MICROORGANISMOS EN LA PRODUCCIN DE COMBUSTIBLES Y BIOMASA

1. Planteamiento del problema Un grave problema de las economas nacionales es el grado de dependencia hacia el petrleo, de ah la necesidad de buscar alternativas que se distingan por su menor precio relativo, as como por su fcil acceso e incluso en la incidencia del medio ambiente .En este caso aparecen los biocombustibles y dentro de ellos el etanol el metano (biogs) e hidrogeno los cuales en nuestro pas tienen la posibilidad de producirse en gran volumen. En el mundo entero se est apostando por la produccin de energas renovables. Adems la produccin de biomasa es partir de residuos orgnicos o industriales, los cuales son subproducto de las industrias. 2. OBJETIVOS 2.1. Objetivo general Produccin microbiana de combustible y biomasa. 2.2. Objetivos especficos Produccin de etanol partir de maz Produccin de metano partir de residuos orgnicos Disear y construir un biodigestor casero a base de plsticos con fines descriptivos. Comprobar la eficacia del biodigestor utilizando el gas obtenido para lograr la combustin. 3. JUSTIFICACIN El presente trabajo de investigacin es importante debido a que ayudara a los estudiantes aplicar los fundamentos cientficos de microbiologa industrial para hacer un aporte en el avance cientfico tecnolgico de la regin Arequipa ya que es de vital importancia preservar el medio ambiente en la regin y en el pas el proyecto tiene como finalidad hacer uso de los residuos orgnicos domsticos e industriales para la produccin de biocombustible y biomasa. 4. MARCO TEORICO. 4.1. ANTECEDENTES: La reduccin de la contaminacin en su origen abarca un gran nmero de aproximaciones metodolgicas que en conjunto pueden llamarse Tecnologas Limpias y que comprenden cambios en los procesos, cambios de procesos y cambios de material de partida: Cambios en los procesos que impliquen la sustitucin de mtodos qumicos por enzimas o microorganismos (incluyendo organismos modificados genticamente: OMGs o GMOs). Control integrado de plagas y de cosechas que reduzca el uso de insecticidas y herbicidas (productos agroqumicos). Control biolgico: uso de materiales biolgicos para el control de plagas y enfermedades. Esto incluye desde usar biopesticidas (por ejemplo, la toxina de Bacillus thuringiensis) a crear plantas transgnicas resistentes a plagas. Mejora biolgica de la produccin agrcola: incluye desde el uso de microorganismos beneficiosos (rizobios, PGPRs, micorrizas, etc.) a la creacin de plantas transgnicas ms productivas.

Recuperacin de recursos naturales: p. ej., la lixiviacin microbiana permite recuperar metales con un coste energtico muy inferior a los procedimientos tradicionales de extraccin. Produccin de plsticos biodegradables por microorganismos. Desulfuracin biolgica del carbn y del petrleo. Uso de biomasa como fuente renovable de energas. Biocombustibles.

La qumica verde, green chemistry, hace referencia al uso de procesos industriales menos contaminantes. Dentro de esta filosofa cobra gran importancia la biotecnologa mediante el uso de organismos o enzimas. En la actualidad los procesos verdes basados en procesos biolgicos constituyen alrededor del 5% de los procesos qumicos industriales. Sin embargo se espera que en la prxima dcada ese porcentaje suba al menos a un 10-20%, en parte al menos por la aplicacin de nuevas tcnicas en la bsqueda de microorganismos y enzimas y en la mejora por ingeniera gentica de ambos en el laboratorio. La sustitucin de procesos puramente qumicos por procesos biotecnolgicos persigue fundamentalmente dos objetivos desde el punto de vista ambiental: disminuir el gasto energtico y de agua y minimizar la produccin de compuestos contaminantes, y todo ello de forma compatible con la rentabilidad. Se denominan energas renovables a las que se obtienen de fuentes naturales virtualmente inagotables, unas por la inmensa cantidad de energa que contienen, y otras porque son capaces de regenerarse por medios naturales.

World total primary energy supply 2004, shares of 11.2 billion tons of oil equivalent, or 470 EJ Combustibles fsiles: Disponibilidad finita (no son renovables): se estima que las reservas de petrleo y gas son para aproximadamente un siglo, y las de carbn, el ms contaminante, para 3-4 siglos. En la actualidad se consumen a un ritmo 105 veces superior al de su formacin. Produccin de gases de efecto invernadero (calentamiento global). Produccin de otros contaminantes (contaminacin del aire, lluvia cida).

Energa nuclear: La fisin nuclear libera 50 millones de veces ms energa que el carbn: se usan pequeas cantidades de uranio, se reduce el problema de transporte (cantidad), no se liberan gases. Residuos altamente peligrosos y difciles de almacenar. Riesgo de catstrofes.

Energas renovables: Energa hidroelctrica Energa solar Energa geotrmica Energa elica Energa mareomotriz Biomasa (biocombustibles)

En la actualidad, las energas renovables estn en alza. El 10 de marzo de 2007 la UE se ha comprometido a un doble objetivo, obligatorio para 2020: reducir un 20% las emisiones de estos gases de efecto invernadero respecto a 1990, y aumentar hasta un 20% el consumo de energas renovables sobre el total (en la actualidad es de un 6,3% en la UE). El consumo de biocombustibles debe ser al menos del 10%. Por su parte, Suecia pretende ser independiente del petrleo en pocos aos. A cinco aos de la renovacin del famoso protocolo de Kyoto, Europa toma as la cabeza de la resolucin de un problema global, con la esperanza de que pases como Estados Unidos y China - sin los cuales estos esfuerzos sern intiles- se sumen a esta posicin. Si lo hacen, el compromiso europeo de reduccin de emisiones nocivas subira a un 30%. 4.2. DEFINICION DE CONCEPTOS: Biocombustibles y Biomasa Los biocombustibles derivan de biomasa (organismos que han vivido recientemente o sus productos o desechos metablicos, como los excrementos). A diferencia de otros combustibles naturales (petrleo, carbn, combustibles radioactivos) son una fuente de energa renovable. Una definicin de biocombustible podra ser: cualquier combustible que al menos en un 80% derive de organismos vivos recolectados en los 10 aos que preceden a su produccin. Al igual que el carbn y el petrleo, la biomasa es en su mayor parte una forma de energa solar almacenada. Otra ventaja de los biocombustibles es que son biodegradables y por tanto no demasiado peligrosos para el ambiente si accidentalmente se vierten a ste.

En cualquier caso, el uso directo de biomasa para obtener calor o electricidad y el uso de biocombustibles va a estar cada vez ms favorecido (legislativamente) en los prximos aos. 4.2.1. PRODUCCIN DE BIOCOMBUSTIBLES

Produccin de biodiesel: El biodiesel es un biocombustible lquido producido a partir de aceites vegetales y grasas animales. Las materias ms utilizadas son semillas de plantas oleaginosas como la colza y el girasol (Europa), la soja (EEUU) y el coco (Filipinas) y frutos oleaginosos como la palma (Malasia e Indonesia). Tambin pueden usarse aceites de fritura usados, por lo que en determinadas zonas existen servicios de recogida de dichos aceites. Es una materia prima barata y adems se evitan los costes de su tratamiento como residuo. Tambin est estudindose el uso de lpidos de origen microbiano: algas, bacterias y hongos.

Las propiedades del biodisel son prcticamente las mismas que las del gasleo de automocin en cuanto a densidad y nmero de cetano (indicativo de la eficiencia energtica de la reaccin que se lleva a cabo en los motores de combustin interna) y presenta un punto de inflamacin superior. Por todo ello, el biodisel puede mezclarse con el gasleo para su uso en motores e incluso sustituirlo totalmente si stos se adaptan convenientemente. El ahorro en emisiones de gases invernadero es de al menos un 60% en comparacin con el gasleo. Adems el biodisel produce menos dixido de azufre en la combustin y es fcilmente biodegradable.

