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ACIDOS NUCLEICOS Tanto el ADN como el ARN pertenecen a un tipo de molculas llamadas cidos nucleicos.

El descubrimiento de estos cidos se debe al investigador Friedrich Meischer (1869), el cual investigaba los leucocitos y espermatozoides de salmn, de los cuales obtuvo una sustancia rica en carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y un porcentaje elevado de fsforo. Por encontrarse dentro del ncleo, llam a esta sustancia nucleina. Aos ms tarde, se encontr que tena un componente proteico y un grupo prosttico (no proteico). Debido a que este ltimo es de carcter cido, a la nuclena se la pas a llamar cido nucleico. La estructura de los cidos nucleicos Los cidos nucleicos son biopolmeros formados a partir de unidades llamadas monmeros, que son los nucletidos. Durante los aos 20, el bioqumico P.A. Levene analiz los componentes del ADN. Encontr que los nucletidos se forman a partir de la unin de: a) Un azcar de tipo pentosa (cinco tomos de carbono). Puede ser D-ribosa en el ARN, o D-2- desoxirribosa, en el ADN.

Adaptado de http://www.arrakis.es/~lluengo/biologia.html En este esquema se muestra la estructura qumica de los dos tipos de azcares que forman el ADN y ARN. La diferencia entre ambas, radica en la presencia de un grupo hidroxilo o alcohol (-OH) en la ribosa o un hidrgeno (-H) en la desoxirribosa, unidos al Carbono 2. Los nmeros indican la posicin de cada uno de los cinco carbonos de la molcula de azcar.

b) Una base nitrogenada. Son compuestos orgnicos cclicos, que incluyen dos o ms tomos de nitrgeno y son la parte fundamental de los cidos nucleicos. Biolgicamente existen cinco bases nitrogenadas principales, que se clasifican en dos grupos: - Las Bases Purnicas, derivadas de la estructura de las Purinas (con dos anillos): la Guanina (G) y la Adenina (A). Ambas bases se encuentran tanto en el ADN como el ARN. - Las Bases Pirimidnicas, derivadas de la estructura de las Pirimidinas (con un anillo): la Timina (T), Citosina (C) y Uracilo (U). La timina slo se encuentra en la molcula de ADN, el uracilo slo en la de ARN y la citosina, en ambos tipos de macromolculas.

Adaptado de: http://www.arrakis.es/~lluengo/biologia.html

Esquema de los cinco tipos de bases nitrogenadas presentes en los cidos nucleicos. Las mismas se encuentran divididas en dos grupos segn su estructura qumica: las purinas y las pirimidinas.

c) cido fosfrico, que en la cadena de cido nucleico une dos pentosas a travs de una unin fosfodiester.

El cido fosfrico une dos molculas de azcar. Esta unin se hace entre el C-3 de una pentosa, con el C-5 de la siguiente.

Los nucletidos monofosfatados estn formados por tres componentes: un grupo fosfato unido al azcar pentosa, mediante una unin de tipo ster (un tomo de O se une a otros dos) en la posicin del Carbono 5 del azcar. A su vez, el azcar se une a una base nitrogenada en la posicin de su Carbono 1. En los ribonucletidos (del ARN) la pentosa es la D-ribosa, en los desoxirribonucletidos (del ADN), el azcar es 2desoxi-D-ribosa.

Los nucletidos se enlazan para formar polmeros: los cidos nucleicos o polinucletidos. En la estructura de los cidos nucleicos, las bases nitrogenadas son complementarias entre s. La adenina y la timina son complementarias (A-T), al igual que la guanina y la citosina (G-C). Dado que en el ARN no existe timina, la complementariedad se establece entre adenina y uracilo (A-U). La complementariedad de las bases es la clave de la estructura del ADN y tiene importantes implicaciones, pues permite procesos como la replicacin del ADN y la traduccin del ARN en protenas. En las hebras enfrentadas A se une con T mediante dos puentes hidrgeno, mientras que G se une con C mediante tres. Entonces, la adhesin de las dos hebras de cido nucleico se debe a este tipo especial de unin qumica conocido como puente de hidrogeno.

Las uniones puentes de hidrgeno son ms dbiles que otros enlaces qumicos, como interacciones hidrfobas y enlaces de Van der Waals. Esto significa que las dos hebras de la hlice pueden separarse con relativa facilidad, quedando intactas.

Las largas cadenas de nucletidos se forman por la unin del C5' de la pentosa con el grupo fosfato formando un nucletido monosfato.

La cadena se va formando al enlazar los fosfatos al C3' de otro nucletido. As la cadena tiene un extremo 5y un extremo 3. La funcin del ADN El ADN tiene la funcin de guardar informacin. Es decir, contiene las instrucciones que determinan la forma y caractersticas de un organismo y sus funciones. Adems, a travs del ADN se transmiten esas caractersticas a los descendientes durante la reproduccin, tanto sexual como asexual. Todas las clulas, procariotas y eucariotas, contienen ADN en sus clulas. En las clulas eucariotas el ADN est contenido dentro del ncleo celular, mientras que en las clulas procariotas, que no tienen un ncleo definido, el material gentico est disperso en el citoplasma celular.

