GRUPO 331

MICROBIOLOGIA BASICA

FATIMA AYUNI GONZALES HERNANDEZ MAYRA ELENA CRUZ FIGUEROA

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE BAJA CALIFORNIA GRUPO 331

MICROBIOLOGIA BASICA
CEPA PROBLEMA
INTRODUCCION
Las pruebas bioqumicas consisten en distintos test qumicos aplicados a medios biolgicos, los cuales, conocida su reaccin, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes. Para realizar las pruebas bioqumicas se dispone de mltiples medios, los cuales se deben aplicar de acuerdo a las exigencias del microorganismo en estudio.

OBJETIVOS
Entender los principios bioqumicos de las pruebas. Ser capaces de interpretar adecuadamente los resultados. Conocer el uso de las pruebas bioqumicas para la identificacin de microorganismos.

PRUEBAS BIOQUIMICAS
PRUEBAS DE CATALASA
Bacterias que viven en ambientes aerobios requieren de catalasa para convertir el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno molecular. Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una bacteria con actividad catalasa con perxido de hidrogeno al treinta por ciento y se producen burbujas de oxgeno.

Procedimiento
Colocamos una gota de perxido en el portaobjetos y posteriormente con un

MICROBIOLOGIA BASICA
palillo plano tomar un poco de bacteria a partir de una colonia aislada, si se observa el burbujeo generalmente intenso significa que hay produccin de oxgeno por lo tanto se entiende que hay presencia de la enzima catalasa.

Resultados

En nuestra cepa problema encontramos que la prueba de catalasa nos sali NEGATIVA, al no mostrase la produccin de burbujas de oxigeno. Mostramos la diferencia entre una prueba positiva y una prueba negativa.

PRUEBA DE COAGULASA
La coagulasa es una enzima proteica con actividad semejante a la protrombina, capaz de transformar el fibringeno en fibrina, provocando la formacin de un cogulo visible en un sistema analtico adecuado. El objetivo es buscar en factor de aglutinacin de los microorganismos cuando estos se mezclan con el plasma.

Procedimiento
La tcnica en tubo detecta coagulasa libre y ligada. Mecanismo de accin de la coagulasa libre: procoagulasa reacciona con un factor activador presente en el plasma sanguneo similar a la protrombina, dando lugar a un complejo anlogo a la trombina que reacciona con fibringeno formando un cogulo de fibrina en ausencia de Ca2+. La coagulasa ligada o factor de agregacin acta directamente sobre el fibringeno y lo convierte en fibrina. No requiere la presencia de activadores plasmticos

Resultados

En nuestra cepa problema encontramos que la prueba de coagulasa mostro una tendencia POSITIVA. Al mostrarse la formacin de un coagulo.

PRUEBA MIO (MOTILIDADINDOLORNITINA)

Esta prueba bioqumica permite identificar bacterias de acuerdo a su motilidad a la reaccin de Indol a la descarboxilacin de la ornitina. REACCION INTERPRETACION

MICROBIOLOGIA BASICA
Enturbiamiento del Agar en picada Azul Amarilla Rojo Amarillo Descarboxila ornitina No descarboxila ornitina Indol (+) Indol (-) Hay movilidad Agar transparente desarrollo solo No hay movilidad

Resultados

En nuestra cepa problema encontramos que la prueba de Movilidad Indol ornitina

PRUEBA TSI (TRIPLE AZCAR HIERRO)

El TSI es un medio nutriente y diferencial que permite estudiar la capacidad de produccin de cido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un nico medio. Tambin permite la identificacin de la produccin de SH2.

Fundamento
El Agar se prepara en forma de pico de flauta. La porcin inclinada (pico) expuesta en toda su superficie al oxgeno es aerobia y la porcin inferior (fondo) est protegida del aire y es relativamente anaerobia. Al crecer un microorganismo en el TSI, el pico tiende a virar al pH alcalino (color rojo por el rojo fenol) por la produccin de aminas, debido a la utilizacin aerobia de las peptonas. En el fondo del tubo -donde no hay oxgeno- la degradacin de peptonas es menor y no se generan aminas, de manera que se pueden detectar la produccin de pequeas cantidades de cido (color amarillo por el rojo fenol). Si se inoculan microorganismo no fermentadores no se formarn cidos, pero por la produccin de aminas en el pico, todo el medio quedar rojo.

