001-2002 una doble y afortunada circunstancia: el contar en el primer curso de Bachillerato con un nmero de alumnos no muy numeroso, 15, y adems con una predisposicin general ms que favorable hacia las Ciencias Naturales. La idea para la realizacin de estos pequeos trabajos cientficos parti de un hecho que hemos venido constatando a lo largo de nuestra labor como profesores de Ciencias Naturales: por un lado el general desconocimiento por parte de los alumnos del microscopio y de las tcnicas microscpicas y por otro lado la falta de actividades prcticas asequibles y relacionadas con algunas de los contenidos ms ridos de la disciplina y, en especial, con los del metabolismo. Teniendo en cuenta estas

consideraciones y las ventajas circunstanciales de un grupo altamente motivado y no muy numeroso iniciamos la estimulante tarea de idear algunas prcticas e irles dando forma y coherencia para trabajar con ellas en clase. Nuestra idea inicial pretenda conseguir un objetivo de fcil enunciado: elaborar unas prcticas de microscopa coherentes y globales que pudieran servir como un hilo conductor de la parte terica de la asignatura. Sin duda nuestra experiencia durante este curso slo ha cubierto de manera parcial una parte muy concreta de la disciplina, pero ha servido de punto de partida para afianzar conocimientos y, en muchos casos, ha constituido un importante estmulo para acercar a nuestros alumnos a problemas o cuestiones que parecen lejanas, -como si el mundo de la Ciencia fuera un mundo alejado del mundo en el que se desarrolla existencia-. Hemos comprobado como algunas de las actividades han facilitado la aproximacin a cuestiones vistas como extraas o lejanas, especialmente aquellas que tienen que ver con el metabolismo y en las que el exceso de frmulas suele abrumar a nuestros alumnos que memorizan sin sentido tan rpidamente como despus olvidan, otras veces asimilan conocimientos que en no pocas ocasiones son asumidos como dogmas sin ms, sin saber el por qu o de dnde surgen. Hacer partcipe al alumno de pequeos descubrimientos es hacerle protagonista de la Ciencia y este ha sido nuestro reto. Aqu slo se abordan algunas cuestiones muy elementales, pero siempre hemos tratado de dar coherencia al conjunto de las propuestas y as son fcilmente reconocibles dos bloques de actividades, en el primero se trata de profundizar en el conocimiento del microscopio y las tcnicas microscpicas mientras que en el segundo las prcticas estn interconectadas y tienen que ver con la organizacin celular y los procesos biolgicos de la nutricin, relacin y reproduccin. En uno y otro caso se abordan desde diferentes perspectivas pero siempre con un nexo de carcter tangible e instrumental: el de la utilizacin del microscopio y para ello hemos propuesto la siguiente secuencia de trabajos: 1.- El microscopio y su historia. 2.- El microscopio compuesto. 3.- La construccin de un microscopio simple. 4.- Manejo virtual de un microscopio electrnico de barrido. 5.- Observacin de organismos procariotas. 6 (I).- Observacin de clulas eucariotas: clulas animales. 6(II).- Observacin de clulas eucariotas: clulas vegetales. 7.- Funciones de nutricin: respiracin. 2

8.- Funciones de nutricin: fotosntesis. 9.- Los procesos de nutricin: toma de alimento. 10(I).-Fermentaciones: fermentacin lctica. 10(II).-Fermentaciones: fermentacin alcohlica. 11.- Las funciones de relacin. 12.-Las funciones de reproduccin: cariocinesis y citocinesis. OBJETIVOS.Como objetivos generales de este trabajo prctico y con independencia de los que hemos establecido para cada una de las actividades, se han propuesto los que seguidamente se detallan: - Acercar a los alumnos al mundo de los objetos y los seres ms pequeos. - Conocer el microscopio ptico simple y compuesto, sus partes pticas y mecnicas y la funcin de cada una de ellas. - Manejar con autonoma el microscopio ptico y aprender a interpretar las observaciones. Aprender a realizar preparaciones microscpicas sencillas con microorganismos, clulas, tejidos y estructuras animales y vegetales. - Formular hiptesis y verificarlas mediante la prctica experimental. - Elaborar informes y trabajos sobre las actividades propuestas. METODOLOGA.Si algo tienen en comn las actividades propuestas es que pretenden hacer a los alumnos protagonistas de sus propios descubrimientos, para ello se han marcado en cada caso las pautas de actuacin y sealado cules son los objetivos que se pretenden conseguir con cada una de las actividades, pero siempre dejando la libertad suficiente como para que los alumnos puedan desarrollar libremente alguna de sus ideas y estimular as la bsqueda de soluciones ante los problemas o cuestiones que se plantean. Las directrices generales para la realizacin de cada una de las actividades han sido entregadas por escrito a cada uno de los alumnos y explicadas con detalle a todos los alumnos en una sesin inicial. El sistema de trabajo.- En este proceso de trabajo y aprendizaje nos ha parecido adecuado que la realizacin de las actividades se desarrolle en equipo, las razones para 3