La estructura del ADN

El ADN se compone de dos cadenas, cada una formada por nucletidos. Cada nucletido, a su vez, est compuesto por un azcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada. Las bases nitrogenadas son cuatro: adenina (A), timina (T), citosina (C), y guanina (G), y siempre una A se enfrenta a una T y una C se enfrenta a una G en la doble cadena. Las bases enfrentadas se dice que son complementarias. El ADN adopta una forma de doble hlice, como una escalera caracol donde los lados son cadenas de azcares y fosfatos conectadas por escalones, que son las bases nitrogenadas. La molcula de ADN se asocia a protenas, llamadas histonas, y se encuentra muy enrollada y compactada para formar el cromosoma. Esta asociacin de ADN y protenas se conoce como cromatina. La cromatina puede estar enrollada en mayor o menor grado, dependiendo de la etapa en que se encuentra la clula; por ejemplo, cuando el ADN se ha duplicado antes de que la clula se divida, la cromatina se compacta en su mayor grado, y como resultado se pueden visualizar los cromosomas duplicados al microscopio como corpsculos con forma de X.

Esquema de un cromosoma duplicado

El ADN est organizado en cromosomas. En las clulas eucariotas los cromosomas son lineales, mientras que los organismos procariotas, como las bacterias, presentan cromosomas circulares. Para cada especie, el nmero de cromosomas es

fijo. Por ejemplo, los seres humanos tienen 46 cromosomas en cada clula somtica (no sexual), agrupados en 23 pares, de los cuales 22 son autosomas y un par es sexual. Una mujer tendr un par de cromosomas sexuales XX y un varn tendr un par XY. Cada cromosoma tiene dos brazos, ubicados por arriba y por debajo del centrmero. Cuando los cromosomas se duplican, previo a la divisin celular, cada cromosoma est formado por dos molculas de ADN unidas por el centrmero, conocidas como cromtidas hermanas.

La imagen representa una clula eucariota en la cual se ampla un cromosoma, y se muestra la estructura del ADN que lo constituye. Un fragmento particular del ADN forma un gen que determina una caracterstica particular. El ADN se forma a partir de la unin de nucletidos, que pueden tener cuatro bases nitrogenadas diferentes: A, T, C, G.

Cuando la clula se divide, cada nueva clula que se forma debe portar toda la informacin gentica, que determine sus caractersticas y funciones. Para eso, antes de dividirse, el ADN debe replicarse, es decir generar una copia de s mismo. Durante la replicacin, la molcula de ADN se desenrolla, separando sus cadenas. Cada una de stas servir como molde para la sntesis de nuevas hebras de ADN. Para eso, la enzima ADNpolimerasa coloca nucletidos siguiendo la regla de apareamiento A-T y C-G. El proceso de replicacin del ADN es semiconservativo, ya que al finalizar la duplicacin, cada nueva molcula de ADN estar conformada por una hebra vieja (original) y una nueva.

Replicacin semiconservativa del ADN de una clula eucariota.

Cmo se interpretan las instrucciones escritas en el ADN? La informacin est guardada en el ADN en el cdigo de secuencia de bases A, T, C y G que se combinan para originar palabras denominadas genes. Los genes son fragmentos de ADN cuya secuencia nucleotdica codifica para una protena. Es decir que a partir de la informacin escrita en ese fragmento de ADN se fabrica (sintetiza) un tipo particular de protena. Aunque, en realidad, los genes tambin llevan la informacin necesaria para fabricar molculas de ARN ( ribosomal y de transferencia) que intervienen en el proceso de sntesis de protenas. El ARN (cido ribonucleico) es una molcula con una estructura similar al ADN. Un gen no es una estructura que se vea sino que se define a nivel funcional. Es una secuencia que va a empezar en algn lugar del ADN y va a terminar en otro. Para conocer un gen se secuencia, se determina la cantidad de los nucletidos que lo forman y el orden en que se ubican.

Todas las clulas de un organismo tienen el mismo genoma, o conjunto de genes. Pero, en cada clula se expresan los genes que se usan. Por ejemplo, aunque una clula de la piel tiene toda la informacin gentica al igual que la clula del hgado, en la piel solo se expresarn aquellos genes que den caractersticas de piel, mientras que los genes que dan caractersticas de hgado, estarn all apagados. Por el contrario, los genes que dan rasgos de hgado estarn activos en el hgado e inactivos en la piel. Lo que no se usa se encuentra mayormente compactado. Este empaquetamiento puede ser temporal o definitivo. La sntesis de protenas
Las protenas son macromolculas que cumplen funciones variadas. Hay protenas estructurales, otras son enzimas, otras transportan oxgeno como la hemoglobina, hay protenas involucradas en la defensa inmunitaria, como los anticuerpos, otras cumplen funciones de hormonas como la insulina, etc.

