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HACIA UN ANTIBITICO COMPATIBLE CON PROBITICOS COMBINACIN TERAPIA: LA EVALUACIN DE LA RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS EN LA PROBITICOS JAPONESES

RESUMEN Objetivo: Determinar la resistencia antimicrobiana de los probiticos japoneses disponible en el mercado sin la supervisin de un farmacutico. Mtodos y Resultados: Un total de 43 aislamientos se obtuvieron de 40 muestras de probiticos (30 productos lcteos y los productos 10 en forma de pastillas). Los aislamientos fueron identificado mediante secuenciacin del gen del ARNr 16S y probados por su susceptibilidad a 14 antimicrobianos. Ellos fueron examinados utilizando PCR para algunos resistencia a los antibiticos genes. La inactivacin de cefepime, claritromicina y vancomicina por diferentes inculos de 11 cepas se evalu mediante el bioensayo de inactivacin antibitico. Ninguno de los probiticos lcteos mostr un nivel de resistencia constitutiva o llevado inducible genes de resistencia, que los hace adecuados para ser administrados con macrlidos. Entre los probiticos en forma de tableta slo Enterococcus faecium cepas lleva el gen msrC mostr una MIC90 de 4 lg ml) 1. De espectro extendido b-lactmicos, tetraciclinas y ampicilina mostraron actividad germicida potente contra la inmensa mayora de las cepas probiticas. Conclusiones: Hay una seleccin limitada de los probiticos japoneses que pueden ser administrados con antibiticos usados clnicamente. Importancia e Impacto del estudio: los probiticos japoneses estn ampliamente distribuidos en todo el mundo. A travs de los resultados de nuestro estudio, hemos tratado de para orientar a los mdicos interesados en el uso de los probiticos en japons combinacin con antibiticos. INTRODUCCIN Considerando que el descubrimiento y el uso de agentes antimicrobianos ha sido uno de los mayores logros de la medicina, frecuentes y el uso prolongado de antibiticos por lo general resulta en alteracin en la complejidad del comensal intestinal flora. Esto mejora la capacidad de otro modo silencioso intestinal los microbios que causan enfermedades. Cmo antibitico mediada eliminacin de las bacterias comensales promueve la infeccin por otras bacterias sigue siendo un rea frtil para la especulacin, con pocos mecanismos definidos (Pamer 2007; Brandl et al. 2008). Adems, la terapia preventiva de enfermedades y secundarios efectos emergentes durante el tratamiento con antibiticos, tales como diarrea asociada a antibiticos (DAA), Clostridium difficile enfermedad y la infeccin con bacterias resistentes a antibiticos (Pamer 2007;. Brandl et al 2008), todava no est disponible. Los profesionales mdicos de esta poca han descubierto que la prescripcin probiticos con antibiticos es un eficaz enfoque para contrarrestar los efectos adversos de los antibiticos. Adems, algunos probiticos viables han demostrado fuerte actividad germicida contra ciertos patgenos, tales como Helicobacter pylori (Zou et al. 2009). Como consecuencia de ello, Se coprescribed con antibiticos. Esto plantea una pregunta importante: Cules son las razones para la eleccin de los probiticos a ser coadministrado con antibiticos? Creemos que una

comprensin ms profunda de su antibitico mecanismos de resistencia conducir al desarrollo administracin conjunta de protocolos ms eficaces. La conclusin que los probiticos son poco probable que ofrecen una proteccin efecto in vivo, cuando ellos mismos son susceptibles a la mismos antibiticos considerados de alto riesgo de causar AAD (Gould y Short 2008) puede subestimar algunas cepas probiticas valiosos. Una cepa bacteriana que lleva un gen inducible resistencia a los antibiticos puede aparecer susceptible a algunos antibiticos en los ensayos in vitro, pero tienen la potencial para desarrollar resistencia a estos antibiticos en seleccin in vivo por el antibitico apropiado (Schmitz et al. 2002). Por otra parte, debe mantener la potencia de los el antibitico en la combinacin probiticaantibitico La terapia se