Los aceites vegetales estn compuestos principalmente por triglicridos y tienen un uso directo mnimo en motores disel por varios problemas: Su combustin da lugar a residuos como gomas y ceras que taponaran los conductos (eso puede evitarse desengomando y filtrando el aceite). Su alta viscosidad causa una mala atomizacin y, con ello, una mala combustin. La polimerizacin de los componentes insaturados en la cmara de combustin causa depsitos en los cilindros.

Por eso los aceites vegetales (o grasas animales) son transformados en steres monoalqulicos de cidos grasos de cadena larga. Los steres ms empleados son los de metanol. stos se pueden obtener por diversas vas, pero la ms utilizada es la reaccin de transesterificacin:

Reaccin de transesterificacin:

La produccin de biocombustibles es de importancia prioritaria ya que puede favorecer la creacin de empleo en agricultura, fijar poblacin en el mbito rural, potenciar el desarrollo industrial en esas zonas y reducir los efectos de la desertizacin gracias a la plantacin de cultivos energticos. Produccin de bioetanol:

La gasolina es una mezcla de alcanos (tpicamente de 5 a 12 tomos de C), alquenos, cicloalcanos e hidrocarburos aromticos. El calor de combustin del etanol es menor que el de la gasolina, lo cual conduce a una menor potencia y por ello el consumo de combustible aumenta entre un 15 y un 25%. Sin embargo puede considerarse un combustible muy limpio porque su combustin slo genera CO2 y H2O (sin emisin de otros gases contaminantes como xidos de S o de N). En la actualidad el bioetanol se produce por la fermentacin de los azcares contenidos en materia orgnica vegetal por parte de microorganismos (levaduras o bacterias). En la grfica que se muestra se puede ver el proceso completo de obtencin de alcohol a partir de las principales materias primas que se utilizan para su produccin: Azcares, procedentes de la caa de azcar o de la remolacha principalmente. Cereales, mediante la fermentacin de los azcares del almidn. Se requiere la hidrlisis del almidn mediante altas temperaturas y el uso de enzimas (amilasas). Biomasa (fermentacin de azcares contenidos en la celulosa y hemicelulosa).

Produccin de bioetanol por Zymomonas mobilis:

ZYMOMONAS MOBILIS En el mundo occidental, las bebidas alcohlicas se elaboran utilizando las levaduras, principalmente del gnero Saccharomyces. En las zonas tropicales de Amrica, frica y Asia se producen bebidas alcohlicas a base muy populares a partir de jugos de frutas fermentadas por mezclas de microorganismos en las que interviene una bacteria del gnero Zymomonas. La principal caracterstica de esta bacteria es la de utilizar la va de Entner-Doudoroff en anaerobiosis para degradarla glucosa. El rendimiento muy elevado de conversin de la glucosa en etanol por esta bacteria hace de ella una potencial candidata para una produccin industrial de etanol por fermentacin. a. Aislamiento, identificacin y cultivo: Zymomonas presenta forma de bacilar de 2 a 6 m de longitud y 1 a 1,4 m de ancho. Se disponen generalmente en pares. Son mviles, ya que presentan de 1 a 4 flagelos, aunque esta movilidad puede ser perdida espontneamente. No forman cpsulas ni esporas. Son catalasa positiva y oxidasa e indol negativos. No reducen los nitratos, el rojo neutro ni el tween 60 u80. Presenta un pH ptimo de 7,3. Las colonias en medio estndar son brillantes, blancas o cremas y miden alrededor de 2 mm de dimetro tras 2das de incubacin a 30 C. Presentan borde regular y es perceptible un olor frutado cuya intensidad depende de la cepa. Crece en medios con glucosa y fructosa y fermenta estos dos azcares. Produce al menos un mol y medio de etanol por mol de glcido fermentado y tambin forma pequeas cantidades de cido lctico y trazas deacetilmetil carbinol. Tambin pueden crecer en medios que contengan 2%(p/v) de extracto de levadura y 20% (p/v) de glucosa o en un medio estndar a un pH entre 4,1 5,2 si ste contiene 5% (v/v) de etanol o rojo neutro (0,1% p/v). El pantoteno y la biotina son indispensables para el crecimiento celular. En aerobiosis hay poco o ningn crecimiento en medio slido estndar y hay ausencia de crecimiento en agar nutritivo. El crecimiento de las clulas es sensible frente a discos que llevan 500 g de sulfafurazol 30 g de novobiocina 10 g de cido fusdico.

b. Metabolismo: Zymomonas slo fermenta la glucosa, la fructosa y la sacarosa, por tanto presenta la particularidad de no asimilar prcticamente ninguna otra fuente de carbono, aunque se ha reportado que pueden metabolizar la rafinosa. Para la fermentacin de la glucosa utilizan la va de Entner Doudoroff. La fermentacin de estas dos hexosas se acompaa de una produccin de gas importante y de una acidificacin del medio. La mayora de las cepas produce entre 1 y 1,6 moles de etanol por mol de glucosa o de fructosa metabolizado. Por cada mol de sustrato consumido, se producen dos moles de NADH, stas se producen a nivel del etanol deshidrogenasa y una parte menor a nivel de la lactato deshidrogenasa. El rendimiento de ATP es de uno por un mol de hexosa degradada. Zymomonas no posee sistema de transporte como la fosfoenol piruvato glucosa fosfotransferasa, ni sistema de permeasa, sino ms bien un sistema por difusin facilitada. Presentan un sistema de transporte para la glucosa y fructosa que se asocia a una velocidad de difusin elevada y una afinidad baja, esto la limita a vivir en un hbitat limitado a entornos con altas concentraciones de azcar. c. Influencia del oxgeno e inhibicin por el etanol: Con respecto a la inhibicin por oxgeno, se ha demostrado que Z. mobilis no es una bacteria estrictamente aerobia. La aireacin disminuye el rendimiento en etanol y la concentracin en cido lctico, aumenta la velocidad de consumo especfico de glucosa y la produccin de cido actico. La inhibicin es ms importante sobre la productividad de etanol que sobre el crecimiento celular. El efecto Pasteur est ausente y el rendimiento Yx/s no aumenta en condiciones de aerobiosis. Con respecto a la inhibicin por etanol, Z. mobilis presenta probablemente la tolerancia ms elevada al etanol. Es capaz de producir etanol con concentraciones. d. Aplicaciones industriales: Z. mobilis interviene en la fermentacin del vino de palma, de la cerveza chica, as como en la fabricacin del vino. Se asegura, adems, que participaba en la fabricacin de las cervezas autnticas de la antigedad. Tambin se ha utilizado para la conservacin de jugos extrados de remolacha y en el tratamiento de desechos de la industria cervecera para uso como alimento en animales de granja (un uso parecido se ha producido con la papa). Otro uso dado ha sido para la elaboracin de cervezas con bajo contenido de alcohol (0,7%), a esta se la llama cerveza diettica. Tambin ha sido empleada para desarrollar una nueva tecnologa en la produccin de pulque. Otra posibilidad de utilizacin de Z. mobilis es la produccin a gran escala de etanol. Esto debido a que su rendimiento de conversin es mayor que el de la levadura y a que puede producirlo a una velocidad significativamente ms elevada, adems, esta bacteriano necesita oxgeno y presenta en general una mejor tolerancia al etanol que la levadura. Como desventajas podramos apuntar que la cepa necesita de un pH de cultivo ms elevado que el de las levaduras, y esto generara un mayor peligro de contaminacin, adems, slo metaboliza un espectro muy reducido de sustratos:

glucosa, fructosa y sacarosa. En el futuro todos estos problemas podrn ser salvados gracias al aporte de la Ingeniera Gentica y la Biotecnologa.

