UNFV - FTM - Cursos: Histologa, Embriologa y Gentica Humana

PRACTICA N 1: MICROSCOPA II
INTRODUCCIN El microscopio es el instrumento insigne en el estudio histolgico y uno de los principales objetivos de la Histologa es permitirle al estudiante la comprensin de la estructura microscpica de las clulas, tejidos y rganos, al mismo tiempo que se relaciona la morfologa con la funcin. Los numerosos descubrimientos han hecho posible que el ser humano logre ver ms all de sus capacidades, observando tanto aquellos objetos que estn muy lejanos, como tambin los que por su reducido tamao, se escapan a la capacidad del ojo humano para formar una imagen de los mismos. Los hallazgos en el campo de la fsica y sobretodo en una de sus ramas, la ptica, que estudia la naturaleza de la luz, sus caractersticas y sus manifestaciones, han permitido comprender el comportamiento de la misma, su interaccin con la materia y notablemente su rol en la formacin de las imgenes. El funcionamiento de muchos microscopios ha sido interpretado de una manera ms efectiva al entender el proceso de la visin y la formacin de las imgenes, estableciendo diferencias entre lo que es el objeto que se observa y la imagen que se forma a partir de l cundo ste es iluminado. El fundamento de la microscopa es efectivamente la formacin de imgenes a partir de un espcimen. Para producir una imagen se requieren dos elementos: Primero, el objeto en estudio, sobre el cual debe incidir algn tipo de radiacin electromagntica que permita iluminarlo por decirlo de alguna manera y segundo, un me dio de formacin de la imagen, o sistema ptico, que permitir finalmente producir la imagen. El tamao de la imagen formada puede ser ms pequeo, igual o mayor que el tamao del objeto a partir del cual se produjo. El conocimiento del fundamento terico de la microscopia es importante para el manejo, mantenimiento y cuidado del microscopio.

CUIDADOS EN EL USO DEL MICROSCOPIO Para el buen uso del microscopio en el laboratorio de Histotecn ologa se deben tener en cuenta los siguientes aspectos. Los microscopios estn numerados y se guardan en el gabinete de microscopios. Cada estudiante del grupo que solicita un microscopio se hace responsable de su cuidado. La mesa donde se colocar el microscopio para hacer la observacin debe ser estable, para evitar vibraciones de la muestra durante el examen. La posicin del observador ante el microscopio debe ser cmoda y a una altura correcta. La mesa de trabajo debe estar limpio y libre de libros, cuadernos, bandejas y reactivos. Cuando se transfiera el microscopio del gabinete a la mesa de trabajo, se agarra fuertemente el brazo del microscopio con la mano de mayor fuerza y se coloca la otra mano por debajo de la base del instrumento. Si no se realiza de esta manera, las probabilidades de golpear contra la mesa o dejarlo caer se elevan. Bajo ninguna circunstancia se debe tomar el microscopio con una sola mano y menos an, dos microscopios con dos manos. Una vez finalizada la observacin, se limpian las lentes y se guarda siguiendo las mismas instrucciones de transporte.