considera un criterio de seguridad en esta teraputico enfoque? Se ha sabido que la potencia relativa de los disminuciones vancomicina con la densidad de bacterias expuestas (Udekwu et al. 2009). Reduccin de la concentracin efectiva del antibitico (potencia) en el medio puede ser debido a un nmero de factores que incluyen inactivacin de los antibiticos o desnaturalizacin enzimas, la unin del antibitico a las estructuras celulares y el ADN o ARN de muertos como as como bacterias viables (Hunt et al 1987;. Davies 1994; Udekwu et al. 2009). Esto puede conducir a la hiptesis de que probiticos que normalmente se ingieren en grandes cantidades, durante la terapia de combinacin de probiticos a los antibiticos, pueden en forma antagnica con antibiticos. Inactivacin de los antibiticos bioensayo es una tcnica sencilla y fiable para los el estudio de esta teora. En los ltimos aos, Japn ha experimentado una reforma regulatoria. Adems de la gran variedad de los probiticos lcteos disponibles en el mercado japons, algunos de los over-the-counter drogas, incluyendo probiticos con seguridad bien establecido registros, se han reclasificado en la categora de "cuasi drogas 'o alimentos funcionales como para reducir los costos de atencin de salud (Amagase 2008). Estos productos ya no se limitan a que se venden en las farmacias y ahora se puede vender ms ampliamente en el mercado. No est claro si la probiticos disponibles en el mercado japons son compatibles para su uso en la terapia de combinacin de probiticos a los antibiticos. Evaluacin fenotpica y molecular de su antimicrobiano resistencia es necesaria para dilucidar esta cuestin. Por lo tanto, El objetivo de este estudio fue determinar el espectro de resistencia a los antibiticos de los probiticos disponibles en los Mercado japons y para verificar sus mecanismos genticos de resistencia Material y mtodos Recogida de muestras y el aislamiento de cepas bacterianas Un total de 40 muestras de los productos probiticos, que comprende 30 los productos lcteos y los productos 10 en forma de tableta producido por empresas diferentes, se obtuvieron de Supermercados japoneses. El aislamiento bacteriano se realiz como sigue. Brevemente, despus de agitacin vigorosa del producto (yogur probitico o PROBIO-) en su envase cerrado, 1 ml se mezcl con 9 ml de agua de peptona tamponada (Difco, Becton Dickinson y Co., Sparks, MD, EE.UU.) y se incubaron durante 3 horas a 37? C. Desde la lechera incubada productos, loopfuls fueron sembradas a De Man Rogosa

Sharpe y medio de agar (Merck, Darmstadt, Alemania) suplementado con 0AE3 gl) 1 cistena (Sigma-Aldrich, Tokio, Japn) para el aislamiento de Lactobacillus y Bifidobacterium cepas y para el medio M17 (Merck) para el aislamiento de cepas de Streptococcus. En el caso de productos en forma de tableta, una tableta era disueltos en 9 ml de agua de peptona tamponada y se incubaron durante 3 horas a 37 C y, a continuacin, de acuerdo con los nombres de cepa declarado en las etiquetas de los productos, loopfuls fueron sembradas en diferentes medios. Adems de los dos anteriormente mencionados medios de comunicacin, kanamicina esculina azida agar (Merck) se utiliza para el aislamiento de Enterococcus spp. todas las placas con diferentes medios se incubaron bajo la norma condiciones. extraccin de ADN El ADN genmico total fue extrado utilizando el DNeasy Tissue kit (Qiagen, Tokio, Japn) siguiendo las instrucciones del fabricante protocolo para bacterias Gram-positivas. La identificacin de los aislamientos El gen ARNr 16S se amplific mediante PCR usando los cebadores segn lo descrito por Frank et al. (2008). Otro conjunto de cebadores que consiste en rrs (avance) (Kariyama et al. 2000) y 1492r (inverso) (Frank et al. 2008) se utilizaron para amplificar 16S rRNA gen en las plantillas de ADN que no podran ser amplificada por el primer conjunto de cebadores. Para la identificacin de especies de aislados de enterococos, un par de cebadores degenerados se utiliz para caracterizar un fragmento de ADN de 438-bp de largo interno al gen sodA que codifica la manganeso dependiente, superxido dismutasa (Poyart et al. 2000). Los productos de PCR fueron purificados usando un QIAquick PCR kit de purificacin (Qiagen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante instrucciones y posteriormente secuenciados comercialmente utilizando un ABI 3730 XL secuenciador automtico (AppliedBiosystems, Foster City, CA, EE.UU.). Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana Cepas caracterizadas en cuanto a su susceptibilidad a 14 agentes antimicrobianos por el mtodo de difusin en disco. Ellos fueron como sigue (lg): ampicilina (10), cefepima (30), cefotaxima (30), cefpiroma (30), ceftriaxona (30), ciprofloxacina (5), claritromicina (15), eritromicina (15), gentamicina (10), kanamicina (30), metronidazol (50), estreptomicina (10), tetraciclina (30) y vancomicina (30). Han sido probados de acuerdo con las directrices del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) [anteriormente, el Comit Nacional para la clnica Laboratory Standards (NCCLS)] (CLSI 2005), pero con las siguientes modificaciones: placas de bacterias cido lcticas (LAB) medio suplementado con prueba de sensibilidad cistena (LSM + cistena) [es decir 90% IsoSensitest caldo (Oxoid, Wesel, Alemania), 10% de caldo MRS (Merck) y 15 gl) 1 agar suplementado con 0AE3 gl) 1 l-cistena HCl (Sigma)] se utilizaron para todos LAB y bifidobacterias (Klare et al. 2005). Streptococcus thermophilus sensible medio (90% Iso-Sensitest caldo, 10% caldo M17, % De lactosa 05 y 15 gl) 1 agar) se utiliz para Strep. cepas thermophilus (Tosi et al. 2007). Muller Hinton agar (Oxoid) se utiliz para los no-LAB. el antimicrobiano discos (Tabla 1) fueron adquiridos de Nissui Pharmaceutical Co. (Tokio, Japn), con la excepcin de metronidazol, que se adquiri de

Oxoid. El mnimo Las concentraciones inhibitorias (CMI), expresados en lg ml) 1, de los mismos antibiticos comprados a diferentes empresas (Bristol-Myers Squibb, Tokio, Japn; Nacalai Kyoto Tesque,, Japn, Sigma-Aldrich; Wako Chemical Co., Osaka, Japn) se determinaron utilizando el caldo mtodo de microdilucin, utilizando los mismos medios de comunicacin sin agar, de acuerdo con las directrices del NCCLS (CLSI 2005). Bioensayos antibiticos inactivacin La inactivacin de la claritromicina, cefepima y vancomicina por una cepa probitica que representa cada especie (un total de 11 cepas) se ensay como sigue: tres tubos de caldo de LSM suplementado con cistena y conteniendo Lg 10 ml) 1 de claritromicina o cefepime o 500 lg ml) 1 vancomicina se inocularon con cultivos exponenciales de estas cepas hasta que las concentraciones eran iguales a 05 y 1 estndar de McFarland (por Enterococcus faecium cepas, Muller-Hinton caldo se utiliz en lugar de LSM caldo). A continuacin, se incubaron durante 12 horas a 37? C. despus centrifugacin, alcuotas de muestras de estos cultivos se filtr (022 lm) para eliminar las clulas despus de 6 y 12 h. Treinta microlitros de los sobrenadantes se deposit el discos estriles sobre placas de agar Muller-Hinton, previamente sembr con Kocuria rhizophila ATCC 9341 como un indicador organismo para la claritromicina y la cefepima, y con una vancomicina sensibles Bacillus subtilis cepa de laboratorio como indicador para el bioensayo vancomicina. Las placas se incubaron durante 18 h y los tamaos de las zonas alrededor de los discos, que indicar el antibitico restante en el medio de cultivo, Se midieron. Los tamaos de zona fueron comparados con los producido cuando el antibitico se incub con medio solo. El ensayo de microdilucin en caldo para la deteccin de concentracin efectiva residual de antibiticos en la cultura medio, que se cree que es ms sensible que el mtodo del disco, se llev a cabo como se describe por Udekwu et al. (2009) para confirmar los resultados negativos. Brevemente, probitico cultivos fueron desafiados con cada antibitico y alcuotas de muestra de estos cultivos se filtr como se ha mencionado anterior. Luego, cultivos de una noche