LABORATORIO DE ANLISIS INSTRUMENTAL FARMACUTICO PRCTICA N3: ENSAYOS DE DISOLUCIN

1. OBJETIVOS: 1.1. GENERAL: Determinar la cantidad de clorfeniramina maleato contenidas en unas tabletas de 4mg que se disuelve en las condiciones especificadas en la monografa de la farmacopea USP. 1.2. ESPECFICOS: Conocer la metodologa y los equipos empleados para los ensayos de disolucin. Hallar las absorbancias para la muestra patrn y problema, y con base en los resultados encontrar el valor Q Analizar si las tabletas cumplen con especificaciones y cules son los factores que pueden afectar los resultados. 2. METODOLOGA: 2.1. ENSAYO DE DISOLUCIN:

Calentar una cantidad aproximada a 6L de agua destilada

Adicionar 5mL de HCl fumante 37%

Llevar el medio a una temperatura de 37C

Colocar 500mL del medio (HCl 0,1N) en el recipiente del aparato 2

Realizar el anlisis UV de la muestra y el patrn+

Tomar muestras de cada vaso con una jeringa*

Operar el equipo a una velocidad de 50 rpm por 30 minutos

Adicionar las tabletas en cada vaso (al mismo tiempo)

Determinar la longitud de onda de mxima absorbancia

Leer las absorbancias para las 6 muestras y el patrn

Realizar los anlisis correspondientes

* Se deben tomar todas las muestras a la misma altura + Se leen directamente ya que la absorbancia es muy baja (por el valor de principio activo 4mg), en la seccin de clculo se puede encontrar la justificacin de sta decisin.

3. CARACTERSTICAS DE LOS EQUIPOS, INSTRUMENTOS Y MATERIALES: 3.1. EQUIPOS E INSTRUMENTOS: 3.1.1. EQUIPOS:

Figura 1. Equipo de disolucin Hanson SR2

Figura 2. Elemento de agitacin de paleta

[3]

El equipo Hanson SR2 consta de un bao de disolucin controlado por un termostato y una sonda de temperatura que controla que no existan fluctuaciones mayores a 0,5 C en la temperatura del medio de disolucin. Disponen generalmente de 6 vasos de disolucin de 1 litro de capacidad de vidrio, pero existen tambin de plstico. Para ello, tambin utilizan un juego de 6 vstagos y contienen ya sea una canastilla, si se trata de un equipo de disolucin USP-I o una paleta si se trata de un equipo de disolucin USP-II. Las canastillas como las paletas deben cumplir ciertas especificaciones que se describen en las farmacopea (Figura 2) y el material con el que se elaboran no debe desprender partculas (normalmente se confeccionan con acero inoxidable de calidad 316L), ni reaccionar, ni absorber, ni adsorber la sustancia activa. Cada vstago gira a una velocidad [1] predeterminada, regulada por un instrumento que controla las revoluciones por minuto . Las soluciones se leyeron en un espectrofotmetro UNICAM UV 2 ATI, el cual es un espectrofotmetro de doble haz en el tiempo, a una longitud de onda mxima max de 263 nm y se registraron las absorbancias de cada muestra. 3.1.2. INSTRUMENTOS: 1 Baln aforado de 25mL 1 Baln aforado de 50mL 1 Baln aforado de 6000mL 6 Jeringas con sus respectivos filtros 1 Pipeta de 1mL 1 Probeta de 1000mL 1 Vaso de precipitado de 100mL 6 Viales color mbar

3.2. MATERIALES: 3.2.1. CIDO CLORHDRICO FUMANTE (37%) Informacin sobre producto Frmula qumica: HCl Nmero CE: 321-595-7 Nmero CAS: 7647-01-0 Datos qumicos y fsicos
[2] [2] [2]