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UNFV - FTM - Cursos: Histologa, Embriologa y Gentica Humana I. DETERMINACIN DE LA DISTANCIA INTERPUPILAR La distancia entre el centro del ojo de una persona al centro del otro ojo se describe como Distancia Interpupilar y generalmente se calcula en milmetros. Si ajustamos correctamente la distancia entre los dos oculares del microscopio binocular se forma un slo crculo de imagen (campo de trabajo); si la distancia entre los oculares no coincide con la distancia interpupilar del usuario se forman dos crculos de imagen superpuestos. Debe variarse la distancia hasta conseguir una imagen circular clara, y no imgenes dobles de los objetos. La observacin debe ser confortable. Esta operacin es sencilla y se puede realizar abriendo o cerrando los tubos oculares sobre su eje, hasta que la distancia de separacin coincida con la del usuario. Hay que tener en cuenta que la medida de la distancia interpupilar vara de persona a persona, as que si se comparte el microscopio binocular, casi obligatoriamente debe reajustarse este factor. De todas formas es muy rpido y casi intuitivo. Por ello, es importante conocer de antemano la distancia interpupilar personal, de manera que antes de hacer uso del microscopio, se grada a esa mediada la distancia de separacin entre ambos tubos oculares, haciendo uso de la escala graduada del eje de los tubos. OBJETIVOS Al finalizar el estudiante estar en capacidad de: Reconocer su distancia interpupilar. Utilizar su distancia interpulilar en observaciones a travs del microscopio de ptico compuesto. MATERIALES: Regla milimetrada Linterna pequea PROCEDIMIENTO Para la determinacin de la distancia interpupilar, dentro de cada grupo formar subgrupos de 2 alumnos, los que seguirn el siguiente protocolo:
1. 2. PROTOCOLO DE MEDICIN DE DISTANCIA INTERPUPILAR Pedir al alumno que fije la mirada en un blanco a la distancia. Colocarse frente al alumno a una distancia del largo del brazo (40 cm), justo por debajo de la mirada del alumno. Alinear los ojos del examinador con los ojos del alumno, mientras el alumno mantiene la mirada fija por encima de la cabeza del examinador. Encender la linterna, dirigindolo hacia los ojos del alumno. Colocar la regla por encima del puente nasal del alumno. El examinador debe cerrar el ojo derecho y debe usar el ojo izquierdo para alinear el punto cero (0) de la regla con el centro de la pupila del ojo derecho del alumno. Mantener la regla fija. Cerrar el ojo izquierdo y abrir el ojo derecho. Leer la medicin que se alinea con el centro de la pupila del ojo izquierdo del alumno. Repetir los pasos 4, 5 y 6 para confirmar una lectura reproducible.

3. 4. 5. 6. 7. 8.

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*** Anotar la medida de la distancia interpupilar en su respectiva gua de prctica. RESULTADOS Mi distancia interpupilar es: . mm.

RECORDAR: DISTANCIA INTERPUPILAR

Definicin: La distancia entre los centros de las pupilas de ambos ojos. Puntos de referencia: Medicin de la distancia entre los centros de ambas pupilas. Elemento de medicin: Regla transparente milimetrada, pupilmetro. Posicin: Se puede encontrar el alumno en bipedestacin o sedestacin con la cabeza en posicin recta y erecta, con la mirada al frente. Limitaciones: Requiere que la mirada est fija al frente. Valores normales: 50.0 70.0 mm. Interpretacin: Cuando la distancia interpupilar est disminuida se denomina hipotelorismo ocular y si se encuentra aumentada hipertelorismo ocular .

II. CALIBRACION DE OCULARES, INSERCIN DE MUESTRA Y ENFOQUE EN EL MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO OBJETIVOS Al finalizar el estudiante estar en capacidad de: Reconocer los elementos del sistema ptico del microscopio. Calibrar los oculares del microscopio ptico compuesto. Insertar la lmina histolgica en la platina del microscopio. Centrar la lmina histolgica en la platina del microscopio. Enfocar la muestra en un microscopio ptico compuesto.

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UNFV - FTM - Cursos: Histologa, Embriologa y Gentica Humana PROCEDIMIENTO 1. RECONOCIMIENTO DEL SISTEMA PTICO DEL MICROSCOPIO: Comprobar la magnificacin y la apertura numrica de los objetivos que estn en el revlver del microscopio y la magnificacin de las lentes oculares. Estos valores estn impresos en cada uno de los objetivos y de los oculares. En las siguientes tablas anotar los valores de magnificacin para cada objetivo y ocular y la AN para cada objetivo y el condensador y, los datos del microscopio. Calcular la magnificacin total y el lmite de resolucin para cada objetivo y el poder de resolucin mximo del microscopio usando aceite de inmersin (n= 1,56). Asumir que la luz que atraviesa la muestra tiene una longitud de onda de 420 nm.
Amplificacin de objetivos Apertura Numrica (AN) Aumento Total AT = A ocular x A objetivo Lmite de Resolucin LR = (0,61 x ) / AN

Amplificacin de los oculares: Apertura numrica del condensador: Objetivo de mayor AN: LR mximo del microscopio Marca:

Datos del Microscopio Modelo: N :