Produccin de bioetanol: El gran objetivo actual es facilitar y hacer ms rentable la conversin de residuos lignocelulsicos en etanol. Las tecnologas convencionales liberan los azcares de estos residuos mediante un tratamiento termoqumico que combina altas temperaturas y condiciones cidas para la hidrlisis de celulosas y hemicelulosas. La situacin ideal ser disponer de microorganismos capaces de convertir los residuos lignocelulsicos en etanol en un proceso conocido como SSF: simultaneoussacarificacin y fermentacin. Para ello: a) Conseguir microorganismos capaces de fermentar tanto hexosas como pentosas (las cuales, como xilosa y arabinosa estn presentes en gran cantidad en las hemicleulosas). b) Conseguir organismos capaces de degradar eficientemente las celulosas y hemicelulosas. En este sentido puede ser interesante emplear los celulosomas, complejos multiproteicos de diversos tipos de celulasas ancladas en una protena que sirve de andamiaje y que tiene un dominio de unin a celulosa.

Produccin biolgica de hidrogeno: A diferencia de los combustibles fsiles, e incluso del biodisel, bioetanol o combustin de biomasa, el hidrgeno sera el combustible ideal debido a que su nico producto de combustin es el agua: no aade gases de efecto invernadero. Potencialmente el hidrgeno puede emplearse tanto como combustible de automocin como combustible para la generacin de electricidad.

Fig. Electron transport to nitrogenase and hydrogenase in photosynthetic microorganisms. A common pathway occurs in cyanobacteria (to nitrogenase) and green algae hydrogenase. Sites of ATP synthesis and hydrolysis are shown by wavy lines with upward and downward arrows, respectively. Lightdriven reactions are denoted by hv.

Bioplsticos:

4.2.2.

MICROORGANISMOS EN LA PRODUCCIN DE BIOCOMBUSTIBLES Microorganismos en la produccin de bietanol. Levaduras: Debido a su alta productividad en la conversin de azcares a bioetanol y a que se separan mejor despus de la fermentacin. Adems, la produccin de toxinas es muy inferior a la de otros microorganismos. Entre las especies ms utilizadas estn: Saccharomyces cerevisiae. S. ellipsoideus. S. anamensisi. Candida seudotropicalis. S. carlsbergensis. Kluyveromyces marxianus. Candida bytyrii. Pichia stipatis. Schizosaccharomyces pombe.

a. Caractersticas de los microorganismos utilizados: Los microorganismos a utilizar deben cumplir con ciertas necesidades y caractersticas tales como: Tolerancia al alcohol La tolerancia al etanol es un elemento importante en la seleccin de una cepa de levadura, pues de su capacidad de mantenerse activa en condiciones crecientes de concentracin alcohlica en el medio depender el rendimiento del proceso. Tolerancia a la alta temperatura Muchas levaduras son sensibles a la temperatura; si sta se eleva, la productividad puede disminuir; los sistemas de enfriamiento son caros, por lo que hay una razn econmica para desarrollar cepas termo tolerantes, que trabajen a temperaturas por encima de 40C sin prdidas en la eficiencia, y que a la vez mantengan la estabilidad gentica. Tolerancia a la alta concentracin de azcares Trabajar con altas concentraciones de azcares produce mayor eficiencia y productividad del proceso fermentativo. Segn investigaciones de la Universidad Rafael Landvar de Guatemala la cepa T-17 de levadura Sacharomyces cerevisiae, aislada del jugo de caa, posee alta tolerancia a la concentracin de azcares y a la temperatura, con elevada produccin de bioetanol. En condiciones industriales obtuvo mejores resultados en % alcohlico y eficiencia que la S. cerevisiae "Hualien", que es la ms ampliamente empleada en Taiwan. b. Otros microorganismos utilizados: Uso de cultivos mixtos: Con relacin al empleo de cultivos mixtos en la fermentacin alcohlica la Universidad Rafael Landvar de Guatemala reportan algunos trabajos con levaduras. Con cultivos formados por dos levaduras: S.cerevisiae- S.carlsbergensis, en proporcin 4:1 en el orden mencionado, se favoreci el incremento en la produccin de alcohol, como resultado de la fermentacin completa de la rafinosa por la segunda. La misma fuente plantea que hay una gran tendencia actual a utilizar bacterias; entre ellas se destaca la Zymomonas mobilis. Se reportan productividades tres veces mayores para la Z.mobilis en comparacin con la S. cerevisiae usando concentraciones de glucosa de 150 g/L o ms bajas. La viabilidad de la Z. mobilis se mantiene durante la produccin de etanol; se logran buenos rendimientos, as como el acortamiento del ciclo fermentativo respecto al que se obtiene con las levaduras. Otras bacterias mesfilas han sido utilizadas en la produccin de etanol por fermentacin, tales como:Clostridiumsporogenes, Cl.indolicus, Cl. sphnoides, Zimomonas mobilis, Erwinia amilovora, Spirocheta aurantia, Streptococus lactis, Spirocheta litorales y Spirocheta stenostrepta, con satisfactorios resultados de productividad. Se realizaron experimentos a escala de laboratorio con bacterias termfilas con rendimientos aceptables.

Se han investigado las caractersticas del Clostridium saccharobutyricum y su comportamiento en la fermentacin, y se demostr que acelera la formacin de alcohol durante la fermentacin por levadura. Se encontr adems que el mejor rendimiento en la produccin de ron y en su aroma fue obtenido cuando la relacin de levadura a bacteria era de 1: 5. Las bacterias son aadidas cuando la concentracin de alcohol es de 3,5 a 4,5 (V/V) y el contenido de azcares igual o menor a 6 g / 100 mL de baticin. Otras experiencias realizadas con Clostridium pasteurianum demostraron que producen cido butrico principalmente y que el Clostridium butyricum A.T.C.C. 6015 produce cidos voltiles. La Universidad Rafael Landvar de Guatemala reporta estudios con cultivos mixtos o microorganismos trabajados genticamente cuyo objetivo fundamental es lograr utilizar sustratos complejos de degradar, que incluso en algunos casos son residuos. Las bacterias Escherichia coli y Zymomonas mobilis y la levaduraSaccharomyces cerevisiae han sido objeto de estudios desde el punto de vista gentico para ser utilizados en la sacarificacin y fermentacin de la celulosa, la utilizacin de residuos agrcolas, sueros y almidones. La misma fuente reporta estudios de cultivos mixtos de hongos y levaduras como Trichoderma viride y Pachysolen tannphylus, Aspergillus ninger y Saccharomyces cerevisiae para lograr estos objetivos. Microorganismos en la produccin de biodiesel: La sntesis del biodiesel se realiza normalmente por medio de los procesos qumicos de esterificacin y transesterificacin, pero hoy en da podemos hablar de un tipo de algas y de bacterias capaces de producir biodiesel de una forma ms sencilla, barata y ecolgica. a. Algas Una empresa holandesa establecida en Roosendaal, Algaelink, ha inventado una tecnologa basada en el mismo proceso que la Naturaleza lleva haciendo desde el comienzo de la vida. El fotobioreactor de Algaelink ha mejorado y acelerado la fotosntesis natural, y puede fabricar algas que se duplican cada 24 horas. Su crecimiento es tan rpido que el gasto de energa para producirlas es comparativamente muy bajo para as convertirse en biodiesel. Las algas en su desarrollo absorben CO2, y tambin son alimento para los seres humanos y el ganado por su alto contenido en protenas, minerales y vitaminas. Para crecer, las algas necesitan slo agua y CO2. Por debajo de quince grados de temperatura el grado de crecimiento es bajo, as que necesitamos la temperatura ideal est entre 15 y 25 grados. Cada kilo de algas consume para su crecimiento entre 2 y 3 kilos de CO2 as que las algas son el mejor sistema de captura y almacenamiento de CO2 del mundo. fotobioreactor consiste en unos tubos transparentes tan largos como se quiera, con agua y luz en su interior. a. Bacterias Segn estudios realizados por por Alexander Steinbchel y sus colaboradores de la Universidad de Munster en Alemania, han creado por ingeniera gentica una variedad de bacteria Escherichia coli mediante el aadido de genes de otras especies. Dos genes proceden de la bacteria Zymomonas mobilis y son los que controlan la produccin alcohol a partir de glucosa. Un tercer gen procede de la bacteria Acinetobacter baylyi y permite a la nueva bacteria combinar el alcohol con el aceite y producir biodiesel. Esta bacteria es por tanto capaz de medrar en una mezcla de aceite y azcar y producir biodiesel directamente. La meta final de este grupo de investigadores es la produccin de

