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Le systme endomembranaire

2010 / 2011

Francois HELLE Laboratoire de Virologie

Le systme endomembranaire
Dfinition : Le systme endomembranaire correspond lensemble des compartiments intracellulaires limits par une membrane (bicouche lipidique) lexception des peroxysomes, des mitochondries et des chloroplastes pour les cellules vgtales.

- Reticulum endoplasmique - Enveloppe nuclaire - Appareil de Golgi - Endosomes (phagosomes) et lysosomes - Toutes les vsicules, canicules et vacuoles permettant la communication des compartiments entre eux et avec la membrane plasmique.

Le systme endomembranaire
Dfinition : Le systme endomembranaire correspond lensemble des compartiments intracellulaires limits par une membrane (bicouche lipidique) lexception des peroxysomes, des mitochondries et des chloroplastes pour les cellules vgtales.

- Reticulum endoplasmique - Enveloppe nuclaire - Appareil de Golgi - Endosomes (phagosomes) et lysosomes - Toutes les vsicules, canicules et vacuoles permettant la communication des compartiments entre eux et avec la membrane plasmique. - Rq : Procaryotes : gnralement constitus dun seul compartiment (cytosol) Eucaryotes : nombreux compartiments fonctionnellement distincts entours dune membrane

Le systme endomembranaire
Noyau Reticulum endoplasmique lisse Endosome / Lysosome Reticulum endoplasmique rugueux

mitochondrie

Golgi

peroxysome

Flux membranaires
Exprience de marquage mtabolique et chasse (pulse-chase) :

% de la radioactivit totale 80 REG Golgi Scrtion Noyau Mitochondrie

60

40

20

0 0 40 80 120 160 200 240 280

temps

Flux membranaires

Flux membranaires

Flux membranaire vectoriel (antrograde)

Flux membranaire rtrograde

Autre flux membranaire

Le reticulum endoplasmique
- Reprsente 50 % des membranes cellulaires totales (surface totale : 10 30 fois celle de la membrane plasmique) - La membrane du rticulum est en continuit avec la membrane nuclaire externe. La lumire du RE et l'intrieur du noyau sont donc spars par une seule membrane : La membrane nuclaire interne Les lumires du RE et de lappareil de Golgi sont spares par deux membranes. - La membrane du RE est plus riche en phophatidylcholine que la membrane plasmique - Divis en 2 catgories : - le rticulum endoplasmique rugueux - le rticulum endoplasmique lisse

Le reticulum endoplasmique

Le reticulum endoplasmique

Le RE lisse
- Il reprsente un compartiment peu important dans la plupart des cellules. - Il participe la synthse de lipides (phospholipides membranaires, strodes...)

une flipase

Le RE lisse
- Il reprsente un compartiment peu important dans la plupart des cellules. - Il participe la synthse de lipides (phospholipides membranaires, strodes...) - Il a un rle important dans la dtoxification des cellules et le stockage du calcium.

Le RE lisse
- Il reprsente un compartiment peu important dans la plupart des cellules. - Il participe la synthse de lipides (phospholipides membranaires, strodes...) - Il a un rle important dans la dtoxification des cellules et le stockage du calcium.

- Exception : les cellules hpatiques (hpatocytes) - il peut tre trs abondant - il est spcialis dans la production de lipoprotines dans la dtoxification de composs solubles. Rq : Dans des situations particulires (ex: prise de mdicaments), le RE lisse des cellules hpatiques peut doubler de surface en quelques jours, puis revenir ensuite aux dimensions d'origine pour augmenter la capacit fonctionnelle de cette structure.

Le RE rugueux ou granuleux

Prsence de ribosomes lis la surface du RER rle majeur dans la synthse des protines (membranaires et exportes) ( des ribosomes libres dans le cytosol synthse des protines cytosoliques)

- Autres fonctions trs importantes du RER : le maintien de la structure des cellules. le contrle-qualit des protines membranaires et scrtes.