ello son varias, en primer lugar porque el proceso de investigacin o el creativo puede verse enriquecido con las aportaciones de los diferentes componentes del grupo, en segundo lugar porque se puede repartir o compartir la realizacin de tareas y por ltimo porque de este modo se pueden economizar medios materiales y espacio. As los grupos de trabajo han estado formados en este caso por tres o cuatro personas. Este trabajo en equipo se ha visto complementado por el trabajo que individualmente debe realizar cada componente, de este modo, la visin personal de cada uno de los miembros del grupo queda recogida con independencia del trabajo que desarrolle el grupo. Tanto el trabajo individual como el trabajo de equipo llevan aparejado en casi todos los casos el desarrollo de habilidades manuales e instrumentales, desarrollo de dotes de observacin y la aplicacin prctica de los conocimientos tericos adquiridos en el aula o en el laboratorio. Los espacios.- La mayor parte de las actividades han sido desarrolladas en el laboratorio de Ciencias Naturales, alguna de ellas en el aula de informtica y de manera complementaria en la biblioteca. La temporalizacin.- El tiempo para la realizacin de cada una de las actividades oscila entre una y tres sesiones de clase aunque siempre se ha procurado explicar la documentacin informativa en la sesin de clase anterior a la del desarrollo de la actividad. Bsqueda de informacin.- como complemento fundamental del trabajo

prctico hemos considerado la bsqueda de informacin, para ello en cada una de las actividades se facilitan las referencias sobre bibliografa especfica adems de ciertas direcciones de Internet. Estimamos que el uso de las fuentes documentales tradicionales junto con las que se pueden obtener de las nuevas tecnologas puede resultar muy enriquecedora y de hecho ha dado muy buenos resultados, sobre todo en las actividades relacionadas con el conocimiento del microscopio. PROCESO DE REALIZACIN.La experiencia de clase y de laboratorio han sido fundamentales para marcar las pautas del proceso de realizacin de estas actividades. Un buen nmero de ellas se han ido elaborando durante los dos cursos pasados cuando decidamos realizar con los 4

alumnos algn tipo de actividad prctica en un espacio diferente al habitual. La idea inicial se plasmaba en un guin de prcticas que se entregaba a los alumnos en el laboratorio junto con una propuesta de actividades. En funcin de las posibilidades reales y de los resultados de la actividad en el laboratorio esos guiones iniciales se han ido modificando, generalmente enriqueciendo con nuevas ideas; el resultado de todas esas modificaciones junto con el desarrollo real de la experiencia del curso pasado ha posibilitado la elaboracin del material que ahora se presenta de una manera ordenada y pensamos que coherente. RESULTADOS DE LA EXPERIENCIA.Los resultados de la experiencia creemos que han sido enriquecedores tanto para los alumnos como para el profesor, en estos trabajos todas las personas implicadas hemos encontrado alicientes, la satisfaccin de descubrir cosas nuevas y el alto grado de motivacin de muchos alumnos han sido fundamentales para seguir trabajando en algo que empez siendo una idea mucho ms modesta. Creemos que adems de los nuevos conocimientos que los alumnos pueden haber adquirido en el laboratorio a partir de unos objetivos concretos, se ha cumplido en buena medida nuestro deseo de hacer sentirse a los alumnos protagonistas de su propio aprendizaje y de sembrar en ellos alumnos la curiosidad por el saber y por conocer mejor y con otros medios la naturaleza que nos rodea.