Estado Fsico: Lquido Color: Incoloro Olor: Picante Umbral Olfativo: 0,8-5 ppm, cloruro de hidrgeno (HCl) gaseoso Solubilidad en agua (20 C): soluble Punto de fusin: -28 C Punto de ebullicin: 45 C Punto de solidificacin: -30C Densidad: 1.19 g/cm3 (20 C) Valor de pH: < - 1 (H2O, 20 C) Presin de vapor: 190 hPa (20 C) Informacin de seguridad de acuerdo a GHS
[2]

Frases de Peligro: H314: Provoca quemaduras graves en la piel y lesiones oculares graves ; H335: Puede irritar las vas respiratorias; H290: Puede ser corrosivo para los metales. Consejos de Prudencia: P280: Llevar guantes de proteccin/ gafas de proteccin/ mscara de proteccin; P301 + P330 + P331: EN CASO DE INGESTIN: Enjuagarse la boca. NO provocar el vmito; P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar con agua cuidadosamente durante varios minutos. Quitar las lentes de contacto cuando estn presentes y pueda hacerse con facilidad. Proseguir con el lavado 3.2.2. CLORFENIRAMINA MALEATO Estructura Qumica:
[3]

Apariencia : Blanca o casi blanca, polvo cristalino [4] Solubilidad : Poco soluble en agua, soluble en etanol al 96% Grupo Farmacolgico: Antihistamnico [3] Punto de fusin : Entre 130-135C Coeficiente de absortividad ( ): 302 a 265nm en medio cido

[4]

 Informacin de las tabletas: Contenido Etiquetado: 4mg Registro Sanitario N: 2005M-0004431 Laboratorio: Labinco Cantidad: 6 tabletas Fecha de vencimiento: No se especifica
[3]

Tolerancia : No menos del 80% (Q) de la cantidad etiquetada de clorfeniramina maleato se disuelve en 30 minutos. [3] Especificaciones : Contiene no menos del 98% y no ms del 100,5% de clorfeniramina maleato, calculado en base seca. 4. DATOS Y CLCULOS: 4.1. DATOS: Los datos obtenidos para las absorbancias de las 6 soluciones (tabletas) y la muestra patrn se muestran a continuacin. Para ello se realiz un barrido y se determin 263 nm como la longitud de mxima absorcin: Tabla 1. Absorbancias de las muestras y el patrn a 263 nm: MUESTRA Patrn 1 2 3 4 5 6 4.2. CLCULOS: 4.2.1. ELABORACIN DE LA SOLUCIN DE HCl 0,01N: Para la preparacin de la solucin de 6L de HCl 0,01N requerida como medio de disolucin partimos del cido clorhdrico fumante disponible, haciendo los siguientes clculos: ABSORBANCIA (UA) 0,208 0,154 0,316 0,156 0,159 0,133 0,149

4.2.2.

ELABORACIN DE LA SOLUCIN PATRN: Para elaborar la solucin patrn debemos convertir el valor de coeficiente absortividad a absortividad. As:

Luego se debe calcular la concentracin teniendo en cuenta que se toman 4mg y se disuelven en 500mL de medio: ( )

Con los datos obtenidos y teniendo en cuenta que la celda es de 1cm, se puede hallar la absorbancia, como se ve a continuacin:

( (

) )

En vista que la absorbancia da en el rango de la linealidad, no se deben hacer diluciones, por lo tanto, se procede a calcular la cantidad de patrn que se debe pesar. Ya que tenemos balones aforados de 25mL y 50mL y pipetas de 1mL, se realizaron los siguientes clculos:

Ya que la cantidad es muy pequea y no es significativa para la balanza de 4 cifras decimales se debe hacer otra dilucin:

Teniendo en cuenta que el patrn tiene una pureza de 96,9%, se debe recalcular la cantidad:

4.2.3.

