UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS CARRERA PROFESIONAL DE BIOLOGIA

PERFIL DE SEMINARIO DE INVESTIGACION:

VARIABILIDAD MORFOANATOMICA, CITOLOGIA HEMATICA Y ESTADO DE CONCERVACION DE Telmatobius spp. (ANURA: TELMATOBIIDAE), EN RIACHUELOS DE LA PROVINCIA DE ANTA, CUSCO

Proyecto presentado por: Rossmery Mercedes Quispe Esquivel 083301-E Melissa Arcos Pea 083268- H

Asesor: Blgo. Rolando Popy Canales perez

CUSCO

2012

PER

VARIABILIDAD MORFOANATOMICA, CITOLOGIA HEMATICA Y ESTADO DE CONCERVACION DE Telmatobius spp. (ANURA: TELMATOBIIDAE), EN RIACHUELOS DE LA PROVINCIA DE ANTA, CUSCO. I.- INTRODUCCION.Los anuros del genero Telmatobius Wiegmann,1834, estn constituidos por 61 especies reconocidas y distribuidas en Argentina, Ecuador, Per y Chile, Aguilar et. al. (2004), Barrionuevo & Baldo (2009), cuyos miembros son especies acuticas o semiacuaticas, que habitan lagos, ros y riachuelos de los valles interandinos, desde los 1000 a 5200 m, se consideran un grupo monofiletico emparentados filogeneticamente con las 2 especies del genero Batrachophrynus Peters 1873. La diversidad de ranas del gnero Telmatobius en el Per fue revisado recientemente por Lehr (2005), reconoci 22 especies en este pas, y De la Riva et al. (2005) aade otra especie (T. times ) y recientemente De la Riva (2012), describe una segunda especie ms ( Telmatobius mendelsoni), con la que se suma el nmero a 24 especies, de las que 5 especies estaran presentes en el Departamento del Cusco (1 de ellas en estado crtico y la segunda, probablemente extinta a consecuencia de la quitridiomicosis y otros factores negativos), Franco et. al. (2011). Las poblaciones de Telmatobius de los riachuelos de la provincia de Anta (Cusco),y otras zonas circundantes, han sido identificadas como T. marmoratus, cuya variabilidad intrapoblacional y la falta de estudios, morfoanatomicos y genticos, confunden en su determinacin exacta y real, cuya bsqueda de material para estudios se hace ms difcil ya que estas poblaciones desaparecen muy rpidamente por la caza

indiscriminada y la accin de factores negativos como la mencionada quitridiomicosis, que an no a sido demostrada en estas localidades y que

podra ser una de las causas ms importantes de la declinacin y extincin de poblaciones en esta localidad. En virtud de lo expuesto, el presente proyecto pretende obtener datos que permitan estudiar la variabilidad de la morfologa externa y anatoma con el fin de valorar su condicin especfica, paralelamente, dada la situacin vulnerable de estas poblaciones, se intentar describir la citologa hemtica, que es desconocida y que permitir valorar y usarla como variable de importancia funcional y patolgica, concluyndose con el propsito de evaluar el estado de conservacin de estas poblaciones especialmente en la bsqueda de evidencias patolgicas que incriminen las infecciones micoticas.

II.- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.Son innumerables los problemas de investigacin que plantean los Telmatobius del Departamento de Cusco, cuy urgencia de estudio, se da ms que todo por la situacin vulnerable de todas las poblaciones naturales que con el transcurso del tiempo, viene extinguindose y desapareciendo, sin dejar rastro de su existencia, como lo que ocurri con las poblaciones de Telmatobius inca, del Abra de Mlaga y parte del Valle de Umasbamba (La Convencin), que desde el 2005 no han vuelto a ser vistas y desaparecieron en estas localidades, De la Riva et al. (2012). En la regin de la pampa de Anta, se conoce la existencia de poblaciones atribuidas a la especie T. marmoratus, las mismas que notoriamente presentan marcada variabilidad fenotpica, conocindose 2 o ms formas, en las que prevalecen la forma maculosa y la pustulosa, con diferente comportamiento y morfologa. Estudios contemporneos han permitido discriminar especies gemelas, con alto grado de aislamiento reproductivo, cuya diferenciacin se da ms en caracteres como son los osteolgicos y ontogenticos, como los condrocraneos y los esqueletos viscerales de las larvas, lo que resulto congruente con los estudios cariotipicos y moleculares, tal como acontece con las especies argentinas y chilenas, Barrionuevo & Baldo (2009), Cuevas & Formas (2002). Nuetras poblaciones de Telmatobius, adolecen de este enfoque y estudio, al mismo tiempo que su evaluacin del estado de conservacin.

