Universidad Tecnolgica de Chile rea de Biotecnologa Laboratorio de Microbiologa

Gua de laboratorio N 1 Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiologa

Introduccin
La Bioseguridad
El concepto Bioseguridad se refiere a un conjunto de normas y procedimientos, establecidos a nivel nacional o internacional, para disminuir el riesgo de daos o prever la ocurrencia de accidentes en el desempeo de las actividades regulares del personal que trabaja en un laboratorio de investigacin, laboratorio clnico, industrial u otro, a quienes estn en sus proximidades o al ecosistema, donde estn presentes elementos como productos txicos, patgenos biolgicos, material radiactivo, material clnico contaminado u organismos genticamente modificados. En su aplicacin concurren el conocimiento de las medidas, el de las tcnicas asociadas y los equipos e instalaciones necesarias para prevenir la exposicin de las personas, de los lugares fsicos involucrados y del ambiente a los agentes peligrosos o potencialmente dainos para la salud de los involucrados. Estas normativas, surgieron primero como respuesta a situaciones derivadas de la manipulacin de elementos qumicos txicos, posteriormente se sum el empleo masivo de elementos radiactivos en diversas actividades y, ms recientemente, el acelerado avance y empleo de diversas metodologas en laboratorios de investigacin en ingeniera gentica, biologa molecular, fusin celular, mutagnesis y otras, que han generado preocupacin especial de la comunidad cientfica como de la sociedad en general. El concepto Bioseguridad, como una actividad humana, est afecto a los progresos de la sociedad (valores, tica, etc.) como a los de la tcnica y la ciencia. Esto se ha traducido, por ejemplo, en la formulacin y la incorporacin de elementos bioticos en la experimentacin clnica con pacientes, la experimentacin con animales y plantas. En la ampliacin de medidas preventivas producto del conocimiento adquirido gracias a estudios toxicolgicos o biolgicos de una gran cantidad de sustancias qumicas naturales o sintetizadas y utilizadas en investigacin cientfica, en medicina como en procesos productivos. En los ltimos aos, el incremento de aplicaciones biotecnolgicas en diferentes mbitos productivos tambin se ha traducido en un factor a considerar, como lo es la ingeniera gentica y la generacin de organismos genticamente modificados. En paralelo, se ha producido un importante incremento en la consideracin y valorizacin de los efectos que las actividades humanas tienen sobre el ambiente, en gran medida debido a los grandes daos ambientales asociados con diversas industrias como la qumica y petroqumica, del papel, la minera, la produccin de alimentos (vegetales y animales), generacin elctrica, etc. Si bien la bioseguridad es un conjunto de normas y conductas preventivas para proteger y mantener el bienestar de las personas y del ambiente, su aplicacin debe adaptarse y optimizarse a las condiciones de cada tipo de actividad que involucre organismos vivos o agentes infecciosos, elementos y compuestos qumicos y factores fsicos. Aunque el objetivo es el mismo, las medidas preventivas en un laboratorio clnico son diferentes a las de un lugar donde se empleen productos radiactivos o un laboratorio de investigacin. No obstante todos deben cumplir con normas estrictas y, en lo posible, certificadas por un organismo competente. Por lo mismo, estas normas deben ser conocidas y aplicadas por personal competente y entrenado, quienes a su vez deben cuidar del entrenamiento de terceros o de los novicios en la actividad.

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Sin duda que toda actividad humana est vinculada con un porcentaje de riesgo, y las realizadas en un laboratorio de Microbiologa no escapan a esto. Por ello, el establecimiento de estas normativas tiende a proteger estas actividades, especialmente las de investigacin, ms que impedir su realizacin, siguiendo procedimientos absolutamente controlados. Y, como se ha mencionado, la adecuada aplicacin e implementacin de las diversas normas, es dependiente de las competencias de las personas involucradas, es decir, de sus aptitudes (entrenamiento) y actitudes (rigurosidad).

Riesgo Microbiolgico
El trabajo en un laboratorio de microbiologa, sea con organismos patgenos o inocuos, no est ajeno a riesgos y la Bioseguridad Biolgica debe prevenir, disminuir o evitar la salida y/o la exposicin de las personas a microorganismos y agentes infecciosos que representen peligros para quienes trabajan en ellos, en su cercana o al ambiente. Este riesgo est siempre presente, debido a la naturaleza falible de las personas y/o a fallas en los equipos o instalaciones. Debido a que con frecuencia en estos laboratorios se realizan cultivos de microorganismos que logran concentraciones muy elevadas, pueden llegar a ser un peligro de infeccin debido a una inadecuada manipulacin. En la consumacin de un accidente microbiolgico, deben concurrir varios factores que en conjunto permiten materializar el peligro, entre ellos hay cuatro bsicos: el agente infeccioso, una alta concentracin de ste, una va de ingreso o trasmisin adecuada y un hospedador susceptible. De ellos, la va de trasmisin es el elemento que puede ser ms adecuadamente controlado mediante las medidas de bioseguridad. Nosotros, como todos los seres vivos poseemos barreras de entrada (defensivas) a los microrganismos y sistemas de defensa (sistema Inmune). Las barreras de entrada son tanto fsicas, qumicas como bioqumicas que impiden o disminuyen el ingreso de los microorganismos. De las fsicas tenemos la piel y las mucosas, donde su integridad evita el ingreso. En las qumicas encontramos el sudor (con su efecto de pH), y las secreciones de las mucosas (como el jugo gstrico). En las bioqumicas encontramos la enzima lisozima presente en las lgrimas y la saliva.