CLCULOS DE CONTENIDO DE PRINCIPIO ACTIVO EN LAS TABLETAS: Para determinar el contenido de principio activo en las tabletas se deben tener en cuenta los datos de la tabla 1 y la concentracin de la muestra patrn, debido a que se pesaron 0,0110g de patrn al 96,9% se debe recalcular la concentracin de la solucin, as:

Con la concentracin de la muestra patrn se puede calcular la concentracin de las dems soluciones, como se muestra a continuacin para la muestra 1:

Tabla 2. Concentraciones de las muestras: MUESTRA 1 2 3 4 5 6 ABSORBANCIA (UA) 0,154 0,316 0,156 0,159 0,133 0,149 CONCENTRACIN (mg/mL) -3 6,3x10 -2 1,3x10 -3 6,4x10 -3 6,5x10 -3 5,4x10 -3 6,1x10

Tomando los datos de las concentraciones, se procede a hallar la cantidad de principio activo, a continuacin se muestra el procedimiento para la muestra 1:

Tabla 3. Contenido de Clorfeniramina Maleato en las muestras: MUESTRA 1 2 3 ABSORBANCIA (UA) 0,154 0,316 0,156 PRINCIPIO ACTIVO (mg) 3,1 6,5 3,2

4 5 6 4.2.4. CLCULO DEL VALOR Q:

0,159 0,133 0,149

3,2 2,7 3,0

4.2.4.1. MTODO: MUESTREO UNITARIO: Los valores de cada muestra se hallaron como se muestra a continuacin para la muestra 1:

Los valores para las dems muestras se encuentran en el numeral 5. 4.2.4.2. MTODO: MUESTREO COMBINADO: Para ello se debe hallar el promedio y la desviacin de la cantidad de frmaco en las 6 muestras: Promedio:

Donde, x=cantidad de PA en mg; n=Nmero de muestras Desviacin Estndar. ( )

Rango: [2,2mg 5,0mg]

Con el promedio se halla el valor Q con la frmula 4:

Si bien el valor de la muestra 2 se podra tomar como dato atpico (ver los clculos a continuacin), no se descarta en el promedio, pues el ensayo slo es vlido si tiene mnimo seis datos. Test Q para datos sospechosos: Lo primero que hacemos es ordenar los datos en forma creciente: 6,5; 3,2; 3,2; 3,1; 3,0; 2,7. Luego empleando la frmula 5 hallamos el valor Q:

Luego, si Q calculada es mayor que Q tabulada se rechaza el dato. Segn la tabla de valores crticos del test de Dixon para un nivel de confianza del 95%, del libro Analytical Chemistry de [5] Christian , el valor de Q para 6 datos es de 0,625. 0,868>0,625 El dato se rechazara 5. RESULTADOS: Tabla 4. Mtodo Muestreo Unitario: Valor Q para las 6 tabletas de Clorfeniramina Maleato: MUESTRA 1 2 3 4 5 6 PRINCIPIO ACTIVO (mg) 3,1 6,5 3,2 3,2 2,7 3,0 VALOR Q 79 161 80 81 68 76

Tabla 5: Mtodo Muestreo Combinado: Valor Q para el promedio de las 5 tabletas de Clorfeniramina Maleato: MUESTRAS 1,2,3,4,5,6 PRINCIPIO ACTIVO PROMEDIO (mg) 3,6 VALOR Q 90