III.- OBJETIVOS DE ESTUDIO Objetivos Generales: Aportar al conocimiento sistemtico-morfolgico y estado de

conservacin de la Kayra Telmatobius spp. (Anura : Telmatobiidae), de los riachuelos de la provincia de Anta (Cusco). Objetivos Especficos: a).- Identificar la especie y estudiar la variabilidad morfo anatmica, poniendo nfasis en caracteres osteolgicos . b).- Describir la citologa hemtica. (Elementos blancos ,rojos y trombocitos ) d).- Evaluar el estado de Conservacin y vulnerabilidad de las poblaciones en riachuelos de la provincia de Anta (Cusco) y reas circundantes.

IV.- JUSTIFICACIN.La falta de diagnstico claro de caracteres y la extrema variabilidad fenotpica de las poblaciones de la kayra (Telmatobius spp.) confunde su real estatus taxonmico, pese a que se atribuye la especie a Telmatobius marmoratus, la misma que en muchas reas a escondido numerosas especies gemelas o cripticas que fueron discriminadas, solo por medio de estudios osteolgicos, citogenticos y moleculares, Barrionuevo & Baldo (2009), Cuevas & Formas (2002), Formas et. al (1999), Franco et. al. (1999), De la Riva (2012). Sin embargo, la bsqueda de especmenes para su uso en estudios anatmicos, genticos y moleculares, ha demostrado ser una tarea muy difcil ya que en recientes aos las poblaciones de Telmatobius siguen desapareciendo, muy probablemente por la quitridiomicosis y a la caza indiscriminada, que persiste en nuestro medio, lo que pone en una situacin altamente vulnerable y constituye permanente preocupacin hasta no aclarar la realidad de estas poblaciones, por lo que amerita una urgente evaluacin taxonmica, e integral.

V.- HIPTESIS

H1 .- Se asume que las poblaciones naturales de Telmatobius spp. De Anta, corresponden a una misma especie o, en todo caso se trata de que alguna de ellas es subespecie de la otra.

VI.- ANTECEDENTES. T. marmoratus tiene una amplia distribucin en al Altiplano y zonas adyacentes de Argentina, Per, Bolivia y Chile (revisado en De la Riva 2005 y Lehr 2005). De la Riva (2005) indica que las poblaciones del noroeste de Argentina asignadas a esta especie probablemente corresponden a T. gigas. En Chile esta especie se distribuye en varias localidades de las regiones de Arica-Parinacota y Tarapac: Parinacota, ro Lauca, lago Chungar y Caquena (e.g. Veloso et al. 1982, Daz y Valencia 1985, Formas et al. 2003, Correa et al. 2006). Capurro (1953) describi la poblacin de Cancosa como T. marmoratus pustulosus. Sin embargo, Formas et al. (2006) sealan que la identidad de esa poblacin es dudosa. Formas (1995) y Daz-Pez y Ortiz (2003) indican que su rango altitudinal est definido entre los 3200 y 4200 m. Para la regin del Cusco, Franco et. al. (1999), describe la morfoanatomia de las poblaciones del Abra de malaga y Machu Picchu, identificando provisionalmente como T. jelskii, lo que corresponde a T. corikaira, adelantando detalles de su morfologa externa, osteologa y cariotipo. Para el Valle del Cusco, se identifica la existencia de T. maroratus, presentndose una clave para la identificacin de la especie con comentarios de su morfologa , ecologa y evaluacin de su estado de conservacin, en la que se seala su situacin muy vulnerable, Franco & Jara (2005).