biodiesel de este modo, pero a partir de desechos vegetales en lugar de los aceites, que son caros de producir.

Microorganismos utilizados en la produccin de hidrogeno como combustible:

Microorganismos involucrados en cada fase de digestin anaerbica Las especies de microorganismos involucrados en el proceso varan dependiendo de los materiales que sern degradados. Los alcoholes, cidos grasos, y los enlaces aromticos pueden ser degradados por la respiracin anaerbica de los microorganismos. Estos utilizan, entre otros nutrientes, el nitrato (Paracoccus denitrificans, Pseudomonas stutzerii), azufre (Desulfuromonas acetoxidans, Pyrodictium occultum), sulfato (Desulfovibrio desulfuricans, Desulfonema limicola ), carbonato (Acetobacterium woodi, Clostridium aceticum, Methanobacterium thermoautotrophicum), fumarato (Escherichia coli, Wolinella succinogenes ) o Fe(III) ( Alteromonas putrefaciens ) como aceptores de electrones, por lo que pueden denominarse reductores de nitrato, reductores de sulfato, etc. Bacterias que participan de la hidrlisis Los microorganismos de muchos gneros son los responsables de la hidrlisis. Entre estos destacan: Bacteroides, Lactobacillus, Propioni- bacterium, SphingomonaSporobacterium,Megasphaera, Bifidobacterium.

Bacterias que participan de la acidognesis: La mayora de los microorganismos acidognicos tambin participan de la hidrlisis. El gnero Clostridium, Paenibacillus y Ruminococcus estn presentes en todas las fases del proceso de fermentacin, pero son dominantes en la fase acidognica. El grupo Cytophaga-Flavobacterium-Bacteroides representa el segundo grupo ms grande de microorganismos durante las dos primeras fases de la descomposicin. Sin embargo, en la fase metanognica representan menos del 5% del total de microorganismos. Esto indica que estos grupos son los principales responsables de la degradacin de compuestos monomricos. Bacterias que participan de la acetognesis: Estas bacterias slo pueden sobrevivir en simbiosis con el gnero que consume hidrgeno. Todos los microorganismos acetognicos tienen un perodo de regeneracin de hasta 84 h. Las bacterias acetognicas reductoras de sulfato son capaces de degradar lactato y etanol, pero no son capaces de degradar cidos grasos y compuestos aromticos. Bacterias que participan de la metanognesis: La ltima fase de la descomposicin anaerbica se encuentra dominada por un grupo especial de microorganismos, las Arqueas metanognicas. Estas se caracterizan a travs del co-factor F420, el cual acta en presencia de hidrogenasas como transportador de H2. Este puede detectarse por su autofluorescencia en un microscopio ptico. Las metanognicas activas aparecen en la segunda fase de la fermentacin, la fase de acidognica. Sin embargo, obviamente el nmero de Arqueas metanognicas aumenta en la fase metanognica. Las principales especies estn representadas por Methanobacterium, Methanospirillum hungatii , y Methanosarcina. Especies metanotrficas: Las especies metanotrficas (especies que consumen metano) se encuentran presentes en todas partes, pero no son deseables en una planta de produccin de biogs. La mayora de estos son aerbicos. Estos microorganismos utilizan el oxgeno para degradar el metano y obtener su energa. Los productos metablicos son el agua y el dixido de carbono. Los metanotrficos aerbicos degradan aproximadamente el 17% de todo el metano en la atmsfera. Adems de estos, existe otro grupo de metanotrficos, que es capaz de consumir metano, sin necesidad de oxgeno. Estos se encuentran en su mayora en los sedimentos marinos. Los microorganismos metanotrficos sintetizan sus lpidos a partir del metano.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS Ventajas.

El menor nivel de impactos ambientales. Un mayor rendimiento en combustible o energa por hectrea, debido a que es posible aprovechar el total de la biomasa; El potencial encerrado en el aprovechamiento de una vasta gama de materia prima, y en particular, de residuos o desechos como paja o madera y otros residuos de biomasa. La posibilidad de "disear" combustibles sintticos a fin de optimizarlos en cuanto a su eficiencia energtica y Bajo nivel de emisiones.

Desventajas. Los biocombustibles tienen algunas desventajas. Una de ellas es que no son ms baratos que los derivados del petrleo. Es porque la materia prima de estos no debe ser producida pero s la de los biocombustibles. La produccin y el uso de biocombustibles como son el uso de fertilizantes en la siembra y cosecha de material agrcola, el material agrcola debera de ser usado para el consumo humano y no para la elaboracin de biocombustibles, pases asiticos han empezado a destruir bosques y selvas con tal de contar con zonas para la siembra agrcola para la sntesis de biocombustibles y el aumento en el precio de los alimentos en los pases en desarrollo.

4.3. HIPOTESIS: Dado los avances en el conocimiento sobre la produccin de biocombustibles, que demuestran su gran demanda, su rentabilidad y la factibilidad de la mayora de estas tecnologas; entonces puede esperarse que la aplicacin de estas tecnologas en nuestro medio sea factible y productiva. 4.4. VARIABLES: Cantidad de sustrato de alimentacin. Concentracin microbiana. Temperatura. Concentracin de nutriente. Alcalinidad. PH. Concentracin de metabolitos. Cintica de crecimiento microbiano. Tiempo de retencin. Rendimiento. 5. METODOLOGA Y DISEO DE LA INVESTIGACIN 5.1. PROCESAMIENTO: El procedimiento a seguir ser como se indica a continuacin para cada caso