Vas de Infeccin o Contagio:

1. La piel, intacta es una barrera muy efectiva, se requiere de un dao o lesin que facilite el ingreso, como la abrasin o una puncin o corte con objetos agudos o cortantes que la atraviesen (agujas, astillas de vidrio, bisturs). 2. Las mucosas, cuando estn lesionadas. Debido a su mayor fragilidad que la piel, producen secreciones que aumentan su efectividad. De las mucosas, la Conjuntiva de los ojos es un ejemplo. 3. La boca, debido a la ingesta de alimentos, bebidas o por contacto con objetos contaminados como lpices, cigarrillos o las manos. Por la manipulacin directa de material con la boca, como pipetas. 4. Los ojos, por salpicaduras de lquidos con microorganismos (medios de cultivo), por contacto con los dedos contaminados. 5. Vas respiratorias (cavidad nasal, laringe, bronquios, pulmones), debido al ingreso de aerosoles o microgotas en suspensin en el aire al respirarlo, generadas al manipular lquidos

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La Bioseguridad en el Laboratorio
La Seguridad Biolgica o Bioseguridad implica tres componentes importantes que se deben tener presentes: el diseo de las instalaciones, los equipos de seguridad, y las tcnicas aplicadas en el laboratorio. El diseo involucra el nivel de seguridad (I, II, III o IV) apropiada al tipo de trabajo desarrollado, debe incluir reas de trabajo limpias y sucias, vas de evacuacin sealizadas, ingresos controlados, reas de almacenamiento de reactivos, etc. El equipamiento incluye entre otros, duchas de emergencia, soluciones o lavaderos para el lavado de ojos, detectores y extintores de incendios apropiados, manta apagafuego, vestimentas de proteccin, alarmas, sistemas de filtros en las ventilaciones, campanas o cmaras de flujo laminar, cmaras de bioseguridad, cmaras de extraccin de gases etc. Por ltimo, y en especial, las tcnicas y prcticas empleadas por los operarios pues su estricto cumplimiento permite minimizar los riesgos inherentes a la actividad. Es importante en este aspecto la actitud de las personas, en especial la conciencia que estn manipulando material potencialmente peligroso para ellos mismos, los dems o el ambiente circundante.

Aprendizajes
La lectura y el estudio de esta gua, permitir a los alumnos y a las alumnas adquirir conocimientos sobre medidas (normas, conductas) de bioseguridad que debern aplicar en el transcurso de todos los prcticos del Laboratorio de Microbiologa. Se espera que el alumnado incorpore de manera estable estas normas que son aplicables a esta y otras prcticas de laboratorio.

Medidas de Seguridad en el Laboratorio

Hay una serie de medidas cotidianas que se deben aplicar siempre en un laboratorio de microbiologa, de modo de mantener la seguridad de los usuarios. Esta lista puede ser ampliada o modificada a la realidad del laboratorio: 1. Usar delantal blanco, abotonado para prevenir la contaminacin de la ropa de calle. El color permite resaltar la presencia de contaminantes o sustancias que otros colores puedan enmascarar. Si se emplea de manera frecuente slo debiera salir del laboratorio para su aseo. Al retirarlo se recomienda transportarlo en una bolsa cerrada evitando el contacto directo con otras pertenencias. Mantener el cabello recogido (o protegido con un gorro o red limpia), en especial las damas, para evitar que sean un medio de transporte de contaminantes, la cada de cabellos en los materiales de trabajo y por las probabilidades de incendio al trabajar con mecheros. Evitar entradas y salidas frecuentes en el laboratorio. Se evita la apertura y cierre de puertas que mueven el aire del exterior que ingresa y transporta microorganismos y esporas contaminantes. Evitar idas y venidas injustificadas, movimientos bruscos y rpidos. Es necesario aprender a moverse en el laboratorio. Los movimientos bruscos pueden ocasionar empellones a otras personas, golpes a los equipos o materiales, adems de generar micro corrientes de aire. No est permitido fumar, comer o beber, ni aplicarse cosmticos dentro del laboratorio. Estos pueden estar contaminados con microorganismos no detectados lo que facilitara su ingesta.