As como el ADN est compuesto a partir de nucletidos, las protenas estn compuestas a partir de aminocidos. Hay 20 aminocidos diferentes, y cada protena tiene una secuencia de aminocidos particular. El proceso de sntesis de protenas consta bsicamente de dos etapas: la transcripcin y la traduccin. En la primera etapa, las palabras (genes) escritas en el ADN en el lenguaje de los nucletidos se copian o transcriben a otra molcula, el ARN mensajero (ARNm). Luego, en la etapa siguiente, el ARNm se traduce al idioma de las protenas, el de los aminocidos. Este flujo de informacin se conoce como el dogma central de la biologa.

Proceso de sntesis de protenas en una clula eucariota. La transcripcin ocurre dentro del ncleo y la traduccin en los ribosomas en el citoplasma.

La transcripcin Durante la transcripcin la enzima ARN polimerasa, copia la secuencia de una hebra del ADN y fabrica una molcula de ARN complementaria al fragmento de ADN transcrito. El proceso es similar a la replicacin del ADN, pero la molcula nueva que se forma es de cadena simple y se denomina ARN mensajero porque va a llevar la informacin del ADN hacia los ribosomas, las organelas encargadas de fabricar las protenas. El ARN, o cido ribonucleico, es similar al ADN aunque no igual. La traduccin La molcula del ARN mensajero se traslada a los ribosomas donde ocurre la etapa de traduccin. Durante esta etapa el ribosoma (ARNr) lee la secuencia de nucletidos del ARN mensajero por tripletes o tros de nucletidos, denominados codones. A medida que el ribosoma lee la secuencia de codones va formando una protena, a partir de la unin de aminocidos. Segn cul es el codn que el ribosoma lee va colocando el aminocido que corresponde. Si se considera la combinacin de cuatro bases tomadas de a tres, existe un total de 64 codones posibles. Cada codn determina qu aminocido se colocar en la protena (ARNt) que se est

fabricando. De los 64 codones, 61 corresponden a aminocidos y 3 son codones de terminacin (stop), responsables de la finalizacin de la sntesis proteica.

El ADN tiene informacin para la sntesis de protenas en el que participa el ARN. Esas protenas determinan las caractersticas de cada organismo y sus funciones. Estos tres tipos de ARN estn implicados en el pasaje de informacin del lenguaje de los nucletidos del ADN al de los aminocidos de las protenas, en un proceso conocido como El dogma central de la biologa, que muestra la siguiente figura:
el cdigo gentico La siguiente tabla es el cdigo gentico o diccionario que permite traducir la informacin escrita en el lenguaje de los cidos nucleicos (nucletidos) al lenguaje de las protenas (aminocidos), y es universal, o sea, es vlido para todos los seres vivos

La tabla del cdigo gentico es universal y permite conocer a partir de la secuencia del ARN mensajero cmo ser la secuencia de la protena para la cual el gen correspondiente codifica.

As, la secuencia ATG (AUG en el ARNm) codifica para el aminocido metionina, y el codn TTT (UUU en el ARNm) codifica para el aminocido fenilalanina en todos los organismos vivos. Como slo existen 20 aminocidos en la naturaleza, varios codones pueden codificar para el mismo aminocido (por ejemplo, al aminocido glicina le corresponden los codones GGU, GGC, GGA y GGG). Cada codn del ARNm es ledo por otro ARN, llamado ARN de transferencia (ARNt), que acta como un adaptador entre la informacin que lleva el ARNm y los aminocidos que deben ir colocndose para formar la protena correspondiente. El ARNt es muy pequeo comparado con los ARNm y tiene una secuencia, denominada anticodn que aparea (es decir, es complementaria) con el codn. Cada ARN de transferencia tiene un anticodn y carga un aminocido en particular. Por ejemplo, el ARNt que tiene el anticodn UCA, se aparea al codn AGU, y carga el aminocido serina (Ser). De la misma manera, el ARNt que carga tirosina (Tyr) se aparea, a travs de su anticodn, con el codn UAC. As se va formando una cadena polipeptdica (protena) a medida que los anticodones de los ARNt reconocen sus respectivos codones en el ARNm. Este proceso de sntesis proteica ocurre en los ribosomas. LA GENETICA La gentica es, bsicamente, el estudio de los genes, la herencia y sus mecanismos La gentica fue utilizada empricamente a lo largo de la historia para obtener mejores especies animales y vegetales que respondieran a los intereses humanos. Estas aplicaciones dejaron de ser empricas a partir del desarrollo de las Leyes de Mendel, a fines del siglo XIX, y de su redescubrimiento a principios del siglo XX . Durante la segunda mitad del siglo XX se avanz en la base biolgica y molecular de los mecanismos de la herencia, con la asociacin de los cromosomas con la informacin gentica, y con el advenimiento de la biologa molecular luego del descubrimiento de la estructura del ADN por Watson y Crick en la dcada de 1950 Dos dcadas ms tarde, la gentica clsica y molecular dieron lugar a la ingeniera gentica , cuando se logr obtener construcciones de ADN recombinante usando principalmente enzimas de restriccin y ligasas . As, en la biotecnologa moderna estn presentes la gentica clsica, la citogentica, la gentica molecular, la gentica de poblaciones y la ingeniera gentica, entre otras . La gentica clsica: de Mendel a la biotecnologa La gentica clsica se refiere al estudio de la herencia de los caracteres, y fue aplicada empricamente desde los inicios de la agricultura y la ganadera al seleccionar los individuos de mejores caractersticas para que se reprodujeran y dejaran descendencia similar a ellos. En esas prcticas siempre estuvo, intuitiva y empricamente, el concepto de herencia. La idea de la herencia, an cuando no se conoca exactamente el mecanismo subyacente, permita explicar los rasgos fisonmicos de los clanes familiares, como el labio prominente de los Habsburgo (dinasta que gobern desde el siglo XIV y durante 300 aos en territorios