5.2. PRODUCCIN DE ETANOL Material y mtodos Origen de las Zymomonas spp. Muestras de jugos naturales frutos vegetales se colectaron en frasco estril de 50 ml, transportadas en hielo al laboratorio para su procesamiento. Deteccin de Zymomonas spp. Se realiz en tubos en CELMG o caldo extracto de levadura g/L: 3g, extracto de malta 3, peptona de caseina 5, glucosa 20; 100 ppm de cicloheximida y 3% de etanol, a un de pH 5.0 ajustado con cido lctico, c/tubo con un Durham invertido. Los tubos se incubaron a 30C/24 a-48 h, la presencia de Zymomonas se detect por produccin de gas y la morfologa tpica: diplobacilos cortos Gram Negativos. Este etapa se repiti para su aislamiento en cultivo axnico. Aislamiento de Zymomonas spp. Los tubos positivos en la etapa anterior, se sembraron en cajas de Patri con agar (1.5%) y ELMG incubadas a 30C/24-48h. Se seleccionaron aquellas colonias tpicas de Zymomonas y por resiembra en el ELMG sin etanol en placa, as se obtuvieron los cultivos axnicos (5,20). Identificacin de los aislados. Se us el Manual de Bacteriologa Determinativa de Bergeys novena edicin del 2000 (1). Con base en las pruebas para la identificacin de Zymomonas sp se incluy la cepa de coleccin Z. mobilis ATCC 10988 como patrn de referencia y comparacin (3). Conservacin de los aislados. Los aislados al igual que la cepa de coleccin de Zymomonas, se resembraron mensualmente en agar ELMG, sin etanol con cicloheximida y conservaron a 10C en refrigeracin. Produccin de etanol. Para comprobar la capacidad de sntesis de etanol de los aislados de Zymomonas, se sigui el siguiente protocolo: Fermentacin. Los aislado se activaron en CELMG sin etanol y cicloheximida, se incubaron a 30C/24-48h, posteriormente se tom una asada de c/u para sembrar un matraz de 500 ml con 250 ml de CELMG, el cual se incubo a 30C, a 100 rpm en agitador rotatorio/24-48h, de est se sembr otro matraz con CELMG para la sntesis de etanol. Produccin de etanol. Cada aislado activado en CELMP, se us el 5% (v/v) de i para un matraz de 250ml. con 150ml. de medio de produccin de etanol g/L: KH2PO4 2, extracto de levadura 10 y 10, 30, 50, 100 y 150. de glucosa en agua destilada a pH 5.0 ajustado con cido lctico, las sales se agregaron despus de esterilizar la base (17-21), cada aislado se sembr por triplicado, en condicin esttica y en agitacin a 100 rpm a 30C por 120 h se tomaron 5ml cada 24 h. en tubos con

tapn de rosca para medir: Cuantificacin de etanol. La muestra de la fermentacin se congelaron hasta la medicin de etanol, se centrifugaron a 3000 rpm/20 min a baja temperatura, el sobrenadante transferido a viales, para posteriormente medir concentracin de etanol por cromatografa de gases Beckman Mod. GC 72-5, con detector de ionizacin de flama, nitrgeno como gas acarreador y columna de acero inoxidable de 6 pies de largo y 1/8 de pulgada de dimetro empacada con Porapak Q en anlisis cromatogrficos, se utilizaron las siguientes condiciones (10,13). Flujo de Nitrgeno 40 c.c./min., flujo de Hidrgeno 40 c.c./min., flujo de aire 230 c.c./min., temperatura de Columna 180 C., temperatura de Inyector 170C., temperatura de Detector 160C., detector de ionizacin de flama, atenuacin de Registro 0.8, velocidad de la Carta 0.1 pulg/min., volumen inyectado 1.0 microlitro. Medicin de crecimiento. Cada aislado se midi la turbidez (D.O.) a 600nm (2,4,5) en un espectrofotmetro Coleman Junior II, cada 24 h durante la fermentacin. Azcares totales. La muestra utilizada para la cuantificacin de etanol, tambin se emplearon para determinar azcares totales en el medio de cultivo, por el mtodo de la Antrona con una curva de calibracin con estndares de glucosa (3). Produccin de etanol por Zymomonas

Resultados y discusin. A partir de aguamiel de maguey, de caa de azcar, de pulque, y de jugo de uva, se recuperaron 15 aislados de Zymomonas spp como se muestra en el cuadro 1, en donde se comprueba que este el gnero es cosmopolita y relativamente fcil de encontrar en la naturaleza, segn se reporta en la literatura (1-4). En referencia a las pruebas bioqumicas de los aislados silvestres en comparacin con la cepa de coleccin Z. mobilis ATCC 10988 de acuerdo con Bergeys del 2000 (1), tuvieron morfologa celular similar a la cepa de referencia: fueron diplobacilos Gram Negativos, mviles a excepcin el aislado R4, mientras que los aislados silvestres respondieron negativamente a la sntesis de: oxidasa, la ureasa, la gelatinasa, el indol y la reduccin nitratos, pero si liberaron catalasa y todos fermentaron la glucosa. La cepa ATCC 10988 y el aislado denominado Zymomonas sp U I, fueron positivas al cido sulfhdrico y la produccin de gas de glucosa, a la fermentaron de fructosa y sacarosa con generacin etanol, en donde la cepa ATCC 10988 creci mejor que los aislados en el medio de cultivo con diferente concentracin de glucosa (11-14), aunque solo el aislado U I, genero etanol. Los 15 aislados silvestres de Zymomonas fueron clasificados como Z. mobilis ya que fermentaron la glucosa a diferente concentracin de 10, 30, 50, 100 y 150g/L, pero con una mnima liberacin de etanol en comparacin con la cepa Z. mobilis ATCC 10988 tanto en condicin esttica como en agitacin a 100 rpm, mientras que la ATCC10988 con un nivel de glucosa de 10, 30, 50, 150g/L libero etanol hasta 104g/L de manera similar en agitacin y como en condicin esttica, debido a lo anterior se seleccion a Z. mobilis U I aunque sintetiza levano . El cuadro 3 muestra el anlisis comparativo del mximo rendimiento celular, entre la Z. mobilis silvestre UI de 0.17 en agitacin a 0.15 esttica en 10g/L de glucosa, mientras que para la ATCC 10988 fue de 0.36 y 0.69 en agitacin con 10 y 150g/L de glucosa en el medio de cultivo (19-21). Por otro lado se observ que la mayora de los aislados silvestres producen levano, actualmente se analiza la capacidad que tienen y el potencial para su posible explotacin. Conclusiones Los resultados de ambos cuadros 1 y 2 demuestran que si bien es posible recuperar Z.mobilis de jugos naturales la seleccin para la produccin de etanol es un trabajo de tiempo, si se desea que esa capacidad sea

natural, dado el contraste entre lo que libera la cepa de coleccin de la silvestre, pues con el avance de la ingeniera gentica es posible seleccionar una Zymomonas spp mejor que la tpica Saccharomycesspp, para la produccin masiva de etanol que ayude a minimizar el impacto de la disminucin combustibles del petrleo. Cuadro 1. Origen de los aislados de Zymomonas mobilis productoras de levanoa etanolb y/o de algunas regiones de Mxico.

Aislado B 1a B 2a B 3a E 2a E 3a R 3a R 4a R 5a R 6a Z 4a Z 5a Pa Fa Ta U I ab

Fuente de aislamiento Jugo agave* Jugo agave* Jugo agave * Aguamiel maguey Aguamiel maguey Jugo de agave Jugo de agave Jugo de agave Jugo de agave Mosto con 24 h* Mosto con 24 h*. Pulque Pulque Pulque Jugo de uva

Sitio Bustamante, N. L**. Bustamante, N. L. Bustamante N. L. Iturbide, N. L.** Iturbide, N. L. Laguna de Snchez, N. L**. Laguna de Snchez, N. L. Laguna de Snchez, N. L. Laguna de Snchez, N. L. Tequila, Jal.*** Tequila, Jal. Matehuala, S. L. P.+++ Fortn Ver. + Yondije, Edo. de Mx++. Monterrey, N. L.**

*jugo o mosto en fermentacin, **noreste, ***centro occidente, nororiente+++, +Costa noreste, ++centro de Mxico. Cuadro 2. Anlisis comparativo de la produccin de etanol por Zymomonas mobilis** de coleccin y un aislado de jugos de frutos vegetales de algunas regiones de Mxico. Glucosa (g/L) Esttica Z. mobilis ATCC 10988 Agitacin Esttica Z. mobilis UI Agitacin

10 30 50 100 150

5.30 16.45 29.29 54.50 70.00

3.60 15.50 33.60 53.45 104.67

1.49 1.80 1.60 1.27 1.34

1.72 3.28 4.40 4.00 3.00

**Condiciones de fermentacin: Inculo 5%, agitacin 100 rpm 30C, pH 5.0 Cuadro 3. Anlisis comparativo del rendimiento de produccin celular (Y=p/s) entre Zymomonas mobilis* de coleccin y un aislado silvestre de jugos naturales de vegetales de algunas regiones de Mxico. Glucosa (g/L) Esttica 10 30 50 100 150 0.53 0.54 0.58 0.54 0.46 Z. mobilis ATCC 10988 Agitacin 0.36 0.51 0.67 0.53 0.69 Esttica 0.15 0.06 0.032 0.013 0.009 Z. mobilis UI Agitacin 0.17 0.11 0.08 0.04 0.02

*condicione similares en agitacin al cuadro 2.