BIBLIOGRAFA BSICA:
BERNAL, J. D. (1977) El origen de la vida. Ed. Destino. Barcelona. BERNIS MATEU, J. (1976) Atlas de Microscopa. Ed. Jover. Barcelona. BOZZO, M. G., DUFORT, M., MERCAD, N. (1975) La vida microscpica. Salvat Eds. Barcelona. BROCK, T. D. (1978) Biologa de los Microorganismos. Ed. Omega. Barcelona. CID, F. (1980) Historia de la Ciencia. Ed. Planeta. Barcelona. COSTA PREZ-HERRERO, A., MIGUEL GONZLEZ y DEL CAIZO FERNNDEZ ROLDN, M. A. Prcticas de Biologa para Enseanza Media: B.U.P., C.O.U. y F.P. (1981) Instituto de Ciencias de la Educacin de Salamanca. CUELLO SUBIRANA, J. & al. (1978) Prcticas de Biologa. Ed. Fontalba. Barcelona. HEALEY, P. (1971) Microscopios y vida microscpica. Ed. Bruguera. Barcelona.

HOOKE, R. (1665) Micrographia (traduccin de Carlos Sols (1989). Ed. Alfaguara. Madrid. IZCO, J. & al. (1998) Botnica. Mc. Graw-Hill. Interamericana. Madrid. LOCQUIN, M. & LANGERON, M. (1985) Manual de Microscopa. Ed. Labor. Barcelona. MEGLISCH (1980) Zoologa de invertebrados. Ed. Omega. Barcelona. ROBERTSON, D. (1980) El microscopio y la vida. Ed. Destino. Barcelona. STRASBURGER, E. & al. (1994) Tratado de Botnica. 8 Edicin. Ed. Omega. Barcelona. WEISZ, P. B. & KEOGH, R. N. (1987) La Ciencia de la Biologa. Ed. Omega. Barcelona. ZARUR, P. (1973) Tengo un microscopio qu puedo observar? Ed. Kapelusz. Buenos Aires.

EJEMPLOS

1.- EL MICROSCOPIO Y SU HISTORIA.

La evolucin del microscopio y de sus imgenes: a la izquierda microscopio de Leeuwenhoek (SXVII); a la derecha microscopio electrnico de barrido actual e imgenes de sangre humana obtenidas con estos dos instrumentos.

INTRODUCCIN El conocimiento de la Naturaleza nos sorprende a cada instante con imgenes nuevas. Sin embargo buena parte de las estructuras y de los procesos biolgicos ms relevantes son ms pequeos de lo que el ojo humano puede ver sin ayuda. nuestro ojo puede alcanzar una resolucin cercana a las 100 m, es decir podemos ser capaces de ver objetos de hasta una dcima de mm, pero no los ms pequeos.

La curiosidad innata al hombre ha hecho que este haya intentado saber ms acerca de los objetos ms lejanos, pero tambin de los ms prximos, la astronoma es una ciencia ligada al hombre desde antiguo y casi en la misma medida que se desarrolla el instrumental ptico para acercar los objetos lejanos lo hace el que permite aumentar los objetos prximos. Qu objetos somos capaces de ver a simple vista? De gran tamao: kilmetros de montaas o de mar; de tamao humano: una persona, un animal...; de 1 centmetro: moscas, abejas...; de 1 milmetro: piojos, pulgas y otros insectos. Qu podemos ver con el microscopio ptico? Amebas y protozoos: una dcima de milmetro; glbulos rojos y otras clulas: una centsima de milmetro; bacterias: milsimas de milmetro. Qu podemos observar sirvindonos del microscopio electrnico? Cromosomas: dcimas de micra o diezmilsimas de milmetro; virus: centsimas de micra; molculas: milsimas de micra, o nanmetros. Qu vemos con los microscopios de efecto tnel y de fuerza atmica? tomos: un ngstrom. OBJETIVOS - Conocer los hitos ms relevantes en el desarrollo del microscopio ptico. - Comprender la utilidad de los diferentes tipos de microscopio. - Saber relacionar algunos descubrimientos relevantes de la Biologa con sus protagonistas principales y su relacin con el microscopio. - Entender las diferentes escalas de medida empleadas en microscopa y sus equivalencias. UNA BREVE RESEA HISTRICA El invento del microscopio parece remontarse al siglo XVI cuando en 1590 los hermanos Jansen en Holanda inventaron el microscopio compuesto, constaba de un tubo con dos lentes convexas en cada extremo y ampliaba ms que las lupas, que existan desde la Edad Media, aunque daba una imagen borrosa.