6. ANLISIS DE RESULTADOS: El ensayo de disolucin es uno de los procedimientos analticos ms importantes para la evaluacin de calidad de formas farmacuticas slidas orales, semislidos tpicos, transdrmicos y supositorios, mediante la determinacin de la cantidad de frmaco que se disuelve por unidad de tiempo bajo condiciones estandarizadas de interfase slido/lquido, temperatura y composicin del solvente. Es utilizado para evaluar los procesos de fabricacin e identificar variables crticas en el proceso, permite la comparacin y estudio de calidad intralotes e interlotes, es un indicador de estabilidad del preparado farmacutico y predice la biodisponibilidad y bioequivalencia in vitro de productos slidos orales, debido a esto es un criterio a tener en cuenta para la liberacin de un lote de determinado frmaco y ocupa aproximadamente el 15% del trabajo en un laboratorio fabricante de formas solidas. A partir del ensayo de disolucin tambin es posible realizar un perfil de disolucin del frmaco, mediante el cual se puede evaluar cmo est siendo liberado el principio activo de la forma farmacutica, a qu velocidad y en que concentraciones, para determinar cmo ocurren los procesos de disgregacin y disolucin en el caso de un comprimido normal y de cmo est siendo entregado el frmaco en un dispositivo de liberacin controlada o no controlada, de una forma predeterminada y reproducible. Como se dijo antes el ensayo se llev a cabo en un equipo de disolucin Hanson SR2, cuyo funcionamiento se encuentra en el numeral 3.1.1. En nuestro caso, la farmacopea USP estableca para el ensayo el aparato 2 de paletas, el cual se usa generalmente para tabletas y se caracteriza por conservar una distancia especfica entre las paletas y el fondo del envase (aproximadamente 25mm), adems unas dimensiones caractersticas que se muestran en la figura 2. Es importante tener cuidado con la instrumentacin de este equipo, pues las dimensiones vienen calibradas para dar caractersticas de agitacin reproducibles, cualquier dao en las paletas, vaso o alguna de las condiciones puede causar resultados errneos. En lo referente al medio empleado en la monografa se especifica un medio cido que imita las condiciones de pH del estomago, generalmente a pH=1-3, emplendose HCl 0,01N. Es necesario tambin que se cumpla la condicin Sink, es decir, que el volumen del medio sea de 5 a 10 veces mayor que el que se necesitara para realizar una solucin saturada del frmaco, en este caso, se requirieron 500mL para ello. Otro factor importante es la temperatura, la cual debe ser de 370,5C, imitando la temperatura corporal del cuerpo humano y una velocidad de agitacin de 50rpm por 30 minutos que mimetizan los movimientos peristlticos. En lo que concierne a la muestra, contbamos con tabletas de liberacin inmediata de Clorfeniramina Maleato (antihistamnico), cuyo contenido etiquetado era 4mg. El objetivo del ensayo es encontrar la cantidad de frmaco remanente en la forma farmacutica respecto al tiempo en que un porcentaje concreto de frmaco es liberado. En este caso, se aprovecha el conocimiento del coeficiente de absortividad de la sustancia, para calcular la concentracin a la cual sera posible leer primero la absorbancia de la muestra problema y luego las absorbancias de las muestras de cada una de las tabletas, el valor que se empleo con base en un barrido previo realizado fue de 263nm, a partir de stos resultados se calcul el contenido de Clorfeniramina Maleato en las tabletas y el valor Q que ser el referente para comparar con los criterios de aceptacin establecidos por la farmacopea USP. A continuacin se muestran las tablas de aceptacin para cpsulas, tabletas sin cubierta y tabletas con cubierta simple de liberacin inmediata en los mtodos de muestreo unitario y combinado respectivamente: Tabla 6. Tabla de Aceptacin para Muestreo Unitario NIVE L S1 S2 NMERO PROBADO 6 6
[3]

CRITERIO DE ACEPTACIN Cada Unidad no deber ser menor que Q+5% El promedio de 12 unidades (S1+ S2) debe ser igual o mayor a Q y ninguna

S3

12

unidad deber ser menor que Q -15% El promedio de 24 unidades (S1+ S2+S3) debe ser igual o mayor a Q y no ms de 2 unidad deber ser menor que Q -15%, y ninguna unidad deber ser menor que Q -25%,
[3]

Tabla 7. Tabla de Aceptacin para Muestreo Combinado NIVEL S1 S2 S3 NMERO PROBADO 6 6 12

CRITERIO DE ACEPTACIN La cantidad disuelta promedio no deber ser menor que Q+10% La cantidad disuelta promedio (S1+ S2) debe ser igual o mayor a Q+5% La cantidad disuelta promedio (S1+ S2+S3) debe ser igual o mayor a Q