de K. rhizophila ATCC 9341 (en el caso de la claritromicina y la cefepima) o B. subtilis cepa de laboratorio (en el caso de la vancomicina) fueron diluido a c. 5 105 UFC ml) 1, y los pases de ingresos medios de la filtracin medios de comunicacin se estimaron mediante el ensayo de microdilucin en caldo modificado a partir del protocolo CLSI. Deteccin de genes de Resistencia a Antibiticos La Presencia de genes de Resistencia a Antibiticos s investig en sabor Todas las Cepas aisladas en Este Trabajo. PCR amplificaciones Asociados con los genes de la Resistencia a los macrlidos (ermA, ermB, ermC, msrA / B, Erea, ereb, MPHA y mefA / E genes) (Sutcliffe et al. 1996), aminoglucsidos (APH [3 ], ant [6], AADE y AACA APHD-) (Van de Klundert y Vliegenthart 1993; Clark et al. 1999; Leelaporn et al. 2008), vancomicina (vanA, vanB, vanC1, y vanC2 o vanC3) (Bell et al. 1998), tetraciclina (la ribosomal Protenas de Proteccin pares de cebadores degenerados DI / DII (Clermont et al. 1997), Ribo-2-FW / Ribo-2-RV y tet (W) (Aminov et al. 2001) llevaron a cabo s. Amplicones fuern purificados Y COMO secuenciados s ha described previamente.

Resultados La identificacin de los aislamientos 16S rRNA anlisis de secuencias utilizando los cebadores descritos por Frank et al. (2008) permiti la identificacin de especies casi todas las cepas. El conjunto alternativo de cebadores que se necesitaba para la identificacin de Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, Lactobacillus helveticus y Lactobacillus acidophilus cepas que no tienen adecuado para la secuenciacin de los amplificados con el primer conjunto. A partir de los probiticos lcteos, los lactobacilos fueron Lactobacillus casei (n = 11), Lact. Acidophilus (n = 5), Lactobacillus gasseri (n = 2), Lactobacillus plantarum (n = 2), Lact. delbrueckii ssp. bulgaricus (n = 6), Lactobacillus brevis (n = 1) y Lact. helveticus (n = 1). Los estreptococos son Strep. thermophilus (n = 3). La bifidobacterias fueron Bifidobacterium animalis ssp. Lactis (n = 3) y Bifidobacterium longum (n = 2). A partir de los probiticos en forma de tabletas, cada una de las cepas de Lact. casei, Lact. acidophilus y Lact. gasseri se identificaron a partir tres productos diferentes. Adems, haba cuatro Ent. faecium cepas. En el caso de los productos lcteos, identificado especies fueron siempre de acuerdo con la cepa nombres declarado en la etiqueta del producto (cuando se escribe), mientras que en el caso de los productos en forma de tabletas, Ent. faecium cepas fueron mal etiquetados como 'Enterococcus faecalis' en todos los cuatro productos que contienen esta especie . Pruebas de susceptibilidad antimicrobiana Los resultados de la susceptibilidad antimicrobiana de difusin en disco las pruebas sobre las 43 cepas de 14 antibiticos se resumen en la Tabla 1. Sus micrfonos se enumeran en trminos de CIM50 [MIC (Lg ml) 1) que inhibi el 50% del nmero de aislados probado], MIC90 [MIC (lg ml) 1) que inhibi el 90% de la nmero de aislados ensayados] y el valor de MIC (Tabla 2). Porque no hay valores de corte se han definido oficialmente para LAB o especies de bifidobacterias, los puntos de corte establecidos por el Grupo FEEDAP de la Autoridad Europea de Autoridad (CE 2008) se emplearon como referencia para la mayora de los antibiticos probados. El uso de estos cortes, ninguno de los probiticos lcteos mostr un nivel de resistencia constitutiva para los macrlidos (breakpoint MIC 4 lg ml) 1). Entre los probiticos en forma de tabletas, slo Ent. faecium cepas mostr la mayor resistencia natural a la eritromicina (CIM90 de 4 lg ml) 1). Los altos niveles de resistencia a vancomicina se observaron en Lact. casei, Lact. brevis y Lact. Plantarum cepas (MIC lg 128 ml) 1). De hecho, los lactobacilos heterofermentativo son naturalmente resistentes a glicopptidos y sus micrfonos para vancomicina no son fiables para la diferenciacin de la resistencia intrnseca y adquirida mecanismos (CE 2005). Por otro lado, la CIM de vancomicina muestran homofermentativo obligado lactobacilos incluyendo Lact. gasseri, Lact. delbrueckii ssp. bulgaricus y Lact. helveticus fueron inferiores a la CMI punto de corte de 4 lg ml) 1 para vancomicina. La tetraciclina y cepas resistentes a la ampicilina parece ser rara en el Mercado japons. Slo Bif. animalis ssp. lactis (n = 3), Lact. brevis (n = 1) y Lact. plantarum (n = 2) mostr niveles moderados de resistencia a la tetraciclina rango (MIC 8-16 lg ml) 1). En contraste, los aminoglucsidos tanto naturalmente resistentes y las cepas metronidazol eran abundantes. Lo