austracos). As, el hecho de que las caractersticas morfolgicas se pasaran de padres a hijos era ampliamente aceptado. Paradjicamente, las teoras reinantes en esa poca hablaban de generacin espontnea para el origen de los organismos, y de la herencia por mezcla para explicar por qu los hijos tenan caractersticas de ambos progenitores. Pero, ninguna de estas teoras pudo sostenerse ante la evidencia obtenida por cientficos del siglo XIX, como Luis Pasteur y Gregor Mendel. La gentica mendeliana La gentica mendeliana se considera parte de la gentica clsica, y se refiere a la aplicacin de las Leyes de Mendel para estudiar patrones de herencia . Estas leyes establecen que la herencia de caracteres est dada por factores concretos, ya que acorde a las observaciones de Mendel, eran repartidos en proporciones matemticas como unidades enteras a la descendencia. A partir de los conocimientos adquiridos desde entonces, se interpreta que la primera ley permite asociar un cierto carcter fenotpico a un gen, y la segunda ley permite indicar si dos caractersticas estn codificadas por dos genes independientes. Estas leyes tambin sentaron las bases para Figura 1: Esquema de vaina abierta explicar otros fenmenos genticos (codominancia, dominancia con semillas de Pisum sativum incompleta, recombinacin gentica, etc.). El material

biolgico: Mendel utiliz los guisantes de jardn ( Pisum sativum Fig.1) por dos razones principales. En primer lugar las poda conseguir en los mercados de semillas en una amplia variedad de formas y colores distintos que le facilitaban la identificacin y el anlisis. Eligi siete caracteres (caractersticas) distintivas para sus estudios: tipo de tallo (alto o corto), posicin de la flor (terminal o axial), color de los ptalos (prpura o blanco), forma y color de la vaina (verde o amarilla; infladas o contorneadas) y forma y color de las semillas (verdes o amarillas; lisas o rugosas), representadas en la Fig. 2.

La segunda razn es que esta planta puede autofecundarse como as tambin cruzarse con el polen de otra planta (fecundacin cruzada). Otras razones prcticas por las cuales Mendel eligi estos guisantes fue que eran baratos y fciles de obtener, que requieren de poco espacio para crecer, que tienen un tiempo generacional relativamente corto y que producen mucha descendencia. Todas estas caractersticas son las ideales para un organismo modelo de estudio gentico. Las plantas que utiliz para sus ensayos eran lneas puras. Una lnea pura es una poblacin que mantiene constante un carcter en todas las generaciones; es decir: todos los descendientes (por autofecundacin o por fecundacin cruzada con plantas de la misma lnea) muestran el mismo caracter sin variaciones (por ej.: todos tienen el mismo color de ptalos). Mendel obtuvo siete pares de lneas puras: uno para cada variante de cada uno de los caracteres que se propuso estudiar (Fig.2). Cada par de lneas muestra una diferencia en un carcter (flores prpuras o flores blancas, etc.), lo cual se denomina variante de un carcter o fenotipo (fenotipo de flor blanca, fenotipo semilla rugosa, etc.).

Figura 2: Las siete caractersticas morfolgicas de los guisantes estudiadas por Mendel.