A principios del siglo XVII, en 1610, Galileo, construy otro de similares caractersticas y desde entonces italianos y holandeses se disputan la autora del invento. Lo que s se hizo en Italia fue acuar el trmino microscopio que se emple por primera vez en la descripcin de la anatoma externa de una abeja en un trabajo

publicado por los componentes de la "Academia dei Lincei", sociedad cientfica a la que perteneca Galileo.

Galileo 1564-1642

Malpighi 1628-1694

Leeuwenhoek 1632-1723

Para obtener ms informacin sobre la historia del microscopio puedes acceder a la siguiente pgina pinchando con el ratn el texto resaltado.: http://odontologia.iztacala.unam.mx/mod_instrumentacion/practicasi/microscopio/micro H.htm A este primer trabajo siguieron otras obras importantes, quiz la de mayor repercusin fue la Micrographia de Hooke, publicada en 1665, en la que se describen tcnicas de microscopia muy elementales y se dibujan y comentan observaciones realizadas en un gran nmero de especmenes hechas con microscopio compuesto, del mismo tipo al inventado por los hermanos Jansen. Tambin por estos mismos aos, en 1660, Malpighi utiliza el microscopio y prueba la teora de Servet y de Harvey sobre la circulacin sangunea al observarla con este instrumento en los capilares sanguneos.

Por estas mismas fechas, hacia mediados del siglo XVII, Antony Van Leeuwenhoek, un comerciante de paos holands, que no tena formacin cientfica, pero que era un hbil pulidor de lentes, fabric microscopios de una sola lente y consigui obtener aumentos prximos a los 200 y describir as por primera vez bacterias, protozoos, espermatozoides y glbulos rojos, a los que llam "animculos" o pequeos animales. Mantuvo correspondencia cientfica a travs de ms de 300 cartas con la Royal Society de Londres. Durante el siglo XVIII se introdujeron en el microscopio mejoras mecnicas que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso aunque no se desarrollaron mejoras pticas. Las mejoras de ms importancia y casi definitivas en la ptica llegaron en 1877 cuando Abbe public su teora del microscopio; por encargo del ptico Carl Zeiss perfeccion la microscopa de inmersin al sustituir el agua por aceite de cedro, con

mayor ndice de refraccin, lo que permiti obtener aumentos cercanos a los 2000. En el primer tercio del siglo XX ya se haba conseguido alcanzar el limite terico de aumentos para los microscopios pticos sin rebasar amplificaciones superiores a 500X o 1000X sin embargo exista un deseo cientfico de observar los detalles de estructuras celulares como el ncleo o los cloroplastos.

Ernst Abbe 1840 - 1905

Calr Zeiss 1816 - 1899

En 1931 Max Knoll y Ernst Ruska fabricaron en Alemania el microscopio electrnico de transmisin MET (T.E.M.), el primer tipo de microscopio electrnico que empleaba un haz de electrones en lugar de luz (fotones) para enfocar la muestra. Las imgenes obtenidas entonces eran muy deficientes y de calidad inferior a la que ofrecan los microscopios convencionales de la poca, adems slo se consiguieron aumentos de hasta x2000 frente a los 10000000 actuales. Sin embargo poco tiempo despus James Hillier consigui construir un microscopio electrnico que super a los convencionales; en 1937 se pas de los 2000 a los 7000 aumentos. Con los aos, el propio Hillier contribuira a construir aparatos con una capacidad de 2 millones de aumentos, una dimensin totalmente fuera de las posibilidades de los microscopios tradicionales.