Hay que sealar que hubo una tendencia hacia una menor CIMs para gentamicina en comparacin con kanamicina y estreptomicina. Este hallazgo es inconsistente con los resultados obtenido por Danielsen y Wind (2003). Identificar las colonias se observaron dentro de la zona de inhibicin de metronidazol mediante la prueba de difusin en disco para todas las cepas de bifidobacterias. De espectro extendido b-lactmicos, incluyendo cefpiroma, cefepime, cefotaxima y ceftriaxona mostr alta germicida actividad contra la inmensa mayora de las cepas ensayadas. Lactobacillus casei cepas exhibieron un comportamiento diferente para este grupo. Ellos mostraron altos niveles de resistencia a los cefepime y ceftriaxona, pero pareca casi susceptible a cefpiroma y cefotaxima. Por otra parte, todos enteroccica cepas mostraron zonas de inhibicin parcial en la prueba de difusin en disco para este grupo. Tambin, en el MIC prueba, todas las cepas de enterococos no son capaces de dar una neblina de el crecimiento en presencia de estos antibiticos hasta mayor Las concentraciones se alcanzaron (cefotaxima y ceftriaxona MIC lg 128 ml) 1 y cefpiroma MIC 128 lg ml) 1). Ciprofloxacino exhiben diferentes patrones de respuesta en las cepas ensayadas. Una amplia gama de los PRM se observ en especies de Lactobacillus. Sin embargo, de acuerdo con los criterios sugerida por Danielsen y Wind (2003) para lactobacilos (Punto de interrupcin MIC de 32 lg ml) 1), casi todas las cepas, con la excepcin de Lact. gasseri y Lact. helveticus, pareca poseer mecanismos intrnsecos de resistencia. Bioensayos antibiticos inactivacin No disminucin en las concentraciones eficaces de vancomicina, claritromicina y cefepima en los filtrados se observ, despus de la incubacin de inculo pesadas de la prueba 11 cepas con estos tres antibiticos. Genes de resistencia a antibiticos A pesar de que las cepas de la misma especie identificada en este estudio apareci fenotpicamente resistentes a los antibiticos, que no son portadores de genes de resistencia a antibiticos. Esto puede atribuirse a mecanismos intrnsecos de resistencia o los presencia de genes de resistencia a antibiticos que no eran examinados en este estudio. Amplicones fueron positivos utilizando MSRA / B cebadores de todas las cepas de enterococos. El anlisis de secuencia revel el gen msrC. Todos Bif. Animalis ssp. lactis con una MIC90 de 8 lg ml) 1 de tetraciclina se encontr que tenan amplicones positivos utilizando degenerada cebadores que identifican todos conocidos de ribosomas proteccin de tipo Tcr genes. Todos tenan la tet (W) de genes como se revela desde el secuenciacin de los amplicones positivos usando tet (W) especfica cebadores. Discusin Se ha producido un aumento significativo en las ventas en todo el mundo y el consumo de productos probiticos se estn adoptando junto con antibiticos. Es importante que tales probitico productos se prescribe correctamente con antibiticos. En otras palabras, la terapia de combinacin de antibiticos y probiticos slo puede considerarse compatibles si la potencia del