MICROBIOLOGIA BASICA
La glucosa en el TSI est en una proporcin 10 veces menor que la lactosa y la sacarosa. Si el TSI es inoculado con una bacteria fermentadora de glucosa pero no de lactosa ni de sacarosa, la cantidad de cido producida por fermentacin ser baja (porque la cantidad de glucosa inicial es baja). En las primeras horas (10 a 16 hs) de incubacin se producir viraje del indicador al amarillo en todo el tubo (pico y fondo), pero al continuar la incubacin, el pico del tubo retornar al rojo por la produccin de aminas debida a la degradacin aerobia de las peptonas. La produccin de H2S a partir de tiosulfato se pone en evidencia por precipitacin del sulfuro ferroso (negro). Adems puede observarse la produccin de gas (H2 y CO2), ya sea como burbujas en el fondo del tubo, por ruptura del agar o desplazamiento del mismo hacia la superficie.

Procedimiento
Inocular los tubos de TSI con punta (alambre recto). Para eso introducir la punta hasta 3 a 5 mm del fondo del tubo. Tras retirar el alambre del fondo, estriar el pico con un movimiento hacia uno y otro lado. Incubar a 35 durante 24 horas. REACCION Pico alcalino/fondo alcalino Pico alcalino/fondo cido Pico alcalino/fondo negro INTERPRETACION No hay fermentacin de azucares Glucosa fermentada lactosa ni sacarosa fermentadas Glucosa fermentada, ni lactosa ni sacarosa fermentadas, produccin de cido sulfhdrico Pico cido/fondo cido Glucosa no. y lactosa y/o sacarosa fermentadas. Puede producirse SH2 o

Resultados

En nuestra cepa problema encontramos que la prueba de Triple Azcar Hierro

PRUEBA LIA (AGAR LISINA HIERRO)

MICROBIOLOGIA BASICA
Esta prueba permite diferenciar el microorganismo que producen descarboxilacin o desanimacin de la lisina. Se pude detectar adems la produccin de SH2 y es ms sensible que el TSI para la deteccin de SH2.

Procedimiento
Inocular en forma de estra las cepas de microorganismo en el medio de cultivo e incubar por 24 horas a 37.

Principio
Durante las primeras etapas de la incubacin el fondo virar el indicador de pH del medio al cido (amarillo) por la fermentacin de glucosa. Luego, si el aminocido es descarboxilado se formarn aminas que provocan un retorno al color original del medio o hacia un viraje al bsico (color violeta). En la desaminacin se produce un cido carboxlico y NH3 y se visualiza en la superficie la aparicin de un color rojo intenso. La produccin de H2S a partir de sulfato se visualiza por la precipitacin de sulfuro ferroso de color negro. REACCION Pico alcalino/fondo alcalino/H2S + Pico rojo/fondo cido/H2SPico alcalino/fondo cido/H2SPico alcalino/fondo cido/H2S+ REACCION Azul Rojo Ennegrecimiento Ruptura del Agar Fondo Amarillo y Tendido prpura INTERPRETACION Descarboxilacin de lisina positiva Desaminacin de lisina positiva Descarboxilacin de lisina negativa Descarboxilacin de lisina negativa Descarboxilacin de lisina negativa Produccin de H2S INTERPRETACION Hay movilidad No hay movilidad Descarboxila ornitina No descarboxila Descarboxilacin de lisina

Resultados:
En nuestra cepa problema encontramos que la prueba de LIA

MICROBIOLOGIA BASICA

UREASA
La urea es una diamida del cido carbnico que puede ser hidrolizada con liberacin de amonaco y dixido de carbono.

Principio
La ureasa es una enzima que poseen muchas especies de microorganismos que pueden hidrolizar urea de acuerdo a la siguiente reaccin qumica: El amonaco reacciona en solucin para formar carbonato de amonio, producindose alcalinizacin y aumento de pH del medio.

Interpretacin
Caldo: una coloracin rojiza indica alcalinizacin e hidrlisis de urea Agar: una coloracin rojiza en el medio indica hidrlisis de urea positiva. Los degradadores lentos producen coloracin parcial en el pico, los rpidos producen coloracin en todo el tubo. Si no hay hidrlisis el medio permanece con el color amarillo, que era el color original y se observa crecimiento.

Resultados:
En nuestra cepa problema encontramos que la prueba de Ureasa

MICROBIOLOGIA BASICA