VII.- MATERIALES Y METODOS.-

REA DE ESTUDIO.El rea de estudio escogida para este estudio, son los riachuelos de Izcuchaca, Pujyura, Surite y Huarocondo, (Provincia de Anta, Cusco) Rio Cachimayo

MATERIALES Y MTODOS - Material Biolgico: Ejemplares de Telmatobius spp. - Equipos de Campo: - Redes de captura - Baldes de transporte - Acuarios implementados - Equipos de Laboratorio A).- Microscopio Estereoscopio B).- Microscopio biolgico C).- Computadora D).- Cmara fotogrfica digital E).- termmetro al 0.1C F).- Balanza de granateros (0.5)

- Material de vidrio

C).- Porta objetos D).- Cubre objetos E).- Vaso de precipitacin F).- Cajas Coplin H).- Bernier (mm) - Otros materiales

A).- Blsamo de Canad B).- Hidrxido de sodio. (10%) C).- Hidrxido de Potasio. D).- Fenol. E).- Azul de Prusia F).- hematoxilina G).- Formaldeido (40%) H).- Glicerina QP. I).- Metanol QP.-

J).- Peroxido de Hidrogeno K).- Tripsina. L).- Borato de Sodio. - Paquetes estadsticos o Coeficiente de variabilidad o Anlisis de varianza simple o Asociacin de variables (regresion) VIII.- METODOLOGA DE ESTUDIO: Estudios morfolgicos Se analizaran 10 a 20 animales (considerando machos y hembras en la misma cantidad) por morfoespecie para obtener una mayor resolucin de la variabilidad que pudieran presentar los caracteres observados. Para este efecto se utilizar una lupa estereoscpica con aumentos de 6,4x, 10x y 40x, respectivamente. Los rasgos morfolgicos externos a utilizarse en el anlisis sern los siguientes: 1) reborde cutneo de los artejos, 2) brazaletes de pigmento en las extremidades, 3) pliegue postocular, 4) perfil del hocico en vista dorsal, 5) forma de la punta de los dedos, 6) forma del canto rostral, 7) posicin de los dientes prevomerianos, 8) perfil del hocico en vista lateral, 9) detalles narina-ojo-tmpano, 10) largo relativo del cuarto dedo de la mano, 11) membrana timpnica, 12) estructuras sexuales secundarias, 13) forma de los tubrculos articulares, 14) forma de los tubrculos subarticulares, 15)

forma de los tubrculos palmares, 16) reborde cutneo de los dedos, 17) forma del prpado, 18) pigmentacin gular,19) granulacin ventral, 20) granulacin cloacal, 21) granulacin dorsal, 22) pigmentacin ventral, 23) pliegue cutneo femoral, 24) membrana entre los ortejos, 25) granulacin del saco gular, 26) largo de la pata, 27) largo de los brazos, 28) forma de la cloaca, 29) forma de la pupila, 30) tamao del tubrculo metatarsal externo, 31) manchas abdominales, 32) manchas dorsales, Caracteres osteolgicos. Se analizarn entre dos a cuatro individuos por morfoespecie, los cuales sern previamente tratados mediante tcnica de diafanizacin de Song & Parenti (1995) con modificaciones, ya que slo se consider la utilizacin de la tripsina . Para ello los animales que se encontrarn fijados en etanol 40% sern lavados con varios cambios de agua destilada por tres das. Una vez transcurrido este perodo, se proceder a retirar la piel, los rganos blandos y musculatura que pudieran ser extrados con facilidad. Los restos de musculatura que se encontraban fuertemente adheridos se mantendrn en su lugar para evitar romper alguna estructura sea. Luego, los animales sern transferidos a un recipiente que contena una solucin de 200 ml de hidrxido de potasio (KOH) al 0,25 % y 100 l de solucin de rojo de Alizarina con una concentracin de 0,50 mg/ml, mantenindose a los especmenes por 24 horas o hasta que la estructuras seas fueran visibles.