Diferencias en un solo carcter: Cruzas Monohbridas . 1. Obtencin de la primera generacin filial (F1) En uno de sus ensayos Mendel poliniz una planta de flores prpuras con el polen de una de flores blancas. Estas plantas de lneas puras (los padres) conforman la generacin parental (P). Todas las plantas que se obtuvieron fueron de flores prpuras. Esta generacin de descendientes (las plantas hijas) se denomina generacin filial 1 (F1) (las subsiguientes generaciones producidas por autofecundacin se las simboliza F2, F3, etc.). Para que el ensayo fuera completo y correcto, Mendel realiz tambin la cruza recproca: polinizar plantas de flores blancas con el polen de una flor prpura y obtuvo el mismo resultado (F1 todas con flores prpura). Similares ensayos hizo con las otras lneas que mostraban Figura 3: Generacin parental y filial 1 para el diferencias fenotpicas en los restantes seis caracteres ya caracter color de semilla. mencionados (Fig.2). El resultado del ensayo correspondiente al color de las semillas se presenta en la Fig. 3. y Seguidamente, Mendel
permiti la autofecundacin de las plantas F1 (Tabla 1) y plant las semillas obtenidas para analizar el fenotipo de la descendencia (F2). l cuidadosamente cont (cuantific) los resultados, lo cual le permiti poder establecer proporciones y as llegar a esgrimir sus hiptesis, testearlas y establecer las leyes que hoy llevan su nombre. Este procedimiento es el que sent las bases de la Gentica Moderna, dado que nadie antes haba aplicado estadstica a las observaciones sobre herencia. Lo que observ al analizar la F2 es que volva a surgir el fenotipo parental ausente durante la F1 y siempre en una proporcin constante: 3/4 de las plantas mostraban el fenotipo que se observ en la F1 y el 1/4 restante de ellas mostraba el fenotipo ausente en F1 (Tabla 1). En su intento por hallar una explicacin a este cociente constante, Mendel infiri que, a pesar de que la F1 mostraba un cierto fenotipo, an conservaba el potencial heredado del otro parental para producir descendencia con el fenotipo no visible. As, utiliz los trminos dominante y recesivo para describir el fenmeno aunque no supo explicar el mecanismo subyacente. Estos trminos son definidos operativamente: la dominancia queda determinada por el fenotipo de la F1 obtenida por el cruzamiento de dos lneas puras. El fenotipo parental que se expresa en dicha F1 es, por definicin, el fenotipo dominante. As, Los individuos de la F1 muestran el fenotipo correspondiente al alelo dominante y en la F2 reaparece 1/4 de la descendencia con fenotipo recesivo. Mendel sospechaba que los individuos F2 de fenotipo dominante no eran todos iguales entre s. Para poder resolver su duda, tom 519 semillas F2 de aspecto dominante (amarillas) y las plant para que dieran descendencia por

autofecundacin. 166 de ellas dieron vainas con semillas nicamente amarillas, mientras que las restantes 353 dieron vainas que contenan semillas amarillas y verdes (recesivas) en una proporcin 3:1. De ellas, las semillas verdes fueron plantadas y autofecundadas obtenindose descendencia nicamente verde. En resumen, todas las semillas F2 verdes eran evidentemente descendencia pura como el parental verde, pero de las F2 amarillas 2/3 eran amarillas impuras como la F1 (capaces de producir descendencia amarilla y verde en proporcin 3:1) y 1/3 eran amarillas puras como el parental. As, este estudio cuidadoso revel que bajo el cociente fenotpico 3:1 de la F2 existe otro cociente fundamental, el cociente genotpico 1:2:1, como se resume a continuacin: Fenotipo F2 (3:1)
3/4 amarillas F2

Genotipo F2 (1:2:1)
1/4 amarillas puras

Homocigoto dominante

2/4 amarillas impuras (similares a las F1) 1/4 verdes F2 1/4 verdes puras

Heterocigoto Homocigoto recesivo

Estos mismos resultados los obtuvo con todos los caracteres que estudi, por lo tanto pas a formular una explicacin para la proporcin 1:2:1 ( en itlicas se dan las explicaciones modernas a las conclusiones de Mendel ): 1. Los determinantes de la herencia son de naturaleza particulada ( y no por fusin, como se propona hasta ese entonces), y los llam factores. Hoy en da llamamos a esos factores genes. 2. Cada planta adulta tiene dos copias de cada factor ( dos copias para cada gen). A las distintas variantes de cada gen las llamamos alelos (para el gen de color de flor existe alelo prpura y alelo blanco, etc). Si un individuo tiene los dos alelos iguales el individuo se denomina homocigoto, y si tiene alelos diferentes se denomina heterocigoto o hbrido. As, los individuos F1 son heterocigotos y portan un alelo dominante y el otro recesivo, y su fenotipo muestra al dominante . 3. Los dos factores correspondientes a un caracter ( los dos alelos de un gen) segregan (se separan) con igual probabilidad a cada gameta. 4. Consecuentemente, cada gameta lleva una sola variante de cada factor al azar (un solo alelo para cada gen). 5. La unin de las gametas para formar el cigoto de un nuevo individuo ocurre al azar, es decir: las gametas se combinan indistintamente de la informacin que llevan.

Para poder dejar estos conceptos ms claramente representados, realicemos un diagrama de un posible cruzamiento (Fig.4) y su correspondiente Cuadro de Punnet. Para ello representaremos a los genes por una letra, que se elige generalmente acorde a la Inicial del alelo dominante (A, por amarillo), representando con MAYSCULA EL ALELO y con minscula el recesivo.

AA

aa

Gametas

nicamente

F1 Posibles Gametas

Aa

Autofecundacin

Cada gameta tiene igual probabilidad de ocurrir ( c/u)

Figura 4: Cruzamiento de lneas puras (P) y anlisis de la F1.

