UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper MICROBIOLOGA II INTEGRANTES: Gonzlez Muoz Yadira Alexandra Jaramillo Riofrio

rio Andrea Carolina Saritama Ramrez Gabriela Alejandra PRACTICA II TCNICA ASPTICA DE AISLAMIENTO INTRODUCCIN Mtodos de inoculacin Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el cultivo. (Espinal G. 2005.) Las tcnicas microbiolgicas se utilizan para detectar si hay microorganismos sobre una muestra y para identificarlos y cuantificarlos. Por tanto, el primer paso en el estudio microbiolgico ser aislar las diferentes especies de microorganismos que haya en la muestra. La tcnica para el aislamiento comienza preparando un inculo de siembra, que es la deposicin de una pequea porcin de la muestra en el medio o en los medios de cultivo adecuado, en funcin de las especies microbianas que se espera encontrar. (P. Garca M. 2009) (Espinal G. 2005.) La inoculacin consiste en tomar una pequea porcin de la muestra y diluirla para dispersarla y que crezca con ms facilidad en el medio de cultivo adecuado. Se puede inocular en medio lquido o en medio slido. Hay diferentes mtodos dependiendo del objetivo que se persiga con la siembra. (Prats G. 2006.) OBJETIVOS Familiarizarse con el manejo de microorganismos y con las tcnicas d aislamiento en placa de Petri y tubos. Obtener colonias separadas, utilizando uno o ms mtodos. Aprender a inocular distintos medios de cultivo contenidos en tubo: caldo, agar inclinado y medio semislido sembrado en profundidad. GRUPO: 5

UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper MATERIALES Agar sangre con varios tipos de colonias Agar nutritivo Agar inclinado (manitol o Kligler) Cultivo mixto en un tubo con caldo TS (gram negativos y gram positivos) Tubos con caldo TS Tubo con cultivo en caldo Agar inclinado con cultivo bacteriano (Manitol o Kligler) Asa Bacteriolgica Mechero Bunsen Estufa

FLUJOGRAMA TCNICA DE AISLAMIENTO EN TUBOS Para todas estas tcnicas se debe partir de sepas aislada TOMA DE MEDIO LQUIDO DE UN TUBO CON CULTIVO

Esterilizamos la aza bacteriolgica con la ayuda de una lmpara de alcohol hasta que esta se torne de color rojo vivo.

Tomamos el tubo de tal manera que los dedos ndice y meique de la mano destapen el tubo.

Flameamos la boca del tubo para evitar contaminaciones.

Tomamos el inoculo con el aza bacteriolgica previamente enfriada y sin asentar sobre ninguna superficie la tapa de tubo

Finalmente flameamos nuevamente la boca del tubo y el asa para evitar contaminaciones y tapamos el tubo de la misma manera en que fue abierto.

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INOCULACIN EN UN TUBO CON MEDIO LQUIDO

Una vez tomado el inoculo procedemos a sembrarlo en el medio liquido correspondiente.

Inclinamos el tubo de tal manera que formemos un ngulo de 45 dentro del mismo

Precisamente en el vrtice del ngulo formado es en donde vamos a inocular el microorganismo deseado

Agitamos tubo

un

poco

el

Finalmente retiramos el aza y la flameamos antes de ponerla en su lugar y colocamos e tubo en forma vertical.

INOCULACIN EN UN TUBO CON MEDIO SLIDO (AGAR POSICIN PICO Y FLAUTA)

Con el asa de siembra estril tomar los microorganismos de la muestra

Inoculamos en el tubo realizando un movimiento de zig-zag en la superficie.

El proceso se inicia en el fondo sin picar el mismo y se va avanzando hacia arriba por el rea inclinada.

Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones

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INOCULACIN EN UN TUBO MEDIO SLIDO (AGAR POSICIN PICO Y FLAUTA Y FONDO)

Con el asa de siembra estril tomar los microorganismos de la muestra

Inoculamos en el tubo realizando un movimiento de zigzag en la superficie.

El proceso se inicia picando el fondo y se va avanzando hacia arriba por el rea inclinada.

Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones

INOCULACIN EN UN TUBO MEDIO SLIDO (AGAR FONDO)

Con el asa de siembra estril tomar los microorganismos de la muestra

Inoculamos en el tubo realizando un picado profundo en el fondo del tubo (aqu no hay necesidad de inclinar el tubo)

Se saca la asa bacteriolgica por el mismo lugar que la introducimos

Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones.

UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper MTODO DE LOS CUADRANTES (MTODO B) TCNICAS DE AISLAMIENTO EN CAJA

Dividimos la caja Petri en 4 cuadrantes

Estriamos con ayuda del asa los microorganismos sobre el rea 1 cerca del borde de la caja. Teniendo cuidado de no lastimar la superficie del agar.

Flameamos el asa y dejejamos enfriar por unos 5 segundos para luego realizar 5-6 estras desde el Area 1 al Area 2

Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones.

Flameamos el asa nuevamente y hacemos tantas estras como sea posible desde el Area 3 al Area 4 utilizando la superficie restante del medio de cultivo.

Flameamos el asa nuevamente y realizamos 6-7 estras desde el Area 2 con direccin al Area 3.

MTODO DE LOS CUADRANTES (MTODO A)

Dividimos la caja Petri en 4 cuadrantes

Estriamos con ayuda del asa los microorganismos hacia delante y hacia atrs sobre el Area 1. Teniendo cuidado de no lastimar la superficie del agar.

Flameamos el asa y la dejejamos enfriar por 5 segundos. Tocamos la superficie del agar para asegurarse que se encuentra fra el asa.

Flameamos el asa nuevamente, rotando la caja y estriamos

Flameamos el asa nuevamente, rotamos la caja y estriamos al Area 3 en varias ocasiones

Rotamos la caja 90 grados mientras la mantenemos cerrada. Estriamos el Area 2 hacia delante y hacia atrs, tocando las estras del Area 1 en varias ocasiones.

Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones

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. RADIADO MTODO

Distribuimos una asada del inoculo de microorganismos sobre una pequea rea cerca del borde de la caja en el Area 1.

Flameamos el asa y dejamos enfriar por 5 segundos.

Desde el Area 1 haga 7 u 8 estras hacia el lado opuesto de la caja.

Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones.

Flameamos el asa nuevamente, dejamos enfriar y realice estras que crucen las anteriores empezando cerca del Area 1.

MTODO CONTINUO

Iniciamos en el borde de la caja (Area A) con una asada de microorganismos distribuyndola con un movimiento nico y contnuo hacia el centro de la caja.

Rotamos la caja 180 grados de manera que la superficie no inoculada se encuentre en la parte superior de la misma.

Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones.

Sin flamear el asa, ejecutamos un movimiento nico y contnuo hasta llegar al centro de la caja teniendo cuidado de no topar las estras del Area A

UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA Memento ascendere semper MTODO PARA ORINA

Colocamos una gota de orina en el centro del agar con ayuda de asa

Trazamos una lnea vertical en el centro del agar

Finalmente flameamos el asa antes de colocarla en su lugar para evitar contaminaciones.

Estriamos el inoculo por toda la superficie de la caja de borde a borde con un movimiento nico y continuo

RESULTADOS Y CONCLUSIONES En la practica realizada aprendimos la buena manipulacin de las diferentes tcnicas de aislamiento de microrganismos Se obtuvieron colonias separadas, cada una inoculada con su respectivo mtodo o mtodos en los diferentes agares. El objetivo de la prctica sobre inoculacin, fue exitosa ya que la experiencia adquirida servir mucho en posteriores trabajos o practicas, debido a que se podr manipular, inocular y transferir microrganismos de manera correcta y sin destruir el medio del cultivo en donde trabajamos.

BIBLIOGRAFA
Espinal G. 2005. Manual de Practicas Microbiologcas I. Santo Domingo (Instituto Tecnologico de Santo Domingo). Editorial BUHO. Prats G. 2006. Microbiologa Clnica. Primera Edicin. Editorial Panamericana. P. Garca M. 2009. Microbiologa Clnica Prctica. Editorial Mdica Panamericana S.A. Segunda Edicin. Mxico.