CURSO BSICO DE CROMATOGRAFIA EM FASE GASOSA

Separao dos componentes da amostra

O Sistema GC

Cromatograma

O que analisar?
Compostos volteis de pontos ebulio de at 350oC e pesos moleculares menores que 500. Compostos que possam derivados volteis. Compostos termicamente nas condies de trabalho. produzir

estveis

Algumas Aplicaes
INDSTRIA PETROQUMICA ALIMENTOS E BEBIDAS BIOCIDAS MEDICAMENTOS MEIO AMBIENTE

Formato Ideal do Pico (Gaussiana)

Distribuio estatstica das molculas

Seletividade da Coluna

= tR2 / tR1 > 1 ... separao aceitvel

Eficincia da Coluna

coluna empacotada: Neff = 5.54 (t R / W)2 coluna capilar: Neff = 5.54 (tR / W)2 tR = tempo de reteno ajustado W = largura do pico a meia altura

Resoluo

R = 1.18 tR / (W1+W2)

Fatores que influenciam a Eficincia da Coluna

A. Difuso por Turbilhonamento (efeito dos mltiplos caminhos)

B. Difuso longitudinal

C. Resistncia a transferncia de massa

Equao de Van Deemter

HETP = A + B/ + C Onde A = difuso de eddy B = difuso longitudinal C = resistncia a trans ferncia de massa = velocidade linear do gs de arraste

Medida de HETP

HETP = L / Neff onde L = comprimento da coluna Neff = nmero efetivo de pratos tericos

Efeito do gs de arraste na eficincia

Vantagens da CG Capilar
Colunas Colunas Empacotadas Capilares comprimento da coluna, m dimetro interno, mm pratos por segundo pratos por metro 4000 pratos por coluna 500000 2-3 2-4 5-20 1500-2500 3000-7500 15-100 0.1-0.8 50-200 300050000-

Empacotada X Capilar

Separao de C14, C15 e C16 (1, 2 e 3) numa coluna empacotada (esquerda) e numa coluna capilar (direita)

Instrumentao Bsica de CG
Suprimento e Controle do Gs de Arraste
Injetores Colunas / Materiais Instalao de Colunas Detetores Dispositivos de Sada de Dados

Suprimento e Controle do Gs de Arraste (Colunas Empacotadas)

Detetor Gs de Arraste TCD He N2 H2 Ar ECD N2 FID TSD He N2 H2 He N2 PFPD ELCD N2 H2 He PID He N2

Gases Combustveis

H2 Air

H2 Air

H2 Air

H2 Air

Dispositivos de Injeo

Injetores para Colunas Empacotadas Injetores Capilares Vlvulas de Amostragem de Gs

Colunas / Materiais

Colunas Empacotadas
Suporte Slido Silanizao Fases Lquidas (GLC) Adsorventes Slidos (GSC)

Colunas / Materiais
Colunas Capilares
Fase Estacionria

Instalao de Colunas

Condicionamento da Coluna
Tcond = (Tmx - Tapp)/2 + Tapp Onde: Tcond = Temperatura de condicionamento Tmx = Temperatura mxima recomendada para a coluna Tapp = Temperatura mxima para a sua aplicao

Medida da Velocidade de Fluxo

= L (cm) / t0 (seg) Onde: L = comprimento da coluna t0 = tempo do pico no retido Compostos no retidos recomendados: Air TCD, MS Butano FID, TCD Cloreto de Metileno* - ECD Acetonitrila* - TSD * Vapor de Headspace

Detetores
Universais Seletivos Range Atenuao

FID (Detetor de Ionizao de Chama)

Dispositivos de Sada de Dados

Registradores Integradores WorkStations (PC)

Injetores

Injetores para Colunas Empacotadas e Megabore

Injetores para Colunas Capilares

Injetores para Colunas Empacotadas

Injeo On-Column
A amostra lquida injetada diretamente na cabea da coluna. A coluna instalada at encostar no septo. O empacotamento retirado da entrada da coluna. Elimina perdas Possibilita um largo intervalo de volatilidade de amostras Melhor para amostras limpas e diludas

On-Column

Injetores para Colunas Empacotadas

Injeo Flash Vaporization

A amostra vaporiza no liner(insersor) de vidro. A coluna e conectada abaixo do injetor. O injetor deve estar pelo menos 50o C acima da temperatura do forno da coluna. Para amostras concentradas ou sujas.

Flash Vaporization

Injeo Sanduche

Injetores para Colunas Capilares

Injeo On-Column
Apenas para colunas mega-bore (ID> 0.53 mm) Permite a injeo lenta de grande volume (> 2l) de amostras diludas. Temperatura de injetor relativamente baixa deve ser utilizada.