5.3. PRODUCCIN DE METANO METODOLOGA Para diluir los desechos se debe recolectar el estircol fresco de ganado vacuno e inmediatamente se preparar la mezcla de estircol con base en la metodologa descrita por Mart (2008).Para elaborar el biodigestor se consultar el Manual sobre la produccin de gas metano en biodigestores. Para comprobar la efectividad del Biodigestor se suministrar en total 15 litros de la mezcla (estircol/ agua) en 3 porciones de 5 litros cada tercer da cuidando algunos factores como la ausencia de oxgeno, la humedad y lograr la produccin de gas metano

Definicin de biodigestor Un biodigestor es un contenedor cerrado, hermtico e impermeable (llamado reactor), dentro del cual se deposita el material orgnico a fermentar 7 transformar este en biogs y fertilizante . ELEMENTOS DE UN BIODIGESTOR en determinada dilucin de agua aprovechando la digestin anaerobia (en ausencia de oxigeno) de las bacterias que ya habitan en el estircol, para

Fig. 4 Esquema General del Biodigestor

ANEXO Fotografa 2 (abajo). El collage presenta la construccin BIOQUMICA. del Biodigestor

Fotografa 1 (arriba). Despus de haber asistido a las asesoras en la UJAT, se realiz la lista de materiales.

Posteriormente se hizo la compra de stos.

Fotografa 3 (izquierda). Antes de la introduccin del substrato al biodigestor, se chec que no hubiera fugas, se pint el biodigestor y la base de ste.

Fotografa 4. Recoleccin del material de substrato para el biodigestor.

Fotografa 5. Dilucin del estircol Del ganado vacuno.

Fotografa 6. Introduccin del material substrato al biodigestor

DISCUSIN El biogs metano es una fuente alternativa de energa que es utilizada, en gran escala, en pases como Colombia, Costa Rica y Bolivia; sin embargo, en nuestro pas an se est dando a conocer este biocombustible y las tecnologas para su produccin. De utilizarse esta tecnologa en comunidades marginadas donde an no cuentan con servicio de energa elctrica y/o gas LP resultara de gran ayuda porque superaran sus carencias y tendran mejores condiciones de vida. Tambin evitan problemas de contaminacin de aguas, malos olores o criadero de insectos.

RESULTADOS Despus de dejar fermentar la mezcla de estircol con agua, esperamos 30 das hasta que hubo una cantidad suficiente de gas metano. Posteriormente este gas se utiliz, obteniendo la combustin que se esperaba.

CONCLUSIN Para que se pueda realizar este proceso, en el cual intervienen diferentes tipos de microorganismos, se debe utilizar un biodigestor, que es un recipiente hermtico para que las condiciones sean anaerobias. Por lo tanto cualquier recipiente que cumpla estas condiciones puede funcionar como un biodigestor, por ejemplo un garrafn de plstico de 20 litros.

5.4. PRODUCCIN DE HIDROGENO PROCESOS DE PRODUCCIN DE HIDRGENO GASEOSO La produccin de hidrgeno gaseoso. A partir del agua, mediante esta fenomenologa requiere manipular la secuencia de reacciones bioqumicas, interactuando con la clula completa (pero sin modificarla en principio), en alguna modalidad que obligue la aparicin de gas hidrgeno que, de ser dejado al sistema natural, no sera producido en absoluto hacia el medio exterior a la clula. Se han popularizado dos alternativas tecnolgicas, a un nivel solamente de laboratorio y de algunos ensayos piloto. En el primer proceso, la produccin de oxgeno fotosinttico, con la consecuente acumulacin de carbohidratos, est separada de la produccin de gas hidrgeno, tanto temporal como espacialmente. Este es un proceso de dos estados: el CO2 es primero fijado a sustratos ricos en H2endogeno durante fotosntesis oxignica normal (estado 1), seguido por generacin de hidrgeno molecular cuando las micro algas son incubadas en condiciones anaerbicas (estado 2). Este enfoque requiere, por ende, de un sistema de cultivo y de otro sistema aparte para la generacin de hidrgeno.

La segunda aproximacin est relacionada con la produccin de oxgeno fotosinttico y gas hidrgeno simultneamente. En este caso los electrones son liberados de la oxidacin del agua y son conducidos a la hidrogenasa sin estar mediado la fijacin de CO2 ni el almacenamiento de energa como metabolitos celulares. Este mecanismo en el proceso de generacin de H2 ha resultado superior al proceso de dos estados, ya que se han obtenido eficiencias de conversin de energa (luminosa a gas hidrgeno) de un 5 a un10% (del orden de magnitud de la eficiencia de celdas fotovolticas. Sin embargo, este proceso "de un estado" tiene limitaciones principalmente por la inhibicin de la hidrogenasa por el oxgeno que es producido por la disociacin del agua por el PS II. PROCESO DE PRODUCCIN DE HIDRGENO DE DOS ESTADOS Como se mencion anteriormente, en la etapa 1 (fotosntesis oxignica) se busca conseguir una acumulacin de carbohidratos va ciclo de Calvin. Luego estas clulas son incubadas anaerbicamente por un cierto perodo para inducir la expresin de genes que codifican para la hidrogenasa reversible y de otros genes que pueden ser esenciales para la produccin de H2. En una segunda etapa, estas clulas son operadas bajo condiciones anaerbicas y en presencia de luz con la consecuente produccin de hidrgeno. Esta evolucin de H2 puede deberse a dos mecanismos: uno, producto de la fermentacin de carbohidratos va fermentacin de ribulosa 5-P y generacin de CO2e hidrgeno; pero, tambin puede explicarse por el aporte de electrones directamente a la maquinaria fotosinttica modificada (tecnolgicamente) por las condiciones de anaerobias. PROCESO DE PRODUCCIN DE HIDRGENO EN UN ESTADO Se ha descrito que bajo ciertas condiciones de limitacin de nutrientes, con un medio libre se azufre (como sulfato) y en condiciones anaerobias, algunas microalgas como Chlamydomonas reiinhardtison capaces de producir hidrogeno de manera sostenida en el tiempo (Melis et.al., 2000). La falta de sulfato en el medio genera un desacoplamiento del PS II y una prdida en la disociacin del agua (y tambin de generacin de oxgeno). La prdida de actividad del PS II se debe a la alta tasa de biosntesis de protena de "novo" en el cloroplasto, necesaria para el frecuente reemplazo de protenas del centro de reaccin en el complejo que oxida H2O en el PS II. En ausencia de azufre, que es un componente esencial de los aminocidos cisteina y metionina, la biosntesis y la reparacin del PS II se bloquea (Ghirardi et.al., 2000; Melis A, 1999). Este desacoplamiento permite la produccin sostenida de hidrogeno en este proceso tambin de dos estados. Los electrones en este proceso son aportados por el consumo de sustratos endgenos. Tales electrones pasan a travs de la plastoquinona al complejo b6f y al PS I, con un transporte acoplado a la hidrogenasa reversible, para generar finalmente H2 y ATP. El oxgeno remanente es consumido en la ruta de fosforilacin oxidativa. Este proceso incluye la habilidad de reciclar el cultivo repetidamente, regular la produccin de oxgeno fotosinttico y la utilizacin de productos de fermentacin excretados. Benemann propuso este concepto en 1998. En la biofotlisis directa, la produccin de hidrgeno depende de la tolerancia de la hidrogenasa al oxgeno ya que en este proceso se generan los dos gases en forma simultnea. Este proceso no es sostenible en el tiempo ya que el oxgeno inactiva a la enzima hidrogenasa.