Ernst Ruska 1906 1988 junto al primer microscopio electrnico

Aos ms tarde, en 1942 se desarrolla el microscopio electrnico de barrido MEB (SEM) que permite observar la superficie de los especimenes a analizar y este instrumento se perfecciona notablemente en 1965. En 1981. G. Binnig y H. Rother, desarrollan el llamado microscopio de efecto tnel. Con esta tecnologa se consiguieron observar por vez primera molculas e incluso tomos individualizados; en 1985 estos mismos autores ponen a punto el llamado microscopio de fuerza atmica, ya en 1998. S. Chou y P. Krauss consiguen, mediante el efecto tnel, realizar la grabacin de datos de mayor densidad conocida: 65 gigabits por centmetro cuadrado. Todos estos avances tcnicos han permitido al hombre ir penetrando de forma progresiva en la constitucin de los seres vivos y de la materia. ACTIVIDADES : 9

Actividad n1- El manejo de las dimensiones y las imgenes microscpicas Escribe las relaciones matemticas entre las diferentes unidades de medida de las que se habla en la introduccin.

Sabras decir con qu tipo de microscopio microscopio ptico, microscopio electrnico, microscopio electrnico de barrido, microscopio de fuerza atmica- han sido obtenidas las imgenes siguientes? Qu imagen corresponde a cada una de las muestras?: esmalte dental, moho, mitocondria, mosquito.

Actividad n2- Un repaso a la historia del microscopio. Sabras relacionar correctamente los recuadros de las tres columnas?

Fabric microscopios de una sola lente y observ por primera vez bacterias y protozoos.

Galileo

Construy, unos aos despus que los hermanos Jansen, uno de los primeros microscopios pticos compuestos.

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Realiz numerosas observaciones con el microscopio ptico y a l se debe el nombre de clula

Leeuwenhoek

Desarroll hasta sus lmites tericos el microscopio ptico

Construy el primer microscopio electrnico

Zeiss

Portada de la Micrographia de Hooke, el primer tratado de microscopa, publicado en Londres en el ao 1665

Actividad n 3- Un fragmento muy pequeo de la Micrographia de Hooke. El texto y el grabado que a continuacin reproducimos corresponden a la obra Micrographia de Robert Hooke publicada en Londres en 1665:

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Observacin XVIII. De la estructura o textura del corcho y de las celdas y poros de algunos otros cuerpos esponjosos semejantes. Cog un trozo bien claro de corcho y con un cortaplumas tan afilado como una navaja de afeitar, cort un trozo, dejando su superficie extraordinariamente lisa. Al examinarlo luego con mucha diligencia con un microscopio pens que poda ver cmo apareca un poco poroso, pero no era capaz de distinguir los poros con suficiente claridad como para estar seguro de lo que eran, y mucho menos para estar seguro de cul era su forma. Sin embargo, juzgando por la ligereza y blandura del corcho que sin duda su textura no poda ser tan delicada que, de recurrir a una mayor diligencia, no pudiera quiz hallar el modo de discernirla con el microscopio, con el mismo cortaplumas afilado separ de la anterior superficie lisa un trozo extraordinariamente delgado y, colocndolo en un portaobjetos negro, dado que se trataba de un cuerpo blanco, y proyectando sobre l la luz con una gruesa lente plano convexa, pude percibir con enorme claridad que estaba todo perforado y poroso, muy a la manera de un panal, aunque sus poros no eran regulares, si bien no difera de un panal en los siguientes aspectos: Primero, en que tena muy poca sustancia slida en comparacin con la cavidad vaca contenida en medio, tal y como aparece de manera ms clara en las figuras A y B de la Plancha XI, pues los intersticios o paredes (como se pueden denominar) o particiones de dichos poros eran casi tan delgadas en relacin a sus poros como esas lminas delgadas de cera de un panal (que encierran y constituyen las celdas exangulares) respecto a los suyos. Luego en que los poros o celdas no eran muy profundos, sino que constaban de muchsimas cajitas separadas en un poro largo y continuado mediante determinados diafragmas, tal y como ser ve en la figura B [de la Plancha XI], que representa una vista de los poros separados longitudinalmente... Como hemos sealado anteriormente Robert Hooke public una de las ms importantes obras de microscopa en 1665, Micrographia, he aqu un texto y uno de los grabados que acompaan a la descripcin de sus observaciones. A qu descubrimiento se alude en el texto?