Para eliminar los restos de musculatura y desteir las estructuras blandas se transferir a los animales a una solucin de KOH al 0,50 % hasta que estos se desprendieran por si solos o con ayuda de pinzas quirrgicas. Una vez que los huesos se encuentren limpios y evidenciados por la tincin, se transferirn a bateras de glicerina mezclada con KOH 0,50% en graduacin creciente hasta llegar a glicerina pura. La variacin de los rasgos osteolgicos s registrar mediante el uso de fotografas tomadas con cmara digital adaptada a una lupa estereoscpica. Los caracteres que a continuacin se indican sern obtenidos mediante la observacin de las estructuras seas con ayuda de una lupa estereoscpica con aumentos de 6,4x, 10x y 40x. A) Rasgos craneales: 34) Proceso cultriforme del paraesfenoides, 35) prevmeres articulados al esfenoetmoides, 36) prevmeres articulados con la maxila, 37) grado de osificacin del esfenoetmoides, 38) nasales en contacto con la pars facialis de la maxila, 39) forma de los neopalatinos, 40) proyecciones del proceso palatino de la premaxila, 41) presencia del cuadrado yugal, 42) forma del crneo en perfil dorsal, 43) frontoparietales cubriendo las fontanelas, 44) separacin de los neopalatinos, 45) posicin del canal de la arteria occipital, 46) forma de los elementos ticos, 47) grado de separacin de los nasales, 48) grado de separacin de los cndilosoccipitales, 49) ngulo de la rama ventral del escamoso, 50) forma de la cresta pretimpnica, 51) posicin y forma de los formenes occipitales.

B) Rasgos del esqueleto axial: 52) forma del arco neural, 53) formacin de la porcin anterior del ccix, 54) proceso transverso de vrtebras V a VIII, 55) tipos cervicales, 56) margen anterior del atlas. C) Rasgos de la cintura pectoral: 57) superposicin de los epicoracoides, 58) grado de osificacin del esternn, 59) forma del omosternum. D) Rasgos de la cintura plvica: 60) presencia de la cresta dorsal del isquion, 61) grado de dilatacin de la diapfisis sacral, 62) formenes del ilion, 63) forma diapfisis sacral. E) Rasgos del esqueleto apendicular: 64) ancho del hmero 65) forma de la falange distal de los ortejos. La expresin morfolgica de tales estructuras en las especies analizadas sern documentadas mediante el uso de cmara fotogrfica digital. La informacin ser guardada en tablas, para su ulterior polarizacin como matriz de datos Estudios de Citologa Hemtica : Inmediatamente despus de la extraccin de la sangre se realizar cuatro extendidos sanguneos para Posteriormente, evitar cambios celulares degenerativos.

se colorear con May Grunwald Giemsa para la

descripcin morfolgica de las clulas sanguneas y bsqueda de parsitos extra- e intracelulares. Estado de Conservacin de las Morfoespecies: Se evaluara el estado de conservacin de los telmatobius, investigando la posible existencia de infecciones por hongos , parasitos y el grado de alteracin del hbitat, reportando los impactos que afecten a cada poblacin estudiada, mediante matrices estandarizadas. El estudio de

conservacin se desarrollar segn recomendaciones de la IUCN, Angulo (2008).

IX.-CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

ACTVIDADES 1 1) Revisin bibliogrfica. 2) Colecta de material biolgico 3) Trabajo de campo y laboratorio 4) Anlisis de resultados 5) Redaccin del trabajo 6) Informe final X 2 X X X X X X X X X 3 4 5

semanas 6 7 8 9 10 11 12

X X

X X X X X x x X

BIBLIOGRAFIA AGUILAR, C. AND N. VALENCIA. 2009. Relaciones filogenticas entre telmatobiinidos (Anura, Ceratophryidae, Telmatobiinae) delos Andes centrales basado en la morfologa de los estados larval y adultos. Revista Peruana de Biologia, 16:43-50. AGUILAR, C. AND V. PACHECO. 2005. Contribucin de la morfologa bucofarngea larval a la filogenia de Batrachophrynus y Telmatobius. Pp. 219-238. In: E. O. Lavilla and I. De la Riva (Eds.), Studies on the Andean Frogs of the Genera Telmatobius and Batrachophrynus (Anura: Leptodactylidae), Asociacin Herpetolgica Espaola, Monografas de Herpetologa 7, Valencia, Spain. AGUILAR, C., A. CATENAZZI, P. J. VENEGAS, AND K. SIU-TING. 2012. Morphological variation of Telmatobius atahualpai (Anura: Ceratophryidae) with comments on its phylogenetic relationships and synapomorphies for the genus. Phyllomedusa, 11(1):37-49. Angulo, A. 2008. Consumption Cusco, Peru: of Andean frogs of for the their

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