La synthse des protines

La synthse des protines

Les peptides signaux

Les peptides signaux

La synthse des protines

La synthse des protines

La synthse des protines

Translocation des protines solubles dans la lumire du RE


En gnral : mcanisme co-traductionnel on distingue deux phases dans ce processus : - une phase de ciblage - une phase de transport

SRP = particule de reconnaissance du signal (6 polypeptides + une petite molcule dARN)

Translocation des protines solubles dans la lumire du RE

Ciblage - dans le cytosol - liaison de la squence hydrophobe (squence signal) une particule ribonucloprotique (signal recognition particle = SRP) (1) - arrt de la traduction - reconnaissance de l'ensemble ribosome-chane naissante-SRP par une protine rceptrice du RER (2) - hydrolyse du GTP en GDP libration du SRP dans le cytosol - Le complexe ribosome-chane polypeptidique naissante reste li la membrane du RER - transport de la protine en croissance dans la lumire du RER

Translocation des protines solubles dans la lumire du RE

Transport - Il se fait par un canal appel translocon


(complexe protique constitu, des protines Sec 61, TRAM (= translocated chain associated membrane), dune peptidase)

- Reprise de la traduction de l'ARNm en protine - Lorsque la protine atteint la lumire du RER, clivage de la squence signal (signal peptide peptidase) - Repliement de la protine assiste par une protine chaperon (BIP=binding protein) appartenant la famille des Hsp (heat schock protein). - A la fin de la synthse protique, libration du ribosome dans le cytosol (recyclage). Cest la squence KDEL (Lys-Asp-Glu-Leu) qui semble tre caractristique des protines rsidentes solubles.

Translocation des protines solubles dans la lumire du RE

Intgration des protines transmembranaires


Intgration des protines transmembranaires. - Mcanisme d'intgration trs mal connu. - Deux modles proposs pour les protines un domaine transmembranaire : 1er modle : - utilisation de la squence signal non clive comme signal d'ancrage dans la bicouche lipidique. - mcanisme d'orientation des extrmits C- ou N-ter (face cytosolique ou luminale) non connu.

2me modle : - clivage de la squence signal - reconnaissance dune squence hydrophobe par une protine de la paroi du pore - utilisation de cette squence comme domaine transmembranaire

Intgration des protines transmembranaires


Intgration des protines transmembranaires. - Mcanisme d'intgration trs mal connu. - Deux modles proposs pour les protines un domaine transmembranaire : 1er modle : - utilisation de la squence signal non clive comme signal d'ancrage dans la bicouche lipidique. - mcanisme d'orientation des extrmits C- ou N-ter (face cytosolique ou luminale) non connu.

2me modle : - clivage de la squence signal - reconnaissance dune squence hydrophobe par une protine de la paroi du pore - utilisation de cette squence comme domaine transmembranaire

protines plusieurs domaines transmembranaires ????

Intgration des protines transmembranaires

Intgration des protines transmembranaires

Modifications co- et post-traductionnelles dans le RE


- Clivage de la squence signal : catalys par un complexe de 5 protines diffrentes faisant partie du translocon (= signal peptide peptidase).

- Glypiation : addition d'un groupement glycosyl-phosphatidylinositol prassembl dans la membrane (= ancre GPI) sur un acide amin en C-ter ancrage de la protine la face externe de la membrane plasmique. (Phnomne co-traductionnel)

- Myristoylation : addition de myristate (acide gras satur en C14) sur une glycine de l'extrmit N-ter par une liaison amide. (Phnomne co-traductionnel)

Modifications co- et post-traductionnelles dans le RE


- Repliement des protines et formation des ponts disulfure : Conformation acquise grce des molcules chaperones (ex : BiP, calnexine, calreticuline) Ponts disulfures catalyss par la Protein Disulfide Isomerase (PDI) dans le RE

- Palmitoylation : addition dun acide palmitique (acide gras satur en C16) sur une cystine de l'extrmit N-ter par une liaison thioester. (Phnomne post-traductionnel)

- Isoprnylation : addition de chanes farnsyl (C15) ou granylgranyl (C20) sur une cystine au voisinage de l'extrmit C-ter. (Phnomne post-traductionnel)

Modifications co- et post-traductionnelles dans le RE


- La N-glycosylation : Ajout dune chane oligosaccharidique ou glycane (= sucre) sur les rsidus Asn de la protine dans un motif Asn-X-Ser/Thr-X (X et X= AA quelconque) Elle commence dans la lumire du RER et se poursuit dans le Golgi.

Cytosol

Rle majeur dans le repliement et le contrle qualit des protines

Cytosol

Lappareil de Golgi
- Rseau complexe de membranes lisses - Empilement de citernes aplaties, parallles (saccules denviron 1m de diamtre) = dictyosome + vsicules de transition et de scrtion denviron 50nm

Lappareil de Golgi
- On distingue en gnral : - la face cis proche du noyau - le Golgi median - la face trans oriente vers la zone d'accumulation des grains de scrtion Constitution biochimique diffrente

Lappareil de Golgi
- Position juxtanuclaire
dans la rgion apicale du cytoplasme pour les cellules polarises (C glandulaires, neurones) imptce des microtubules : colchicine, nocodazole dispersion du Golgi