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Por qu Hooke coloc la muestra sobre un portaobjetos negro? Qu palabra qued acuada en esta descripcin? Ese trmino tiene el mismo significado hoy que cuando Hooke realiz la observacin? Por qu? TEMPORALIZACIN: tres sesiones, una en el aula, otra en el laboratorio y otra en el aula de informtica. DIRECCIONES DE INTERNET: http://www.cienciaparaninos.com/genmol.htm Pgina con gran nmero de enlaces relacionadas con el mundo del microscopio. http://www.micro.magnet.fsu.edu/ Excelente pgina en ingls con imgenes virtuales de microscopio, historia, etc. http://www.msa.microscopy.com/ Pgina de la sociedad americana de microscopa con varios enlaces relacionados con la educacin. http://www.csic.es/hispano/patrimo/micro1/microevo.htm Pgina del CSIC sobre los microscopios y el instrumental microscpico conservado en Espaa. BIBLIOGRAFA BSICA: BERNAL, J. D. (1977) El origen de la vida. Ed. Destino. Barcelona. BERNIS MATEU, J. (1976) Atlas de Microscopa. Ed. Jover. Barcelona. BOZZO, M. G., DUFORT, M., MERCAD, N. (1975) La vida microscpica. Salvat Eds. Barcelona. BROCK, T. D. (1978) Biologa de los Microorganismos. Ed. Omega. Barcelona. CID, F. (1980) Historia de la Ciencia. Ed. Planeta. Barcelona. COSTA PREZ-HERRERO, A., MIGUEL GONZLEZ y DEL CAIZO FERNNDEZ ROLDN, M. A. Prcticas de Biologa para Enseanza Media: B.U.P., C.O.U. y F.P. (1981) Instituto de Ciencias de la Educacin de Salamanca. CUELLO SUBIRANA, J. & al. (1978) Prcticas de Biologa. Ed. Fontalba. Barcelona. HEALEY, P. (1971) Microscopios y vida microscpica. Ed. Bruguera. Barcelona. HOOKE, R. (1665) Micrographia (traduccin de Carlos Sols (1989). Ed. Alfaguara. Madrid. IZCO, J. & al. (1998) Botnica. Mc. Graw-Hill. Interamericana. Madrid. LOCQUIN, M. & LANGERON, M. (1985) Manual de Microscopa. Ed. Labor. Barcelona. MEGLISCH (1980) Zoologa de invertebrados. Ed. Omega. Barcelona. 13

ROBERTSON, D. (1980) El microscopio y la vida. Ed. Destino. Barcelona. STRASBURGER, E. & al. (1994) Tratado de Botnica. 8 Edicin. Ed. Omega. Barcelona. WEISZ, P. B. & KEOGH, R. N. (1987) La Ciencia de la Biologa. Ed. Omega. Barcelona. ZARUR, P. (1973) Tengo un microscopio qu puedo observar? Ed. Kapelusz. Buenos Aires

10 (I).- FERMENTACIONES: LA FERMENTACIN LCTICA

Lactobacillus casei, imagen de MEB

Lactobacillus bulgaricus, imagen de M.O.

INTRODUCCIN: Uno de los procesos ms primitivos empleado por los microorganismos para obtener energa de una manera alternativa al de la respiracin es el de la fermentacin anaerobia, es decir, en ausencia de oxgeno. Aquellos que comparten esta posibilidad de obtener energa mediante respiracin, si hay oxgeno, o fermentacin si no lo hay, son los organismos anaerobios facultativos. Sin embargo, otros, slo pueden vivir en ausencia de oxgeno, son los anaerobios estrictos. Dentro de las fermentaciones las dos modalidades ms importantes son las de la fermentacin lctica y las de la fermentacin alcohlica. En ambos casos el combustible empleado por la clula es el mismo que en la respiracin: la glucosa, sin embargo el rendimiento energtico de las fermentaciones es muchsimo ms bajo que el de la respiracin. Tanto en la fermentacin lctica como en la alcohlica, la glucosa, en una primera fase se rompe en dos molculas de tres tomos de carbono: el cido pirvico, siguiendo un conjunto de reacciones que reciben el nombre de glicolisis (destruccin de la glucosa). Sin embargo, la segunda fase del proceso de fermentacin difiere en la lctica de la alcohlica, en la lctica el cido pirvico se transforma en otro compuesto de 3 tomos de carbono, el cido lctico, mientras que en la alcohlica cada molcula de pirvico perder una molcula de CO2 y se convertir en etanol (alcohol etlico).