2. CALIBRACIN DE OCULARES: Ajustar los oculares a la posicin neutra de dioptras (0). Ajustar los oculares a la distancia interpupilar y dioptras del observador. La mayora de microscopios estn equipados con un tirador entre los oculares para su ajuste y slo se requiere empujar o tirar directamente de los oculares juntos o individualmente. Mover los oculares (derecha e izquierda) hasta que concuerde con la distancia interpupilar personal y ver un campo de visin uniforme. 3. INSERCIN DE MUESTRA: Girar el revolver portaobjetivos hasta que el objetivo de menor aumento est en posicin de observacin. Bajar totalmente el condensador y la platina. Coger la lmina histolgica, colocarla en la platina asegurndose que queda correctamente fijada, y con el cubreobjetos hacia arriba. 4. CENTRADO DE MUESTRA: Encender el microscopio. Observando la lmina histolgica y el ocular, subir la platina hasta el tope. Subir el condensador al tope. Abrir completamente el diafragma. Usando las perillas de arrastre de la platina, centrar la muestra en el halo de luz. Cerrar el diafragma y bajar completamente el condensador. Ajustar la intensidad de luz con el potencimetro a un nivel confortable para el observador. Nunca controlar la intensidad de luz con el condensador, asegurarse que el condensador est en posicin correcta. www.galeon.com/histoweb tm_victoralberto@yahoo.com

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A m enor aum ento, m enor intensidad de luz. A m ayor aum ento, m ayor intensidad de luz. A m enor aumento, diafragma menos abierto. A m ayor aumento, diafragma m s abierto. A m enor aumento, condensador ms bajo. A m ayor aumento, condensador m s arriba.

Objetivo de 4 X diafragma casi cerrado y condensador abajo. Objetivo de 100 X diafragma totalmente abierto y condensador completamente arriba.

5. ENFOCAR LA MUESTRA: Con las manos en los tornillos macromtricos, observar a travs de los oculares. Bajar lentamente la platina hasta observar la formacin de una imagen. 6. NITIDEZ DE IMAGEN: Cerrar el ojo izquierdo y observar slo con ojo derecho. Mover lentamente el tornillo micromtrico hasta obtener la mayor nitidez de la imagen. Cerrar el ojo derecho y observar slo con el ojo izquierdo la imagen formada, de no estar ntida girar el ocular en sentido antihorario hasta obtener la mayor nitidez de la imagen. En este ltimo procedimiento no mover el tornillo micromtrico. usar slo el anillo de ajuste del ocular.
El tornillo m acrom trico es para enfocar. El tornillo m icrom trico es para dar nitidez a la im agen.

7. Durante el uso del microscopio, una mano debe de permanecer sobre el micromtrico reajustando el enfoque constantemente y la otra mano se usa para dirigir los movimientos de la platina. 8. Si fuese necesario ms aumento, gire el revlver y seleccione el objetivo de 10X, explore la muestra y luego con el objetivo de 40X. El objetivo de 100X o de inmersin se usar slo en preparados especiales y que justifican un mayor aumento. 9. Realizar esquemas de lo observado en la prctica, a diferentes aumentos.
El estudio con el microscopio siempre se inicia de menor a mayor aumento y se termina de mayor a menor aumento; es ms, con la prctica, el estudiante debe estar en la capacidad de identificar a simple vista el corte histolgico en la lmina, de tal manera que el microscopio constituya el Instrumento con el cual confirme su diagnstico preliminar.

BIBLIOGRAFA Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiologa. Manual de Mtodos Generales (segunda edicin). Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela. Pelczar and Chan. 1977. Laboratory Exercises in Microbiology. Fourth edition. Mc GrawHill Book Company. Seely. H; Van Demark, P. 1962. Microbios en accin. Manual de Laboratorio para Microbiologa. Editorial Blume. Madrid-Espaa. Tortora G.J., B.R. Funke and C.L. Case. 2001. Microbiology an Introduction Seventh Edition. The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc.

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UNFV - FTM - Cursos: Histologa, Embriologa y Gentica Humana RESULTADO DE OBSERVACIONES

Muestra: . Coloracin:

Aumento del Ocular : Aumento del Objetivo: Aumento Total :

Aumento del Ocular : Aumento del Objetivo: Aumento Total :

Aumento del Ocular : Aumento del Objetivo: Aumento Total :

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