antibitico y la viabilidad de los probiticos se mantienen. Este estudio es el primero en proporcionar colectivo datos sobre la compatibilidad de los probiticos antibitico Japoneses. A travs de los resultados de nuestro estudio, tenemos intentado dar una orientacin para los mdicos interesados en utilizando los probiticos japoneses en combinacin con antibiticos y para mejorar el conocimiento del pblico en general con respecto a los aspectos de seguridad de la ingestin de probiticos durante la terapia con antibiticos. Los probiticos son definidos como "microorganismos vivos administrados en cantidades adecuadas confieren un beneficio que efecto sobre la salud del husped "(FAO / OMS 2001). Comienzo a partir de esta definicin vaga y en ausencia de aprobado normas para la evaluacin fenotpica o genotpica de la resistencia a los antibiticos de los probiticos, avanzando hacia una aproximacin teraputica con probiticos es complicado. Esta definicin se basa en los efectos beneficiosos de las bacterias viables y no deben confundirse con los efectos probiticos alcanzado por bacterias no viables o incluso por el ADN bacteriano (Szajewska et al. 2006). Creemos que dos importantes conceptos que deben tenerse en cuenta al elegir esta teraputica enfoque. En primer lugar, los probiticos viables deben alcanzar su sitio diana en el tracto gastrointestinal en gran nmero suficiente para lograr sus efectos. Por lo tanto, se debe tener altos niveles naturales de resistencia constitutiva o no transferibles inducible genes de resistencia a antibiticos lo que les permite sobrevivir en la concentracin real de antibiticos que pueden estar presentes en el humano gastrointestinal tracto. En segundo lugar, cuando las bacterias susceptibles son expuestos a concentraciones bactericidas de un antibitico, la mayora de los la poblacin es asesinado dentro de 1-2 h y algunas bacterias sobrevivir incluso en presencia de antibitico activo (Wiuff y Andersson 2007). As, en el estudio aleatorizado, doble ciego ensayos controlados con placebo, los efectos beneficiosos de los probiticos aislado despus del final del tratamiento no debera ser siempre atribuido a los probiticos viables normales. Cepas probiticas han sido probados por su eficacia clnica contra la infeccin por H. pylori (Zou et al. 2009). Esta infeccin es una de las de riesgo ms importante establecido factores para el desarrollo de cncer gstrico, con ms de 100 000 casos nuevos cada ao en Japn (Ferlay et al. 2002). El Lact. gasseri, Lact. acidophilus, Lact. casei y Bifidobacterium lactis Bb12 cepas fueron encontrados para amplificar la erradicacin de este patgeno (Zou et al. 2009). Sin embargo, los mdicos suelen prescribir los probiticos en combinacin con la terapia antibitica para lograr la erradicacin completa. Erradicacin de Helicobacter pylori rgimen, protn inhibidores de la bomba + amoxicilina (AMPC) + claritromicina (CAM), o PPI / AC es ampliamente utilizado en todo el mundo y es el nico aprobado actualmente erradicacin del H. pylori rgimen para la cobertura de seguros en Japn. Sorprendentemente, de acuerdo con nuestros resultados, ninguno de los productos lcteos probiticos cepas investigadas pueden ser adecuadamente combinados con este rgimen, ya que eran muy susceptibles a la claritromicina (CIM90 ml 0125 lg) 1). En efecto, el gstrico concentracin de claritromicina (lg ml) 1) se registr a ser 13 y 43 despus de 6 h de regmenes de dosis baja y alta, respectivamente (Nakamura et al. 2003). Por lo tanto, no es espera que estos probiticos seguirn siendo viables si se coadministra con claritromicina. Adicionalmente, estos probiticos no realiz ninguna resistencia inducible antibitico genes que podran les han permitido sobrevivir in vivo. Por otra parte, las mismas especies mencionadas aislado de probitico productos en forma de pastilla

tambin son muy susceptibles a la claritromicina. Cabe sealar que la MIC90 para macrlidos obtenidos en este estudio para las especies de Lactobacillus fue menor que la obtenida en algunos MIC90 anterior estudios (Danielsen y Wind, 2003). Sin embargo, fue incompatible con la CIM90 eritromicina para la gran nmero de especies de Lactobacillus analizadas en un Europeo proyecto destinado a proponer tentativo epidemiolgica valores de corte para el reconocimiento intrnseco y adquirido resistencias antimicrobianas (Klare et al. 2007). Por el otro mano, la concentracin esperada de metronidazol, la segunda lnea de