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OBJETIVOS: - Observar qu ocurre cuando actan sobre la leche algunos microorganismos que llevan a cabo la fermentacin lctica. - Reconocer las bacterias responsables de la fermentacin lctica y presentes en el yogur. - Tratar de cuantificar cmo tras la fermentacin aumenta el nmero de bacterias. MATERIAL NECESARIO: 1 yogur natural. Envase de plstico de botella de agua de 33cl. Agua destilada. Alcohol metlico. Azul de metileno. Agua destilada. Pipeta. Mechero Bunsen. Portaobjetos y cubreobjetos. Microscopio. Estufa de cultivos.

Frotis bacteriano de yogur donde se aprecian distintos tipos de bacterias responsables de la fermentacin lctica x1000 Montaje y fotografa en el laboratorio del Instituto.

ACTIVIDADES: Actividad n1 Observacin y recuento de bacterias antes de la fermentacin El objetivo de esta primera actividad ser la realizacin de un frotis bacteriano para identificar formas bacterianas y hacer un recuento aproximado del nmero de bacterias por unidad de volumen, para ello, disolveremos en 200cl. de agua 1cl. de yogur; con una pipeta tomaremos una muestra de 0,01ml de esta disolucin, que depositaremos en un extremo de un portaobjetos. Apoyando el borde corto de otro portaobjetos sobre la gota, la extenderemos presionando y arrastrando hacia el otro extremo del porta de una sola pasada. Cuando la muestra est seca se aadirn unas gotas de alcohol metlico para fijar la preparacin. Secaremos la muestra agitndola ligeramente y teniendo la precaucin de no poner los dedos sobre la superficie donde estn extendidos los microorganismos; aadiremos sobre la extensin bacteriana unas 15

gotas de azul de metileno que se dejarn actuar durante 2 3 minutos. Despus se lavar la preparacin con un fino chorro de agua, y se dejar escurrir y secar perfectamente, cuando esto ocurra la preparacin estar lista para su observacin en el microscopio. Para realizar la observacin bacteriana tendremos que utilizar el objetivo de inmersin procediendo del siguiente modo: con un palillo o bastoncito de plstico colocaremos una gota de aceite de inmersin en la lente frontal del objetivo de inmersin, moveremos lentamente el tornillo macromtrico hasta que la gota de aceite entre en contacto con el cubreobjetos y observando por el ocular y manipulando el tornillo de enfoque micromtrico mejoraremos el enfoque realizando despus los ajustes pertinentes en el regulador de la intensidad lumnica y en el diafragma para obtener la suficiente luz; dibujaremos los tipos bacterianos que hayamos podido diferenciar.

Tincin del frotis para realizar una primera observacin de las bacterias de la fermentacin lctica

El recuento de bacterias se puede hacer realizando un frotis sobre un porta especial con cmaras destinado a contar el n de clulas sanguneas, pero podemos efectuar uno aproximado as: se recortar una hoja de papel milimetrado del mismo tamao del porta y se colocar debajo de l; tambin se puede fotocopiar el papel milimetrado sobre una hoja de acetato para fotocopiadora. Contaremos el nmero de cuadrculas por las que se extienden las bacterias -coincidirn con las zonas teidas de azul-, colocaremos despus la hoja de acetato o el papel milimetrado con cinco cuadrculas aleatoriamente recortadas con un cter sobre la platina del microscopio y bajo la preparacin y contaremos as las bacterias que se extienden en un rea de 5mm2, de este modo podremos saber cuntas se extienden por todas las cuadrculas, que son las mismas que existen en 0,01ml de disolucin. Actividad n2 Observamos los efectos de la fermentacin. En esta segunda fase de la prctica disolveremos en 200cl. de leche 5 cl. de yogur; humedeceremos un trocito de papel tornasol en el lquido para averiguar el pH e introduciremos esta disolucin en una botella de agua mineral vaca de 33cl. Con cuidado iremos aplastando la botella hasta que el lquido quede enrasado con la boca, posteriormente cerraremos la botella y la introduciremos en la estufa de cultivos a 30C, donde la tendremos durante 24 horas. Observaremos qu ha ocurrido con la botella, con el lquido de su interior y qu pasa al abrir la botella. Introduciremos ahora el papel tornasol en el lquido resultante y anotaremos el valor de pH.

