Exemplo de titulao de um aminocido

A titulao utilizada para determinar a quantidade de um cido numa determinada soluo. Um certo volume de um cido titulado atravs da utilizao de uma base forte, normalmente o hidrxido de sdio (NaOH), de concentrao conhecida. O NaOH adicionado em pequenas quantidades at o cido ser neutralizado, o que pode ser indicado atravs de um pH metro. A concentrao do cido na soluo original pode ser determinada atravs do volume de NaOH adicionado. A tendncia de qualquer cido (HA) para perder um proto e formar a sua base conjugada (A-) definida pela constante de equilbrio Keq para a reaco reversvel HA H+ + A- , a qual dada por Keq= [H+] [A-] / [HA]

O grfico do pH versus a quantidade de NaOH adicionado (uma curva de titulao) revela o pKa do cido, sendo este o ponto mdio da curva de titulao. Quanto mais forte for o cido, menor o pKa e quanto mais forte for a base, maior o pKa. medida que o NaOH vai sendo introduzido, o OH - adicionado vai reagir com o H+ que se encontra livre na soluo, formando H 2O. Esta remoo do io H+ vai fazer com que HA se dissocie para satisfazer a sua constante de equilbrio, e assim se vai formando mais A-.

Como exemplo de titulao de um aminocido vamos analisar a glicina. A curva de titulao tem duas fases diferentes, correspondendo cada uma remoo de protes dos seus dois diferentes grupos. A pH muito baixo, a espcie inica predominante da glicina a forma completamente protonizada +H3N CH2- COOH. A meio da primeira fase da titulao, na qual o grupo carboxilo da glicina perde o seu proto, as concentraes do dador (+H3N CH2 COOH) e aceitador de protes (+H3N CH2 COO-) so equivalentes. A meio de qualquer titulao atingido um ponto de inflexo onde o pH igual ao pKa do grupo protonado que est a ser titulado. O pH para o ponto mdio da primeira fase na glicina 2.34, dado que o seu grupo carboxilo tem um pK a de 2,34. Com o continuar da titulao outro ponto importante alcanado ao pH=5,97. Aqui existe outro ponto de inflexo, no qual o primeiro proto j foi praticamente removido e inicia-se a remoo do segundo proto. A este valor de pH a glicina encontra-se maioritariamente sob a forma de +H3N CH2 COO-. A segunda fase da titulao corresponde remoo do proto do grupo NH 3+ da glicina. A meio desta segunda fase o pH toma valor de 9.60, equivalente ao pK a do grupo amina. A titulao fica praticamente completa quando o pH atinge o valor de 12. Neste ponto a forma predominante da glicina H2N CH2 COO-.

Das curvas de titulao da glicina podemos tirar diversas informaes importantes. Primeiro d-nos uma medida quantitativa do pKa de cada um dos grupos ionizveis: 2,34 para o grupo carboxilo e 9.60 para o grupo amina. Note-se que o grupo carboxilo da glicina cerca de 100 vezes mais cido (mais facilmente ionizvel) que o grupo carboxilo do cido actico, o qual tem um valor de pKa de 4.76. A diferena de pKa do grupo carboxilo na glicina causado pela repulso entre o proto que sai e o grupo amina carregado positivamente do carbono. As cargas opostas ao estabilizaremse deslocam o equilbrio para a direita. semelhana deste, o pKa do grupo amina da glicina fica abaixo do seu valor mdio mdio. Este efeito devido parcialmente electronegatividade dos tomos de oxignio do grupo carboxilo, que tende a atrair electes, aumentando a tendncia de o grupo amina ceder um proto. Dai o grupo amina tem um pKa que inferior ao de um grupo amina aliftico, como por exemplo o da metilamina. De forma geral, o pK a de qualquer grupo funcional maioritariamente afectado pelo ambiente qumico, um fenmeno por vezes explorado no centro activo das enzimas para promover mecanismos de reaco que dependem dos valores do pKa dos grupos dadores/aceitadores de resduos especficos.

O segundo pedao de informao fornecido pela curva de titulao da glicina que o aminocido tem duas regies que funcionam como solues tampo. Uma dessas regies uma parte relativamente rasa da curva, que corresponde a 1 unidade de pH para cada lado do primeiro valor de pKa (de 2,34), o que indica que a glicina uma boa soluo tampo quando apresenta valores de pH prximos desta rea. A outra zona em que a glicina uma boa soluo tampo est centrada volta de pH=9,60 (Note-se que a glicina no uma boa soluo tampo a um pH prximo do valor dos fluidos intersticiais ou do sangue, os quais andam volta de 7,40). Dentro destes valores em que a glicina funciona como soluo tampo, a equao de Henderson-Hasselbach pode ser usada para calcular as propores das espcies dadora de protes e aceitadora de protes da glicina necessrias para fazer uma soluo tampo a um certo valor pH. Outro pedao de informao importante que retiramos da curva de titulao da glicina a relao entre a rede de cargas elctricas e o pH da soluo. No ponto de inflexo da curva de titulao entre as duas fases, em que o pH de 5.97, a glicina est presente predominantemente nas suas formas dipolares, totalmente ionizadas mas sem rede de cargas elctricas. O pH caracterstico prximo do qual a rede de cargas elctricas zero chamado o ponto isolctrico ou pH isoelctrico, designado pI. Para a glicina, que no tem nenhum grupo ionizvel na sua cadeia lateral, o pI simplesmente a mdia aritmtica dos dois valores de pKa: pI= (pK1 + pK2 ) = (2.34 + 9.60 )= 5.97 A glicina tem uma rede negativa de carga para qualquer pH acima do seu pI e desloca-se ento em direco ao elctrodo positivo (nodo) quando colocado num campo elctrico. Qualquer pH abaixo do seu pI, a glicina tem uma rede de cargas elctricas negativa e vai-se movimentar em direco ao elctrodo negativo (o ctodo). Quanto mais afastado o pH for do pI, maior a carga da rede elctrica da populao das molculas de glicina. Por exemplo, a pH=1.0 a glicina existe quase inteiramente na forma +H3N CH2- COOH, com uma rede positiva de cargas de 1.0. Ao pH 2.34, onde h uma igual mistura de +H3N CH2- COOH e +H3N CH2- COO-, a rede positiva de cargas 0.5. O sinal e a magnitude de uma rede de cargas de qualquer aminocido a qualquer pH pode ser previsto da mesma maneira.

Grupo 2 Nuno Barros Diana Nunes Lus Rosado Carlos Silva