Las posibles gametas que generen los individuos F1 y su proporcin las representamos en un Cuadro de Punnet, (generalmente las gametas femeninas en el borde superior y las masculinas en el izquierdo) el cual dar como resultado la posible descendencia con sus proporciones genotpicas y fenotpicas.
Femeninas (vulos)

Gametas
Masculinas (clulas espermticas)

1/2 A 1/4 1/4


A A A

1/2 1/4 1/4


A

a a a

1/2 1/2

Cuadro de Punnet para las gametas F1 con la posible descendencia F2 y sus probabilidades fenotpicas y genotpicas.

Proporciones: Fenotpicas: 3/4 amarillas : 1/4 verde (3:1 dominante: recesivo) Genotpicas: 1/4 amarillas puras homocigoto dominante (HD) 2/4 amarillas impuras heterocigoto (Ht) 1/4 verde puras homocigoto recesivo (hr) Las proporciones tambin pueden expresarse en forma porcentual:
1 : 2 : 1 HD : Ht : hr

Fenotpicas: 75% dominantes : 25% recesivos Genotpicas: 25% homocigoto dominante : 50% heterocigotos : 25% homocigotos recesivos. Cruzamientos prueba A

Figura 5: Cruzamientos Prueba. A) El individuo incgnita es homocigoto dominante. B) El individuo incgnita es heterocigoto.

Con todos estos datos, Mendel ya estaba en condiciones de poder formular una ley que explique los patrones de herencia que observ. Pero como era muy metdico, realiz una ltima prueba para corroborar la hiptesis de su modelo: realiz cruzamientos prueba o retrocruzamientos. Estos cruzamientos consisten en tratar de dilucidar el genotipo de un individuo cuyo fenotipo es dominante, es decir, se quiere saber si el individuo es homocigoto (dominante) o heterocigoto. Para ello se lo cruza con un recesivo (homocigoto recesivo) y se analiza la descendencia. Si todos los hijos son de fenotipo dominante, entonces el individuo en cuestin es homocigoto, dado que slo pudo aportar gametas con alelo dominante (Fig.5A). En cambio, si mitad de los hijos muestran fenotipo dominante y la otra mitad muestra fenotipo recesivo (proporcin 1:1), entonces el individuo en cuestin es heterocigoto porque pudo aportar la mitad de gametas con alelo recesivo y la otra mitad con alelo dominante (Fig.5B). As, Mendel confirm su modelo de segregacin, que qued formalmente reconocida como la Primera Ley de Mendel o Ley de la Segregacin. Con la interpretacin actual, la misma establece que los dos alelos de un mismo gen se separan el uno del otro (segregan) al formar las gametas de modo tal que la mitad de las gametas lleva uno de ellos y la otra mitad llevar el otro en

forma aleatoria. En consecuencia, los caracteres recesivos enmascarados en la F1 heterocigota de un cruzamiento entre dos lneas puras (homocigotos) reaparecern en la F2 con una proporcin de 1/4.

Aplicacin de las leyes de uniformidad y segregacin a otros casos:

Estas mismas dos leyes (la de la uniformidad y la de la segregacin) pueden aplicarse a otros casos donde existe un fenotipo intermedio entre el dos posibles fenotipos: los casos de Dominancia Incompleta. Mendel slo describi dominancia y recesividad, pero se refera a dominancia completa, es decir, el fenotipo del heterocigota es igual al del homocigoto dominante (ej.: semillas amarillas). En cambio, existen en la naturaleza casos en los que el fenotipo del heterocigota es intermedio entre el de dos homocigotos distintos, como por ejemplo las flores llamadas Damas de noche (su nombre se debe a que estn abiertas durante la noche). Cuando plantas homocigotos de flores blancas se cruzan con homocigotos rojas, la descendencia F1 heterocigota muestra un fenotipo intermedio rosado. La F1 son todas uniformes de color rosa (Fig. 6) y en la F2 se vuelve a obtener 1/4 de flores rojas, 1/2 de flores rosas y 1/4 de flores blancas. Si bien no se puede hablar de recesivos y dominantes, sino ms bien de dos alelos distintos, las proporciones de las leyes de uniformidad y segregacin son igualmente aplicables en estos casos.

Figura 6: Dominancia incompleta en las Damas de Noche.

Otro caso en el cual tambin se cumplen las proporciones fenotpicas y genotpicas 3:1 y 1:2:1 es el fenmeno de codominancia. EL fenotipo del heterocigoto muestra el fenotipo de ambos homocigotos. Por ejemplo: la cruza de dos plantas homocigotos blancas y rojas puede producir F1 de flores blancas con pintitas rojas y luego en la F2 recuperarse 1/4 de flores rojas, 1/2 blanco con pintitas rojas y 1/4 blancas.