On-Column Capilar

Injetores para Colunas Capilares

Injeo Flash Vaporization
A amostra vaporiza no liner(insersor) de vidro. A extremidade da coluna fica pressionada contra uma restrio.Nas colunas mega bore esta restrio fica na poro mais baixa do insersor. Para colunas mais finas a restrio fica na parte superior. O injetor deve estar pelo menos 50o C acima da temperatura do forno da coluna. Para amostras concentradas ou sujas.

Flash Vaporization (Capilar)

Injeo Split/Splitless
Split Splitless Splitter Razo de Split Purga de Septo

Splitter

Injetor 1079

Septum support Sealing ferrule Injection point

Septum nut Septum Septum purge Carrier gas in Split out Insert* Split point

Injetor 1177

Pneumticos do Injetor 1079

Insersores para Injetores

SPLIT E SPITLESS

FLASH VAPORIZATIO N CAPILAR

FLASH VAPORIZATIO N EMPACOTADA

Injeo da Amostra
Relays Injeo Split Injeo Splitless Injeo com Programao de Temperatura do Injetor

Injetor Tipo SPI

Vlvulas de Injeo de Gases

Para uso com

amostras gasosas Operadas Manualmente ou automticamente

Posies da Vlvula de Amostragem

Na posio Carregar, o
loop preenchido com a quantidade conhecida de amostra.

Na posio Injetar, a
amostra empurrada do loop para a coluna pelo gs de arraste.

Colunas

Dimenses das Colunas

Fases Estacionrias Lquidas Suportes Slidos Fases Estacionrias Slidas

Dimenses das Colunas

Comprimento da Coluna Dimetro Interno da Coluna (ID) Espessura do Filme

Dimetro Interno de Colunas Capilares

ID (mm) 0.18 0.25 0.32 0.53

He 40cm/seg 0.3cc/min 0.7cc/min 1.2cc/min 2.6cc/min

H2 40cm/seg 0.6cc/min 1.4cc/min 2.4cc/min 5.2cc/min

Capacidade (ng) <50 50-100 400-500 1000-2000

Pratos

Pratos

Tericos/m Efetivos/m 5300 3300 2700 1600 3900 2500 2100 1200

Razo de Fase

= r / 2df

Onde: r = raios de coluna em m df = espessura do filme em m

Capacidade da Coluna
Espessura do Filme (d f) Temperatura Dimetro Interno Seletividade da Fase Estacionria

Fases Estacionrias Lquidas

Cadeia Siloxano e Substituintes

Composio e Descrio

1 0 0 % metil substitudo Menos Polar 5 % fenil, 95% metil substitudo 6 % cianopropifenil, 94% metil substitudo 1 4 % cianopropilfenil, 86% metil substitudo 5 0 % fenil, 50% metil subtitudo Moderado aumento da polaridade. Drogas, pesticidas, bioqumica 5 0 % trifluoropropil, 50% metil substitudo Polaridade moderada. Frmacos. 5 0 % cianopropilfenil, 50% metil substitudo Alta polaridade. Polietileno glicol Alta polaridade. lcool, fenol, pontes de hidrognio. Polietileno glicol cido modificado. 5 0 % cianopropil, 50% metil substitudo

Fase Estacionria Fase Estacionria Equivalente da Coluna Equivalente da Coluna Empacotada capilar OV-1, OV-101, SP-2100, DB-1, HP-1, HP-101, DC-200, UC-W982, S96, Ultra-1, SPB-1 CP-Sil 5, SE-30 OV-3, OV-73, Fluorolube, DB-5, HP-2, Ultra-2, SPBCP-Sil 8 5, C P - S i l 8 C B DB-1301 OV-1701 0V-17, OV-11, OV-22, SP-2250, DC-710 DB-1701, SPB-7, CP-Sil 19CB, Rtx-1701 DB-17, HP-17, RSL-400, Rtx-50, PE-17, 007-17, SP2250 DB-210, RSL-500, SP2401 DB-225, SP-2330, CP-Sil 43CB, RSL-500 DB-WAX, HP-20M, Supelcowax 10, CP-WAX 52CB, Superox II DB-FFAP, HP-FFAP, Nukol, Superox FA, Stabilwax-DA DB-23, SP-2330, Rtx2330, PE-CPS-1, 007CPS-1

OV-210, OV-202, OV-215, QF-1, SP-2401 OV-225, Silar 5 CP Carbowax 20M, Superox, Supelcowax 10, PEG OV-351, FFAP, Carbowax 20M-cido Tereftlico SP-2310, SP-2330, CPSil 58

Fatores que Afetam a Eficincia da Coluna

Sangramento da Coluna Limites de Temperatura Escolha de uma Fase Estacionria Lquida

Suportes Slidos
Chromosorb so as mais populares Slidos Descrio
TM

Suportes

Chrom asorb

P W G A

Rosa, m enos inerte, alta eficincia B ranco, m ais

TM

inerte,

menos

eficiente

que

Chromasorb Menor rea

P , drogas, pesticidas. superfcie, m ais inerte e

de

rugoso que W , propsitos gerais. S im i l a r a C h r o m a s o r b rea de

TM

P , m a com maior para am ostras

superfcie,

gasosas.