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No colocar objetos personales sobre la mesa de trabajo. Mantener en ellas slo los materiales necesarios para el trabajo. Los objetos ajenos deben permanecer en un lugar distante del lugar de trabajo, en lo posible, aislado de l. No usar los refrigeradores, ni las estufas para conservar o calentar alimentos. Slo se permite almacenar material biolgico de trabajo, adecuadamente identificado Lavarse siempre las manos al llegar y antes de abandonar el laboratorio. En lo posible con un jabn antisptico. Desinfectarlas cuando sea necesario. Para secarlas, usar toallas desechables o aire caliente seco. No hacer uso del delantal ni pauelos personales para limpiar objetos o instrumentos de trabajo.

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10. Comunicar inmediatamente a la persona responsable de la seguridad cualquier sospecha de riesgo qumico, microbiolgico o fsico. 11. Las superficies donde se trabaja deben ser descontaminadas antes y despus de hacer el trabajo. El empleo de alcohol diluido al 70% es adecuado para esto. 12. Est prohibido pipetear con la boca. Se deben usar propipetas tanto para medios de cultivo con o sin microorganismos, como para reactivos qumicos. 13. Durante la realizacin de experimentos o preparacin de materiales, las puertas y ventanas deben permanecer cerradas para evitar el ingreso de partculas transportadas por el aire. 14. En el laboratorio no se permite la presencia de animales o plantas que no estn relacionados con el trabajo que se est realizando. 15. Precaucin con el empleo de etanol para la esterilizacin al trabajar junto al mechero, debido a su inflamabilidad. Esto se disminuye diluyndolo al 70%, sin perder su capacidad antimicrobiana. 16. Emplear calzado cerrado, con plantas antideslizantes y sin tacos altos, pantalones largos en varones y en damas para prevenir contacto directo con la piel en zona de menos atencin. 17. Sentarse cmodamente al mesn, con una postura adecuada tanto para la espalda como para las piernas, y que las manos queden con la libertad suficiente sobre el mesn de trabajo. 18. Verificar las etiquetas de los reactivos disponibles las indicaciones de riesgo que registra su etiqueta. Los reactivos qumicos empleados y sobrantes no deben ser regresados a los envases originales, para evitar su contaminacin y eventuales riesgos de manipulacin. 19. Los materiales empleados y contaminados deben ser depositados en contenedores apropiados para su posterior limpieza. El material de vidrio no empleado con microorganismos debe ser enjuagado con agua antes de disponer de l para su posterior limpieza.

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20. Extremar las precauciones al emplear material corto-punzante como jeringas, bisturs. No encapsular las agujas usadas y disponer de ellas en contenedores adecuados. Las hojas de bistur y asas de inoculacin se esterilizan a la llama del mechero una vez empleadas.

Medidas a ejecutar en casos de emergencia

Hay una serie de medidas que se deben realizar en casos que ocurra un accidente. Si hay seguridad o sospecha que el accidente implica material contaminado con microorganismos, aplique las primeras medidas indicadas y acuda a recibir pronta atencin mdica 1. Derrames de lquidos o medios de cultivo con microorganismos sobre superficies: a) De cuenta inmediatamente al profesor b) Proteja sus manos con guantes y aplique papel absorbente sobre la superficie comprometida c) Absorba el lquido y disponga del papel en un recipiente para material contaminado (bolsa para esterilizaciones o de desechos) d) Aplique un desinfectante, djelo actuar un momento y limpie nuevamente la superficie con papel. Repita la accin si es necesario e) Aplique el desinfectante en los guantes contaminados y elimnelos en el mismo recipiente, cuidando de no tocar su piel con los guantes f) Lave sus manos con jabn antisptico y abundante agua 2. Derrames sobre el cuerpo de materiales contaminados con microorganismos a) De cuenta inmediatamente al profesor b) Retire el delantal o ropa involucrada inmediata y cuidadosamente para no tocar otras partes o vestuarios c) Aplique etanol al 70% sobre la vestimenta contaminada, djelo actuar varios minutos d) Empleando guantes, lave con agua y abundante jabn el rea afectada e) Posteriormente, transporte la vestimenta en una bolsa cerrada, djela en remojo con hipoclorito de sodio, lvela por separado y una vez seca plnchela. 3. Cortes menores y heridas no profundas por agujas: a) De cuenta inmediatamente al profesor b) Lave la herida con jabn (antisptico) y abundante agua por tiempo prolongado c) Aplique un antisptico (alcohol yodado, povidona, agua oxigenada, etc.) sobre la superficie afectada verificando su ingreso en la herida 4. Salpicaduras de lquidos biopeligrosos en los ojos: a) De cuenta inmediatamente al profesor b) Utilice un lavaojos o una botella con solucin de lavados c) Lave inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del prpado con abundante agua durante 15 minutos aproximadamente. d) Abrir el ojo para asegurar efectivamente el lavado, comenzando por los prpados.
Ms informacin puede encontrar en: http://bioseguridadhospitalarios.blogspot.com/2010/11/conceptos-de-bioseguridad-parte-i.html http://www.conicyt.cl/fondecyt/category/estudios-y-documentos/bioseguridad/ http://www.centrobiotecnologia.cl/index.php/bioseguridad http://www.sag.cl/ambitos-de-accion/bioseguridad-instructivos