Lappareil de Golgi

Fonctions de lappareil de Golgi


Gare de triage

Fonctions de lappareil de Golgi

Fonctions de lappareil de Golgi

Les fonctions de lappareil de Golgi


1 - Addition covalente
- Fin de la N-glycosylation des protines - O-glycosylation des protines ajout d'une chane glycosyle sur un rsidu srine ou thronine. chane glycosyle trs variable. - Glycosylation des lipides Certains lipides peuvent tre glycosyls dans la lumire de l'appareil de Golgi. - Sulfatation des protines Ajout dun groupement SO42- des rsidus tyrosines ou des chanes glycosyles issues de la N-glycosylation 2 - Coupures protolytiques Les coupures protolytiques sont inities dans le trans Golgi et se poursuivent dans les grains de scrtion du compartiment post-golgien.

Les endosomes

Endosomes prcoces : - maturation des constituants imports - tri (dissociation ligand/rcepteur) - recyclage des rcepteurs de surface

Endosome tardifs : Senrichissent en hydrolases lysosomales et en membranes lysosomales par fusion avec vsicules recouvertes clathrine,

Les lysosomes
Structure : - petites vsicules sphriques de 250 500 de diamtre - membrane drive des saccules de l'appareil de Golgi, constitue de: - protines (50 60%) (enzymes (ADPase, ATPase), transporteurs d'ions) - lipides (phospholipides, cholestrol), - oligosaccharides, qui correspondent la prsence de glycoprotines. - structure interne extrmement irrgulire et trs variable.

Les lysosomes
Action des enzymes lysosomiques : les hydrolases acides organites cellulaires de digestion

activit optimale pH acide Forte concentration de protons lintrieur du lysosome maintenue par un transporteur de protons (H+-ATPase)

Les lysosomes
Enzymes lysosomiques dans la tte du spermatozode dans acrosome digestion de lenveloppe externe de lovule

Les lysosomes
Fonction : site majeur de la dgradation intracellulaire de molcules d'origine exogne et endogne. - dgradation de molcules exognes (hormones, facteurs de croissance, lipoprotines, virus, bactries, etc) = endocytose / phagocytose - dgradation de molcules endognes (fragments de membranes, mitochondries, grains de scrtion) = autophagie

Contenu des lysosomes : biochimiquement et morphologiquement htrogne : hydrolases acides dont l'activit optimale s'exerce pH 5
(pH maintenu par une ATPase protons) - protases - nuclases - glycosidases - lipases - phosphatases

produits de dgradation parvenant de lautophagie ou de lendocytose.

Transport des enzymes lysosomales vers les lysosomes

Transport des enzymes lysosomales vers les lysosomes

Flux membranaires
antrograde

rtrograde

Le transport vsiculaire

Cavoline

assemblage des complexes protiques

dformation mcanique de la membrane

COP : coat proteins ou protines du manteau - COP I : protines assurant le transport rtrograde entre les compartiments golgiens et du Golgi vers le RE. - COPII : protines assurant le transport antrograde des protines du RE vers le Golgi.

Le transport vsiculaire
Vsicules tapisses :

De PCOII : pour matriaux du RE en direction du CIREG et du Golgi De PCOI : du CIREG et des empilements de Golgi vers RE De clathrine du RTG aux endosomes aux lysosomes

Le transport vsiculaire

Le transport vsiculaire
1 - formation d'un bourgeon la membrane d'un compartiment donneur 2 - formation d'une vsicule par pincement du bourgeon.
isolement dune fraction du compartiment donneur et des composants membranaires

3 - accostage (arrimage) de la vsicule au compartiment accepteur 4 - fusion


- dversement du contenu de la vsicule dans le compartiment accepteur - intgration de la membrane de la vsicule celle du compartiment accepteur 1 2 3 4

Le transport vsiculaire : lendocytose

Le transport vsiculaire : lendocytose

Le transport vsiculaire : lendocytose

Les puits de clathrine


3 grosses sous-units + 3 petites sous-units (chanes lourdes) (chanes lgres) triskle (3 branches)

Lendocytose
(Universit Lyon 1/ IBCP)

Accostage et fusion des vsicules


- vsicule dirige vers le compartiment accepteur grce aux protines Rab = protines d'adressage

- accostage au compartiment receveur facilit par l'interaction des protines SNAREs = Soluble-NSF-Acceptors-Receptors

- v-SNARE : associes la vsicule

- t-SNARE : associes au compartiment accepteur (target).

Fusion des vsicules

Flux membranaire vectoriel