W -H P

A lta

perform a n c e , stios

lavado de

com

cido bom

para para

m in im i z a r

absoro,

esterides, carbohidratos, pesticidas, etc.

Baseado compostos actico, N H

em muito
3

T e f lo n , polares

para H
2

separar O , cido

, gs de enxfre, etc.

Fases Estacionrias Slidas

Material Carvo Aplicao Misturas gasosas, hidrocarbonetos Alumina Slica gel Misturas gasosas, C2, C3, C4 Dixido de carbono, hidrocarbonetos Peneira molecular Polmero poroso Porapak e Hayesep O2, N2, CH4, CO Gases e compostos polares

Automao

Introduo Hardware Modos de Injeo Operao SPME

Motivos para Usar um AutoSampler

Aumenta a preciso e a exatido

da injeo

Libera o operador do GC para realizar outras tarefas

AutoSampler 8200

AutoSampler 8400

AutoSampler CombiPal

Modos de Injeo

Standard
Volatile Neat Viscous User Definided

SPME Fiber Holder

SPME - Processo de Amostragem

SPME num Sistema Trifsico

SPME Aplicaes
Solventes orgnicos em gua Fast GC com BTEXs Metanol em amostras corrosivas Flavor volteis em bebidas Polmeros lcool no sangue Fenis Pesticidas Hidrocarbonetos poliaromticos Drogas no sangue e na urina

Detetores

Os Detetores Universais Os Detetores Seletivos Cromatografia Gasosa / Espectrometria de massas

Avaliao do Sistema

Rudo, Drift e MDQ do Detetor

Contaminao do Sistema e Sangramento da Coluna Linearidade do Detetor Sensibilidade do Detetor Resposta do Detetor e Seletividade

Rudo, Drift e MDQ do Detetor

Contaminao do Sistema e Sangramento da Coluna

Causas
Impurezas do gs. Contaminantes do injetor e do detetor. Fase estacionria decomposta. Amostras sujas.

Cuidados
No sobreaquecer colunas. Trocar os filtros gases regularmente. Usar amostras limpas. as de

Efeitos
Picos fantasmas. Rudo excessivo. Drift excessivo

Linearidade do Detetor

Linearidade Intervalo Linear LDR (intervalo linear dinmico)

Sensibilidade do Detetor
detetor dependente de massa: S= A / M Onde A = rea do pico integrado M = massa da amostra

detetor dependente da concentrao: S = ht / C Onde ht = altura do pico C = concentrao

Resposta do Detetor e Seletividade

Resposta Quantidade de sinal gerada por uma dada quantidade de amostra. Seletividade Iguais quantidades de diferentes classes de compostos nem sempre produzem igual resposta no detetor. O detetor requer calibrao para determinar os fatores de resposta.

Introduo
Tipos de Detetores Universal Seletivo Destrutivo No destrutivo Dependente do fluxo de massa. Dependente da concentrao.

Especificaes
Detetor Seletividade TCD universal universal para hidrocarbonetos FID eletronega-tivos: ECD compostos
halognios, perxi-dos, quinonas, organo-metlicos e grupos nitro

Detetividade
0.2ppm <10pg/seg <0.1ppb

LDR
10 4 10 7 10 3

TSD FPD ELCD

fsforo, nitrognio

<0.05pg P/seg <0.1pg N/seg

10 3 10 4 10 4

enxfre, fsforo

0.1ng S/seg 1pg P/seg

compostos

orgnicos

com 2pg N/seg 2pg S/seg 0.5pg Cl/seg e <10pg/seg

nitrognio, enxfre ou halognios

PID

aromticos,

fenis,

10 7

hidrocarbonetos insaturados

Os Detetores Universais

TCD

Clula do TCD

Condutividade Trmica dos Gases

Gs hidrognio hlio metano oxignio nitrognio monxido de carbono gua argnio dixido de carbono Condutividade Trmica cal/(cm2.s.oC) 458.72 368.63 85.54 65.91 64.06 61.99 44.63 44.22 41.74

FID - Detetor de Ionizao de Chama

Gases Combustveis

Os Detetores Seletivos

e- + amostra perda de corrente

N2 + e-

ECD

TSD

ELCD (HALL)