Resumen del Modus Operando para establecer Herencia Mendeliana simple (un gen para un caracter): i. ii. iii. iv. v. vi. Elegir como material biolgico lneas puras que difieran en el caracter de nuestro inters. Realizar fecundacin cruzada entre las lneas para obtener F1 Comprobar uniformidad de la F1 y determinar as el alelo Dominante. Autofecundar la F1 para obtener la F2. Comprobar la proporcin fenotpica 3:1 Autofecundar los individuos de fenotipo dominante (3/4) y analizar la descendencia (F3) para poder determinar la proporcin genotpica de la F2 1:2:1. Realizar todo lo mismo pero con la cruza inversa.

vii.

As, la existencia de genes fue originalmente inferida (y lo sigue siendo hoy en da) por medio del anlisis matemtico de las proporciones de la descendencia de cruzamientos de lneas puras.
Gentica mendeliana y biotecnologa La gentica mendeliana se aplica en la actualidad al realizar proyectos de biotecnologa. Por ejemplo, antes de poner en prctica las tcnicas de biologa molecular para clonar un gen , se debe saber si la caracterstica biolgica que se quiere buscar est codificada por un solo gen. Para verificarlo, se parte de progenitores con caracteres contrastantes (por ejemplo, resistentes y susceptibles a un patgeno) y se analiza la proporcin de descendientes en las dos generaciones siguientes (F1 y F2) de modo tal que si cumple la primera Ley de Mendel, se puede determinar que existe un gen para la caracterstica de inters. Tambin se aplica esta misma ley para resolver cruzamientos de prueba, cuando se quiere conocer el genotipo de un individuo para un gen dado, o cuando se quiere saber cul de las formas de una caracterstica es la dominante y cul la recesiva. Tambin se aplica gentica mendeliana cuando se quiere saber si dos caractersticas estn codificadas por genes independientes entre s, para lo cual se realizan cruzamientos llamados dihbridos . Adems de estas aplicaciones de gentica mendeliana a priori de un proyecto biotecnolgico, se deben realizar anlisis genticos luego de obtener una planta o animal transgnico, de modo de demostrar si el transgn insertado sigue un patrn de herencia estable tipo mendeliano, acorde con lo demandado por los organismos reguladores de biotecnologa en los distintos pases .

Citogentica y la teora cromosmica de la herencia


Posterior a Mendel, los cientficos se dieron cuenta de que los patrones hereditarios que el monje austriaco haba descrito eran comparables al comportamiento de los cromosomas en las clulas en divisin, y sugirieron que las unidades mendelianas de la herencia, se localizaban en los cromosomas, lo que constituye el concepto central de la teora cromosmica de la herencia. Esta teora asocia los genes (o factores de Mendel) con una estructura fsica dentro de la clula, los cromosomas, y reconoce que los genes son parte de los cromosomas. Este concepto no es nuevo hoy en da, pero fue un hito cuando se formul a principios del siglo XX, y tuvo profundas implicancias en la citogentica, la rama de la ciencia que estudia los cromosomas y su comportamiento durante el ciclo celular. Es decir que esta teora permiti correlacionar los resultados de los cruzamientos empricos con el comportamiento de los cromosomas que se observaban en las clulas. El proceso celular que permiti correlacionar los cromosomas con los genes fue la meiosis, es decir la divisin celular por la cual se generan las gametas. Fueron dos investigadores, Walter Sutton (EE.UU) y Theodor Boveri (Alemania), que en forma independiente llegaron a la misma conclusin en 1902. Reconocieron que el comportamiento de los factores de Mendel durante la produccin de las gametas se corresponda precisamente con el comportamiento de los cromosomas en la meiosis:

los genes se encuentran en pares al igual que los cromosomas; los alelos (o variantes de un gen dado) segregan igualitariamente en las gametas (al igual que los miembros de un par de cromosomas homlogos); genes diferentes actan independientemente (al igual que pares cromosmicos distintos). Citogentica y biotecnologa La citogentica es parte esencial de los estudios genticos actualmente, con importantes aplicaciones en la gentica mdica, en la gentica evolutiva y en la gentica aplicada al mejoramiento animal y vegetal. Normalmente se asocia citogentica con el cariotipo (el ordenamiento de los cromosomas

segn su tamao construido a partir de imgenes del material gentico teido y fotografiado).

Cariotipo humano femenino (superior) y masculino (inferior). Se observa un total de 23 pares de cromosomas en cada cariotipo compuesto de 22 pares de autosomas y el par de cromosomas sexuales femeninos XX, y los cromosomas sexuales masculinos XY. Esa fue la primera aplicacin de la citogentica para clasificar los cromosomas de cada especie y asociar ciertas enfermedades o caractersticas de inters con algunos cromosomas en particular o con regiones dentro de los brazos de los cromosomas. As se obtuvieron los primeros mapas fsicos del genoma de las especies, que permiten ubicar en el genoma cierto gen responsable de un cierto fenotipo. Hoy en da, con el desarrollo de tcnicas de fluorescencia aplicadas a la citogentica, se puede saber en qu cromosoma y en qu regin especficamente se ubica una secuencia gentica de inters. Por ejemplo, si se desea conocer dnde se integr un transgn al realizar una planta o animal transgnico, como se muestra en la figura:

Mediante citogentica aplicada al mapeo fsico, se puede ubicar el sitio de insercin de un transgn (en amarillo). Fuente: http://www.seedna.com/transgene.html La gentica molecular: de Watson y Crick a la biotecnologa Los estudios de gentica clsica durante la primera mitad del siglo XX continuaron analizando otros patrones de herencia, como aquellos ligados a los cromosomas sexuales, entre otros fenmenos. Por su parte, los qumicos y fsicos trataron de dilucidar la estructura y naturaleza fsico-qumica de las molculas involucradas en

la herencia. As se estudi la estructura y composicin qumica de los cromosomas, y se concluy que estaban compuestos por asociacin de cido desoxirribonucleico (ADN) y protenas (histonas). Al mismo tiempo, los microbilogos estudiaban cmo los virus que infectan bacterias se pasan informacin gentica entre ellos. Todas estas lneas de investigacin tuvieron como nexo y punto de inflexin el descubrimiento de la estructura del ADN en 1953 por James Watson y Francis Crick, quienes abrieron el camino al estudio de la estructura de los genes y los mecanismos por los cuales estos genes se replican y se transmiten a las clulas hijas. El estudio de los genes a nivel molecular y los mecanismos de herencia por medio de herramientas de biologa molecular se denomina gentica molecular. La gentica molecular incluye, por ejemplo, estudiar qu genes de una bacteria estn involucrados en su capacidad de ser patgena, o cules son las rutas genticas para la sntesis de una cierta sustancia en un organismo, o realizar un mapa gentico para una cierta especie en el cual se indiquen distancias entre pares de bases dentro de un cromosoma, entre otras posibilidades. Gentica molecular y biotecnologa La gentica molecular permite conocer los genes involucrados en distintos procesos celulares. La comprensin de estos procesos puede resultar de inters para su aplicacin industrial o agrcola. La investigacin de gentica molecular es el primer paso, que permite caracterizar molecular y funcionalmente a esos genes, y que luego continuar con una lnea de produccin industrial. En la actualidad, los genes de inters pasan previamente por una serie de retoques mediante ingeniera gentica para hacer ms eficiente el proceso industrial o agrcola. Este es el caso de los biofrmacos como la insulina humana, algunos factores de coagulacin, la vacuna contra la hepatitis B, etc. los cultivos transgnicos ornamentales, en los cuales se aplic el conocimiento de gentica molecular del desarrollo floral para modificar la morfologa de las plantas, etc. Otra importante aplicacin de la gentica molecular en temas de biotecnologa es el desarrollo de mapas genticos de especies, los cuales facilitan luego los programas de mejoramiento tradicional (por cruzamientos), a esto se lo denomina Mejoramiento asistido por marcadores moleculares o MAS (del ingls Marker assisted selection). Ingeniera Gentica Esta rama de la gentica se podra definir como la aplicacin de las herramientas de la biologa molecular para la construccin de fragmentos de ADN recombinantes con genes de inters y la insercin de los mismos en otros organismos. As, el uso de las enzimas de restriccin y las ligasas se utilizan para insertar un gen de inters detrs de un promotor y dentro de un vector adecuados para el organismo donde se quiere insertar el gen. La ingeniera gentica se utiliza como herramienta de laboratorio para estudios de gentica molecular bsica como investigar la funcin y el mecanismo de accin de un gen particular, como as tambin se usa de herramienta para los desarrollos biotecnolgicos.

Ingeniera gentica y biotecnologa Siempre que se habla de biotecnologa moderna o de ADN recombinante se hace referencia a la ingeniera gentica, ya que esta disciplina provee las tcnicas y herramientas para el desarrollo de la construccin de ADN de inters industrial. As, por ejemplo, todas las enzimas producidas en forma recombinante , los frmacos y las vacunas recombinantes , las plantas transgnicas , entre otros y los animales transgnicos, son productos biotecnolgicos donde la ingeniera gentica fue una herramienta fundamental para su desarrollo. Otros ejemplos son el gen de la insulina humana con un promotor bacteriano para que la hormona se produzca en bacterias, el gen de tolerancia al herbicida glifosato (gen epsps) con un promotor vegetal para que funcione en la soja, maz y algodn transgnicos (variedades RR, ), el gen de la hormona de crecimiento humano con un promotor de glndula mamaria bovina para que la hormona se produzca en la leche de la vaca, etc. El desarrollo de la biotecnologa moderna est ntimamente ligado con todas las ramas de la gentica desde sus inicios. Desde el poder entender cules son las unidades responsables de transmitir la herencia, hasta el poder transformarlas para el mejor aprovechamiento por el hombre. El paso desde las construcciones genticas a la aparicin del primer producto biotecnolgico en el mercado en la dcada de 1980, fue posible por la asociacin de cientficos y empresarios, que entendieron a la ciencia como un bien comn sobre el cual se basa una sociedad para progresar.