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Preparacin del cultivo, realizacin de un frotis y fijado de la muestra tras la fermentacin.

Actividad n3 Observacin y recuento de bacterias despus de la fermentacin Con una pipeta volveremos a tomar una muestra de 0,01ml y la extenderemos sobre un porta siguiendo los mismos pasos que en 1) y en 2). Finalmente despus de completar el recuento de bacterias las observaremos con el objetivo de inmersin. Despus de ser utilizado deber limpiarse bien con un pauelo fino ligeramente humedecido en xilol.

Aspecto que presentan las botellas tras la fermentacin lctica, izquierda, y alcohlica, derecha

Propuesta de trabajo: - Explica qu transformaciones ha sufrido la botella tanto en su aspecto externo como en su interior antes y despus de haberla introducido en la estufa de cultivos. - Por qu utilizamos un colorante para realizar la observacin? - Dibuja la forma de las bacterias que hayas podido observar Cuntos tipos distintos has podido reconocer? - Cuntas bacterias haba en 1cc de cultivo antes de la fermentacin? y despus? explica cmo lo has podido calcular - Cmo a variado el pH a lo largo del experimento? Por qu? - Trata de dar una interpretacin cientfica al experimento. TEMPORALIZACIN

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Tres o cuatro sesiones de laboratorio bastarn para realizar esta prctica y la siguiente. SUGERENCIAS Es muy interesante la comparacin de los procesos de fermentacin lctica y alcohlica, por lo que recomendamos la realizacin de esta prctica al mismo tiempo que la siguiente. DIRECCIONES DE INTERNET http://omega.ilce.edu.mx:3000/sites/ciencia/volumen1/ciencia2/43/htm/elmundo.htm Pgina mejicana dedicada al mundo de la microbiologa, bastante completa y asequible. http://www.ucm.es/info/mfar/presenta.htm Pgina principal del Departamento de microbiologa de la Facultad de Farmacia en la Universidad Complutense de Madrid. Numerosos y excelentes enlaces e informacin variada. http://www.microbe.org/espanol/experiment/yeast.asp Experimentos con levaduras y otros microorganismos. http://www.microbelibrary.org/ Pgina de la sociedad americana de microbiologa con numerosos recursos. http://www.microbelibrary.org/C3Search.asp?SubmissionType=v Pgina para buscar cualquier texto o imagen relacionada con microorganismos: excelente.

BIBLIOGRAFA BSICA: BERNAL, J. D. (1977) El origen de la vida. Ed. Destino. Barcelona. BERNIS MATEU, J. (1976) Atlas de Microscopa. Ed. Jover. Barcelona. BOZZO, M. G., DUFORT, M., MERCAD, N. (1975) La vida microscpica. Salvat Eds. Barcelona. BROCK, T. D. (1978) Biologa de los Microorganismos. Ed. Omega. Barcelona. CID, F. (1980) Historia de la Ciencia. Ed. Planeta. Barcelona. COSTA PREZ-HERRERO, A., MIGUEL GONZLEZ y DEL CAIZO FERNNDEZ ROLDN, M. A. Prcticas de Biologa para Enseanza Media: B.U.P., C.O.U. y F.P. (1981) Instituto de Ciencias de la Educacin de Salamanca. CUELLO SUBIRANA, J. & al. (1978) Prcticas de Biologa. Ed. Fontalba. Barcelona. HEALEY, P. (1971) Microscopios y vida microscpica. Ed. Bruguera. Barcelona. HOOKE, R. (1665) Micrographia (traduccin de Carlos Sols (1989). Ed. Alfaguara. Madrid. IZCO, J. & al. (1998) Botnica. Mc. Graw-Hill. Interamericana. Madrid. LOCQUIN, M. & LANGERON, M. (1985) Manual de Microscopa. Ed. Labor. Barcelona. 18

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