PID

PFPD

Estgios do PFPD

Aplicaes e Hardware dos Detetores

DETETOR TCD FID ECD SELETIVIDADE
UNIVERSAL

MERCADOS
MEIO AMBIENTE E PETROLFERO: GASES INORGNICOS E LEVES

DETETIVIDADE
0.2PPM <10 PG/SEG <0.1PPB 10

LDR
4

UNIVERSAL HIDROCARBONETOS COMPOSTOS HALOGNIOS,

PARA TODOS OS MERCADOS, PETROLFERO

ESPECIALMENTE

10 7 10 3

ELETRONEGA-TIVOS: MEIO AMBIENTE E FARMACUTICO PERXI-DOS,

QUINONAS, ORGANO-METLICOS E GRUPOS NITRO

TSD PFPD ELCD

FSFORO , NITROGNIO

TODOS OS MERCADOS,

ESPECIALMENTE

<0.05 PG P/SEG <0.1PG N/SEG 0.1NG S/SEG 1 PG P/SEG 2 PG N/SEG 2 PG S/SEG 0.5PG CL/SEG <10 PG/SEG

10 3 10 4 10 4

FARMACUTICO E MEIO AMBIENTE ENXFRE , FSFORO MEIO AMBIENTE E PETROLFERO

COMPOSTOS NITROGNIO , HALOGNIOS

ORGNICOS ENXFRE

COM MEIO AMBIENTE , ALI -MENTOS E AROMAS, E OU FARMACUTICO

PID

AROMTICOS,

FENIS ,

E MEIO AMBIENTE

10 7

HIDROCARBONETOS INSATURADOS

Manipulao de Dados

Anlise Qualitativa Anlise Quantitativa

Erros na Manipulao de Dados

Amostras com mltiplas fases. Poro representativa amostra. para preparao da

Decomposio, vaporizao, reaes. Adsorso no injetor, coluna ou detetor. Fatores de resposta so necessrios para tratar os componentes igualmente. Os parmetros do registrador ou sistema de dados devem ser otimizados para assegurar preciso, e para que dados reprodutveis sejam coletados.

Anlise Qualitativa

Tcnicas Analticas Suplementares

Tempos de Reteno Relativo

Anlise Quantitativa
Porcentagem de rea
Padro Interno Padro Externo Porcentagem Normalizada

Porcentagem de rea
Todos os componentes na amostra devem responder
igualmente no detetor e devem ser bem separados. Indica a quantidade de um componente em relao aos outros componentes na amostra. rea % = (Ai / A) x 100 Onde: Ai = rea do pico individual A = soma de todas as reas dos picos

Padro Externo
Usa uma srie de compostos conhecidos (padres externos) para criar uma curva de calibrao. Estas curvas so constitudas para cada componente de interesse. Estas curvas devem ser lineares e passarem pela origem. Os volumes de injeo devem ser exatos.

Padro Externo
O clculo feito pelo fator de calibrao. Fci = reai / quantidadei Massai = reai / Fci Onde: Fci = fator de calibrao do pico de interesse; reai = rea do pico de interesse; quantidadei = massa ou concentrao do pico de interesse; massai = massa ou concentrao do pico de interesse

Padro Interno
Um padro interno adicionado aos padres e amostra. Apenas a resoluo completa dos picos de interesse e do padro interno requerida. O Padro Interno deve ter as seguintes caractersticas:
No estar presente na amostra; separar completamente dos outros componentes da amostra; estvel, no- reativo e de alta pureza.

O volume de injeo no influi no resultado.

Padro Interno
RRFi = fi =(quantidadei/reai) x (rearef/quantidaderef) Onde: massai = reaifiMref /rearef fi = fator de resposta relativo do pico de interesse; quantidadei = concentrao ou massa do pico de interesse; reai = rea do pico de interesse; rearef = rea do pico de padro interno; quantidaderef = concentrao ou massa do pico do p. interno; massai = massa ou concentrao do pico de interesse; Mref = massa de padro interno adicionada.

Padro Interno

Exemplo 1: Calcular os fatores de resposta relativos.

Pico 1 2 IS 3

Tempo 2.00 3.00 4.00 5.00

Massa 10 10 1.00 5

rea 10000 5000 10000 10000

Exemplo 2: Calcular a massa da amostra usando os fatores relativos resposta.

Pico 1 2 IS 3

Tempo 2.00 3.00 4.00 5.00

Massa ? ? 1.00 ?

rea 8000 8000 8000 4000

Porcentagem Normalizada
Calcula a composio percentual de cada componente.
Fatores de resposta com respeito a um composto de referncia so calculados para cada componente.

Porcentagem Normalizada
fi = (quantidadei / Ai) x (Aref / quantidaderef) % = [Ai x fi / (A x f)n] x 100% Onde: fi = fator de resposta relativo do pico de interesse; reai = rea do pico de interesse; rearef = rea do pico de referncia escolhido; quantidaderef = concentrao ou massa do pico de referncia