En nuestro caso, slo realizamos el nivel S1, y teniendo en cuenta que el valor Q para la Clorfeniramina Maleato est estipulado como 80%, solo la muestra 2 cumple las condiciones de la tabla nmero 6, es decir ms que 85%, por lo tanto el ensayo no cumple con el estado de disolucin S1 y es necesario realizar el ensayo S2. En el caso de la tcnica de muestreo combinado el nivel S1 se cumple, ya que el Q es igual al 90%. Como se puede ver, ste ltimo resultado es altamente influenciado por la muestra 2, que podra considerarse como un dato atpico, pero segn lo estipulado para ste tipo de ensayos el valor no se descarta. Las muestras restantes no cumplen las especificaciones, posiblemente por la degradacin natural del frmaco con el tiempo o por un almacenamiento inadecuado. Debido a que hay una cantidad tan pequea de principio activo en la tableta, las variaciones en porcentajes se hacen ms evidentes, por lo tanto el ensayo de disolucin para la liberacin de lotes en este tipo de muestras es muy importante. Los posibles productos de degradacin que se reportan en la Farmacopea Britnica y que se pueden presentar como impurezas se encuentran en la figura 3.

Figura 2. Posibles impurezas de las muestra de Clorfeniramina

[4]

Adems de los errores inherentes a la degradacin de la molcula, es importante tener en cuenta una serie de factores procedimentales que pueden influir en los resultados, tales como el volumen dispensado, el pH, la velocidad de agitacin, la limpieza de los viales, el estado de los filtros, el centrado de los vasos, las vibraciones y la temperatura de medicin de la muestra. 7. CONCLUSIONES: El mtodo de muestreo unitario no cumple con el nivel S1, mientras que el mtodo de muestreo combinado si cumple con el nivel S1, sin embargo, stos resultados deben ser complementarios a otra serie de ensayos para comprobar la calidad de los productos.

 El ensayo de disolucin se ve influenciado por ciertas condiciones como las caractersticas del medio de disolucin (que vara segn el principio activo), el tiempo de la prueba, el volumen de medio condiciones Sink, hidrodinamia (velocidad de agitacin, ubicacin de la tableta, etc). El ensayo de disolucin nos permite hacer un acercamiento de los procesos que sufre el producto in vivo, la forma como es liberado el frmaco, la homogeneidad de lotes, etc, por lo tanto, permite tomar decisiones respecto a procesos crticos y a la formulacin como cambio de excipientes o sus proporciones (en el caso de aglutinantes, lubricantes, desintegrantes) antes de sacar al mercado los lotes de productos. A pesar de que el ensayo de disolucin es bastante til en el control de calidad de formas farmacuticas slidas, semislidas, transdrmicos, etc, debe ser complementaria a otras pruebas, ya que como vimos en ste slo se tienen en cuenta los lmites mnimos ms no los mximos como criterios de aceptacin.

8. BIBLIOGRAFA: 1. J.E. Aguilar. Aspectos Generales del ensayo de disolucin I y II. URL: http://www.docstoc.com/docs/21476575/ASPECTOS-GENERALES-DEL-ENSAYO-DEDISOLUCI%C3%93N-USP-I-y. Fecha de Consulta: 30 de Abril de 2012 2. Merck Chemicals. HCl Fumante 37%. URL: http://www.merckmillipore.com/colombia/chemicals/acidoclorhidrico-fumante-37-%25/MDA_CHEM-. Fecha de Consulta: 27 de Abril de 2012. 3. United States Pharmacopeial Convention.Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica, USP 30 -NF 25. Council of Experts.2007. Pgina 1439, 1691, 3265 4. British Pharmacopoeia Commission. British Pharmacopoeia. Crown. 2009. Pginas 12881289. th 5. G.D. Christian. Analytical Chemistry. John Wiley & Sons. Inc. 6 edition. Washington, EE.UU. 2004. Pginas 98-99.