tratamiento antimicrobiano, en el jugo gstrico fue de alrededor de 20 lg ml) 1 a 1 h despus de la administracin (Calafatti 2000). Esto fue mayor que la MIC de Bif. Animalis ssp. lactis cepas. La aparicin de colonias puntiformes alrededor de los discos de metronidazol (50 lg) usando el disco prueba de difusin indica que la aparicin de mutantes es ms probable que ocurra en vivo. Sin embargo, el nmero de estos mutantes no se espera que alcance la propuesta nmero de probiticos que pueden ofrecer efectos beneficiosos. Las cefalosporinas estn perdiendo rpidamente su utilidad como agentes antimicrobianos de primera lnea, debido a su potencial para causar Cl. difficile diarrea (Billyard 2007). El modo de excrecin de estos resultados antibiticos en un MIC concentracin en la parte inferior del tracto intestinal que se informa que es mayor que la MIC que puede ser tolerado por todos los de la microflora intestinal, lo que conduce a su eliminacin parcial (Brismar et al. 1990). Uso de la MIC propuesta actual punto de interrupcin para la ciprofloxacina (Danielsen y Wind 2003), nuestras cepas de Lactobacillus pareca ser susceptible. Por lo tanto, su supervivencia durante La terapia es un motivo de sospecha. Nuestros resultados in vitro eran incompatibles con los resultados de la anterior clnica ensayos que utilizaron cepas de Lactobacillus similares (Sullivan et al. 2003). Sullivan et al. (2003) slo pudo detectar bajo nmero de bacterias probiticas en las heces de algunos pacientes tratados despus de 10 das de tratamiento con quinolonas. Esto indicaba que el surgimiento de una probiticos pocos fenotpicamente resistentes que slo puede ser detectado despus de este perodo. Adems, la gran mayora de las cepas detectadas en este estudio eran claramente susceptible a la tetraciclina y espectro extendido b-lactamas, por lo que la eleccin de los probiticos que permanecen viables con estos antibiticos limitado. Un Bif. animalis ssp. lactis cepa que lleva el tet (W), el gen que tena una MIC similar a las cepas identificadas en este estudio, se ha demostrado que sobrevivir durante tetraciclina terapia (Saarela et al. 2007). Su supervivencia dependa de la evolucin de un mecanismo gentico de la resistencia, en lugar de su capacidad natural para soportar la concentracin intestinal de tetraciclina. Esta cepa tena MICs de tetraciclina de> 256, 256 y 32 lg ml) 1 durante la terapia. Ms importante an, no volver al estado susceptible despus de crecer en antibiticos medios de comunicacin libres. Esto significa que un mecanismo gentico de resistencia, en lugar de la resistencia fenotpica, era responsable para el fenotipo adquirido (Balaban et al. 2004). Curiosamente, todas las cepas de enterococos identificados en este estudio mostr dos personajes nicos. En primer lugar, se llevaron msrC gen que se cree que confiere bajo nivel de proteccin contra los macrlidos de 14 miembros de anillo y de tipo B estreptograminas. Este es el primer informe de gen en msrC Ent. faecium cepas utilizadas como probiticos. Ha sido inform de que msrC es frecuente, pero no intrnseca, en Ent. faecium y codifica una bomba de eflujo que se probable que sea de una naturaleza inducible (Singh et al 2001.; Werner et al. 2001). Desde una

perspectiva clnica, la induccin de este gen durante la terapia de macrlido puede permitir estas cepas para sobrevivir in vivo. La segunda nico carcter de las cepas de enterococos aislados apareci en pruebas de susceptibilidad a los antibiticos de espectro extendido b-lactmicos (cefpiroma, cefepima y cefotaxima). No resultados claros fueron detectados en difusin en disco y tanto Pruebas de CIM. Este fenmeno no ha sido registrada en las directrices para las pruebas de susceptibilidad de Enterococcus spp. (CLSI 2005), sino un fenmeno similar ha sido Comit inform por anaerobios (National for Clinical Laboratory Standards, NCCLS) (CLSI 2001). En tal casos, CMI se determin como la concentracin ms baja de agente antimicrobiano que dio lugar a una importante bajada en la cantidad de