PROCESOS PROPUESTOS PARA LA GENERACIN DE HIDRGENO. Primera alternativa de proceso Este proceso consiste en biofotlisis indirecta con dos estados El proceso comprende una laguna abierta para el estado I de fijacin de CO2 y fotodisociacin del agua por el fotosistema II con la consiguiente produccin de O2. En esta etapa se generan compuestos de acumulacin como carbohidratos y un aumento de la biomasa. Una etapa de concentracin celular por filtracin y lavado para remover el sulfato presente, conservando los dems nutrientes, seguido de una etapa (Estado II) de adaptacin en fase oscura y anaerobia del concentrado celular y una posterior fermentacin y produccin de H2 en un fotobioreactor tubular cerrado El diagrama de flujos del proceso propuesto debe incluir diversas unidades de proceso y lneas de flujo, las que se presentan en le diagrama 1. Estas unidades parecen todas tcnicamente factibles, pero sus tamaos son considerables y lo sern mientras no se logre un dramtico aumento de la eficiencia, mediante, por ejemplo, manipulacin gentica. La entrada al proceso (lnea 1) estar dada por una lnea de alimentacin con agua de mar filtrada mediante arena y captada a travs de un pozo, ms medio de cultivo. Esta se bombea a la lnea 2 en la cual se mezclan con una parte de la lnea 3 (agua de lavado del medio de filtracin) y la lnea 4 de recirculacin de biomasa. La entrada al proceso tiene la composicin de un medio de cultivo basado en agua de mar paraSpirulina platensis. La lnea de recirculacin tendr los mismos compuestos, en concentraciones ms bajas y sin sulfato por el efecto de la lnea de lavado en la etapa de la separacin de slidos por filtracin. La mezcla resultante (lnea 5) es la que ingresa a una laguna de produccin de biomasa de microalgas. La laguna puede recibir, adems el ingreso de aire (lnea 23) mediante un compresor hacia la lnea 30, en un proceso abierto a la atmsfera (lnea 24). Dentro de la laguna existen slidos (clulas y precipitados) que se retiran por la lnea 6 y gases (oxgeno y aire) que se emiten libremente a la atmsfera (lnea 24). El pH de operacin de la laguna debido a las condiciones de crecimiento de las microalgas ser de carcter bsico. Las conversiones dentro de la laguna sern: Fotodisociacin del agua producto de la activacin del Fotosistema II y el consecuente transporte de electrones. Produccin de oxgeno debido a la fotodisociacin del agua. Generacin de poder reductor (NADH) que es utilizado para la fijacin de CO2 y la consecuente acumulacin de carbohidratos (almidn, etc.) que lleva a la formacin de biomasa. La lnea de salida del reactor (lnea 6) se llevara hacia la lnea 7, que se mezcla en una etapa controlada con la lnea 25 generando la lnea 8 para entrar a una etapa de concentracin celular. El

lavado del sulfato presente en el medio se realiza con agua salina sin sulfato (lnea 25). La eleccin del sistema de concentracin celular se deber examinar en este estudio. En esta etapa se obtendr un filtrado compuesto de agua de mar y agua de lavado (lnea 9) la que mediante una bomba conecta a la Lnea 4 hacia la recirculacin. Para extraer las microalgas del sistema se utiliza el mismo medio pero en contracorriente utilizando las lneas 11 y 12 generando un medio semislido (slurry) que va por la lnea 13 hacia un estanque de fermentacin oscura anaerobio. Las conversiones dentro del estanque de almacenamiento anaerbico (reactor) sern: Expresin gnica de la hidrogenasa debida a los cambios ambientales impuestos por el diseo, a saber: oscuridad y anaerobiosis. Produccin de hidrgeno bajo estas condiciones. La lnea de salida de gas del estanque de almacenamiento llevar el gas hidrgeno producido a los correspondientes procesos de purificacin final. La salida de concentrado de microalgas ser transportada hacia la lnea 15 que entra al fotobioreactor Las conversiones dentro del fotobioreactor sern: Utilizacin de la energa acumulada por las microalgas para la generacin de hidrogeno va hidrogenasa. Inhibicin del fotosistema II debido a la ausencia de sulfato en el medio. Transporte electrnico en presencia de luz debido a la activacin del fotosistema I transferencia hacia la ferredoxina y luego a la hidrogenasa. Produccin de hidrogeno La lnea 29 transporta los gases (hidrgeno) producidos por el fotobioreactor en fase luminosa. La lnea 18 lleva a un intercambiador de calor, luego reciclada hacia la lnea 19 y 20 que se mezcla con la lnea de entrada (lnea 16) a una biomasa determinada, para regular la temperatura del lquido en reaccin. El exceso de biomasa se utiliza (lnea 21) para ser transportada a la lnea 22 y pasar a la lnea 4 para ser utilizado como inoculo a la laguna de crecimiento de microalgas. El exceso de biomasa (lnea 26) ser utilizado en un posterior tratamiento (generacin de metano por digestin anaerbica, o la utilizacin de esta biomasa para la produccin de bioproductos como biodiesel, pigmentos, etc., de alto valor comercial). El exceso de agua de lavado (lnea 10) se descarta. Las lneas 28 y 29 sern mezcladas para la posterior separacin de los gases y el almacenamiento del hidrgeno producido. En resumen el proceso producir gas hidrogeno, ms biomasa y agua de lavado como desechos. La biomasa puede ser tratada para producir compuestos de valor como, protena de alto valor, biogas, biodiesel y pigmentos.