crecimiento. Cabe sealar que en la evaluacin de los niveles de resistencia a los antibiticos de los probiticos, debemos considerar la supervivencia del nmero propuesto de los probiticos que se espera dar efectos beneficiosos. Otros estudios clnicos siguen siendo necesarios para aclarar esta punto en estas cepas probiticas. Teniendo en cuenta la alta densidad celular de los probiticos en forma de comprimidos y en los productos lcteos en el de mano y el hbitat tradicional de comer grandes cantidades de los probiticos en los pases asiticos, por el otro, tratamos de este estudio para investigar el efecto de 11 cepas de diferentes especies con diferentes componentes de las clulas y genomas en las concentraciones eficaces de tres clases diferentes de antibiticos. Se encontr que un incremento en el tamao del inculo de LAB dio lugar a la elevacin de los pases de ingreso mediano a algunos antibiticos, incluyendo b-lactmicos (ampicilina) y macrlidos (Eritromicina) antibiticos (Egerva rn et al. 2007). Por otro lado vancomicina, se ha demostrado ser inactivada por inculos pesados de vancomicina aureus susceptible cepas de Staphylococcus (Udekwu et al. 2009). No est claro si el inculo pesado de bacterias probiticas tiene la capacidad para inactivar ciertas clases de antibiticos. Por lo tanto, la interacciones de cefepime, claritromicina y vancomicina, los antibiticos utilizados en la clnica, con bacterias probiticas fueron investigados en este trabajo mediante la inactivacin de antibiticos bioensayo. Las concentraciones efectivas residuales de la tres antibiticos en el filtrado de los medios de cultivo no fueron afectados por el inculo pesado de las cepas probiticas. Curiosamente, LAB, incluyendo algunas especies pertenecientes a gnero Lactobacillus sintetizar peptidoglicano bajo afinidad precursores que terminan exclusivamente en D-Lac que carecen de la capacidad de unirse con vancomicina (Handwerger et al 1994.; Deghorain et al. 2007). De acuerdo con este punto de vista, la inculos pesados de cepas resistentes en este estudio mostraron ningn efecto sobre la potencia de la vancomicina. Nuestra in vitro encontrar mostr claramente que los componentes bacterianos de probiticos no tuvo ningn efecto antagonista sobre la potencia de los antibiticos probados. Otros estudios son an necesarios para investigar si la densidad celular elevada de los probiticos negativamente afecta a la tasa y grado de la destruccin mediada por antibiticos (La eficacia de los antibiticos) durante probiticos antibitico la terapia de combinacin. Con respecto a una preocupacin general acerca de la seguridad de los probiticos, tales como la transferibilidad potencial de resistencia determinantes, la gran mayora de los probiticos japoneses, con su baja resistencia natural a los antibiticos probados, aparecer libre de riesgos. Los datos previos publicados (Portillo et al. 2000; rez Flo 'et al. 2006) relativa a los antibiticos genes de resistencia identificados en este estudio revel que se fueron siempre codificado cromosmicamente. Adems, dado que los genes de resistencia transferibles pueden estar presentes en todos cepas de una misma especie, otros estudios

tambin estn siendo necesarios para dilucidar los mecanismos de resistencia de algunos cepas que presentan pases de ingreso mediano alto. En conclusin, de acuerdo con la molecular y fenotpica caractersticas de los probiticos japoneses detectado en este estudio, probiticos antibitico terapia en combinacin muchos casos no pueden lograr los mismos resultados positivos como los obtenidos en los ensayos clnicos que utilizaron probiticos viables solo. Esto es porque muchas cepas probiticas son susceptibles a los antibiticos utilizados en la clnica. En vista de la similitud entre nuestro perfil de susceptibilidad in vitro de los probiticos japoneses y la viabilidad de los probiticos ha demostrado en Anteriores estudios clnicos clnicos, se recomienda utilizar slo aquellas cepas probiticas demostrado ser viable en presencia de los antibiticos.