Conclusiones respecto de la primera alternativa de proceso Las reacciones bioqumicas involucradas en cada uno de los procesos (el clsico y el desacoplado) Son las mismas en cuanto a la produccin de hidrgeno por la va fermentativa. La diferencia, es que en la va clsica el fotosistema II estara activo y el oxgeno producido ira a respiracin celular. En la va desacoplada el fotosistema II no estara presente y no se producira oxgeno. La produccin de hidrgeno por la cianobacteria Spirulina platensis, es mayor que para microalgaChlamidomonas reinhardtii. Es interesante notar que la cianobacteria no tiene organelos celulares y toda la maquinaria fotosinttica estar ubicada en estructuras como tilacoides. Esto puede ser una ventaja en el momento de la difusin del oxgeno y el hidrgeno. Para poder generar 1 GW/h se necesitara un rea de fotobioreactores de 6400 H, o 64 Km2, ms las 20000 H, (200 Km2) de rea de lagunas; bajo la tasa de produccin descrita para escala de laboratorio, por lo que es necesario estimar las tasas de produccin a escala piloto. Otro punto crtico de este sistema es el trabajo con agua de mar que complica la remocin del sulfato por lavado ya que esta contiene grandes cantidades (del orden de g/L). De acuerdo a los recientes estudios realizados por Melis, se puede disear un proceso como el esquematizado en la figura 4. SEGUNDA ALTERNATIVA DE PROCESO Este consiste en el uso de fotobioreactores tubulares planos (figura 4), que operan en dos ciclos. Un ciclo en el cual hay crecimiento de las microalgas y /o recuperacin de ellas, bajo condiciones aerbicas y en presencia de CO2 o NaHCO3, el otro ciclo comprende la produccin de H2 bajo condiciones de operacin anaerbicas y en presencia de luz. Estos dos ciclos ocurren en el mismo fotobioreactor. Tenemos adems una etapa de concentracin celular para obtener el ptimo de biomasa necesaria para la produccin de hidrgeno deseada. El diagrama N2 muestra los flujos del proceso cuyas etapas (Etapa I aerbica, Etapa II anaerbica) fundamentales son descritas. Las lneas marcadas en rojo indican la operacin del proceso bajo las distintas condiciones (aerbica y anaerbica). La entrada del proceso (lnea 1) lleva agua la cual es filtrada por un equipo de microfiltracin, la salida (lnea 2) contiene agua filtrada. La lnea 3 son los residuos de la filtracin. Esta agua filtrada ingresa (lnea 2) a un estanque de preparacin del medi de cultivo de las microalgas. Esta agua se mezcla con sales a una concentracin controlada de ellas, principalmente en el contenido de sulfato. La lnea 17 ingresa al estanque con solucin salina concentrada ms bicarbonato de sodio. La salida del estanque de cultivo (lnea 4) ingresa a la lnea de circulacin de biomasa (lnea 14)saliendo (lnea 5) una mezcla de biomasa ms nutrientes. Este proceso opera solo bajo condiciones aerbicas. Ya en la lnea de circulacin (lnea 5), sta ingresa al fotobioreactor. El pH de operacin del fotobioreactor debido a las condiciones de crecimiento de las microalgas ser en torno al pH bsico. La temperatura optima en torno a los 25 C. Las conversiones dentro del fotobioreactor sern: Para el ciclo aerbico y en presencia de CO2:

Generacin de biomasa. Acumulacin de carbohidratos y protenas. Produccin de O2 y consumo de CO2. Para el ciclo anaerbico: Utilizacin de la energa acumulada por las microalgas para la generacin de hidrogeno va hidrogenasa. Inhibicin del fotosistema II debido a la ausencia de sulfato en el medio. Transporte electrnico en presencia de luz debido a la activacin del fotosistema I transferencia hacia la ferredoxina y luego a la hidrogenasa. Produccin de hidrogeno. La salida del fotobioreactor (lnea 6) ingresa a un gasificador/degasificador. En operacin aerbica hay ingreso de aire y CO2 va la lnea 16, generando O2 que va a la atmsfera va la lnea 15. La lnea 7 transporta a travs de una bomba hacia la lnea 8 que pasa por un separador de corriente hacia un sistema de microfiltracin (lnea 10) para la concentracin de la biomasa celular. El agua (lnea 12) es reciclada. La salida del microfiltro (lnea 11) pasa por un sistema de mezclado de corrientes saliendo por la lnea 13 hacia un intercambiador de calor y luego hacia la lnea 14. El proceso descrito en la Etapa 2 anaerbica es similar al anterior con la diferencia que no habra ingreso de medio de cultivo y el gasificador /degasificador slo operara como degasificador permitiendo la salida del hidrgeno producido.

5.5. PRODUCCIN DE PROTENAS UNICELULARES 5.5.1. Parte experimental: Sector de la tcnica: La presente invencin se enmarca dentro de los sectores de industrias de depuracin medioambiental (biotecnologa ambiental), fermentacin e industria quesera y de lechera, y en la industria alimentaria La cepa de Kluyveromyces maxianus ha sido seleccionada por sus altos ndices de productividad en cultivo continuo por los autores de la patente Sin embargo, el comportamiento de esta cepa en cultivo continuo en lo que respecta a requerimientos nutricionales as como condiciones de cultivo, con el objeto de obtener alta productividad en biomasa a partir de lactosuero no ha sido descrito, siendo objeto de estudio en la actualidad Procedimiento: El procedimiento consta de tres etapas diferenciadas: 1) Pretratamiento del lactosuero. Consistente esencialmente de una desproteinizacin previa, seguida de la adicin de una serie de nutrientes necesarios para la fermentacin (principalmente una fuente de nitrgeno, una fuente de Fosforo, elementos minerales y vitaminas) As, el aporte de factores de crecimiento y vitaminas, resuelto en otros sistemas a travs de la adicin de extracto de levadura, de alto costo y causante de la formacin de espumas, es sustituido en esta invencin por la utilizacin de un complejo vitamnico de composicin y concentraciones previamente optimizadas. De esta manera se consigue un abaratamiento del proceso a la vez que se disminuye la formacin de espumas. El medio de fermentacin es sometido normalmente a un proceso de pasteurizacin previo a la fermentacin. 2) Fermentacin. En esta etapa el fermentador de trabajo es inoculado a partir de un cultivo previo. El fermentador es aireado continuamente y controladas las variables pH, temperatura y aireacin, as como la formacin de espumas, desarrollndose la totalidad de esta etapa en condiciones estriles. 3) Separacin/recogida del producto. La levadura rica en protena es separada del efluente mediante centrifugacin en continuo .El efluente puede ser vertido con mnimos problemas de contaminacin. La crema de levadura es almacenada en tanque hasta ser molida, secada y recogida como producto final.

5.5.2. Materiales y mtodos Aislado de la levadura. La muestra se tom del residuo de la elaboracin de jugo de caa de azcar, se sembr en cajas petri con agar Sabouraud a 30 C y pH de 4.5 durante 5 das. La cepa de C. utilis que creci en el agar, se enriqueci nuevamente en caldo Sabouraud a 30 C y 200 rpm, durante 48 hrs. Medio de mantenimiento y de propagacin. Agar Sabouraud y caldo Sabouraud, para preservar y propagar la levadura a una temperatura de 28 C y 200 rpm por 48 h. Medio de cultivo mnimo formulado. Se utiliz un medio de cultivo mnimo de composicin definida, consistente en un medio bsico: sulfato de amonio 5 g/L, fosfato dicido de potasio 1 g/L, sulfato de magnesio heptahidratado 0.5 g/L, cloruro de calcio 0.1 g/L; factores de crecimiento: biotina 2 g/, cido pantotnico 400 g/L, cido flico 2 g/L, inositol 2000 g/L, niacina 400 g/L, cido para amino benzoico 200 g/L, piridoxina 400 g/L, riboflavina 200 g/L y tiamina 400 g/ y oligoelementos: cido brico 500 g/L, yoduro de potasio 100 g/L, molibdato de sodio 200 g/L, sulfato de cobre 40 g/L, cloruro frrico 200 g/L, sulfato de manganeso 400 g/L, sulfato de zinc 400 g/L, cloruro de sodio 0.1 g/L; al igual que etanol al 96 % para consumo humano, como fuente de carbono. 6. CONCLUSIONES : La produccin de una fuente de energa limpia y la utilizacin de materiales de desecho hacen de los biocombustibles una prometedora alternativa a las demandas energticas que aumentan cada da en el mundo

7. BIBLIOGRAFA : Bolvar, Z. F. G. 2003. Recomendaciones Para el desarrollo y consolidacin de biotecnologa en Mxico. edicin. Mxico p.p. 143 Eaton, A. 2008. Biodigestores. Editorial IRRI- Mxico. p.p. 29 FUNDACIN PRODUCE CHIAPAS. A.C. 2006. Biodigestor. Manual Editorial Academia Mexicana de Ciencias,Primera

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